СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ЛИМФАТИЧЕСКИХ СОСУДОВ ПЛОДА ЧЕЛОВЕКА Российский патент 1994 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к разделу теоретической медицины - анатомии и может быть применен для изучения начальных этапов формирования лимфатической системы, на которых возникают врожденные пороки развития лимфатической системы (лимфангиоматоз, лимфангиэктазия) и внутренних органов (кисты почки, особенно парапельвикальная, врожденная непроходимость тонкой кишки).

Известные способы выявления лимфатических сосудов [1-7] разработаны на трупном материале в дефинитивном состоянии и не учитывают особенности организации презумптивной лимфатической системы.

При внутритканевом методе вещество (масса Герота, масса Стефаниса, тушь, ртуть, воздух и др. ) впрыскивают в стенку органа с помощью стеклянной канюли или инъекционной иглы, которые повреждают лимфатические капилляры. Через дефекты их стенок инъецируемое вещество из интерстициального пространства попадает в лимфатическое русло и распространяется по направлению лимфотока. Для эффективного использования этого способа требуются развитая сеть лимфатических капилляров и достаточно обширная поверхность органа для введения иглы (канюли), чего нет у плодов III месяца. Существенным недостатком метода являются артефакты, возможность инъекции кровеносных сосудов [2] .

Инъецируемое вещество можно вводить в толщу лимфатического узла. Метод специфичен для выявления лимфатических сосудов. Но лимфатические узлы как анатомические образования до 14-16 недель утробной жизни человека либо отсутствуют, либо недоступны для инъекции, поскольку имеют ничтожно малые размеры.

"Самоинъекция" лимфатической системы лимфой возникает в результате экспериментальной перевязки лимфатических сосудов (узлов), вен, выводных протоков некоторых органов или в следствие патологических изменений в органах, приводящих к застою лимфы. Оба варианта неприемлемы для исследования нормальной анатомии лимфатической системы человека на начальных стадиях ее развития [5] .

Импрегнация лимфатических сосудов солями тяжелых металлов [3, 4] предполагает их из влечение в составе пленок или частей органов, что нецелесообразно для изучения анатомии лимфатической системы и невозможно из-за очень небольших размеров органов и лимфатических сосудов у плода III месяца. Способ выявления лимфатических сосудов с помощью Шифф-реактива [6] основан, очевидно, на окрашивании соединительно-тканных структур в стенке сосудов, которые отсутствуют или немногочисленны до 14-16 недель утробной жизни человека.

Указанных недостатков лишен способ прямой инъекции лимфатических сосудов, который избран как прототип. Препарируют крупные лимфатические стволы, соединяют их с канюлей и впрыскивают различные вещества в ретроградном (противоположном лимфотоку) направлении. Это прием эффективен лишь в том случае, если по какой-либо причине имеет место недостаточность клапанов, которые в большом количестве содержатся в просвете дефинитивных лимфатических сосудов [5] .

Наибольшее применение для инъекции лимфатических сосудов получила синяя масса Герота, поскольку позволяет изготавливать стабильные препараты с контрастной окраской сосудов. Стандартная масса Герота готовится следующим образом: 5 г железной лазури растирают, добавляя по каплям 3-5 мл скипидара, разбавляют хлороформом (10-15 мл), отстаивают и фильтруют. Инъецируют лимфатические сосуды на нефиксированном материале. Рекомендуется использовать слег-подгнивший труп или промывание теплой водой кровеносной системы, что способствует наполнению лимфатических сосудов газами или жидкостью, а следовательно, их визуальному выявлению для введения канюли (иглы).

После инъекции материал помещают в 4-5% -ный раствор формальдегида на 2-3 недели для фиксации. Затем промывают в проточной воде и исследуют лимфатическое русло.

Главным недостатком метода является то, что самые крупные лимфатические сосуды у плодов имеют узкий просвет и очень тонкую стенку, особенно у плодов III месяца. Поэтому невозможно ввести в их просвет канюлю или инъекционную иглу. Стенка презумптивных лимфатических сосудов легко деформируется с возможными разрывами в процессе инъекции, особенно при форсированной. Выявить лимфатические сосуды у плодов III-V месяцев визуально или с помощью микроскопа практически невозможно.

Целью изобретения является выявление лимфатических сосудов у плодов человека III месяца.

Поставленная цель достигается путем предварительной фиксации материала в растворе формальдегида с последующей промывкой и введением разбавленной массы Герота в регионарный лимфатический мешок.

Способ осуществляется следующим образом.

