СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГНОТОБИОЛОГИЧЕСКИХ МОДЕЛЕЙ Российский патент 1995 года по МПК A61D19/00 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при проведении научно-исследовательских работ с экспериментально-биологическими моделями, в частности при получении гнотобиологических моделей (мышей, крыс и т.п.).

Известен способ получения гнотобиологических моделей, включающий стерилизацию внутренних поверхностей камер изолятора, перчаток и набора хирургических инструментов, гистерэктомию, при которой фиксируют самку-донора с 2-й или 3-й беременностью в положении на спине, удаляют шерсть с живота, обмывают кожу теплой водой, обрабатывают раствором йода, приклеивают к поверхности кожи анаэробную пленку, обрабатывают пленку раствором йода, под местной анастезией по средней линии живота разрезают пленку и склеенную с ней кожу с поперечными разрезами по концам, рассекают по этим линиям мышцы живота и брюшины, отворачивают лоскуты ткани в сторону, обкладывают рану стерильными марлевыми салфетками с разводом краев тупым ранорасширителем, выводят рога беременной матки из брюшной полости, перевязывают матку в области шейки нитью или марлевым жгутиком, смоченным в растворе йода, пересекают кровеносные сосуды и связки матки, ампутируют матку в области шейки, дистальнее места перевязки, погружают ампутированную матку вместе с плодами на 1 мин в сосуд с дезинфектантами температурой 38^оС, разрезают стенки матки, извлекают плоды, освобождают их от плодных оболочек, осушивают с перевязкой и отсечением пуповин, проводят микробиологический контроль околоплодных материалов, последнее вскармливание сосунков в гнотобиологической камере.

Указанный способ получения гнотобиологических моделей принят в качестве прототипа.

К числу недостатков прототипа следует отнести недостаточную надежность сохранения стерильности и качества биологических моделей, хотя в принципе по сравнению с известными способами сам метод и является прогрессивным.

Цель изобретения повышение надежности сохранения стерильности и качества биологических моделей.

Указанная цель достигается тем, что в способе получения гнотобиологических моделей, включающем стерилизацию внутренних поверхностей камер изолятора, перчаток и набора хирургических инструментов, гистерэктомию, при которой фиксируют самку-донора с 2-й или 3-й беременностью в положении на спине, удаляют шерсть с живота, обмывают кожу тепловой водой, обрабатывают раствором йода, прикрепляют к поверхности кожи анаэробную пленку, обрабатывают пленку раствором йода, под местной анастезией по средней линии живота разрезают пленку и склеенную с ней кожу с поперечными разрезами по концам, рассекают по этим линиям мышцы живота и брюшины, отворачивают лоскуты ткани в сторону, обкладывают рану стерильными марлевыми салфетками с разводом краев тупым ранорасширителем, выводят рога беременной матки из брюшной полости, перевязывают матку в области шейки нитью или марлевым жгутиком, смоченным в растворе йода, пересекают кровеносные сосуды и связки матки, ампутируют матку в области шейки, дистальнее места перевязки, погружают ампутированную матку вместе с плодами на 1 мин в сосуды с дезинфектантами температурой 38^оС, разрезают стенку матки, извлекают плоды, освобождают их от плодных оболочек, осушивают с перевязкой и отсечением пуповины, проводят микробиологический контроль околоплодных материалов, вскармливание сосунков в гнотобиологической камере, гистерэктомию и извлечение плодов проводят в отдельной изолированной светопрозрачной операционной камере с аэрошлюзом, соединенным светопрозрачным трубчатым переходником с аэрошлюзом гнотобиологической камеры, при непрерывно горизонтально направленном в ней ламинарном потоке стерильного воздуха температуры 37-38^оС, анастезии самки-донора посредством раздавливания ее четвертого шейного позвонка, с дополнительной обработкой матки с плодами 1%-ным раствором Люголя после обработки дезинфектантами, осушенные плоды подают через светопрозрачный трубчатый переходник в гнотобиологическую камеру, где вскармливают сосунков 2-3 недели под безмикробными или СПФ-статуса самками-кормилицами.

Отличительными особенностями способа получения гнотобиологических моделей является проведение гистерэктомии и извлечение плодов вне гнотобиологической камеры, в отдельной изолированной светопрозрачной камере с аэрошлюзом, соединенный с ней, с ее аэрошлюзом светопрозрачным трубчатым переходником при непрерывно горизонтально направленном в ней ламинарном потоке стерильного воздуха температуры 37-38^оС, анастезия самки-донора посредством раздавливания ее четвертого шейного позвонка, дополнительная обработка матки с плодами 1%-ным раствором Люголя после обработки дезинфектантами, осушение плодов и подача их через светопрозрачный трубчатый переходник в гнотобиологическую камеру, вскармливание сосунков 2-3 недели под безмикробными или СПФ-статуса самками-кормилицами.

