СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО ПРОТИВОЛУЧЕВОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 1997 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к медицине, точнее, к лекарственным средствам, выделяемым из растений, конкретно, к способу получения средства, обладающего противолучевой активностью.

Известны средства химической защиты от облучения, называемые радиопротекторами, например, цистамин, цистеамин, гаммафос и др. Они, как правило, обладают высокой токсичностью, что затрудняет их практическое применение. Поиск других средств, проявляющих свойства радиопротекторов, получаемых из природных источников, в частности, из растительного сырья, является весьма актуальным. Решению этой задачи посвящены, например, исследования японских ученых (Wang C.M.Ohta S.Shinoda M.J.Pharm.Soc.Japan.1989,v.109,N 12 p.949- 953, Studies on chemical protectors against radiation. XXVII; ibid 1990,v. 110, N 3, p. 218-224, XXIX). Было изучено радиозащитное действие препаратов древней китайской медицины, которые издавна применяются и заслужили доверие, с точки зрения безопасности и надежности, основанное на богатой клинической практике. Японские ученые установили, что некоторые из этих препаратов могут успешно использоваться в противолучевой и противоопухолевой терапии, хотя недостатком как этих, так и других препаратов, относящихся к классу адаптогенов, является их сравнительно низкая эффективность при остром облучении организма.

Известен способ получения экстрактов, обладающих радиозащитным действием (А. А.Нариманов, С.Н.Мякишева, С.М.Кузнецова. Радиозащитное действие экстрактов Archangelica Officinalis Hoffm.Ledum Pallustre L.на мышей. - Радиобиология,1991,т.31,вып.3) из растительного сырья- дягиля и багульника путем его обработки этанолом при комнатной температуре в течение 20 суток. Недостаток данного средства так же невысокая эффективность (при однократном одновременном введении экстрактов багульника и дягиля в дозах 142 мг/кг мас. и 135 мг/кг мас. соответственно и облучении мышей в дозе 800 P выживаемость составила 25+9,6% от общего количества облученных животных).

Целью изобретения является получение эффективного и нетоксичного средства, проявляющего противолучевую активность.

Известно выделение с помощью экстракции органическим растворителем из перца стручкового однолетнего (Cfpsicum Annuum L.) различных веществ и соединений, которые находят разнообразное применение (обзоры Dee Castro Ramos R. Grasas Aceites (Seville),1981,v.32,N 1,p.391-394 "The Pepper Compositions(Capsicum Annum L.)and Utilization of its Resuduis"; Ganuett P.M.Nagel D. L. Reilly P.J. et al.J.Org.Chem. 1988,v.53.N 5,p.1064-1071,"The Capsaicinoids: Their Separation,Synthesis and Mutagenicity"; Japan Kokai Tokyo Koho JP 02 204403,1990, кл. A 01 N 65/00,"Capsicum Annuum Extract-Containing Antifouling Agents", а также "Экстракт стручкового перца" (ФС-42-1978-90) и "Лекарственные средства, применяемые в медицинской практике в СССР" (Справочник), М. Медицина,1990,с.284).Выделение из перца стручкового веществ, обладающих противолучевой активностью, неизвестно.

Цель достигается способом получения средства, обладающего противолучевой активностью, из растительного сырья, заключающимся в том, что перец стручковый или его шрот отход промышленного получения капсаициноидных препаратов экстрагируют углеводородным растворителем, обычно гексаном или бензином экстракционным. Экстрагент упаривают, а экстракт омыляют спиртовой щелочью. Целевое средство экстрагируют эфиром, эфир упаривают. Остаток промывают гексаном, полученный раствор сливают, фильтруют, гексан отгоняют. Получают густую ярко-красную массу, которая при введении в организм млекопитающих проявляет выраженные противолучевые свойства.

Для исследования на радиопротекторную активность в опытах на мелких лабораторных животных были отобраны следующие образцы:
Экстракт из шрота перца стручкового Образец N
Неомыляемая часть экстракта из шрота, обработанная гексаном Образец P
Экстракт из перца стручкового Образец К
Неомыляемая часть экстракта из перца, обработанная гексаном Образец L
В результате проведенных экспериментов было установлено, что образцы N и K активны в дозах 150-200 мг/кг, а образцы P и L -в дозах 50-100 мг/кг. Кроме того, для образцов P и L были получены более стабильные результаты в различных сериях опытов и для двух видов мелких лабораторных животных (мышей и хомяков). В изученных дозах ни один образец не оказал летального действия на подопытных животных.

Существенными отличиями предлагаемого способа являются следующие: в качестве сырья используют перец стручковый однолетний или его шрот, поскольку, как было экспериментально установлено, экстракт из него проявляет достаточно высокую антиоксидантную активность и представляет собой концентрат биологически-активных липидов: эфиров жирных кислот, стеринов, токоферолов, каротиноидов и пр. После омыления и удаления эфира неомыляемую часть экстракта освобождают от балластных веществ путем обработки гексаном, что позволяет сконцентрировать действующее начало экстракта, значительно уменьшить дозу введения в организм животных действующего средства, а также добиться стабильности его воздействия. Как подтверждено результатами доклинических испытаний, предлагаемое противолучевое средство можно отнести к разряду безвредных для организма малотоксичных соединений.

Перец стручковый однолетний является доступным и сравнительно дешевым растительным сырьем, а его шрот неиспользуемым отходом фармацевтической промышленности. К преимуществам данного технического решения можно также отнести его простоту и экономичность.

