СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ ПРИ ЭКСТРАКЦИИ КАТАРАКТЫ Российский патент 1994 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к области медицины - офтальмологии и предназначено для прогнозирования ранних послеоперационных осложнений, связанных с развитием аутоиммунных реакций.

Известно, что имплантация искусственного хрусталика после экстракции катаракты увеличивает частоту воспалительных реакций в послеоперационном периоде по сравнению с простой экстракцией. По данным литературы, частота стерильного увеита, не связанного с послеоперационной инфекцией, операционной техникой или видом линзы, увеличилась после интраокулярной коррекции до 25,3%. Этиопатогенез этих осложнений не ясен, однако неадекватность реакций глаза объему оперативного вмешательства, развитие увеита в первые дни после операции, успешное купирование процесса кортикостероидами заставляет склоняться в пользу аутоиммунной природы этих осложнений.

В офтальмологии известен способ прогнозирования воспалительных осложнений после экстракции постувеальной катаракты, предусматривающий иммунологическое обследование больного до операции, включающее исследование слезной жидкости в реакции непрямой гемагглютинации на наличие антител и S-антигену сетчатки и прогнозирование развития осложнений при титрах антител, больших или равных 1:32.

Однако описанный способ позволяет выявлять аутоиммунные реакции, вызванные только одним строго тканеспецифичным S-антигеном сетчатки, что существенно снижает точность способа.

Целью изобретения является повышение точности прогнозирования осложнений после имплантации ИОЛ.

Поставленная цель достигается тем, что в способе прогнозирования воспалительных осложнений при экстракции катаракты с имплантацией ИОЛ путем определения антител к специфическому антигену отличительной способностью является то, что в качестве специфического антигена используют нативную и денатурированную дезоксирибонуклеиновую кислоту (ДНК), а содержание антител определяют в сыворотке крови в иммуноферментном анализе с последующим определением индексов реакции и при показателях хотя бы одного индекса выше соответственно 1,1 и 1,3 прогнозируют развитие воспалительного процесса.

Способ осуществляется следующим образом. У больного из пальца берут кровь в объеме 0,5 мл, отсасывают сыворотку. Для определения антител к нативной и денатурированной ДНК, выделенной из селезенки крупного рогатого скота, используют наборы для иммуноферментного определения этих антител, выпускаемые ЦНИИ вакцин и сывороток им.И.И.Мечникова Минздрава СССР. Применяют твердофазный вариант иммуноформентного анализа (ИФА) с использованием 96-луночных пластин с плоским дном. В лунки одной пластины вносят по 100 мкл раствора нативной ДНК, в другой - денатурированной. Сорбцию антигена проводят при 4^оС 18 ч, затем обе пластины тщательно отмывают (6 раз) от избытка антигена и в лунки вносят по 100 мкл исследуемых сывороток в разведении 1:100. Каждую сыворотку вносят в 4 лунки. Для контроля специфической активности тест-системы в каждую пластину вносят положительную (содержащую антитела к нативной денатурированной ДНК) и отрицательную (не содержащую антител к обоим видам ДНК) в разведении 1:100. Контакт 1 ч при 37^оС, после чего пластины вновь отмывают от непрореагировавших с антигеном антител и в каждую лунку обеих пластин вносят по 100 мкл конъюгата антител против иммуноглобулинов g человека с пероксидазой в рабочем разведении. Контакт 1 ч при 37^оС. После окончания контакта пластины тщательно отмывают и в каждую лунку добавляют по 100 мкл приготовленной ex tempore субстратной смеси (0,08% раствор 5-аминосалициловой кислоты и 0,05% раствора перекиси водорода). Пластины оставляют при комнатной температуре в темном месте на 1 ч. Учет реакции проводят на спектрофотометре при длине волны 450 нм. Вычисляют среднее арифметическое значение оптической плотности для каждой сыворотки, после чего определяют индекс иммуноферментного анализа: частное от деления оптической плотности исследуемой сыворотки на оптическую плотность контрольной отрицательной сыворотки. Реакция считается положительной при индексе ИФА выше 1,1 для нативной ДНК и 1,3 для денатурированной ДНК. Повышение индексов нативной и/или денатурированной ДНК свидетельствует о наличии у больного аутоиммунного процесса.

При статистической обработке с использованием критерия χ² выявлена достоверная разница в частоте возникновения ранних осложнений в послеоперационном периоде в группе больных с повышенными индексами обеих или одной ДНК по сравнению с группой больных, имеющих нормальные показатели.

