СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ РАЗВЕРНУТОЙ И ТЕРМИНАЛЬНОЙ СТАДИЙ ХРОНИЧЕСКОГО ЛИМФОЛЕЙКОЗА Российский патент 1999 года по МПК G01N33/49 G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, может быть использовано для дифференциальной диагностики развернутой и терминальной стадии хронического лимфолейкоза.

Известны способы дифференциальной диагностики развернутой и терминальной стадий хронического лимфолейкоза, основанные на изучении содержания в крови форменных элементов. Для этой цели у больного утром, натощак производят забор капиллярной крови, после чего подсчитывают число форменных элементов. При оценке течения заболевания исходят из того, что развернутая стадия хронического лимфолейкоза характеризуется значительным увеличением (выше физиологической нормы) числа лейкоцитов и лимфоцитов, прогрессирующим или генерализованным увеличением лимфатических узлов, возможны гепато- и(или) спленомегалия. К признакам терминальной стадии относят значительное снижение уровней эритроцитов, гемоглобина, тромбоцитов, случаи злокачественной трансформации хронического лимфолейкоза (Руководство по гематологии / Под ред. А. И. Воробьева, М., 1985. - тт. 1-2.; Клименко В.И., Дягиль И.С., Крячок И.А.- "Врачебное дело". - 1995. - N 5-6. -С. 45-51.)
Недостатком проведения дифференциальной диагностики стадий на основании указанных методов является тот факт, что снижение количества эритроцитов, гемоглобина, тромбоцитов может иметь различную природу (острая и хроническая кровопотеря, наличие аутоиммунных осложнений и сопутствующих заболеваний), а также то, что вместе с количеством лейкоцитов эти показатели могут широко варьировать на фоне проводимой химиотерапии.

Трудности дифференциации развернутой и терминальной стадии хронического лимфолейкоза заключаются еще и в том, что указанные выше признаки нередко не связаны с длительностью течения заболевания, а в ряде случаев лейкоз дебютирует с терминальной стадии и имеет неблагоприятный прогноз.

Все вышеперечисленное позволяет заключить, что до сих пор не установлено как ни одного четкого обязательного симптома терминальной стадии хронического лимфолейкоза, так и сочетания их признаков.

Сущность изобретения состоит в том, что в крови больного определяют способность эритроцитов сорбировать витальные красители и при сорбционной способности эритроцитов менее 44,5% судят о развернутой стадии, при ее значении более 44,5% - о терминальной стадии хронического лимфолейкоза.

В основе способа лежат представления об эритроците как об универсальном адсорбенте, а также как об универсальной модели для исследования характеристик клеточных мембран (Покровский А.А. Липиды: структура и биосинтез. Превращения и функции. - М., 1977.; Черницкий Е.А., Воробей А.В. Структура и функции эритроцитарных мембран. - Мн.: Наука и техника, 1981. - 216 с.).

Одним из ранних проявлений нарушения функции плазматических мембран клеток при злокачественной их трансформации является изменение состояния активных и пассивных форм ионтранспортирующих систем. Основными причинами возникновения морфо-функциональных изменений при лимфопролиферативных заболеваниях является развитие анемии и гипоксии, а также наличие опухолевой интоксикации. При этом на начальных этапах развития заболевания метаболические изменения носят компенсаторный характер и направлены на предотвращение гибели клеток (Лосева М.И., Шпагина Л.А., Лисуков И.А. и др. - "Гематол. и трансфузиол. " - 1992. - N 5-6. - С. 16 - 20.). Установлено, что качественная неполноценность эритроцитов сохраняется или прогрессирует даже при отсутствии лабораторно-регистрируемых признаков анемии при лечении больных с опухолями различной локализации (Новицкий В.В., Колосова М.В., Степовая Е.А. и др. / Патофизиология органов и систем. Типовые патологические процессы (экспериментальные и клинические аспекты): Тезисы докладов: Первый Российский конгресс по патофизиологии с международным участием, Москва, 1996. - С. 93).

Ранее нами было установлено, что содержание воды и ее фракций в эритроцитах крови больных хроническим лимфолейкозом характеризуется снижением количества связанной и увеличением общей воды и ее свободной фракции. Выявленные изменения усугубляются при переходе заболевания из развернутой в терминальную стадию (Литвинов А.В., Милягин В.А., Цепова Е.Л., Дьяков М.Ю. - "Гематол. и трансфузиол." - 1997. -N 3.-С. 23-25.).

