СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ НОВООБРАЗОВАНИЙ ЛЕГКИХ Российский патент 1995 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано в клинической и экспериментальной медицине для дифференциальной диагностики новообразований легких.

Диагностика новообразований легких, особенно на ранних этапах развития, является сложной задачей, поскольку новообразования легких как собирательное понятие объединяет злокачественные и доброкачественные опухоли, и кроме того, сходную клиническую и рентгенологическую картину имеют некоторые заболевания неопухолевого характера (пневмонии, туберкулез и т. д.).

Улучшение дифференциальной диагностики этих заболеваний и возможность своевременного выявления из этого ряда больных раком легкого позволит выбрать оптимальный метод его лечения с учетом специфики заболевания.

В настоящее время для дифференциальной диагностики новообразований легких используют традиционные методы обследования: рентгенологический, эндоскопический, морфологический (гистологические и цитологические).

Рентгенологическое исследование относится к ведущим методам выявления легочной патологии, в том числе рака легкого, и позволяет у 80% больных распознать рак легкого. Однако, сложность рентгенологических данных при заболеваниях легких приводит к ошибкам и позднему выявлению рака легкого (А. Х. Трахтенберг "Рак легкого", М. Медицина, 1987, с. 50).

Морфологическое исследование, например, цитологическое исследование мокроты, является одним из первых диагностических мероприятий, применяемых у больных с той или иной легочной патологией. Распознавание рака легкого на основании мокроты зависит от клинико-анатомической формы, типа роста опухоли и др. факторов. Этим обеспечивается неоднозначная разрешающая способность этого метода при диагностике различных клинических форм рака. Так, цитологическое исследование мокроты при центральном раке легкого позволяет обнаружить опухолевые клетки у 52-88% больных, а при периферическом раке легкого результативность метода значительно ниже и составляет 33-61% (Агамова К. А. Тихомирова Е. Е. "Своевременные достижения и перспективы развития цитологической диагностики в легочной патологии". Сб. научн. трудов "Диагностика и лечение рака легкого". М. 1984, с, 58-63).

Эндоскопический метод также считается основным методом при дифференциальной диагностике новообразований легких (Максимов И. А. Лебедев А. В. Лебедев В. А. Ющенко В. И. "Возможность бронхологической диагностики периферического рака легкого", Сб. научн. трудов "Диагностика и лечение рака легкого", М. 1984, с, 51-54). Однако, он малоэффективен при диагностике периферического рака, т. е. информативность фибробронхоскопии не превышает 64,9% Необходимо отметить, что бронхоскопия жестким бронхоскопом является длительным и ложным процессом, требует участия анестезиолога. Кроме того, эта диагностическая процедура вызывает осложнения у больных (1-2%), а у ряда больных в виду анатомических особенностей и сопутствующих заболеваний выполнение бронхоскопии противопоказано, что ограничивает применение этого метода.

Известным методом диагностики периферического рака является трансторакальная пункция, позволяющая подтвердить диагноз у 93,4% больных (Тао L. C. Transthoracic fine-needle aspiration biopsy. Cytomorphologic interpretation and its histologic bases, Chest, 1986, v. 89, n. 4, p. 326-330).

Однако, при данном методе, еще в большей мере, чем при бронхоскопии, наблюдается возрастание числа осложнений, достигая 9%
Известен также ряд радиоиммунологических методов исследования новообразований легких с использованием опухолевых маркеров (раково-эмбриональный антиген, альфа-фетопротеин, бета-два-микроглобулин и др.). Однако, методы с использованием опухолевых маркеров малоинформативны в диагностике первичного рака легкого, что обусловлено их недостаточной чувствительностью и низкой специфичностью (Африкян М. Н. Абрамов В. Ф. Ткачева Г. Д. "Раково-эмбриональный антиген у больных раком легкого. Мед. радиол. 1982, N 9, с. 115-119).

