ПРЕПАРАТ, ОБЛАДАЮЩИЙ ГЕПАТОЗАЩИТНЫМ ДЕЙСТВИЕМ Российский патент 2002 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к области медицины, а именно к препаратам и лекарственным средствам для лечения и профилактики заболеваний внутренних органов, в частности печени, а также лечения токсикозов различной этиологии.

Известно использование для лечения заболеваний печени и лечении токсикозов большого числа фармацевтических препаратов, таких как желчегонные препараты, препараты кальция, диуретики (липамид, липоевая и никотиновая кислоты, тиосульфат натрия и т.д. ( М.Д. Машковский, Лекарственные средства, М., Медицина, 1985, т.1-2 -585 с.).

Недостатком большинства этих препаратов является высокая токсичность, многочисленные негативные побочные эффекты, относительно невысокая эффективность.

Более безопасным и наиболее перспективной группой лекарственных средств в связи с их относительной дешевизной и безвредностью являются препараты из лекарственных растений.

В частности, в использование в качестве гепатозащитных препаратов лекарственного сбора "силибор", шафрана посевного, девясила высокого, горечавки желтой, тимьяна обыкновенного, астрагала шестицветкового, маакии амурской, расторопши пятнистой, плодов шиповника и боярышника (пат. РФ 2032419, 1995, кл. А 61 К 35/78, пат. РФ 2104027, 1998, кл. А 61 К 35/78, пат. РФ 2102999, 1998, кл. А 61 К 35/78).

При относительною безопасности средств растительного происхождения их эффективность, как правило, относительно невысока.

Наиболее близким к заявляемому изобретению является использование экстракта шелухи какао-бобов (пат. РФ 20331769, 1995, кл. А 61 К 35/78), обладающего наряду с гепатозащитным ранозаживляющим, желчегонным и антиоксидантным действием.

Недостатком препарата является нестабильность его состава и недостаточная исследованность, в частности, для борьбы с различными токсикозами.

Задачей, стоявшей перед авторами, являлось расширение спектра применяемых препаратов лекарственного происхождения, в частности создание препарата, стабильного по составу и позволяющего оказывать лечебное воздействие при введении в организм микродоз активного начала.

В результате исследований было установлено, что задача решается применением в качестве данного средства полисахаридной фракции, выделенной из каллусной ткани растений рода Унгерния.

Выделенная фракция содержала в качестве активного начала полисахарид общей формулы (C₆H₁₂O₆)_3-20 и связанный, по-видимому, в составе комплекса калий в количестве 0,1-20% от веса полисахарида.

Полисахаридную фракцию заявляемого состава получают из каллусной ткани луковиц таких растений рода Унгерния, как Унгерния Виктора, Унгерния Северцева или Унгерния трехшаровой, произрастающих в районе Гиллярской долины и являющимися эндемиками третичного периода. В настоящее время из корней и листьев растений получают алкалоиды, в частности галантамин, ликарин, тацеттин (ЖОХ 1956, XXVII, 12 с.3357).

Возможно использование каллусной ткани, полученной культивированием клеток растения с использованием биохимических методов.

Лучшие результаты были получены при использовании каллусной ткани Унгернии Виктора.

Полисахаридную фракцию получали путем водно-спиртовой экстракцией измельченного растительного материала с последующим ее выделением традиционными методами, включающими, в частности, освобождение от фенольных соединений, органических кислот и алкалоидов. Содержание активного начала в конечном препарате составляет около 0,02% мас. (остальное, в основном, - 30-50% раствор этанола в воде, выполняющий одновременно функции консерванта).

Полученный продукт, получивший в зависимости от происхождения наименования "Гликонор" или "Влаирин", представлял собой прозрачную светло-желтую жидкость с рН 6,8-7,2, характерным запахом и содержанием полисахаридсодержащего сухого остатка не менее 0,2 мг/мл, обычно 0,2-0,5% в зависимости от исходного сырья и технологии концентрирования. В продукте не содержится алкалоидов. Концентрация сухого остатка доводится до 0,2 мг/мл.

Биологически свойства обоих препаратов в основном идентичны, хотя имеются некоторое различие в активности по отношению к ряду патологий.

Препараты были исследованы на токсичность в отношении белых мышей и крыс-самцов. При определении острой токсичности смертельную дозу получить не удалось. Максимально введенная доза составила 15 г/кг, что составило 700% от максимально используемой. Интоксикация не отмечалась. Кроме того, установлено, что препарат не накапливается в организме, не оказывает негативного влияния на состояние ЦНС, кровь и функции печени, почек, состояние внутренних органов.

