СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ РАЗВЕРНУТОЙ И ТЕРМИНАЛЬНОЙ СТАДИЙ ХРОНИЧЕСКОГО ЛЕЙКОЗА Российский патент 1997 года по МПК G01N33/49 

Изобретение относится к медицине, может быть использовано для дифференциальной диагностики развернутой и терминальной стадии хронического лейкоза.

Известны способы дифференциальной диагностики развернутой и терминальной стадии хронического лейкоза, основанные на изучении содержания в крови форменных элементов. Для этой цели у больного утром натощак производят забор капиллярной крови, после чего под микроскопом подсчитывают число форменных элементов. При оценке течения заболевания исходят из того, что развернутая стадия хронического лейкоза характеризуется значительным увеличением (выше физиологической нормы) числа лейкоцитов и нередко тромбоцитов, а также характерными признаками лимфо- и миелолейкоза (увеличение количества лимфоцитов или миелоцитов). К признакам терминальной стадии хронического лейкоза относят резкое снижение указанных показателей, а также эритроцитов (нередко ниже физиологической нормы) и появление в крови бластных клеток, что свидетельствует о прогрессировании с течением времени опухолевого клона (Руководство по гематологии./Под ред. А.И.Воробьева, М. 1985, т. 1-2).

Недостатками проведения дифференциальной диагностики этих состояний на основании указанных методов исследований являются отсутствие четких количественных критериев развития терминальной депрессии кроветворения. Кроме того, хорошо известно, что снижение количества эритроцитов и тромбоцитов может иметь различную природу (острая и хроническая кровопотеря, наличие аутоиммунных и сопутствующих заболеваний), а количество лейкоцитов может широко варьировать в развернутой стадии на фоне проводимой химиотерапии. Бластные же клетки, предлагающиеся в качестве признака прогрессии опухолевого клона, нередко выявляются в развернутой стадии заболевания и сохраняются в крови на протяжение многих лет болезни, не переходящей в терминальную стадию.

Трудности дифференциации развернутой и терминальной стадии хронического лейкоза заключаются еще и в том, что указанные признаки нередко не связаны с длительностью течения заболевания. В ряде случаев хронический лейкоз дебютирует с терминальной стадии и имеет неблагоприятный прогноз.

Все перечисленное позволяет заключить, что до сих пор не установлено как ни одного четкого обязательного симптома терминальной стадии хронического лейкоза, так и сочетания их признаков.

Сущность изобретения состоит в определении в плазме крови больного свободной и связанной воды и в подсчете коэффициента гидратации плазмы крови, при его значении меньше 6,75 судят о развернутой стадии хронического лейкоза, а при его значении больше 6,75 о терминальной стадии хронического лейкоза.

Повышение количества связанной воды в плазме крови (норма 11,64%) при неизмененном количестве свободной воды ( норма 78,51%) судят о развернутой стадии хронического лейкоза. Терминальная стадия характеризуется снижением количества связанной и увеличением количества свободной воды плазмы крови. Интегральным показателем происходящих при этом изменений является предложенный коэффициент гидратации плазмы, представляющий собой отношение количества свободной к количеству связанной воды. При развернутой стадии хронического лейкоза он меньше, а при терминальной больше 6,75 (гидратация плазмы в норме).

Установлено, что вода является составляющей всех систем живой природы, где она наряду с белками и нуклеиновыми кислотами выступает в качестве их обязательного компонента и непременного участника всех биологических процессов. В воде выявлено наличие свободной и связанной фракций. Фракция свободной воды не ассоциируется с макромолекулами и выполняет лишь роль среды или растворителя, в то время как связанная ее часть взаимодействует с биомакромолекулами и упорядочивает их третичную и четвертичную структуру (Хромова Т.Б. Лазарев Ю.А. "Биофизика", т. 21, вып. 2, с. 208-211). В результате взаимодействия воды с макромолекулами вещества происходят изменения не только их конфигурации, но и физико-химических свойств. Эти особенности позволяют воде играть активную роль в функционировании биологических структур.

В последние годы был открыт феномен адаптационной стабилизации структур при действии на организм различного рода повреждающих факторов, в развитии которого важную роль играют стресс-белки из семейства белков теплого шока. При этом было установлено, что на первом этапе повреждения в процесс адаптации указанные белки накапливаются в клетках и участвуют в стабилизации клеточных структур. В итоге формируется т.н. "системный структурный след", приводящий к активации функционирующей системы. При длительном воздействии повреждающего фактора развивается второй этап повреждения, в ходе которого происходит редукция, сопровождающаяся снижением содержания стресс-белков (Меерсон Ф. З. Малышев И.Ю. Замотринский А.В. "Бюл.эксп. биологии и медицины", 1993, N 10, с. 352-355). Таким образом, содержание свободной и связанной воды в крови как интегрирующей системы организма является отражением структурно закрепившихся изменений в мембранах, клеточных популяциях и межклеточной среды под влиянием патологического процесса.

