СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОМПЕНСАЦИИ САХАРНОГО ДИАБЕТА У ДЕТЕЙ Российский патент 1994 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, в частности к эндокринологии, и может быть использовано для установления компенсации сахарного диабета у детей, а также для оценки правильности выбора дозы инсулина.

Известен способ определения компенсации сахарного диабета, проводимый путем исследования уровня гликемии, отсутствия глюкозурии, кетонемии, кетонурии. Недостатком известного способа является относительно невысокая точность информации, обусловленная тем, что содержание указанных показателей не является стабильным даже в течение суток.

Наиболее близким по технической сущности к заявляемому послужил способ определения компенсации сахарного диабета по содержанию гликированных гемоглобинов с предварительным освобождением их от лабильной фракции. Согласно этому способу оценка состояния компенсации происходит только по повышенному содержанию стабильного компонента.

Недостатком способа прототипа является относительная длительность и сложность диагностической процедуры, обусловленная применением диализа, который длится более суток и представляет определенные технические трудности.

Целью изобретения является ускорение и упрощение диагностической процедуры, позволяющее диагностировать состояние компенсации или декомпенсации.

Поставленная цель достигается тем, что для определения компенсации сахарного диабета путем исследования крови определяют содержание гликированных гемоглобинов и активность глюкозо-6- фосфатдегидрогеназы и при содержании гликированных гемоглобинов до 3,5% и активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в пределах 1,8-2,7 мкмоль˙мин/г Нb определяют компенсацию сахарного диабета. Достижение положительного эффекта обусловлено отказом от проведения дополнительной процедуры диализа. Одновременное определение двух показателей связано с тем, что содержание гликированных гемоглобинов отражает уровень гликемии не только в момент исследования, а и в течение 3-4 предшествующих месяцев, то есть периода жизни эритроцитов, так как стабильный компонент гликированных гемоглобинов исчезает только с гибелью клеток. Активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы находится в тесной взаимосвязи с концентрацией глюкозы, участвующей в гликировании, и служит объективным показателем на момент исследования.

Способ осуществляется следующим образом.

У больного забирают кровь из вены в количестве 2-3 мл в пробирку с 2-3 каплями гепарина. Эритроциты отделяют от плазмы путем центрифугирования при 3 тыс. об/мин в течение 15 мин. Эритроциты гемолизируют добавлением равного объема дистиллированной воды и в гемолизате определяют содержание общего гемоглобина. В опыт берут такое количество гемолизата, которое содержит 10 мг гемоглобина. Объем гемолизата доводят до 1 мл физиологическим раствором, добавляют 1 мл 0,3 н. щавелевой кислоты и выдерживают в кипящей бане 3 ч, затем добавляют 1 мл 40% раствора трихлоруксусной кислоты и центрифугируют. К 1 мл надосадочной жидкости добавляют 1 мл 0,05 М раствора тиобарбитуровой кислоты и инкубируют в водяной бане при 40^оС 40 мин. Полученный окрашенный раствор спектрофотометрируют против контроля при 443 нм. Контрольная проба обрабатывается так же, как опытная, только вместо гемолизата берется физиологический раствор. Расчет гликированных гемоглобинов проводится исходя из того, что 1% гликированного гемоглобина соответствует оптической плотности стандартного раствора, равной 0,029.

Определение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г6ФД). Активность Г6ФД измеряют спектрофотометрически при 340 нм по нарастанию НАДФН₂.

Реактивы: 1. Трис-буфер 0,02 М рН 7,6.

2. МgCl₂ 0,3 М
3. НАДФ 0,002 М
4. Глюкозо-6-фосфат-натриевая соль 0,02 М (Г-6-Ф)
В спектрофотометрическую кювету помещают реакционную смесь, содержащую в объеме 3 мл 0,02 М трис-буфер, рН 7,6 (2,35 мл), 0,3 М МgCl₂ (0,05 мл), 0,002 М НАДФ (0,1 мл), а также 0,02 М раствор Г-6-Ф (0,4 мл). Реакцию начинают добавлением 10 МКЛ гемолизата эритроцитов (1:20). Контрольная проба не содержит Г-6-Ф. Измеряют поглощение, нарастание поглощения в течение первых 3 мин при 340 нм.