Указанные отличительные особенности являются существенными, так как каждая из них направлена на достижение нового положительного эффекта в соответствии с поставленными задачей и целью изобретения и эти существенные отличия являются новыми признаками не известными из известных биотехнологических решений в данной области гнотобиологии и применяемых в ней способах получения гнотобиологических моделей, что свидетельствует о соответствии нового биотехнического решения критерию "новизна".

Единая совокупность общих известных существенных признаков с новыми существенными признаками заявляемого биотехнологического решения обеспечивают достижение нового положительного эффекта, является результатом научно-исследовательской и экспериментальной работы, не является проектировочным решением и не следует из известного уровня техники в данной области, является дальнейшим его развитием и результатом изобретательского творчества, что характеризует предлагаемое биотехнологическое решение соответствием критерию "изобретательский уровень" и неочевидностью.

На фиг. 1 представлен общий вид гнотобиологического изолятора при продольном разрезе; на фиг. 2 то же, вид сверху; на фиг. 3 то же, вид сбоку.

Гнотобиологический изолятор содержит светопрозрачную гнотобиологическую камеру 1 с входным и выходным воздушными фильтрами 2 и 3 для подачи стерильного воздуха, манипуляционными перчатками 4 и аэрошлюзом 5 с крышкой 6, сосуды 7, 8 и 9 с дезинфектантами и нагреватели соответственно 10, 11 и 12 или их блок, отдельную изолированную светопрозрачную операционную камеру 13 для проведения гистерэктомии и извлечения из плодов с горизонтально расположенным входным воздушным фильтром 14 для подачи стерильного воздуха горизонтальным ламинарным потоком от задней стенки 15 к передней 16 со свободным истечением через отверстие 17, площадку 18 для размещения на ней сосудов 7, 8 и 9 с дезинфектантами и нагревателей 10, 11 и 12 или их блока, аэрошлюз 19, соединенный трубчатым светопрозрачным переходником 20 с аэрошлюзом 5 гнотобиологической камеры 1, клетку 21, помещенную в гнотобиологическую камеру 1.

Более подробное описание способа получения гнотобиологических моделей состоит в следующем.

При включенной вытяжной лабораторной вентиляции производят стерилизацию внутренних поверхностей камер 1 и 13 изолятора, манипуляционных перчаток 4, набора хирургических инструментов, аэрошлюзов 5 и 19, соединяющего их трубчатого переходника 20 и крышки 6 готовым 2%-ным раствором перуксусной кислоты или синтезированной из перекиси водорода (73,5 мл), серной кислоты (3,5 мл) и уксусного ангидрида (350 мл).

Подбирают самку-донора с 2-й или 3-й беременностью, помещают ее в операционную камеру 13 и для проведения гистерэктомии фиксируют в положении на спине, удаляют шерсть с живота, обмывают кожу теплой водой, обрабатывают 10% раствором йода, приклеивают к поверхности кожи анаэробную пленку, обрабатывают пленку также 10%-ным раствором йода, под местной анастезией, осуществляемой посредством раздавливания четвертого шейного позвонка, по средней линии живота разрезают пленку и склеенную с ней кожу с поперечными разрезами по концам, рассекают по этим линиям мышцы живота и брюшины, отворачивают лоскуты ткани в сторону, обкладывают рану стерильными марлевыми салфетками с разводом краев тупым ранорасширителем, выводят рога беременной матки из брюшной полости, перевязывают матку в области шейки нитью или марлевым жгутиком, смоченным 10%-ным раствором йода, пересекают кровеносные сосуды и связки матки, ампутируют матку в области шейки, дистальнее места перевязки. При этом все эти операции гистерэктомии и дальнейшие операции по извлечению плодов проводят в одной операционной камере 13 при непрерывном горизонтально направленном в ней (на себя) ламинарном потоке стерильного воздуха температуры 37-38^оС от задней стенки 15 к передней 16 со свободным истечением через отверстие 17 с использованием входного воздушного фильтра 14.