Заблаговременно разбавляют хлороформом стандартную синюю массу Герота в 2-3 раза: боле жидкая масса легче проходит через узкие лимфатические сосуды, меньше их деформирует. Свежий трупный материал (плоды III месяца) помещают в 4-5% на веронал-ацетатном буфере (рН 7,0) или нейтрализованный мелом раствор формальдегида на 10-24 ч, после чего промывают в теплой проточной воде. Плод закрепляют, например, на пенопласте, вскрываю грудную и брюшную полости, отводя лоскут их передних стенок. Иглу (канюлю) вводят в регионарный лимфатический мешок и медленно впрыскивают разбавленную массу Герота. Поскольку на этой стадии развития клапаны в лимфатических сосудах отсутствуют либо единичны с короткими створками, то жидкая масса легко распространяется в любом направлении, орто- и ретро-градно. После наливки материал немедленно опускают в 4-5% -ный раствор формальдегида.

Пример конкретного выполнения способа.

Плод 40 мм теменно-копчиковой длины (9 недель) фиксировали в 4% -ном растворе формальдегида на веронал-ацетатном буфере в течение 15 ч. После промывки в теплой проточной воде (30 мин) вскрыли грудную и брюшную полости лоскутным методом. Удалили печень, сохранив малый сальник, правое легкое и большую часть диафрагмы. Инъекцию осуществляли с помощью шприца "Рекорд" емкостью 1 мл и иглы для подкожных инъекций. Иглу ввели в забрюшинное пространство, впереди брюшной аорты, справа от корня брыжейки двенадцатиперстной кишки, где размещается забрюшинный лимфатический мешок. Масса заполнила мешок, правый и левый грудные протоки, кишечные стволы - чревные (в корне дорсальной брыжейки желудка) и брыжеечные (в корне брыжейки двенадцатиперстной кишки), а также презумптивные лимфатические сосуды брыжейки пупочной петли. Плод опустили в 4% -ный забуференный раствор формальдегида на 16 дней. После промывки в проточной воде изучали анатомию грудного протока и его корней под микроскопом МБС-2.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет выявить грудной проток, а также поясничные и кишечные стволы, их корни и притоки у плодов человека III месяца, а следовательно проводить углубленное исследование анатомии презумптивной лимфатической системы человека и ее преобразования в связи с развитием окружающих органов. Предварительная фиксация материала облегчает его набор, поскольку допускает проведение инъекции лимфатического русла через сутки после выкидыша. (56) 1. Выренков Ю. Е. Основные направления развития современной лимфологии//Арх. анат. - 1989. - Т. 96. - N 6. - С. 14-20.

2. Жданов Д. А. Функциональная анатомия лимфатической системы. - Горький, 1940. - 376 с.

3. Куприянов В. В. Безынъекционная методика изучения сосудов на пленчатых препаратах//Морфологические основы микроциркуляции. - М. : Изд-во 11 ММИ, 965. - С. 20-22.

4. Манукян Л. А. и Сисакян С. А. Способ выявления лимфатических сосудов//Арх. анат. - 1983. - Т. 84. - N 2. - С. 90-92.

5. Русньяк И. , Фельди М. и Сабо Д. Физиология и патология лимфообращения. - Будапешт: Изд-во АН Венгрии, 1957. - 856 с.

6. Штефанец М. И. и Перлин Б. З. Макро-микроскопический метод выявления лимфатический сосудов и узлов//Арх. анат. - 1991. - Т. 100. - N 3. - С. 73-76.

7. Ярославцев Б. М. Анатомическая техника. - Фрунзе: Изд-во Киргиз. гос. ун-та, 1961. - С. 329-342.

Использование: в области теоретической медицины, а именно анатомии, может быть применено для изучения начальных этапов формирования лимфатической системы, на которых возникают врожденные пороки развития лимфатической системы и внутренних органов человека. Сущность изобретения: плод человека 3 месяца помещат в раствор формальдегида на 10 - 24 ч, после чего его промывают и разбавленную в 2 - 3 раза синюю массу Герота вводят в регионарный лимфатический мешок. Способ позволяет выявлять лимфатические сосуды у плодов человека 3 месяца.

СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ЛИМФАТИЧЕСКИХ СОСУДОВ ПЛОДА ЧЕЛОВЕКА путем инъекции синей массы Герота, отличающийся тем, что плод III месяца до инъекции помещают в раствор формальдегида на 10 - 24 ч, после чего его промывают , а разбавленную в 2 - 3 раза синюю массу Герота вводят в регионарный лимфатический мешок.