Способ осуществляется следующим образом. В плазме крови определяют свободную и связанную воду дилатометрическим методом по Н.Ф. Фаращуку (авт.св. N 154431). У больного хроническим лейкозом утром натощак производят забор крови из вены в гепаринизированную пробирку в количестве 1-2 мл, после чего кровь центрифугируют и отделяют плазму. Последнюю набирают в микропипетку до уровня 0,08 мл и вставляют ее в специальное зажимное приспособление. Используя оптическое устройство МПБ-2, регистрируют объем содержимого с точностью до 0,00005 мл и вносят устройство с микропипеткой в морозильную камеру с постоянной отрицательной температурой на 15-20 мин до состояния замерзания. Затем устройство вынимают и в верхний канал микропипетки вставляют металлический стержень до упора в замершую жидкость, регистрируя при этом ее объем.

Процент содержания свободной воды рассчитывают по формуле:

где V₀ исходный объем плазмы;
V₁ объем замерзшей плазмы;
K коэффициент сжатия биологической жидкости при охлаждении от уровня комнатной температуры до температуры кристаллизации воды.

Количество общей воды (% ) определяют после высушивания исследуемого материала при 100-150^oC путем взвешивания сухого остатка.

Количество связанной воды (% ) определяют по разности между общей и свободной ее фракциям.

Кроме того, в расчетах пользовались преложенным коэффициентом гидратации плазмы, представляющим собой частное от деления количества свободной воды плазмы крови в процентном отношении на количество ее связанного компонента:

При значении коэффициента меньше 6,75 регистрируется развернутая, а при превышении терминальная стадии хронического лейкоза.

Пример. Больной М. 43 лет. Впервые поступил в клинику 23.03.93 г. с диагнозом хронический миелолейкоз, развернутая стадия. Заболевание выявлено при проведении профосмотра. Анализ крови при поступлении: эритроциты -3,79•10¹², Hb 116 г/л, ЦП 0,9, тромбоциты 347,8 тыс. Лейкоциты 100 тыс, миелоциты 25, юные 7, п/я 9, с/я 50, эоз. 1, базоф. 1, лимфоц. 15, бластные клетки 1, СОЭ 58 мм/ч. Одновременно выявлены снижение количества белка крови (80 г/л), диспротеинемия (глобулины - 53,3% ), гепато- и спленомегалия. Проведенное исследование гидратации крови в этот период позволило выявить увеличение содержания связанной воды при сохранении уровня ее свободного компонента (коэффициент гидратации составил 5,89 при норме в 6,75).

В дальнейшем заболевание быстро прогрессировало и перешло в терминальную стадию, о чем свидетельствовало значительное увеличение коэффициента гидратации плазмы крови (7,37). Несмотря на проводимую терапию больной в январе 1994 года скончался. В табл. 1 приведены данные изучения гидратации крови в течение года наблюдения за больным.

В данном случае отмечается быстрое прогрессирование заболевания с переходом его из развернутой в терминальную стадию, о чем свидетельствует возрастание коэффициента гидратации плазмы. Проведено исследование гидратации плазмы крови у 44 больных хроническими лейкозами. Хроническим лимфолейкозом (ХЛЛ) страдали 29 человека, из которых у 19 больных была зарегистрирована развернутая и у 10 терминальная стадия заболевания. Хронический миелолейкозом (ХМЛ) был выявлен у 15 больных, из них у 8 развернутая и у 7- терминальная стадии. Стадии заболевания были определены на основании совокупности клинических признаков, а также длительного динамического наблюдения за характером течения заболевания. Контролем служила репрезентативная группа из 20 практически здоровых лиц доноров. В ходе исследования было установлено, что у больных хроническим лимфо- и миелолейкозом в развернутой стадии количество связанной воды было увеличено при неизменных показателях ее свободной фракции. Коэффициент гидратации был достоверно ниже нормы (6,75) и составлял 6,24 для хронического лимфо- и 6,21 для хронического миелолейкоза. Терминальная стадия хронического лейкоза характеризовалась снижением количества связанной и увеличением количества свободной воды. Коэффициент гидратации был в этом случае выше нормы и составлял 7,54 для хронического лимфо- и 7,24 для хронического миелолейкоза. Полученные данные представлены в табл. 2.

Преимущества предлагаемого способа заключается в том, что:
1) в качестве дифференциально-диагностического критерия оценки развернутой и терминальной стадий хронического лейкоза предлагается исследование гидратации крови, являющейся универсальной интегрирующей системой организма и отражающей изменения, происходящие в мембранах, клеточных популяциях и его межклеточной среде;
2) изменение коэффициента гидратации плазмы отражает процессы, происходящие в организме под влиянием хронического лейкоза, и не зависит от его формы;
3) определение динамики гидратации сыворотки крови наряду с другими данными клинических исследований позволяют прогнозировать течение заболевания и определять соответствующую терапию;
4) предлагаемый способ не требует специального оборудования, техника его выполнения проста, получаемая информация объективна и высоко информативна.

Использование: в гематологии. Сущность: с помощью определения содержания свободной и связанной воды в плазме крови больного дифференцируют развернутую и терминальную стадию хронического лейкоза (при значениях меньше 6,75 и больше 6,75 соответственно). Эффективность: повышение точности диагностики стадий хронического лейкоза, определение соответствующих режимов химиотерапии. 2 табл.

Способ дифференциальной диагностики стадий хронического лейкоза путем анализа крови, отличающийся тем, что определяют в плазме крови больного содержание свободной и связанной воды, рассчитывают коэффициент гидратации, при его значении меньше 6,75 судят о развернутой стадии, при его значении больше 6,75 о терминальной стадии хронического лейкоза.