Формула расчета активности Г6ФД:
= мкмоль НАДФН₂/г Нв/мин
190,5 - экстинкция 1 г Нb на 3 см³;
Δ ОД - изменение оптической плотности пробы в 1 мин;
2,07 - молярный коэффициент;
ОД_Нb - оптическая плотность гемолизата.

При содержании гликированных гемоглобинов до 3,5% и активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в пределах 1,8-2,7 мкмоль НАДФН₂/гНb/мин определяют компенсацию сахарного диабета.

Установлено, что из 84 обследованных детей с сахарным диабетом у 14 больных показатели гликированных гемоглобинов и активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы соответствовали компенсации сахарного диабета. Оценка компенсации диабета проводилась помимо определения показателей гликированных гемоглобинов и активности глюкозо-6-фосфатдегидрогензы по общепринятым критериям - уровню гликемии, отсутствию глюкозурии и кетонурии. Длительность процедуры согласно способу составляет 5-7 ч. В указанной группе были дети, страдающие различными формами сахарного диабета: латентный диабет, сахарный диабет II степени тяжести, III степени тяжести.

П р и м е р 1. Адамсон Н., 10 лет. Ист. бол. N 7440. Больна сахарным диабетом два года. Поступила на эндокринное отделение для подбора дозы инсулина с диагнозом сахарный диабет II степени тяжести, декомпенсация. После проведенного лечения гликемия 3,2-3,0-6,7 ммоль/л. Показатели гликированных гемоглобинов составляли 2,8% , активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы - 2,48 мкмоль НАДФН₂/гНb/мин. У больного диагностирована компенсация сахарного диабета, так как уровень гликемии в пределах нормы, отсутствовали глюкозурия и кетонурия.

П р и м е р 2. Курзенкова С., 6 лет. Поступила на эндокринное отделение с диагнозом сахарный диабет II степени тяжести, декомпенсация. Больна в течение трех лет. При поступлении гликемия 18,7 ммоль/л. После проведенного лечения гликемия в пределах 5,2-4,4-4,5 ммоль/л. Содержание гликированных гемоглобинов - 2,84%, активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы 2,64% мкмоль НАДФН₂/г Нb/мин. У больного диагностирована компенсация сахарного диабета, так как уровень гликемии в пределах нормы, отсутствовали глюкозурия, кетонурия.

П р и м е р 3. Землянухина Т., 12 лет. Ист. бол. N 2373. Поступила на эндокринное отделение с диагнозом сахарный диабет II степени тяжести, декомпенсация. После подбора дозы инсулина гликемия в пределах 4,4-5,6 ммоль/л. Содержание гликированных гемоглобинов - 3,1%, активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы - 2,19 мкмоль НАДФН₂/гНb/мин. У больного диагностирована компенсация сахарного диабета, так как уровень гликемии в пределах нормы, отсутствовали глюкозурия, кетонурия.

Использование изобретения в медицинской практике позволяет сократить длительность диагностической процедуры на 24 ч, упростить исследование и снизить вероятность развития осложнений сахарного диабета.

Использование: изобретение относится к медицине, в частности к эндокринологии, может быть использовано для установления компенсации сахарного диабета у бетей, а также для оценки правильности выбора дозы инсулина. Сущность изобретения: для определения компенсации сахарного диабета у детей определяют содержание гликированных гемоглабинов и активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в крови и при ее активности в пределах 1,8 - 2,7 мкмоль мин/Hb определяют компенсацию сахарного диабета.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОМПЕНСАЦИИ САХАРНОГО ДИАБЕТА У ДЕТЕЙ, включающий измерение содержания гликированных гемоглобинов, отличающийся тем, что дополнительно определяют активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и при ее значении в пределах 1,8 - 2,7 мкмоль · мин/ гHb определяют компенсацию сахарного диабета.