Препарат вводится в организм перорально в суточной дозе 10^-6-10^-3 г активного начала на 10 кг веса в течении 7-30 дней в возрастающем градиенте дозы от 2 капель в день на 10 кг веса до физиологически принимаемой организмом.

Практика показала, что лечение оптимально проводить курсами по 20-30 дней с интервалом 10-14 дней между ними.

Предложенная схема лечения может подвергаться незначительным изменениям исходя из активности препарата и характера заболевания.

Сущность изобретения иллюстрируется примерами.

Пример 1. Влияние препарата на антитоксическую функцию печени мышей.

Испытания проводили с использованием препарата "Гликонор", приготовленного лабораторией "Румата" (Москва), представляющий собой спиртовой экстракт подземной части Ungemia Victoris, расфасованный во флаконы по 50 мл.

Для выявления нарушений антитоксической функции печени использовали метод гексеналовой пробы. Критерием ее оценки является длительность гексеналового сна, выраженная в минутах. Известно, что гексенал разрушается, в основном, в печени.

В опытах использовали препарат "Гликонор" в дозе 4,54 мг/кг внутривенно и 13,62 мг/кг перорально, что соответствует максимальной терапевтической дозе для человека. В качестве положительного контроля использовали широко известный в практической медицине гепатопротектор - ампульный раствор эссенциале (500мг в 10 мл) в дозе 7,14 мг/кг.

Опыты выполнялись на 60 беспородных мышах, самках, массой 20-22 г. Для экспериментов отбирали кондиционных особей с гладким шерстным покровом и массой тела в пределах среднестатистических возрастных показателей (M+S D). Группы формировали рандомизацией по массе тела. Животных содержали в стандартных пластиковых клетках (10 мышей на клетку) при свободном доступе к воде и корму. Пищевой рацион включал зерновую смесь, брикеты, овощи по средним нормативам потребления корма. Курс лечения составил 10 дней.

Животные были разбиты на 4 группы (по 20 мышей в группе). В первую группу вошли животные, которым внутривенно вводили препарат "Гликонор" в дозе 0,10 мг /мышь, во вторую животные, которым вводили препарат зондом в желудок в дозе 0,30 мг/мышь, что соответствует максимальной терапевтической дозе, рекомендуемой для человека (путь введения соответствовал рекомендуемому пути введения препарата).

В качестве положительного контроля использовали животных, которым внутривенно вводили эссенциале в дозе 0,14 мг/мышь (III группа). В качестве негативного контроля был использован 0,9% раствор хлорида натрия в тех же объемных дозах (IV группа).

На 10 день эксперимента через 2 часа после последнего введения препаратов осуществляли постановку гексеналовой пробы. Гексенал как доза 1,6 мг/мышь.

Латентный период и продолжительность наркоза определяли по моменту утраты и восстановления гравитационного рефлекса. Статистический анализ результатов проводили по t-критерию Стьюдента.

Данные по исследованию антитоксической функции печени мышей представлены в таблице 1.

Как следует из таблицы, наиболее продолжительный наркотический сон отмечен у контрольных мышей IV группы. Этот показатель равен 21,0±4,1 минут.

У животных I и II групп (опыт) и III группы (положительный контроль) продолжительность сна была значительно ниже, чем в 3 группе и соответствовала 13,2±2,5 и 15,7±2,7 (для I и II групп соответственно) и 14,9-1:3,1 (для III группы), что является статистически достоверным результатом по отношению к негативному контролю (р<0,05).

Из результатов исследований, представленных в таблице 1, следует, что препарат "Гликонор" существенно изменяет действия гексенала и, следовательно, влияет на систему неспецифических оксидоредуктаз печени, метаболизирующих чужеродные вещества.

Пример 2. Влияние препарата "ВЛАИРИН" на деятельность печени при токсическом поражении крыс четыреххлористым углеродом (ССl₄).

Испытания проводили с использованием препарата "Влаирин", приготовленного лабораторией "Румата" (Москва), представляющий собой спиртовой экстракт каллусной ткани Ungernia Viсtоris, полученный культивированием клеток растительной ткани, расфасованный во флаконы по 50 мл.

Эксперименты проведены на 50 крысах линии Вистар - самцах, массой 250-280 г. Отбор, содержание и кормление животных проводились соответственно описанному в примере 1.

Поражение печени крыс вызывали четыреххлористым углеродом, вводимым перорально в дозе 0,6 мг/крысу в виде масляного раствора на протяжении 4-х дней.

