ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ПРОДУЦЕНТА ЦИТОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ Российский патент 1997 года по МПК C12N9/42 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается питательной среды для культивирования продуцента цитолитических ферментов, например, гриба Trichotheciun roseum.

Известна питательная среда для культивирования продуцента цитолитических ферментов гриба Trichotheciun roseum, содержащая источник углерода, источник азота, стимуляторы роста и индуктор ферментов, сернокислые соли марганца и цинка и воду.

Однако известная питательная среда имеет сложный состав и состоит из дорогостоящих компонентов. Общая цитолитическая активность грибной культуры, полученной при выращивании на этой среде, не превышает 2,0 ед/см³ и составляет в среднем 1,62 ед/см³.

Техническим результатом является получение цитолитических ферментов и усиление их биосинтеза, упрощение состава среды и ее удешевление.

Предлагаемая питательная среда содержит в качестве источника углерода, азота, фосфора, микроэлементов и индуктора цитолитических ферментов прогидролизованный ячменный солод, а в качестве стимулятора роста и индуктора ферментов прогидролизованные солодовые ростки, лимонную кислоту и сернокислые соли марганца и цинка при следующем соотношении компонентов; г на 100 см³ среды,
прогидролизованные:
ячменный солод 0,9-1,1
солодовые ростки 1,9-2,1
лимонная кислота 0,25-0,35
сернокислые соли:
марганца 0,045-0,055
цинка 0,025-0,035
вода остальное
Гидролиз ячменного солода осуществляют ферментами самого солода при гидромодуле 1: 4, постепенным нагреванием смеси солода с водой и выдерживанием по 30 мин при температуре 45^oС и 52^oС, 50 мин при температуре 63^oС, 30 мин при температуре 70^oС и до полного осахаривания при температуре 72^oС с последующим кипячением смеси в течение 15-20 мин.

Гидролиз солодовых ростков проводят цитолитическими ферментами, например, ферментным препаратом цитороземином П1-х, Г20-х или Г10-х, которые вносят в количестве 0,01-0,05% к массе ростков, при гидромодуле 1:10 и температуре 45^oС в течение одного часа с последующим кипячением в течение 15-20 мин.

Прогидролизованные ячменный солод и солодовые ростки после кипячения соединяют с другими компонентами среды, которые предварительно растворяют в водопроводной воде и стерилизуют.

Питательную среду готовят следующим образом.

Проводят гидролиз ячменного солода. Одну часть ячменного солода смешивают с четырьмя частями водопроводной воды. Полученную смесь постепенно нагревают и выдерживают по 30 мин при температуре 45^oС и 52^oС, 50 мин при температуре 63^oС, 30 мин при температуре 70^oС и до полного осахаривания при температуре 72^oС. После чего смесь кипятят в течение 15-20 мин.

Гидролиз солодовых ростков проводят цитолитическими ферментами, например, ферментным препаратом цитороземин П10-х, Г20-х или Г10-х, которые вносят в количестве 0,01-0,05% к массе ростков. При этомодну часть ростков смешивают с десятью частями водопроводной воды. Смесь выдерживают при 45^oС в течение 1 ч, после чего подвергают кипячению в течение 15-20 мин.

Далее лимонную кислоту и сернокислые соли марганца и цинка растворяют в водопроводной воде и соединяют с прогидролизованными ячменным солодом и солодовыми ростками, объем среды доводят водопроводной водой до 100 см³, перемешивают. Полученную питательную среду стерилизуют.

При выращивании гриба на предложенной среде общая цитолитическая активность (ОЦА) грибной культуры составляет 9,8-11,0 ед/см³, т.е. в среднем равна 10,0 ед/см³, по сравнению с известной средой она увеличивается в 6 раз, что подтверждается данными, приведенными в таблице.

Пример 1. Питательная среда для культивирования продуцента цитолитических ферментов следующего состава, г на 100 см³ среды,
прогидролизованные:
ячменный солод 0,9
солодовые ростки 1,9
лимонная кислота 0,25
сернокислые соли:
марганца 0,045
цинка 0,025
вода остальное.

ОЦА культуральной жидкости на этой среде равна 9,8 ед/см³.