П р и м е р 1. Больная Ч., 1953 г.р. Диагноз: зрелая катаракта правого глаза, начальная катаракта левого глаза. Сопутствующая соматическая патология не выявлена. Индекс ИФА: нативная ДНК - 1,9; денатурированная ДНК - 1,9. Произведена экстракапсулярная экстракция катаракты с имплантацией заднекамерной линзы. Операция без осложнений. Назначен обычный курс противовоспалительной терапии, включающий парабульбарные инъекции дексазона вместе с антибиотиками 1 раз в день в течение 5 дней. На следующий день после операции появился легкий отек роговицы, отек радужки, вялая реакция зрачка на свет, экскурс его до 1 мм. На третий день после операции отмечена отрицательная динамика: гипопион до 1 мм в виде уровня, помутнение влаги передней камеры, наличие большого количества клеток во влаге (3+), формирование синехий между ИОЛ и радужкой. Несмотря на интенсивную антибиотикотерапию явления воспаления прогрессируют. В области зрачка появился мощный желеобразный экссудат, спускающийся к нижнему углу передней камеры. При повторном обследовании индексы нативной и денатурированной ДНК остаются повышенными. Увеличены дозы стероидов (парабульбарно 2 раза в день, внутривенно 1 раз в день в течение трех дней), внутривенно гемодез в течение 3 дней. В результате назначенной терапии на 6 день наступило улучшение: рассасывание экссудата, уменьшение размеров гипопиона. Клиническая стабилизация отмечена к 12 дню после операции, больная продолжала получать стероиды в виде подконъюктивальных инъекций дексазона. Выписалась с остротой зрения 0,6. После выписки прекратила стероидную терапию, после чего наступило резкое ухудшение: вновь появились боли в глазу, помутнение влаги передней камеры, клеточная взвесь во влаге. Индексы нативной и денатурированной ДНК повышены до 2,2. Проведен курс интенсивной стероидной терапии: внутривенные инъекции дексазона в течение 3 дней, парабульбарные - 5 дней. Через 3 недели после операции воспалительный процесс купирован.

П р и м е р 2. Больная А., 1913 г.р. Диагноз: начальная возрастная катаракта левого глаза. Сопутствующие заболевания: гипертоническая болезнь. Перед операцией индекс нативной ДНК 1,4, денатурированной - 1,3. Произведена экстракапсулярная экстракция катаракты с имплантацией заднекамерной линзы. Операция без осложнений. На 3-4 день после операции появилось помутнение влаги передней камеры (3+), клеточная взвесь во влаге (3+), отек радужки с явлениями иридоциклита. Назначено внутривенное введение стероидов в сочетании с парабульбарным введением. На фоне интенсивной стероидной терапии явления иридоциклита купированы, нормализовались показатели аутоиммунного состояния: индекс нативной ДНК - 1,0, денатурированной ДНК - 1,1. Острота зрения при выписке (8 день) - 0,6.

П р и м е р 3. Больная С., 1934 г.р. Диагноз: начальная катаракта правого глаза, осложненная катаракта левого глаза. Сопутствующие заболевания: тромбофлебит нижних конечностей. Индекс денатурированной ДНК перед операцией 0,1, нативной - 0,1. Произведена экстракапсулярная экстракция катаракты с имплантацией задней камерной линзы. Операция без осложнений. Послеоперационное течение без осложнений. Индексы нативной и денатурированной ДНК на 4 день после операции 0,1. Острота зрения при выписке на 6 день 0,3, через месяц 1,0.

Таким образом, выявление аутоиммунного состояния перед операцией с помощью определения индекса антител к нативной и денатурированной ДНК в крови больного позволяет прогнозировать развитие ранних послеоперационных осложнений после экстракции катаракты с имплантацией ИОЛ, обосновывает назначение более интенсивной, чем обычно, кортикостероидной терапии, служит основанием для продления или отмены стероидной терапии, повышает точность прогнозирования на 8%.

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для прогнозирования послеоперационных осложнений при экстракции катаракты. Цель - повышение точности прогнозирования осложнений. Для этого у больного перед операцией экстракции катаракты с имплантацией ИОЛ исследуют кровь на содержание антител к нативной и денатурированной ДНК в иммуно-ферментном анализе с последующим определением индексов реакции и при показаниях хотя бы одного индекса выше соответственно 1,1 и 1,3 прогнозируют развитие воспалительного осложнения.

СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ ПРИ ЭКСТРАКЦИИ КАТАРАКТЫ путем определения содержания антител к специфическому антигену, отличающийся тем, что, с целью повышения точности прогнозирования осложнений после имплантации ИОЛ, в качестве специфического антигена используют нативную и денатурированную ДНК, а содержание антител определяют в сыворотке крови в иммуноферментном анализе с последующим определением индексов реакции и при показателе хотя бы одного индекса выше соответственно 1,1 и 1,3 прогнозируют развитие воспалительного осложнения.