СПОСОБ ЭКСПРЕСС-ОЦЕНКИ СТЕПЕНИ БИОПОРАЖЕНИЯ СМАЗОЧНО-ОХЛАЖДАЮЩЕЙ ЖИДКОСТИ Российский патент 1997 года по МПК C12Q1/18 

Предлагаемое изобретение относится к методу определения микробиологического состояния жидкостей и может быть использовано в автомобильной, станкоинструментальной, легкой, пищевой и других отраслях промышленности.

В частности, изобретение можно применять для оценки биопораженности смазочно-охлаждающих жидкостей (СОЖ) при обработке металлов.

Методы оценки биопораженности СОЖ подразделяются на 2 группы: метод прямого подсчета общего числа микроорганизмов в растворе и косвенные методы.

а. Первый метод заключается в посеве строго измеренного микроколичества исследуемой жидкости в питательную среду, помещенную в чашки Петри. После размножения микроорганизмов подсчитывают все колонии, выросшие как на поверхности питательной среды (аэробные бактерии), так и в глубине ее (анаэробные бактерии).

Недостатком является длительность метода определения 24±2 час, о чем более подробно будет сказано в следующем пункте.

б. Косвенные методы основаны на изменении химических и физико-химических свойств СОЖ под влиянием продуктов жизнедеятельности микроорганизмов. Замеряя те или иные параметры, можно судить о степени биопоражения жидкости. Чаще всего используют способность некоторых индикаторов менять окраску жидкости в зависимости от ферментативной активности микроорганизмов. Наиболее близким по технической сущности к заявляемому изобретению является способ, осуществляемый с помощью индикатора 2,3,5-трифенилтетразолий хлористый (ТТХ), применяемый в нашей стране для экспресс контроля биопоражения СОЖ типа Укринол [I]
Недостатком данного и подобных методов является его длительность (1,5 - 24 час), поэтому полученные данные не соответствуют действительному состоянию СОЖ на момент окончания анализа, поскольку аэробы удваиваются каждые 20 30 мин, а анаэробы в течении 4 час [2] Следовательно, оперативность (производительность) данных методов невелика. Кроме того, косвенные методы контролируют активность только одной микрофлоры (в приведенном примере - определяется аэробная флора).

Целью нашего изобретения является сокращение времени анализа, т.е. повышение оперативности и возможности активности как аэробной, так и анаэробной микрофлоры.

Сущность изобретения заключается в том, что в результате жизнедеятельности любых микроорганизмов, в окружающей среде накапливаются соединения, содержащие первичную или вторичную аминогруппы (-NH₂ или -NH-) аминокислоты, амины, ферменты и т.п. Да и сами микроорганизмы представляют собой белковые тельца, содержащие подобные группировки. В качестве индикатора на аминогруппы выбран нингидрин (2,2-диокси-1,3-индандион).

При взаимодействии нингидрина в слабощелочной среде с соединениями, содержащими указанные аминогруппы, образуются фиолетово-окрашенные продукты. Интенсивность окрашивания тем выше, чем больше биопоражение СОЖ.

Определение осуществляется следующим образом. Вначале готовят стандартную шкалу: из заведомо испорченной (имеющей сильный гнилостный запах) и свежеприготовленной СОЖ готовят смеси (по 500 700 мл), содержащие испорченную в процентном отношении 0, 20, 40, 60, 80 и 100. Полученные растворы хранят в холодильнике.

Экспресс методика определения степени биопоражения СОЖ.

1. В шесть занумерованных пробирок одинакового внутреннего диаметра заливают по 2 мл стандартных растворов СОЖ и добавляют по 2 мл буферного раствора (pH 7,2). Содержимое пробирок тщательно перемешивают.

2. В каждую пробирку приливают по 0,5 мл 0,5%-ного раствора аскорбиновой кислоты и снова перемешивают.

3. При помощи микропипетки в пробирки наливают по 0,2±0,01 мл 2%-ного водного раствора нингидрина и хорошо перемешивают.

4. Без промедления все пробирки помещают на 3 мин в кипящую водяную баню. Затем их быстро охлаждают в сосуде с холодильной водой. После охлаждения в пробирки приливают по 10 мл воды, перемешивают и расставляют в штативе.

Одновременно аналогичные операции проводят и с неизвестной СОЖ. Сравнивая интенсивность окраски последней со стандартной шкалой, судят о степени биопоражения исследуемой СОЖ.

Продолжительность определения 4 5 мин. Следовательно, оперативность (продолжительность) нашего метода в 20 300 раз выше по сравнению с известными косвенными методами и, кроме того, определяется суммарное биопоражение СОЖ как аэробными, так и анаэробными микроорганизмами.

Примечание. Предлагаемая методика неэффективна, если в процессе эксплуатации СОЖ в нее добавляли следующие дезинфицирующие вещества: однохлористый иод, иодтриэтиленгликоль, хлорофос, диазинон, глутаровый альдегид, формалин и метафор.

Заявляемое изобретение представляет интерес для народного хозяйства, так как позволяет оперативно определять момент критического биопоражения СОЖ и необходимость ее замены на свежую, оберегая тем самым обслуживающий персонал от возможных заболеваний, а технику от преждевременного износа.

Назначение: изобретение относится к области определения микробиологического загрязнения смазочно-охлаждающих жидкостей и может быть использовано в автомобильной, станкоинструментальной, легкой, пищевой и других отраслях промышленности. Сущность изобретения: в шести пробирках готовят стандартную шкалу из различных смесей заведомо испорченной смазочно-охлаждающей жидкости и свежей смазочно-охлаждающей жидкостью неизвестного качества вводят индикатор и сравнивают цвет жидкости со стандартной шкалой.

Способ экспресс-оценки степени биопоражения смазочно-охлаждающей жидкости, включающий введение в пробу смазочно-охлаждающей жидкости индикатора, выдерживание пробы с индикатором фиксированное время и сравнение интенсивности окраски со стандартной шкалой, отличающийся тем, что в качестве индикатора используют нингидрон, а в качестве стандартной шкалы используют аналогично приготовленную пробу заведомо испорченной смазочно-охлаждающей жидкости.