СТИМУЛЯТОР РЕПАРАТИВНОЙ РЕГЕНЕРАЦИИ ТКАНЕЙ Российский патент 1994 года по МПК A61K31/14 

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, и представляет собой средство для ускорения регенерации поврежденных тканей.

Для сокращения сроков заживления ран и ускорения восстановления печени после острого токсического поражения и травм, применяют четвертичную аммонийную соль конидина общей формулы

Заживление ран проводили с использованием раневого покрытия, полученного включением средства (ЧАС-25К) в коллаген. Ранозаживляющее свойство этого покрытия сравнивали с аналогичным свойством губки (комплекс коллагена с метилурацилом) "метуракол". Эксперименты проведены на белых лабораторных крысах-самцах массой 180-200 г, которым наносили полнослойные вырезанные раны площадью 300 мм² с восстановлением кольца по методу Слуцкого.

Результаты этой серии экспериментов представлены в табл. 1. Как видно из табл. 1, композиция коллагена и предложенного средства ускоряют процесс заживления ран. Размер кожного дефекта на 10-е и 14-е сутки после нанесения ран (% от контроля) зависит от концентрации препарата в покрытии. Наилучший лечебный эффект обнаружили покрытия, содержащие 5% ЧАС-25К и 95% коллагена.

Стимуляция заживления ран под влиянием покрытий с ЧАС-25К достигает максимума к 12-14-и сут для пленок и к 14-16-и сут для губок и сохраняется на достаточно высоком уровне, сокращая сроки эпителизации ран. Окончательное заживление ран при использовании композиции с 5%-ным содержанием ЧАС-25К составляет 19,2 ± 1,5 сут, индекс ускорения заживления ран равен 36,2% по сравнению с коллагеновой губкой "Комбутек" (контроль 1) и 20% по сравнению с губкой, содержащей 5%-ный метилурацил-"Метуракол".

Эти показатели заметно отличаются от сроков заживления ран при использовании губки "Метуракол" - прототипа, для которой срок полного заживления составляет 24,0 ± 1,0 сут, а индекс ускорения заживления 17,2%.

Гистологическое и гистохимическое изучение тканей заживающих ран (окраска гематоксилин-эозином, пикрофуксином, толуидиновым синим, по Браше и т.д.) позволило сделать следующие выводы:
динамика репаративных процессов в кожных ранах на 3, 10, 14, 21-е сут опыта свидетельствуют о заметной стимуляции роста и созревания грануляционной ткани, интенсификации регенерации эпителия под влиянием композиции коллагена и ЧАС-25К;
введение в коллагеновую пленку ЧАС-25К на начальных сроках заживления (3-7-е сут) приводит к некоторому усилению воспалительных процессов по сравнению с губкой "Метуракол", хотя эти процессы выражены значительно слабее, чем в контроле (заживление под струпом);
наибольшая интенсивность фибробластической и макрофагальной реакции, роста и созревания грануляционной ткани, ее перехода в рубцовую ткань и эпителизации дефекта наблюдались при использовании препарата, содержащего 5% ЧАС-25К.

В экспериментах по изучению влияния ЧАС-25К на восстановление массы печени после частичной резекции установлено, что однократное внутривенное введение препарата обеспечивает более быструю регенерацию органа, чем в контроле. Поэтому была проверена возможность использования этого соединения как стимулятора репаративной регенерации печени после химического поражения, вызванного CCl₄.

Первоначально исследовалось дозо-эффектная зависимость гепатопротекторного действия ЧАС-25К. Препарат вводили внутривенно в дозе 2-8 мг на кг массы животного. Одной группе ЧАС-25К вводили через 6 ч после CCl₄, а другой - за сутки до затравки. В экспериментах этой серии через сутки животных забивали, кровь брали для биохимических исследований.

В табл. 2 приведены данные по определению АЛТ, гистидазы и содержания билирубина в сыворотке крови (% от контроля). Как видно из результатов табл. 2, ЧАС-25К наиболее эффективно защищает печень от токсического действия CCl₄ в дозе 2-4 мг на кг веса животного. Введение препарата за сутки до введения CCl₄ или через 6 ч после введения CCl₄достоверной разницы в результатах не дает.

