СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ИСХОДА БЕРЕМЕННОСТИ У ЖЕНЩИН С УГРОЖАЮЩИМ ВЫКИДЫШЕМ РАННИХ СРОКОВ Российский патент 1998 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относятся к медицине, а именно акушерству и гинекологии, может быть использовано для прогнозирования исхода беременности у женщин с угрожающим выкидышем ранних сроков (до 12 недель) по сперме отца ребенка.

Проблема невынашивания беременности остается одной из наиболее актуальных в современном акушерстве, в том числе угрожающие выкидыши ранних сроков составляют от 13 до 30% по данным отечественных и от 60 до 78% по данным зарубежных авторов.

В качестве прототипа избран способ прогнозирования исхода беременности у женщин с угрожающим выкидышем ранних сроков путем исследования в сыворотке крови беременных специфического иммунохимического параметра - хорионического альфа-глобулина (ХАГ) с последующим прогнозированием выкидыша при отсутствии ХАГ в сыворотке крови по качественной реакции с точностью до 88,9% и при положительной реакции на ХАГ в исследуемой пробе прогнозируется сохранение беременности до срока родов с точностью 82,6%.

Недостатками способа-прототипа являются следующие:
1. Тест на исследование ХАГ в настоящее время не производится ни одной лабораторией страны и не выпускается ни отечественными, ни иностранными фирмами, поэтому применение его ограничено авторскими наборами.

2. Инвазивность способа - для исполнения необходимо исследование венозной крови беременной, а это высокий риск заражения женщины вирусом СПИД.

Указанные недостатки могут быть устранены в предлагаемом способе.

Целью изобретения является прогнозирование исхода беременности у женщин с угрожающим выкидышем ранних сроков (до 12 недель) по сперме мужа.

Поставленная цель достигается исследованием в сперме мужа содержания ПАМГ-2 (плацентарный альфа-2 микроглобулин), и при его уровне менее или равном 8 мкг/мл прогнозируется неблагоприятный исход беременности в 95% случаев.

Новизна изобретения заключается в том, что впервые предлагается прогнозирование исхода беременности у женщин с угрозой прерывания ранних сроков по определению белка ПАМГ-2 в сперме мужа. Ранее исследования спермы мужа на ПАМГ-2 у женщин с угрожающим выкидышем с целью прогнозирования исхода беременности не проводились.

Плацентарный альфа-2 микроглобулин (ПАМГ-2), впервые был обнаружен в водных экстрактах плаценты человека в 1976 г. Петруниным Д. Д. и соавторами и назван органоспецифическим альфа-2 глобулином плаценты. Новый белок идентифицировался в плаценте во все сроки гестационного процесса, в амниотической жидкости, в сыворотке крови женщин, экстрактах хорионэпителиомы. В последующем, учитывая низкий молекулярный вес белка, его назвали плацентарным альфа-2 микроглобулином. Позднее, после обнаружения ПАМГ-2 в органах репродуктивной системы мужчин и женщин, его стали обозначать как альфа-2 микроглобулин фертильности.

В проведенных ранее исследованиях выявлена связь ПАМГ-2 с фертильностью у женщин и мужчин, на основании чего разработаны новые способы определения фертильности мужчин, диагностики недостаточности лютеиновой фазы, прогнозирования грубых врожденных пороков у плода.

Способ осуществляется следующим образом: исследование ПАМГ-2 осуществляется методом двойной иммунодиффузии в агаре со стандартной тест-системой против ПАМГ-2. Антисыворотку против ПАМГ-2 получают путем иммунизации кроликов фракцией ретроплацентарной крови. Способ полуколичественный. Перед производством анализа готовится ряд разведений исследуемой спермы в дистиллированной воде в лунках полиэтиленовой матрицы соответственно 1:1, 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64. Реакцию проводят на обезжиренных предметных стеклах, залитых расплавленным 1%-ным раствором агара типа "Дифко" с 25%-ным раствором поваренной соли из расчета 5 мл геля на 1 анализ. При застывании агара в нем пробивают лунки специальным стандартным штампом "семерка". На одном стекле делают две "семерки". Агар из лунок удаляют иглой. В центральную лунку каждой из "семерок" с помощью пастеровской пипетки заливают антисыворотку против ПАМГ-2, в две противоположные - раствор стандартного антигена (абортная кровь в стандартном разведении), а в оставшиеся четыре - исследуемую сперму в разных разведениях. Стекла помещают в чашки Петри с влажной средой. Иммунопроявление длится 18 - 24 ч. Результаты читаются на следующий день в проходящем свете. Учитывается последний подгиб линии преципитации возле лунки с соответствующим разведением исследуемой спермы. Таким образом, получают полуколичественную оценку результата. Это разведение умножается на чувствительность метода - 2 мкг/мл. Полученный результат сравнивают с нормативными показателями ПАМГ-2 спермы мужчин с ненарушенной репродуктивной функцией. При постановке реакции на ПАМГ-2 на один анализ используется одно предметное стекло с агаром.

