СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУПП ОНКОРИСКА У БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЕЗОМ ЛЕГКИХ Российский патент 1994 года по МПК G01N33/58 

Изобретение относится к медицине, в частности, к фтизиатрии, и может быть использовано в противотуберкулезных и онкологических учреждениях.

Известен способ определения сывороточных опухолевых маркеров (СЕА, ТРА, УАП) и ферритина при туберкулезе легких. В сыворотке был определен тканевой полипептидный антиген (см. Клиническая роль сывороточных опухолевых маркеров (СЕА, ТРА, УАР и ферритин) при туберкулезе легких. Komafsh H. , Кеккани, 1987. 62. 1, с. 31-36).

Недостатком этого способа является применение большого количества дорогостоящих наборов-маркеров.

Известен способ определения групп онкориска путем определения раковых клеток в бронхоальвеолярных смывах (БАС) с применением маркеров РЭА и β₂- микроглобулин (см. Крумм А. В. Опухолево-ассоциированные антигены бронхоальвеолярного смыва в дифференциальной диагностике опухолевых, предопухолевых и неопухолевых заболеваний легких. Автореф. диссертации канд. мед. наук. 1988).

Данный аналог является наиболее близким по технической сущности заявленному изобретению и принят за прототип.

Недостатком данного способа является травматичность процедуры - смывы БАС проводят неоднократно под наркозом во время бронхоскопии, а также смывы БАС недостаточно информативны ввиду невозможности определения патологии на ранних стадиях.

Техническим результатом является снижение травматичности, повышение информативности на ранних стадиях заболевания, повышение точности. В качестве биологического материала используется сыворотка крови путем радиоиммунологического исследования.

Из локтевой вены берут 3-5 мл крови, центрифугируют, отсасывают сыворотку и разливают по приборам. При постановке набора β₂-микроглобулина берется 0,1 мл сыворотки, делают разведение 1 : 50, развивают по аликвотам, добавляют I¹²⁵ 100 мкл во все пробирки, затем прибавляют антисыворотку к испытываемым сывороткам. При комнатной температуре после встряхивания ставят на инкубацию на 30 мин. По окончании инкубации в каждую пробирку вносят по 1 мл раствора полиэтиленгликоля (разделительная система) и перемешивают на вихревой системе 15 мин. После центрифугирования в течение 15 мин из всех пробирок удаляется надосадочная жидкость, пробирки помещают в γ-счетчик-установку для измерения I¹²⁵ в течение 1 мин. Полученную информацию вносят в графическое изображение - строят калибровочную кривую. На оси абсцисс откладывают десятичный логарифм концентрации β₂-микроглобулина, на оси ординат откладывают значение B/B_o·100% , где В - средняя скорость счета I¹²⁵ бета ₂-микроглобулинсодержащих в пробирках П₁-П₄₂ анализируемые образцы; В_о - скорость средняя I¹²⁵бета₂-микроглобулин в пробирке С_о, содержащих калибровочную кривую, соответствующую концентрации бета₂-микроглобулин 0 мкг/л. По этой калибровочной кривой определяют содержание β₂-микроглобулина в исследуемых образцах сыворотки крови.

Постановка радиоиммуноанализа "ИРМО-ФЕРРИТИНА"
В две контрольные пробирки (Т) вносят 100 мкл I¹²⁵ in vitro, затем в чистые пробирки (90 ги), наливают по 200 мкл буфера, добавляют 50 мл сыворотки крови и такое же количество буфера в калибровочные пробы (С_о-65), встряхивают на вихревом смесителе и ставят на инкубацию на 24 ч при комнатной температуре. После инкубации в каждую пробирку (кроме контрольных, обозначенных условно Т) добавляют иммуносорбент в количестве 100 мкл. Ставят на шуттель-аппарат для встряхивания на 1 ч, затем центрифугируют 10 мин, сливают жидкую часть, а в осадок добавляют 2 мл дистиллированной воды, встряхивают 3-5 с и ставят в центрифугу на 10 мин. Затем сливают дистиллированную воду и пробирки с плотным осадком ставят на гамма-счетчик для получения результатов испытываемых и калибровочных проб импульса в 1 мин.

Содержание ферритина в сыворотке крови рассчитывается по формуле: B/T·100% , где В - средняя скорость счета I¹²⁵-антител к ферритину в пробирках, содержащих калибровочные смеси С_о-С₅, антител к ферритину; Т - средняя скорость счета I¹²⁵ контрольных пробирок.

