СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ПОЗДНЕГО ГЕСТОЗА Российский патент 1998 года по МПК G01N33/68 A61B10/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования развития поздних гестозов беременности.

Проблема поздних гестозов остается одной из наиболее актуальных в современном акушерстве. Частота данного осложнения беременности составляет по данным разных авторов от 8 до 12%, а в последние годы имеется тенденция к нарастанию частоты данной патологии до 14,7%, материнская смертность от которых возросла до 10,3%, перинатальная - до 44% [2,7]. И.П.Иванов и А.П.Марусов отмечают значительную трудность и малую эффективность в прогнозировании поздних гестозов, особенно доклинических форм [2,3].

Известен способ прогнозирования позднего гестоза беременных путем определения уровня липидов и фосфолипидов в моче при сроке беременности 8-12 и 20-24 недели [4]. При уровнях липидов 513.1-65.8 и 706.4+84.7 ед. оптической плотности и фосфолипидов 5.7+1.7 и 16.5+6.1 мг/л прогнозируется поздний гестоз. Точность способа 64.5%.

Способ имеет недостатки:
двухкратность обследования (I и II триместр);
неспецифичность субстрата исследования, поскольку появление липидов и фосфолипидов в моче характерно для хронических заболеваний мочевыделительной системы (нефритов и пиелонефритов) и другой соматической патологии;
невысокая точность.

Наиболее близок по техническому решения способ прогнозирования позднего гестоза путем определения иммунного статуса беременной [8], где определяют относительное содержание Т-супрессоров в периферической венозной крови и при величине показателя 18% и менее прогнозируется развитие данного осложнения беременности. Данный споосб выбран в качестве прототипа.

Недостатками способа-прототипа являются:
при поздних гестозах содержание Тγ -клеток и CD8+ лимфоцитов, наиболее точно отражающих количество Т-супрессоров, практически не изменяется, снижается лишь содержание теофиллинчувствительных клеток, уровень которых может колебаться в широких пределах;
содержание Т-супрессоров снижается и при развитии других осложнений гестационного процесса, в том числе угрозы невынашивания беременности поздних сроков и соматических заболеваниях;
имеет невысокую точность - при определении уровня Т-супрессоров - 60%, при определении теофиллинчувствительных клеток - 47%.

Указанные недостатки могут быть устранены в предлагаемом способе.

Целью изобретения является повышение точности прогнозирования развития позднего гестоза у беременных женщин в 28-32 недели беременности за 3-7 недель до клинических проявлений данного осложнения беременности по определению в периферической крови теофиллинрезистентных Т-лимфоцитов, несущих на своей поверхности структуры, реагирующие с плацентарным альфа-1 микроглобулином (Ттфр-ПАМГ-1-РОК) и при их содержании 18% и более прогнозируется поздний гестоз в 80% случаев.

Новизна изобретения заключается в том, что данный параметр используется впервые для прогноза поздних гестозов беременности. Впервые установлено что, популяция Ттфр-ПАМГ-1 розеткообразующих клеток специфически отражает происходящие изменения в организме, сопровождающие развитие поздних гестозов. Способ основан на использовании установленной авторами закономерности изменения уровня Ттфр-ПАМГ-1-РОК при неосложненной и осложненной беременности (при физиологически протекающей беременности уровень Ттфр-ПАМГ-1РОК колеблется в интервале от 3 до 16%). Точность заявляемого способа - 80%.

Плацентарный альфа-1 микроглобулин (ПАМГ-1) представляет собой органоспецифический антиген плаценты, описанный впервые Д.Д.Петруниным и соавт. в 1977 г. ПАМГ-1 найден в ткани яичников, преовуляторной жидкости фолликулов, желтом теле, а также в семенных пузырьках и сперме. Учитывая синтез ПАМГ-1 органами репродуктивной системы человека, его отнесли к семейству белков фертильности. Белок обладает иммуносупрессивной активностью [1]. В связи с малым количеством ПАМГ-1 в биологических жидкостях определяется методом иммуноферментного анализа. При нормально протекающей беременности показатели ПАМГ-1 в сыворотке крови женщин при увеличении срока беременности изменяются незначительно [5].

В проведенных ранее исследованиях установлена связь повышения уровня белка у больных с эндометриозом, при гипотрофии и внутриутробной смерти плода, при развитии позднего гестоза беременных [5, 6].

Способ осуществляется следующим образом: периферическую венозную кровь из локтевой вены забирают в гепаринизированную пробирку в количестве 3 мл с добавлением гепарина из расчета 25 единиц на 1 мл крови. Выделяется взвесь лимфоцитов по методу Jondal M. е.а. [9], обогащенную популяцию теофиллинрезистентных клеток получали по методу Shore A. е.а. [10]. К 0,1 мл обогащенной фракции теофиллинрезистентных Т-лимфоцитов в концентрации 2 • 10⁶/мл добавляется эритроцитарный диагностикум, содержащий ПАМГ-1, в равном объеме.