Способ осуществляется следующим образом. Определяется сорбционная способность эритроцитов по Тогайбаеву А.А. с соавт. (1988) [Тогайбаев А.А., Кургузкин А.В., Рикун И.В., Карибжанова P.M. - "Лаб. дело". - 1988. - N 9. - С. 22 - 24. ] в собственной модификации. У больного хроническим лимфолейкозом утром натощак производят забор крови из вены в пробирку, содержащую 3,8% раствор цитрата натрия, в соотношении 4 : 1. После перемешивания эритроциты отделяют путем центрифугирования в течение 10 минут при 3000 об/мин. Плазму и лейкоцитарный слой удаляют. Переносят 1 мл эритроцитной массы в пробирку, содержащую 3 мл 0,025% раствора метиленового синего, приготовленного на физиологическом растворе. Перемешивают и инкубируют в течение 20 минут при комнатной температуре. Далее центрифугируют в течение 10 минут при 3000 об/мин. Надосадочную жидкость переносят в кювету фотоэлектрокалориметра. Используя красный светофильтр, определяют оптическую плотность исходного раствора и надосадочной жидкости в единицах экстинкции по отношению к физиологическому раствору. Сорбционную способность эритроцитов (количество поглощенного красителя) рассчитывают по формуле: A (%) = 100 - (C•100)/B, где A - количество поглощенного красителя (%), B - оптическая плотность исходного раствора метиленового синего (в единицах экстинкции), C - оптическая плотность раствора метилепового синего после инкубации с эритроцитами больного (в единицах экстинкции). За норму принята сорбционная способность эритроцитов (ССЭ), равная 36,26±2,09%. При ССЭ в диапазоне 39,5 - 44,5% определяют развернутую, а при ССЭ более 44,5% - терминальную стадию болезни.

Пример 1.

Больной Н., 49 лет. Хронический лимфолейкоз выявлен впервые. Общий анализ крови: эритроциты - 3,64•10¹²/л, гемоглобин -111 г/л, ЦП - 0,93, лейкоциты - 57,2•10⁹/л, сегм. - 4, лимф. - 96, СОЭ - 18 мм/ч, тромбоциты - 236,6•10⁹/л, ретикулоциты - 0,2%. В процесс вовлечены шейные, подмышечные и забрюшинные лимфатические узлы. Умеренно увеличены печень и селезенка. Сорбционная способность эритроцитов составила 43,36%. На основании общепринятых и дополнительных критериев диагностирована развернутая стадия заболевания.

Пример 2.

Больной К. , 67 лет. Болен хроническим лимфолейкозом более 2,5 лет. С момента постановки диагноза проводилась первично-сдерживающая химиотерапия. Общий анализ крови: эритроциты -2,50•10¹²/л, гемоглобин - 83 г/л, ЦП - 1,0, лейкоциты - 28,1•10⁹/л, пал. -1, сегм. - 5, лимф. - 93, мон. - 1, СОЭ - 30 мм/ч, тромбоциты -60,0•10⁹/л, ретикулоциты - 1,7%. В процесс вовлечены лимфатические узлы всех групп. Умеренно увеличена печень и значительно увеличена селезенка. Сорбционная способность эритроцитов составила 51,4%. На основании общепринятых и дополнительных критериев диагностирована терминальная стадия заболевания.

Нами проведено исследование сорбционной способности эритроцитов у 48 больных хроническим лимфолейкозом, у 31 из которых была диагностирована развернутая, а у 17- терминальная стадия болезни. Стадии заболевания были определены на основании общепринятых критериев, а также длительного динамического наблюдения за характером течения заболевания. В ходе исследования было установлено, что у больных хроническим лимфолейкозом в развернутой стадии болезни ССЭ оказалась равной 41,37±1,65%. При переходе заболевания в терминальную стадию способность эритроцитов поглощать витальные красители увеличивалась до 51,11±1,95% (p< 0,001).

Преимущества предлагаемого способа заключаются в том, что:
1. В качестве дифференциально-диагностического критерия оценки развернутой и терминальной стадии хронического лимфолейкоза предлагается исследование сорбционной способности эритроцитов, отражающее изменения, происходящие в различных биологических мембранах организма.

2. Определение динамики сорбционной способности эритроцитов наряду с другими данными клинико-инструментальных исследований позволяют прогнозировать течение хронического лимфолейкоза и определять соответствующую терапию.

3. Способ обладает существенными достоинствами: быстротой исследования, простотой выполнения, отсутствием сложного специального оборудования и материалов. Получаемая при этом информация объективна и высоко информативна.

Способ может быть использован в медицине, а именно, в гематологии. В крови больного определяют способность эритроцитов сорбировать витальные красители. При значении сорбционной способности эритроцитов менее 44,5% судят о развернутой стадии, при ее значении более 44,5% - о терминальной стадии хронического лимфолейкоза. Способ обеспечивает повышение точности диагностики стадий хронического лимфолейкоза, определение соответствующих режимов химиотерапии. Способ более прост в исполнении, обладает быстротой исследования, отсутствием сложного специального оборудования и материалов.

Способ дифференциальной диагностики стадий хронического лимфолейкоза путем анализа крови, отличающийся тем, что определяют сорбционную способность эритроцитов и при значении сорбционной способности эритроцитов менее 44,5% судят о развернутой стадии, при ее значении более 44,5% - о терминальной стадии хронического лимфолейкоза.