Наиболее близким к заявляемому способу является метод кожной пробы с фитогемагглютинином (ФГА), согласно которому, больному внутрикожно на внутреннюю поверхность левого предплечья вводили ФГА в дозе 2 мкг в 0,1 мл изотонического раствора натрия хлорида. Реакцию кожи на ФГА оценивали по диаметру эритемы через 24 часа, при зоне эритемы более 5 мм реакцию считали положительной. У больных со злокачественными образованиями легких наблюдалась отрицательная кожная реакция с ФГА у 80% (величина эритемы составляла 3,9 мм±0,5 мм). (Когосова Л. С. и др. "Кожная проба с ФГА в дифференциальной диагностике специфических и неспецифических заболеваний легких". Пульмонология: Республ. междуведомственный сб. 1983, в. 6, с. 68-70).

Проба с ФГА относится к кожным реакциям гиперчувствительности замедленного типа, широко используемым в клинической практике для обнаружения клеточнозависимой реактивности. С их помощью осуществляют оценку общего состояния клеточного иммунитета, определяя уровень функциональной активности иммунной системы. Проявление отрицательной кожной пробы с ФГА у онкобольных в прототипе свидетельствует о том, что у них нарушен или ослаблен клеточный иммунитет. Но известно, что измененный иммунитет наблюдается при целом ряде заболеваний, в кожная проба ФГА, не обладая специфичностью к раку легкого, не позволяет выделить его среди других болезней и тем более эта проба не может использоваться для ранней диагностики этого заболевания.

В основу изобретения положена задача создания способа дифференциальной диагностики новообразований легких, при котором в кожной пробе используют инициирующий фактор, обладающий высокой чувствительностью к раку легкого и вызывающий резко положительную кожную реакцию, отчетливо проявляемую именно при этом виде заболевания, что позволяет выделить рак легкого из числа других новообразований легких.

В соответствии с изобретением это достигается за счет того, что в кожной пробе в качестве инициирующего фактора используют аутологичные лимфоциты больного, которые предварительно инкубируют с митогеном, например, ФГА, конканавалином А (Соп. А). При инкубировании происходит связывание митогена с рецепторами лимфоцита, вызывающее структурную перестройку клеточной поверхности и изменение конформационных характеристик самого митогена. В результате чего аутологические лимфоциты приобретают новое свойство способность активизировать у онкологических больных определенные субпопуляции Т-лимфоцитов, распознавающих комплекс митоген-рецептор, что и проявляется в положительной кожной реакции. При этом у больных раком легкого диаметр эритемы равен или больше 13 мм, а у больных с доброкачественными новообразованиями или с неопухолевыми патологиями легких диаметр эритемы равен или меньше 6,0 мм.

Таким образом, изобретение позволяет выявить нарушения в иммунной системе, имеющие место при онкологических заболеваниях легких, путем инициации клеточной реакции гиперчувствительности замедленного типа и результаты этой реакции указывают на наличие данного заболевания и позволяет дифференцировать его от других заболеваний легких.

Предлагаемый способ обеспечивает высокую точность диагностирования рака легкого, в том числе и его периферической формы (95%). Способ является очень чувствительным и позволяет определить наличие рака легкого на самых ранних стадиях развития до проявления клинических, рентгенологических и эндоскопических признаков заболевания, а также при его рецидиве после операции.

Преимуществом способа является также и то, что он позволяет не только улучшить качество диагностики рака легкого, но и дифференцировать злокачественные и незлокачественные новообразования в легких. Использование данного способа дает возможность конкретизировать диагноз в случае неопределенного рентгенологического, эндоскопического и морфологического заключения и своевременно решить вопрос соответственно о показанности операции или необходимости проведения специфического лечения на более ранней, прогностически благоприятной стадии заболевания.

Апробация способа проводилась в течение 1989-1992 гг. в Карельском республиканском онкологическом диспансере г. Петрозаводска.

Способ осуществляется следующим образом.