Затем погружают ампутированную матку вместе с плодами на 1 мин в сосуды 7, 8 и 9 с дезинфектантами температурой 38^оС (соответственно 10%-ный раствор йода, 5%-ный раствор хлорамина и 1%-ный раствор Люголя), размещенные на площадке 18 операционной камеры 13. Разрезают стенки матки, извлекают плоды, освобождают их от плодных оболочек, осушивают с перевязкой и отсечением пуповин, проводят микробиологический контроль околоплодных материалов и осушенные плоды подают через аэрошлюзы 5 и 19, соединенные переходником 20, в гнотобиологическую камеру 1 при открытой крышке 6, которую после передачи плодов герметично закрывают и с помощью манипуляционных перчаток 4 при непрерывной работе входного и выходного воздушных фильтров 2 и 3, подающих стерильный воздух с незначительным напором в камере 1, подсаживают к самкам-кормилицам (безмикробным или СПФ-статуса), помещенным в индивидуальные клетки 21 в гнотобиологической камере 1, где и вскармливают сосунков 2-3 недели.

При дезинфектации в камере 13 растворы в сосудах 7, 8 и 9 подогревают индивидуальными нагревательными 10, 11 и 12 или их блоком.

Научно-исследовательские и опытно-экспериментальные работы по данному способу проводились по получению гнотобиологических моделей с высоким результатом: получено 30 линий мышей СПФ-статуса и 2 линии крыс.

Предлагаемый способ получения гнотобиологических моделей обладает значительным преимуществом по сравнению с известным, имеет оригинальную последовательность и отличия гнотобиологических операций, обеспечивающий надежность сохранения стерильности и качества биологических моделей, увеличение процента их годности с более высоким результатом.

Использование: в медицине, в частности в процессах проведения научно-исследовательских работ с экспериментально-биологическими моделями, например при получении гнотобиологических моделей (мышей, крым и т.п.). Сущность изобретения: способ предусматривает стерилизацию внутренних поверхностей камер изоляторов, перчаток и набора хирургических инструментов, гистерэктомию и извлечение плодов в отдельной изолированной светопрозрачной операционной камере с аэрошлюзом, соединенным светопрозрачным трубчатым переходником с аэрошлюзом гнотобиологической камеры. Процесс ведут при непрерывной горизонтальной подаче ламинарного потока стерильного воздуха температуры 37-38°С от задней стенки к передней со свободным истечением через переднюю стенку, анастезии самки донора посредством раздавливания ее четвертого шейного позвонка, с дополнительной обработкой матки с плодами 1%-ным раствором люголя после обработки дезинфектантами, подачи осушения плодов через светопрозрачный трубчатый переходник в гнотобиологическую камеру, где вскармливают сосунков 2-3 недели под безмикробным или СПФ-статуса самками-кормилицами. 3 ил.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГНОТОБИОЛОГИЧЕСКИХ МОДЕЛЕЙ, включающий стерилизацию внутренних поверхностей камер изолятора, перчаток и набора хирургических инструментов, гистерэктомию, при которой фиксируют самку-донора со 2-3-й беременностью в положении на спине, удаляют шерсть с живота, кожу обмывают теплой водой и обрабатывают раствором йода, разрезают под местной анастезией пленку и склеенную с ней кожу по средней линии живота с поперечных разрезами по концам, рассекают по этим линиям мышцы живота и брюшины, отворачивают лоскуты ткани в сторону, разводят ее края тупым ранорасширителем и обкладывают рану стерильными марлевыми салфетками, выводят рога беременной матки из брюшной полости, перевязывают матку в области шейки смоченными в растворе йода нитью или марлевым жгутиком, пересекают кровеносные сосуды и связки матки, ампутируют матку в области шейки, дистальнее места перевязки, погружают ампутированную матку вместе с плодом на одну минуту в сосуды с дизинфектантами, имеющими температуру 38^oС, рассечение матки, извлечение плодов, освобождение их от плодных оболочек, обсушивание, перевязку и отсечение пуповины, проведение микробиологического контроля околоплодных материалов и последующее вскармливание сосунков в гнобиологической камере, отличающийся тем, что гистерэктомию и извлечение плодов проводят в отдельной изолированной светопрозрачной камере с аэрошлюзом, соединенной светопрозрачным трубчатым переходником с аэрошлюзом гнобиологической камеры при непрерывном ламинарном потоке стерильного воздуха, имеющего температуру 37-38^oС, горизонтально направленном от задней стенки камеры к передней со свободным истечением его через переднюю стенку, а анастезию самки-донора осуществляют посредством раздавливания ее четвертого шейного позвонка, кроме того, матку с плодами после обработки дезинфектинтами дополнительно обрабатывают 1%-ным раствором Люголя, а после осушения подают плоды через прозрачный трубчатый переходник в гнобиологическую камеру, где проводят вскармливания сосунков в течение 2-3 недель под безмикробными или СПФ-статоуса самками-кормилицами.