В последующих экспериментах гепатит вызывали 4-кратным подкожным введением 50%-ного масляного раствора CCl₄ один раз в сутки в объеме 0,4 мл на 100 г массы животного.

Способность ЧАС-25К восстанавливать печень после токсического поражения CCl₄ сравнивали с действием традиционного гепато-протектора - витамина В₁₂, который вводили по схеме и в количестве, обычно используемом в терапии токсического гепатита.

Для этой серии экспериментов брали 5 групп животных: 3 - контрольные; 0 - интактные животные; 1 - животные с токсическим гепатитом; 4 - животные получившие CCl₄ и витамин В₁₂ и две опытные, в которых животным вводили ЧАС-25К и CCl4.

На 3, 6, 10-е сут животных забивали, кровь и ткани печени брали для биохимических и морфологических исследований. На гистологических препаратах, окрашенных гематоксилином и эозином, проводили подсчет митотического индекса (МИ) (%) и оценивали интенсивность дистрофических изменений, некроза, макрофагальную и фибробластическую реакцию, развитие грануляционной ткани.

Уровень гиперлипопероксидации оценивали по содержанию ТБК-активных продуктов в сыворотке крови и гомогенате печени.

У крыс, которым вводили ЧАС-25К, по сравнению с контрольными группами, достоверно уменьшается число очагов некрозов и снижается интенсивность дистрофических изменений гепатоцитов. Как видно из табл.3 на 3-и сут в группах животных 1 и 4 повреждение печени стимулирует умеренную пролиферацию гепатоцитов с МИ 0,93% и 0,7% соответственно. В группе животных, леченых ЧАС-25К в концентрации 2 мг/кг массы животного, количество митозов возрастает приблизительно в 3-3,5 раза по сравнению с контрольными группами.

Из анализа биохимических параметров крови, приведенных в табл.4, следует, что к 10-м сут уровень АЛТ, гистидазы, содержание билирубина у животных 1 группы все еще в 1,9; 3,9 и 1,5 раза соответственно превышает норму, а в группах получивших ЧАС-25К, эти характеристики приближаются к значениям, свойственным для здоровых животных. На 3-и сутки у животных с токсическим гепатитом препараты ЧАС-25К снижали перекисное окисление липидов в 2-3 раза.

На основании проведенных исследований можно сделать вывод, что ЧАС-25К обладает свойствами стимулировать репаративные процессы в поврежденных тканях.

П р и м е р 1. Под эфирным наркозом в межлопаточной области животному делали концентрический разрез, удаляли участок кожи с подкожной клетчаткой. Стандартизацию размеров раны обеспечивали введением в нее тефлонового кольца, которое прочно фиксировалось окружающей тканью. Получали раны со стандартной площадью 300 мм². Однократно внутрь кольца на поверхность раны накладывали коллагеновую губку с содержанием ЧАС-25К 2,5%. Сверху кольцо покрывали перфорированной целлофановой пленкой для предотвращения загрязнения, высыхания раны и потери коллагенового покрытия. Таким образом прооперировано 20 животных. На 5-е сутки тефлоновые кольца удаляли и измеряли площадь ран на 7, 10, 12, 14 сут, на 14-е сутки после операции средняя площадь ран составляла 66,9 ± 22,8 мм², т.е. 23% от исходной. Окончательное заживление ран наступило на 21,0 ± 1,3 сут. Ткани ран на 3, 7, 10, 14 и 21-е сут после операции изучали гистологически.

П р и м е р 2. Оперативное вмешательство выполнено как описано в примере 1. Для лечения ран использована коллагеновая губка с содержанием ЧАС-25К 5% . Число животных в опыте 20. На 14-е сут после операции площадь раны составила 48,7 ± 1,8 мм², т.е. 16,2% от исходной. Окончательное заживление наступило на 19,2 ± 1,5 сутки.