Проводят забор крови у больного в объеме 2 мл с антикоагулянтом. После отстаивания в течение 1 ч при 37^оС плазму крови, содержащую лейкоциты, наслаивают на градиент фиколл-верографин (плотность 1,077) для выделения фракции лимфоцитов. Центрифугируют 40 мин при 1,750 тыс. об/мин. Пастеровской пипеткой отбирают лимфоциты с поверхности градиента и отмывают в среде 199 в течение 5 мин при 1 тыс. об/мин. (трижды). После отмывки подсчитывают число лимфоцитов (приблизительно 2 млн в мл). Отбирают поровну две стерильные пробирки и инкубируют: одну порцию с митогеном (50 мкг митогена + 1 мл среды), другую без него в течение 30 мин при 37^оС. После инкубации трижды отмывают клетки в среде 199. Исследуемому больному внутрикожно на предплечье вводят 0,1 мл суспензии лимфоцитов предварительно инкубированных с митогеном. Параллельно проверяют реакцию больного на лимфоциты, не обработанные митогеном, и на среду 199, которые также вводят внутрикожно. Затем измеряют диаметр эритемы в продольном направлении на предплечье в течение 3 дней (через 24, 48 и 72 ч) и, если гиперемия сохраняется, то измеряют и далее. Данным способом было обследовано 113 больных, из них у 75 больных величина диаметра эритемы на стадии обследования и диагностики составляла 13 мм 32 мм, что позволило определить заболевание раком легкого. Этот диагноз был подтвержден при последующем хирургическом лечении. У 38 неонкологических больных значение диаметра эритемы составляло 6 мм и менее.

Нижний предел диаметра эритемы при раке легкого в кожной реакции с аутологическими лимфоцитами, обработанными ФГА в наших наблюдениях был равен 13 мм.

П р и м е р 1. Больной К. 56 лет, поступил в клинику с диагнозом: центральный рак верхнедолевого бронха правого легкого. Диагноз подтвержден рентгенологически, эндоскопически. При цитологическом исследовании мазков из бронха получены клетки эпидермоидного рака. Кожная реакция с аутологичными лимфоцитами, обработанными ФГА 13 мм. Произведена операция: верхняя лобэктомия справа. Послеоперационный гистологический диагноз: эпидермоидный рак.

П р и м е р 2. Больной Х. 65 лет, поступил в клинику с подозрением на рак нижнедолевого бронха правого легкого. Диагноз подтвержден рентгенологически и эндоскопически. Кожная реакция с аутологичными лимфоцитами, обработанными ФГА 27 мм, Соп А 16 мм. Произведена операция: нижняя лобэктомия справа. Послеоперационный гистологический диагноз: эпидермоидный рак.

П р и м е р 3. Больной М. 58 лет, поступил в клинику с диагнозом: периферический рак в/доли левого легкого. Рентгенологически в верхней доле левого легкого периферическая опухоль диаметром 1,5 см. Кожная реакция с аутологичными лимфоцитами, обработанными ФГА 6 мм. Произведена операция: атипическая резекция верхней доли левого легкого с опухолью. Послеоперационный гистологический диагноз: доброкачественная хондрогамартома.

П р и м е р 4. Диагностика в трудном случае. Больной С. 51 года, поступил в клинику с диагнозом: осумкованный пристеночный плеврит справа. Рентгенологически заподозрена верхнедолевая пневмония справа с формированием абсцесса и реакцией плевры. При трансторакальной пункционной биопсии опухолевых элементов не обнаружено. Анализ крови: Гемоглобин 6,2 ммоль/г, лейкоциты 28.0˙10⁹/л, РОЭ 66 мм/час. Кожная реакция ГЗТ с аутологичными лимфоцитами, обработанными ФГА, диаметр эритемы 25 мм. Произведена операция, во время которой выявлена периферическая опухоль верхней доли, врастающая в костальную плевру. Гистологический диагноз после операции: бронхиолоальвеолярная аденокарцинома, прорастающая плевру, очаговым распадом и нагноением.

П р и м е р 5. Больной Т. 55 лет, поступил в клинику с жалобами на умеренный кашель с мокротой, боли в левой половине грудной клетки. Рентгенологически выявлена незначительная инфильтрация в области проекции VIII сегмента левого легкого. Эндоскопически с цитологическим исследованием бронхосмыва онкопроцесса со стороны бронхиального дерева не выявлено. Кожная реакция ГЗТ с аутологичными лимфоцитами, обработанными ФГА, 27 мм. От предложенной операции категорически отказался. Поступил для повторного обследования спустя 4 месяца. При бронхоскопическом обследовании выявлена опухоль нижнедолевого бронха левого легкого. При цитологическом исследовании мазков из бронха получены клетки аденокарциномы. Таким образом, кожная реакция ГЗТ с аутологичными лимфоцитами, обработанная ФГА, была положительной и указывала на наличие рака легкого за 4 месяца до проявления явных рентгено-эндоскопических признаков.