Значение B/T·100% откладывают на оси ординат, а по оси абсцисс - десятичный логарифм концентрации ферритина соответственно калибровочным пробам (С_о-65).

Способ апробирован в Московском НИИ туберкулеза на 120 больных. Из них 20 - контрольная группа - здоровые доноры. Из 100 больных у 20 была выявлена патология, с которой больные были отнесены в группу онкориска.

П р и м е р 1. Больной Н. , 26 лет. Диагноз: фиброзно-кавернозный туберкулез в фазе инфильтрации и обсеменения с локализацией полостей в верхних долях обоих легких.

В результате радиоиммунного определения ферритина β₂-микроглобулина в сыворотке крови и динамического наблюдения (5 мес. ) наблюдалась отрицательная динамика с высокими показателями ферритина (более 500 нг/мл) и β₂-микроглобулина (3,75 мг/мл). Больной выписан из клиники с высокими показателями ферритина и β₂-микроглобулина, что дает возможность судить о наличии раннего появления онкологического процесса.

П р и м е р 2. Больной Б. , 25 лет, поступил в клинику МНИИТ с диагнозом: инфильтративный туберкулез легких в фазе распада и обсеменении (ВК+).

В динамике лечения и пребывания в клинике больному наряду с рентгенотомографическим исследованием проводилось лабораторное радиоиммуноизотопное обследование in vitro методом радиоиммунного анализа: постановка набора "ИРМО-ферритин" и β₂-микроглобулин. В первые дни поступления и в процессе лечения (9 мес. ) показатели ферритина отмечались очень высокие - 500 нг/мл, β₂-микроглобулин - к концу лечения 5,26 мг/мл. Несмотря на длительное лечение (9 мес. ) показатели радиоиммуноанализа ферритин и β₂-микроглобулин возрастали. Отрицательная динамика наблюдалась также в рентгенотомографических исследованиях. На фоне туберкулезного процесса появляются патологические изменения, не связанные со специфическим процессом.

Соответственно при норме:
ферритин от 10-100 мг/мл;
β₂-микроглобулин 1,88-2,1 мг/мл.

По полученным данным значение β₂-микроглобулин определяется границей 5,6 мг/мл ферритин по 500 нг/мл и выше, хотя по доступным источникам могут быть выше этих границ. Наличие показателей β₂-микроглобулин от 2,1 мг/мл и выше и ферритина 200 мг/мл и выше могут являться прогностическим тестом, который указывает на раннюю стадию развития онкологического процесса на фоне удовлетворительного клинического состояния, при продолжении специфического процесса или окончания лечения и прекращения выделения ВК.

Присутствие высоких показателей ферритина и β₂-микроглобулина послужило основанием для изучения их возможной роли как критерия диагностики определения оценки эффективности при формировании групп повышенного риска развития рака легкого.

Таким образом, применение предлагаемого способа определения групп онкориска с помощью радиоиммунного анализа β₂-микроглобулина и ферритина в сыворотке крови позволяет подтвердить или исключить предлагаемую концепцию.

Использование радиоимунного метода определения β₂-микроглобулина и ферритина в качестве опухолевых маркеров позволит снизить травматичность, повысить информативность. Предлагаемый способ может найти широкое применение в клинической практике фтизиатрии. Метод высокоинформативен, для данной патологии специфичен, легко воспроизводим, высокочувствителен с отсутствием лучевой нагрузки. (56) Крумм А. В. Опухолево-ассоциированные антигены бронхоальвеолярного смыва в дифференциальной диагностике опухолевых, предопухолевых и неопухолевых заболеваний легких. Автореф. дисс. канд. мед. наук, М. : 1988, с. 20.

Использование: медицина, фтизиатрия, для определения группы онкориска больных туберкулезом легких. Сущность изобретения: в сыворотке крови определяют β₂-микроглобулин и ферритин радиоиммунным методом. Предлагаемый способ легко воспроизводим и дает возможность определить в ранний период переход туберкулезного процесса в раковый.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУППЫ ОНКОРИСКА У БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЕЗОМ ЛЕГКИХ, включающий радиоиммунологические исследования биологического материала, отличающийся тем, что в качестве биологического материала используют сыворотку крови, в которой регистрируют уровень ферритина и β₂-микроглобулина и при содержании ферритина 500 н/гмл и выше, а β₂-микроглобулина 2,1 - 5,6 мг/мл определяют группу онкориска больных туберкулезом легких.