Пример 1. В верхнюю рабочую часть экстрактора объемом 10 л загружают 2 кг шрота перца стручкового, который является отходом производства препарата "Экстракт перца стручкового густой" на Лубенском ХФЗ, и экстрагируют 6 л бензина экстракционного. После необходимого числа циркуляций и времени контакта экстрагента с сырьем, достаточного для наиболее полного извлечения экстрактивных веществ, полученный раствор сливают из нижней рабочей части экстрактора в круглодонную колбу. Упаривают растворитель на роторном испарителе. Получают 0,091 кг экстракта (Образец N). Выход составляет 4-5% в расчете на исходное сырье. После кипячения экстракта в растворе спиртовой щелочи в течение 1 ч смесь охлаждают, разбавляют водой до 2,5 л и экстрагируют эфиром при соотношении экстрагент-водный слой 1:4. Эфирные вытяжки сушат на прокаленным сульфатом магния, затем эфир отгоняют на роторном испарителе, а остаток 0,010 кг промывают гексаном. Полученный раствор сливают, а образовавшийся смолянистый осадок еще несколько раз промывают гексаном до тех пор, пока раствор не станет практически бесцветным. Все декантированные растворы объединяют, фильтруют, упаривают до практически полного удаления гексана.

Таким образом, получают 0,009 кг густой маслянистой ярко- красной массы (Образец Р), химический состав которой определяют при помощи метода хромато-масс-спектрометрии. Содержание каротиноидов, измеренное спектрофотометрически в соответствии со стандартной методикой ФС-42-1730-86, составляет 2500 мг%
Пример 2. В верхнюю рабочую часть экстрактора загружают 2 кг сухого измельченного сырья перца стручкового однолетнего и 6 л гексана. Экстрагируют до практически полного извлечения экстрактивных веществ, после чего раствор сливают из нижней рабочей части экстрактора и упаривают на роторном испарителе. Получают 0,093 кг экстракта (Образец К), который омыляют, а затем неомыляемую часть извлекают эфиром, отгоняют его, остаток 0,013 кг несколько раз промывают гексаном. Полученный раствор фильтруют и упаривают на роторном испарителе.

Таким образом, получают 0,010 кг густой маслянистой массы ярко- красного цвета (Образец L), представляющей собой целевое средство, химический состав которого по данным хромато-масс- спектрометрического анализа не отличается существенно от полученного в примере 1, а содержание каротиноидов составляет 2450
Пример 3. Для определения острой токсичности средства были проведены эксперименты на белых беспородных мышах массой 18-20 г. Препараты вводили внутрибрюшинно в виде масляного раствора в объеме 0,2 мл. Наблюдение за животными проводили в течение 5 ч после введения препарата и выдерживали животных в течение 5 суток. За время наблюдения не было зарегистрировано изменений в поведении животных, отсутствовала местная реакция на введение при всех использованных дозах препаратов. Результаты приведены в табл. 1.

Пример 4. Радиозащитную эффективность препаратов при остром облучении изучали в экспериментах на мышах линии F₁ (CDAxC₅₇B1) массой 18-20 г. Препараты вводили внутрибрюшинно в 0,2 мл масла кубанского, затем животных подвергали общему тотальному облучению на гамма-установке "Игур", доза облучения составляла 8,0 рад при мощности дозы 1,61 рад/мин. Результаты радиозащитной эффективности оценивали по 30-дневной выживаемости животных. Препараты вводили за 1 ч до облучения. Контрольной группе мышей вводили внутрибрюшинно по 0,2 мл масла кубанского. Результаты приведены в табл. 2.

Пример 5. Эксперименты по изучению радиозащитной эффективности препаратов при пролонгированном облучении проводили на мышах линии F₁ (CDAxC₅₇B1) массой 18-20 г. Препараты вводили внутрибрюшинно в 0,2 мл масла кубанского за час до облучения. Мышей подвергали тотальному облучению на установке "ГУБ-1", доза облучения составила 1200 рад при мощности дозы 1 рад/мин. Радиозащитную эффективность оценивали по 30-дневной выживаемости животных. Контрольной группе мышей вводили внутрибрюшинно по 0,2 мл масла кубанского. Результаты экспериментов этой серии приведены в табл. 3.

В результате проведенных экспериментов было установлено, что образцы P и L обладают высокой радиозащитной активностью при введении их в организм животных в дозах 50-100 мг/кг. В изученных дозах ни один образец не оказал летального действия в опытах на мелких лабораторных животных.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается способа получения средства, обладающего противолучевой активностью. Сущность изобретения заключается в экстракции перца стручкового однолетнего или его шрота - отхода препарата "Экстракт перца стручкового густой", концентрировании экстракта, его омылении и выделении неомыляемой части обработкой эфиром, удаление эфира, извлечение целевого продукта гексаном и его отгонки. Технический результат заключается в усилении специфической противолучевой активности. 3 табл.

Способ получения средства, обладающего противолучевой активностью, путем экстракции растительного сырья органическим растворителем, отличающийся тем, что в качестве сырья используют перец стручковый однолетний (Capsicum annrum L. ) или его шрот отход производства препарата "Экстракт перца стручкового густой", сконцентрированный экстракт омыляют и выделяют из него неомыляемую часть экстракцией эфиром, эфир удаляют, а из остатка целевой продукт извлекают гексаном и его отгоняют.