П р и м е р 6. Дифференциальная диагностика рака легкого и ХНЗЛ. Больной Х. 47 лет, поступил в клинику с диагнозом: рак средней доли правого легкого. Рентгенологически выявлен ателектаз средней доли правого легкого. Эндоскопически: сужение среднедолевого бронха справа. При цитологическом исследовании мокроты, мазков из бронха опухолевых элементов не обнаружено. Кожная реакция ГЗТ с аутологичными лимфоцитами, обработанными ФГА, 4 мм. Выполнена операция: торакотомия справа, средняя лобэктомия. Послеоперационный гистологический диагноз: фиброателектаз средней доли. Данный пример подтверждает, что реакция ГЗТ с аутологичными лимфоцитами позволяет дифференцировать рак легкого и ХНЗЛ.

П р и м е р 7. Дифференциальная диагностика злокачественной и доброкачественной опухоли. Больной К. 55 лет, поступил в клинику с диагнозом: периферический рак нижней доли правого легкого. Рентгенологически в нижней доле периферическая опухоль до 2 см в диаметре. Кожные реакции с аутологичными лимфоцитами, обработанными ФГА, 4 мм. Дооперационный диагноз: доброкачественная опухоль легкого. Выполнена операция: торакотомия справа, атипичная резекция нижней доли с опухолевидным образованием. Гистологический диагноз после операции: доброкачественная хондрогамартома.

П р и м е р 8. Диагноз рецидива заболевания рака легкого. Больной Г. 46 лет, поступил в клинику с диагнозом: рак легкого главного бронха. Кожные реакции с аутологичными лимфоцитами, обработанными ФГА, до операции 24 мм. Выполнена операция: левосторонняя пневмония. Гистологический диагноз после операции: инвазивный эпидермоидный рак с ороговением. Показатели кожной реакции ГЗТ с аутологичными лимфоцитами, обработанными ФГА, через 1 месяц после операции 5 мм. При контрольном осмотре через 1 год жалоб нет, рентгенологически состояние после левосторонней пневмонэктомии. Показатели кожной реакции ГЗТ с аутологичными лимфоцитами, обработанными ФГА, 18 мм. Еще через 3 месяца у больного появилась осиплость голоса, парез пpавой голосовой складки. Рентгенологически расширение тени средостения за счет увеличения лимфоузлов. При пункционной биопсии лимфоузлов средостения обнаружены клетки эпидермоидного рака. Реакция ГЗТ с аутологичными лимфоцитами, обработанными ФГА, вновь становится положительной и позволяет этим самым до проявления рентгенологических признаков диагностировать рецидив заболевания раком легкого.

Приведенные клинические примеры 1-8 свидетельствуют о том, что заявляемый способ дифференциальной диагностики новообразований легких за счет высокой специфичности и чувствительности дает возможность по сравнению с прототипом более точно диагностировать рак легкого, а также выявлять рак легкого и дифференцировать его от доброкачественных новообразований и ХНЗЛ до проявления рентгенологических и эндоскопических признаков, в том числе и в случае периферической формы рака легкого, что позволяет широко использовать способ в практике для дифференциальной диагностики и мониторинга больных раком легкого.

Использование: в области медицины, в частности в клинической и экспериментальной онкологии. Сущность изобретения: ставят кожную пробу с аутологичными лимфоцитами больного, которые предварительно инкубируют с митогеном. Через 24-72 ч измеряют диаметр эритемы и при ее величине равной или большей 13 мм диагностируют рак легкого, а при величине равной или меньшей 6 мм диагностируют неопухолевое или доброкачественное новообразование легких. Способ обладает высокой специфичностью и обеспечивает высокую степень точности диагностирования (95%) рака легкого и неопухолевого или доброкачественного новообразования легких, а также возможность раннего диагностирования до проявления явных клинических и эндоскопических признаков заболевания.

СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ НОВООБРАЗОВАНИЙ ЛЕГКИХ, включающий постановку кожной пробы с использованием митогена и последующим измерением диаметра эритемы, отличающийся тем, что при постановке кожной пробы дополнительно используют аутологичные лимфоциты больного, предварительно проинкубированные с митогеном, и при значении диаметра эритемы 13 мм и более диагностируют рак легких, а при 6 мм и менее неопухолевое или доброкачественное новообразование легких.