Для приготовления эритроцитарного диагностикума 1 мл 20%-ной взвеси эритроцитов быка инкубируется с равным объемом раствора ПАМГ-1 в концентрации 200 нг/мл в течении 1 ч. при комнатной температуре. Рабочая концентрация эритроцитарного диагностикума - 1%. Взвесь теофиллинрезистентных клеток и эритроцитарного диагностикума инкубируется 10 мин при 37^oC, центрифугируется в течение 10 мин при 200 g и повторно инкубируется при температуре +4^oC в течение 1 ч. Клетки фиксируются 20%-ным раствором глютарового альдегида. Подсчет результатов осуществляется путем светового микроскопирования.

Существенными отличиями заявляемого способа являются.

В заявляемом способе оценивается уровень содержания Ттфр-ПАМГ-1- реактивных клеток и при его значении 18% и более прогнозируется поздний гестоз.

Преимущества предлагаемого способа:
однократность проведения исследования в срок планового обследования беременных в женских консультациях на RV и Вич (28-32 недели);
метод прост в исполнении, не требует дорогостоящего оборудования. Результаты исследования могут быть получены в тот же день. Продолжительность постановки способа составляет 4 ч.;
прогнозирование позднего гестоза за 3-7 недель до проявления клинических симптомов данного осложнения позволяет в условиях женских консультаций выделить группу риска на возникновение гестоза, провести необходимые профилактические мероприятия, что позволит предотвратить развитие тяжелых форм позднего гестоза и снизить перинатальную патологию;
высокая точность прогнозирования позднего гестоза (80%).

Пример 1. Беременная А., 18 лет. Настоящая беременность первая, протекает без осложнений. В сроке 30 недель объективно: жалоб не предъявляет. Артериальное давление 110/70 мм рт.ст. общая прибавка массы тела за последнюю неделю 300 г. ВСДМ - 30 см, ОЖ - 82 см. Сердцебиение плода ясное, ритмичное до 142 в минуту, видимых отеков нет. Общий анализ мочи без патологии. Заключение УЗИ: размеры плода соответствуют 30 неделям беременности, матка в нормальном тонусе, количество околоплодных вод в норме. Поставлен диагноз: беременность 30 недель, группа риска на возникновение позднего гестоза. Проведено иимунологическое обследование в сроке 30 недель. Содержание Тγ -клеток по способу-прототипу - 28%, теофиллинчувствительных клеток - 33%. По данным способа-прототипа содержание Т-супрессоров находится в пределах нормы, беременность протекает без осложнений, развитие позднего гестоза не прогнозируется. Содержание Ттфр-ПАМГ-1-РОК по заявленному способу составило 22%, что более 18% и позволяет прогнозировать развитие позднего гестоза. При обследовании в 34 недели беременности у беременной А. отмечено повышение АД (130/90 мм рт.ст.), пастозность голеней и передней брюшной стенки, патологическая прибавка массы тела за неделю 350 г., содержание белка в моче составило 0,033 г/л. Беременная помещена в стационар с диагнозом: беременность 34 недели. Поздний гестоз (нефропатия I степени). Первородящая в 18 лет. Беременность закончилась своевременными родами и рождение доношенного новорожденного массой 3200 г, ростом 60 см, с оценкой по шкале Апгар 8-9 баллов. Заключение: прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Пример 2. Беременная К. 28 лет. Настоящая беременность вторая. Первая беременность закончилась индуцированными преждевременными родами в срок 33 недели по поводу тяжелой формы позднего гестоза (нефропатии II-III степени) и рождением недоношенного ребенка с массой тела 1900 г, ростом 45 см, оценкой по шкале Апгар 4-5 баллов. Ребенок умер через 3 суток. При данной беременности женщина отнесена в группу риска на развитие позднего гестоза. Настоящая беременность протекает без осложнений. В сроке 28 недель объективно: жалоб не предъявляет, АД - 120/80 мм рт.ст., видимых отеков нет, белок в моче отсутствует, прибавка массы тела за неделю - 200 г. По данным УЗИ: беременность 28 недель, плод соответствует гестационному сроку. Поставлен диагноз: беременность 28 недель, риск развития позднего гестоза. Данные обследования: количество Тγ - клеток составило 10%, теофиллинчувствительных клеток - 3%, что позволяет прогнозировать развитие позднего гестоза. При обследовании заявленным способом содержание Ттфр-ПАМГ-1-РОК составило 10%, что свидетельствует об отсутствии риска развития позднего гестоза у данной беременной. При последующем наблюдении за беременной признаков позднего гестоза не выявилось. Беременность закончилась своевременными родами и рождением доношенного ребенка с массой тела 3500 г, ростом 60 см, оценкой по шкале Апгар 8-9 баллов. Заключение: прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Пример 3. Беременная П. 35 лет. Настоящая беременность пятая, желательная, во втором браке. Первая беременность закончилась своевременными родами в 39 недель и рождением ребенка с массой тела 3700 г, ростом 62 см, оценкой по шкале Апгар 7-8 баллов. Последующие 3 беременности закончились медицинскими абортами без осложнений. Настоящая беременность протекает без осложнений. Заключение терапевта; гипертоническая болезнь I A стадии. Объективно в 28 недель; состояние удовлетворительно, жалоб не предъявляет, АД 140/90 мм рт. ст., видимых отеков нет, общий анализ мочи без патологии, прибавка массы тела за неделю 250 г. По данным УЗИ: беременность 28 недель, плод соответствует гистационному сроку. Поставлен диагноз: Беременность 28 недель. Гипертоническая болезнь I A стадии. Группа риска на развитие позднего гестоза. Обследование способом-прототипом: содержание Тγ - клеток составило 17%, теофиллинчувствительных - 5% (прогнозируется развитие позднего гестоза). Содержание Т-тфр-ПАМГ-1-РОК составило 18%, что также позволяет прогнозировать развитие гестоза у данной женщины. При обследовании в сроке 34 недели выявлены симптомы нефропатии I степени, женщина помещена в стационар. Проведено общепринятое лечение. Беременность закончилась своевременными родами и рождением ребенка с массой тела 3000 г, ростом 54 см, оценкой по шкале Апгар 7-8 баллов. Заключение: прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Результаты исследований сведены в таблицу.

