СПОСОБ РАЗВЕДЕНИЯ МЕДИЦИНСКИХ ПИЯВОК В ИСКУССТВЕННЫХ УСЛОВИЯХ Российский патент 1996 года по МПК A01K67/33 A01K67/33 A01K67/00 

Изобретение относится к зоологии, фармакологической промышленности и фармакологии и может быть использовано для получения в искусственных условиях высококачественных медицинских пиявок с целью выделения из них ряда лекарственных препаратов.

Известен способ разведения медицинских пиявок в искусственных условиях [1] Способ заключается в том, что полученных из естественных водоемов пиявок раскармливают сывороткой крови крупного рогатого скота, содержат в стеклянных трехлитровых банках, после образования поясков оплодотворения переносят в торф, собирают молодь, раскармливают ее сывороткой крови до массы тела 1,5-2,0 г и выдерживают в голодном состоянии в тех же сосудах. Все операции проводят в ярко освещенных помещениях при комнатной температуре в стеклянных емкостях. Но данный способ имеет следующие недостатки:
низкая терапевтическая эффективность медицинских пиявок из-за пониженного содержания биологически активных веществ, входящих в состав секрета слюнных желез пиявок;
снижение жизнестойкости медицинских пиявок (они не выдерживают более 3-4 месяцев голодания, в то время как природные особи могут голодать до 1,5-2 лет);
отсутствие способности пиявок воспроизводить потомство;
трудоемкость данного способа, так как смена воды в стеклянных емкостях, другие работы по содержанию пиявок производятся ежедневно вручную;
наличие стрессирующих факторов для пиявок: постоянный контакт с поверхностью стекла, отсутствие дозировки освещенности, комнатная температура, контакт с руками рабочих.

Целью предлагаемого изобретения является сокращение сроков выращивания медицинских пиявок, восстановление их репродуктивной функции и повышение активности секрета их слюнных желез.

Поставленная цель достигается тем, что пиявок после кормления помещают в пластмассовые емкости и содержат в освещенном помещении при температуре +15-30^oC, после чего пиявок с образовавшимися поясками оплодотворения помещают в емкости с торфом и содержат в темном помещении при температуре +18-30^oC, из отложенных коконов собирают молодь, помещают в пластмассовые емкости с проточной водой и содержат при естественном освещении.

При достижении пиявками состояния голода их используют для:
а) закладки маток в целях получения следующего потомства;
б) для реализации в аптечную сеть;
в) для переработки с целью получения медицинских препаратов.

Способ осуществляют следующим образом:
Пример 1.

Берут кратное количество пиявок из дикой природы, высаживают в пластиковые резервуары с проточной водой в помещении с температурой +20^oC и естественным освещением. Пиявок кормят 2 раза кровью крупного рогатого скота. Пиявки достигают массы тела 3-5 г. По мере образования поясков оплодотворения пиявок пересаживают в пластиковые бидоны с торфом и переводят в темное помещение с температурой +25^oC. Спустя три месяца собирают молодь из коконов и помещают ее в пластиковые емкости и содержат в помещении с комнатной температурой и естественным освещением. Коррмят пиявок шесть раз и масса тела пиявок достигает 1,7-2,3 г. После 6 кормлений пиявок переводят в прохладное (+16^oC), затемненное помещение, где содержат в резервуарах с проточной водой. Спустя четыре месяца анализируют численность пиявок и активность секрета слюнных желез выращенных пиявок (см. таблицу).

Пример 2.

Все операции проводят как указано в примере 1, только первичное раскармливание пиявок проводят при температуре +15^oC и содержат маток в торфе при температуре +18^oC (см. таблицу).

Пример 3.

Все процедуры проводят как указано в примере 1, только первичное раскармливание проводят при температуре +23^oC, содержат маток в торфе при +30^oC (см. таблицу).

Пример 4.

Все операции проводят как указано выше, только первичное раскармливание пиявок проводят при +12^oC. Пиявки достигли массы тела 3-4 г после трех кормлений, пояски оплодотворения не образовались. Таким образом пиявки не дали потомства.

Пример 5.

Все операции проводят как указано в примере 1, только пиявок в торфе содержат при температуре +15^oC и при освещении (естественном). Полученные коконы стерильны, другими словами пиявки не дали потомства.

Пример 6.

Все операции проводят как указано в примере 1, только содержат пиявок в торфе при температуре +35^oС. Полученные коконы частично стерильны (25%), вышедшая молодь погибла к третьему кормлению.