П р и м е р 3. Оперативное вмешательство выполнено на 20 крысах, как в примере 1. Для лечения использована коллагеновая губка с содержанием ЧАС-25К 10%. На 14-е сут после операции площадь раны составила 147,9 ± 47,4 мм², т. е. 49,3% от исходной. Окончательное заживление наступило на 32,5 ± 2,7 сут.

П р и м е р 4. Оперативное вмешательство выполнено на 20 крысах как в примере 1. Для лечения использована губка "Метуракол". На 14-е сут площадь ран составила 70,7 ± 12 мм^2, т.е. 23,6% от исходной. Окончательное заживление наступило на 24,0 ± 1,0 сут.

П р и м е р 5. У крыс экспериментальный гепатит вызывали подкожными инъекциями 50%-ного масляного раствора тетрахлорметана (CCl₄) один раз в сутки в объеме 0,4 мл на 100 г массы животного в течение 4 дней подряд. Животным за 2 ч до первого введения CCl₄ внутривенно вводили ЧАС-25К в дозе 2 мг/кг веса животного (в объеме 0,5 мл). На 3, 6, 10-е сут от начала эксперимента группы из 10 животных забивали, брали кровь и ткань печени для биохимических и морфологических исследований. В сыворотке крови определяли активность АЛТ, гистидазы, содержание билирубина. Уровень гиперлипопероксидации оценивали по результатам определения ТБК-активных продуктов в сыворотке крови и гомогенате печени животных. На 10-е сутки активность аланинаминотрансферазы составила 0,616 ±0,029 мкмоль/мл.ч, 12,1% от исходного (3 сут), активность гистидазы 0,088 ± 0,07 ммоль/мин.л, т.е. 28,2% от исходного значения и содержания билирубина на 10-е сутки 0,594 ±0,054 мг/дл, т.е. 24,8% от содержания билирубина на 3-е сут эксперимента в контрольной группе 1 (CCl₄).

П р и м е р 6. Экспериментальный гепатит у крыс вызывали способом, описанным в примере 5. Животным за 2 ч до первого введения CCl₄внутривенно вводили ЧАС-25К в дозе 4 мг/кг веса животного (в 0,5 мл раствора). На 10-е сутки активность АЛТ составляла 0,835 ± 0,069 мкмоль/мл.ч, т.е. 16,4% от исходной. Активность гистидазы 0,188 ± 0,021 ммоль/мин.л, т.е. 23,6% от исходной, содержание билирубина 0,505± 0,013 мг/дл, т.е. 17,9% от содержания билирубина в сыворотке крови животных на 3-и сут эксперимента.

П р и м е р 7. У крыс экспериментальный гепатит вызывали по методике, описанной в примере 5. За 2 ч до первого введения CCl₄, а затем ежедневно в течение последующих 10 дней внутримышечно вводили витамин В₁₂ в дозе 50 мкг на 1 кг веса животного (в 0,5 мл раствора). На 10-е сутки от начала эксперимента активность АЛТ составила 0,953± 0,067 мкмоль/мл.ч, т.е. 18,7% от исходной. Активность гистидазы 0,377 ± 0,017 ммоль/мин.л, т.е. 47,4% от начальной, содержание билирубина 0,699 ± 0,039 мг/дл, что составляет 4,8 от исходного содержания билирубина.

Изобретение относится к медицине. Четвертичная аммонийная соль олигомера-25 конидина известная как антагонист гепарина предлагается в качестве средства для стимуляции репаративной регенерации поврежденных тканей. Показано, что однократное введение препарата в дозе 2 - 4 мг/кг массы животного ускоряет восстановление печени после острого токсического поражения, вызванного CCl₄ . Раневое покрытие, полученное включением средства в коллаген, стимулирует заживление полнослойных вырезанных ран. Индекс ускорения заживления составляет 36% по сравнению с коллагенновой губкой "Комбутек" и 20% по сравнению с губкой "Метуракол". 4 табл.

Применение четвертичной аммонийной соли конидина формулы

в качестве стимулятора репаративной регенерации тканей.