Таким образом, заявленный способ прост в исполнении и позволяет с высокой точностью прогнозировать развитие позднего гестоза за 3-7 недель до клинического проявления симптомов данного осложнения беременности, что позволит выбрать правильную тактику ведения женщин с риском развития позднего гестоза и будет способствовать снижению частоты данного осложнения беременности, уменьшению экономических затрат на лечение.

Список литературы.

1. Горлина Н.К., Головистиков И.Н., Татаринов Ю.С., Стенина М.А. Плацентарные белки как регуляторы иммунологических реакций при беременности.// Онтогенез. - 1983. - Т.14. - N2. - с. 205-208.

2. Иванов И.П. Современные подходы к ранней диагностике, общие принципы базисной терапии позднего гестоза беременных и медицинские аспекты реабилитации. // Пути снижения материнской и пеританальной заболеваемости и смертности при поздних гестозах беременности: Тез. докл. пленума правления Всесоюзного научного общества акушеров-гинекологов. - Иваново-Франковск. - 4-5 сент. - 1985. М. - 1985. - с. 74-76.

3. Марусов А.П. Претоксикоз и токсикоз беременных. Саранск. - Издательство Саратовского университета. - 1988. - 123 с.

4. Муратова Р.М., Краснопольский В.И., Юрьева Э.А., Алексеева Н.В., Воздвиженская Е.С. Способ прогнозирования позднего токсикоза беременных. А.С. 1572534.

5. Назимова С. В. , Петрунин Д.Д., Щербакова Л.Л., Татаринов Ю.С. Плацентарный альфа-1-микроглобулин как показатель внутриутробного развития плода. // В кн. Проблемы изучения наследственности человека на уровне белковых продуктов генной экспрессии. - Тезисы докладов Всесоюзного симпозиума. - М. - 1989. - с. 44.

6. Посисеева Л.В. "Новые" плацентарные белки в оценке нормальной и нарушенной репродукции человека. // Автореф. дисс. докт. мед. наук. - М. - 1991 - 50 с.

7. Серов В.Н. Практическое акушерство. - М. - Медицина - 1989 г.

8. Чернова Т.К., Мирович Д.Ю. Способ прогнозирования позднего токсикоза беременных. А.С. 1748066.

9. Jondal M. , Helm G. , Wigzell H. Surfase markere on human T and B lymfocytes/ 1/ A large population of limphocytes forming nonimmune rosettes with aheep red blood cells. // J.Exp/Med/ - 1972. - v. 136. - p. 207-222.

10. Shore A., Dosche H.M., Gelband E.W. Induction and separation of antigen-dependent T-helper and T-supressor cells in man. // Nature. - 1978. - v. 277. - p. 586.

Способ предназначен для прогнозирования развития позднего гестоза путем исследования периферической венозной крови беременной. В сроки 28-32 недели у беременной женщины определяют уровень теофиллинрезистентных Т-лимфоцитов, несущих на своей поверхности структуры, реагирующие с плацентарным альфа-1-микроглобулином. При содержании указанных Т-лимфоцитов 18% и более прогнозируют развитие позднего гестоза. Способ прост в исполнении, позволяет прогнозировать развитие позднего гестоза за 3-7 недель до появления клинических симптомов. 1 табл.

Способ прогнозирования развития позднего гестоза путем исследования периферической венозной крови беременной, отличающийся тем, что в сроки 28 - 32 недели у женщин определяется уровень теофиллинрезистентных Т-лимфоцитов, несущих на своей поверхности структуры, реагирующие с плацентарным альфа-1-микроглобулином, и при их содержании 18% и более прогнозируют развитие позднего гестоза.