Пример 7.

Все процедуры проводят как указано в примере 1, только содержат пиявок в стеклянных банках (по прототипу) (см. таблицу).

Пример 8.

Все процедуры проводят при комнатной температуре (как в прототипе), только содержат пиявок в пластиковых емкостях (см. таблицу).

Сравнение активности медицинских пиявок, выращенных по методу прототипу и по предлагаемому методу приведено в таблице.

Результаты, полученные в процессе работы и приведенные в таблице свидетельствуют что, пиявки, выращенные по предлагаемому способу (примеры 1, 2, 3), достигают большей массы тела за более короткий промежуток времени, дают больше потомства в первом поколении (на 40% больше, чем по способу прототипу) и, что, пожалуй, самое важное, обладают репродуктивной способностью (то есть дают потомство во втором и третьем поколении, которое по своим терапевтическим свойствам не уступает пиявкам, полученным из естественных водоемов. Это в свою очередь дает возможность сократить отлов природных пиявок на 80-90%).

По терапевтическим свойствам, определяемым количеством и качеством секрета слюнных желез, пиявки мало уступают животным, выловленным из природных водоемов, как по времени кровососания в процессе гирудотерапии, так и по содержанию биологически активных соединений, продуцируемых медицинскими пиявками. Это приводит к снижению числа пиявок на курс гирудотерапии одному больному (в среднем на 20-30%).

Цикл выращивания пиявок по предлагаемому методу практически лишен ручного труда, что дает возможность в два раза сократить число рабочих на фабрике.

При использовании способа прототипа в 2 раза снижается процент естественной гибели пиявок.

Таким образом, предлагаемый способ разведения и содержания медицинских пиявок позволяет:
1) сократить время выращивания пиявок;
2) получить более терапевтически эффективную пиявку;
3) получать от этих пиявок жизнеспособное потомство (то есть осуществить замкнутый цикл выращивания пиявок, не истощая природных ресурсов);
4) резко снизить трудоемкость технологического процесса;
5) снизить трудоемкость выращивания пиявки.

Методы определения активности секрета слюнных желез
1. Определение концентрации белка проводим спектрографически, используя формулу Калкара:
1,45 x A₂₈₀ 0,74 x A₂₆₀= мг/мл.

2. Активность гирудина определяем по времени свертывания коммерческого препарата фибриногена тромбином [2] активность гирудина выражаем в международных единицах (ATNIH).

3. Активность фермента дестабилазы определяем по методу Аструпа [3] по площади (1 мм) жидких зон, образуемых на поверхности стабилизированного фибрина.

4. Выраженность блокады внутреннего механизма свертывания крови определяем по времени рекальцификации плазмы крови [3] в сек.

5. Содержание простоциклина определяем радиоиммунным методом, используя набор реактивов по прототипу фирмы "Amersham" (Англия).

Источники информации
1. Щеголев Г.Г. Федорова М.С. Медицинская пиявка и ее применение. Медгиз, 1955, 75 с.

2. Никонов Г. И. Баскова И.П. Физиологические и биохимические аспекты лечебного действия медицинских пиявок. Успехи современной биологии, 1986, т. 101, вып. 1, с. 141-154.

3. Никонов Г. И. Полифункциональность и противотромботическое действие секрета слюнных желез медицинских пиявок Hirudo medicinalis, Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук, М. 1985.

Использование: в зоологии, медицине, а именно для получения в искусственных условиях медицинских пиявок для выделения из них ряда лекарственных препаратов. Сущность изобретения заключается в том, что пиявок помещают в пластмассовые емкости, содержат при температуре +15-30^oС, после чего переносят пиявок с образовавшимся пояском оплодотворения в емкости с торфом в темное помещение при температуре +15-30^oС, собирают молодь и содержат в пластмассовых емкостях с проточной водой при естественном освещении. 1 табл.

Способ разведения медицинских пиявок в искусственных условиях, включающий кормление их кровью млекопитающих, закладывание в торф с последующим переносом их в водную среду, отличающийся тем, что пиявок после кормления содержат в пластмассовых емкостях в освещенном помещении при температуре 15 30^oС, после чего пиявок с образовавшимся пояском оплодотворения содержат в темном помещении при температуре 18 30^oС в емкостях с торфом, из отложенных коконов собирают молодь, помещают в пластмассовые емкости и содержат при естественном освещении.