Пример 2. Питательная среда для культивирования продуцента цитолитических ферментов следующего состава, г на 100 cм³ среды,
прогидролизованные:
ячменный солод 1,0
солодовые ростки 2,0
лимонная кислота 0,30
сернокислые соли:
марганца 0,050
цинка 0,030
вода остальное.

ОЦА культуральной жидкости на этой среде равна 10,2 ед/см³.

Пример 3. Питательная среда для культивирования продуцента цитолитических ферментов следующего состава, г на 100 см³ среды,
прогидролизованные:
ячменный солод 1,1
солодовые ростки 2,1
лимонная кислота 0,35
сернокислые соли:
марганца 0,055
цинка 0,035
вода остальное
ОЦА культуральной жидкости на этой среде равна 11,0 ед/см³.

Достигнутое увеличение общей цитолитической активности в грибных культурах, получаемых на предложенной питательной среде, обусловливается тем, что с прогидролизованными ячменным солодом и солодовыми ростками в среду вносят не только легкоусвояемые низкомолекулярные вещества углеводной и белковой природы сахара, азотистые вещества с различной молекулярной массой, в том числе и необходимые аминокислоты, органический фосфор, важные для жизнедеятельности гриба ростовые вещества (биос), витамины, микроэлементы, но и, что весьма важно, индукторы ферментов деструктированные гумми- или слизевые вещества, гемицеллюлозы и целлюлоза, стимулирующие биосинтез цитолитических ферментов.

Кроме того, предлагаемая среда по сырью значительно дешевле среды прототипа.

Использование : биотехнология. Сущность изобретения: среда содержит компоненты в следующем соотношении, г на 100 см³ среды: прогидролизованные: ячменный солод 0,9-1,1; солодовые ростки 1,9-2,1; лимонная кислота 0,25-0,35; сернокислые соли: марганца 0,045-0,055; цинка 0,025-0,035, вода - остальное. Гидролиз ячменного солода осуществляют ферментами самого солода при гидромодуле 1:4, постепенным нагреванием смеси солода с водой и выдержке по 30 минут при температурах 45^oС и 52^oС, 50 мин при температуре 63^oС, 30 мин при температуре 70^oС и до полного осахаривания при температуре 72^oС с последующим кипячением смеси в течение 15-20 мин. Гидролиз солодовых ростков проводят цитолитическими ферментами, например, ферментным препаратом цитороземином Г20-х или Г10-х, которые вносят в количестве 0,03-0,05% к массе ростков при гидромодуле 1:10 и температуре 45^oС в течение одного часа с последующим кипячением в течение 15-20 мин. Прогидролизованные ячменный солод и солодовые ростки после кипячения соединяют с другими компонентами среды, которые предварительно растворяют в водопроводной воде и стерилизуют. 2 з.п. ф-лы, 1 табл.

1. Питательная среда для культивирования продуцента цитолитических ферментов, например гриба Trichothecium roseum, содержащая источник углерода, азота, стимулятор роста и индуктор ферментов, сернокислые соли марганца и цинка, и воду, отличающаяся тем, что в качестве источника углерода и азота, индуктора цитолитических ферментов и одновременно фосфора и микроэлементов она содержит прогидролизованный ячменный солод, а в качестве стимуляторов роста и индуктора цитолитических ферментов прогидролизованные солодовые ростки и лимонную кислоту при следующем соотношении компонентов, г/100 см³ среды:
Прогидролизованные
ячменный солод 0,9 1,1
солодовые ростки 1,9 2,1
лимонная кислота 0,25 0,35
Сернокислые соли
марганца 0,045 0,055
цинка 0,025 0,035
Вода Остальное
2. Среда по п.1, отличающаяся тем, что содержит прогидролизованный ячменный солод ферментами самого солода при гидромодуле 1:4 постепенным нагреванием смеси солода с водой и выдерживанием по 30 мин при 45 и 52^oС, 50 мин при 63^oС, 30 мин при 70^oС и до полного осахаривания при 72^oС с последующим кипячением смеси в течение 15 20 мин. 3. Среда по п.1, отличающаяся тем, что содержит прогидролизованные солодовые ростки, полученные гидролизом солодовых ростков цитолитическими ферментами, например ферментным препаратом цитороземином П10х, или Г20х, или Г10х, который вносят в количестве 0,01 0,05% к массе ростков при гидромодуле 1:10 и 45^oС в течение 1 ч с последующим кипячением в течение 15 20 мин.