Препараты вводили внутривенно в равных объемах и зондом в желудок, исходя из рекомендуемой схемы применения в качестве гепатопротекторного средства. Все животные были разбиты на 5 групп по 10 крыс в группе:
- I группа - Опыт. Животные получали "Влаирин" в дозе 0,12 мг/крысу (внутривенно), что соответствует 1/10 рекомендуемой терапевтической дозы для человека и CCl₄;
- II группа - Опыт. Животные получали "Влаирин" в дозе 1,2 мг/крысу (внутривенно), что соответствует 1 терапевтической дозе для человека и CCl₄;
- III группа - Опыт. Животные получали "Влаирин" в дозе 3,6 мг/крысу (перорально), что соответствует 1 терапевтической дозе для человека и CCl₄;
- IV группа - Положительный контроль. Животные получали препарат эссенциале в дозе 1,8 мг/крысу и ССl₄;
- V группа - Контроль. Животные получали физиологический раствор и ССl₄;
- VI группа - Негативный контроль. Животные получали физиологический раствор.

В группах I-V препараты применяли за 2 часа до введения CCl₄ и продолжали применять до 10 дня включительно.

На 10 день у животных всех групп производили забор крови. В сыворотках крови крыс определяли с помощью спектрофотометра активность ферментов аспартат- и аланин-трансаминаз (ммоль/ч-л); общий билирубин (мкмоль/л) - малиновый диальдегид (нмоль/мл).

Для микроскопической оценки изменений в печени проводили забой животных (по 5 особей из каждой группы) на 5 день (после последнего введения CCl₄) и на 10 день (после последнего введения препарата). Забой производился путем декапитации в соответствии с Методическими рекомендациями по эвтаназии экспериментальных животных (1985). Образцы печени фиксировали в 10% растворе формалина и окрашивали Суданом 111. Часть печени гомогенизировали. В гомогенатах печени определяли содержание: холестерина (ХС) на основе измерения оптической плотности стандартных растворов ХС и триглицеридов на основании определения оптической плотности стандартного триолинина (0,13 ммоль/л).

Полученные результаты приведены в таблицах 2 и 3.

Результаты экспериментов показали, что под влиянием препарата "Влаирин" существенно снижалась тяжесть течения токсического гепатита, вызванного четыреххлористым углеродом, что выражалось в ослаблении гиперферментемии, уменьшении содержания биллирубина, нормализации содержания триглицеридов и холестерина, предупреждении развития структурных нарушений в печени. Наиболее отчетливый эффект получен при использовании препарата "Влаирин" в дозе 1,2 мг/крысу внутривенно, что соответствует одной терапевтической дозе, рекомендуемой для человека.

Анализ полученных данных показал, что по эффекту действия заявляемый препарат превосходит широко известный препарат эссенциале в 8 раз (по клинико-морфологическому показателю) и в 12 раз снижает тяжесть токсического гепатита.

Изобретение относится к области медицины, а именно к препаратам и лекарственным средствам для лечения и профилактики заболеваний внутренних органов, в частности печени, а также лечения токсикозов различной этиологии. Предложено средство для нормализации генетического аппарата фракции полисахаридов из каллусной ткани растений вида Унгерния общей формулы (С₆Н₁₂О₆)_3-20, содержащей 0,1-20% калия от веса полисахарида. Препарат применяют перорально в суточной дозе 10^-6-10^-3 г активного начала на 10 кг веса в течение 7-30 дней в возрастающем градиенте дозы от 2 капель в день на 10 кг веса до физиологически принимаемой организмом. Использование средства показывает высокую эффективность и безопасность, возможность сочетать с другими лекарственными препаратами. 3 з.п. ф-лы, 3 табл.

1. Препарат, обладающий гепатозащитным действием, на основе экстрактов активных компонентов растительного сырья, отличающийся тем, что в качестве активного компонента он содержит фракцию полисахаридов из каллусной ткани растений вида Унгерния общей формулы (С₆Н₁₂О₆)_3-20, содержащую 0,1-20% калия от веса полисахарида. 2. Препарат по п. 1, отличающийся тем, что в качестве каллусной ткани используется нативная каллусная ткань растения. 3. Препарат по п. 1, отличающийся тем, что в качестве каллусной ткани используется каллусная ткань растения, полученная культивированием клеток растения с использованием биохимических методов. 4. Препарат по пп.1-3, отличающийся тем, что в качестве каллусной ткани используется каллусная ткань Унгернии Виктора.