Общим для способа-прототипа и заявленного способа является исследование биологического материала на белковый иммунохимический параметр (ХАГ- в способе-прототипе и ПАМГ-2 в заявляемом) методом иммунодиффузионного анализа с соответствующими стандартными тест-системами.

Существенными отличиями являются:
во-первых, предложен новый диагностический параметр спермы мужа - ПАМГ-2, равный или менее 8 мкг/мл для прогнозирования исхода беременности у женщин с угрожающим выкидышем ранних сроков.

во-вторых, используется другая биологическая среда - сперма мужа (в способе-прототипе используется сыворотка крови беременных женщин для исследования ХАГ).

Существо изобретения поясняется следующими примерами:
Пример 1. Вольная С., 25 лет, имеющая в анамнезе один самопроизвольный выкидыш в ранние сроки, поступила в филиал родильного дома в отделение патологии беременных с диагнозом: Беременность 8 недель, угроза прерывания. Беременность желательная. При поступлении предъявляла жалобы на боли внизу живота, скудные сукровичные выделения из половых путей. Данные осмотра при поступлении: шейка матки без дефектов, наружный зев сомкнут. Матка увеличена до 8-недельного срока беременности, мягковатой консистенции, безболезненная, при осмотре матка возбудима. Придатки не определяются. Выделения слизисто-сукровичные, скудные. Данные кольпоцитологии: поверхностных клеток - 0, промежуточных - 25, ладьевидных - 75 (данные показатели позволяли прогнозировать благоприятный исход беременности). Обследование способом-прототипом: выявлена положительная реакция на ХАГ, что позволяло прогнозировать сохранение беременности. При обследовании заявленным способом: ПАМГ-2 в сперме мужа обнаружен в концентрации 1 : 1, что составляет 2 мкг/мл, эти данные позволили прогнозировать выкидыш. Женщине проводилась сохраняющая терапия (спазмолитические препараты, сернокислая магнезия, витаминотерапия, физиолечение). Через две недели от начала лечения произошел самопроизвольный выкидыш. Гистологическое исследование соскоба из полости матки указывало на наличие плодного яйца. Таким образом, прогноз выкидыша заявленным способом подтвердился.

Пример 2. Больная 3., 24 лет, повторнобеременная, имеющая в анамнезе три самопроизвольных выкидыша в ранние сроки, поступила в ОПБ родильного дома с диагнозом: Беременность 9 недель, угрожающий выкидыш. При поступлении предъявляла жалобы на сукровичные выделения из половых путей в течении двух дней, ноющие боли внизу живота. При осмотре: шейка матки без дефектов, наружный зев сомкнут. Матка увеличена до 9-недельного срока беременности, тонус повышен, при осмотре матка возбудима. Придатки не определяются. Выделения сукровичные, незначительные. Данные кольпоцитологии: поверхностных клеток - О, промежуточных - 20, ладьевидных - 80, что позволяет прогнозировать благоприятный исход беременности. Обследование способом-прототипом: ХАГ в сыворотке крови определяется (реакция положительная). Прогнозировалось сохранение беременности. Больной проводилась симптоматическая терапия, направленная на сохранение беременности. При обследовании заявленным способом: ПАМГ-2 в сперме мужа обнаружен в концентрации 1 : 4 что составляет 8 мкг/мл. Прогнозировался неблагоприятный исход беременности. Через три недели, несмотря на проводимую сохраняющую терапию, произошел самопроизвольный выкидыш. Гистологическое исследование соскоба из полости матки указывало на наличие элементов плодного яйца. Таким образом, прогноз выкидыша заявленным способом подтвердился.

Пример 3. Больная Н., 23 лет, имеющая в анамнезе один самопроизвольный выкидыш в раннем сроке, поступила в отделение патологии беременных родильного дома с диагнозом: Беременность II недель, угроза прерывания. Беременность от второго брака, желательная. При поступлении предъявляла жалобы на тянущие боли внизу живота, мажущие сукровичные выделения из половых путей в течение дня. При осмотре: шейка матки конической формы, без дефектов, чистая. Матка увеличена до II недель беременности размягчена, при осмотре возбудима. Придатки не определяются. Выделения сукровичные, скудные. Данные обследования кольпоцитологии: поверхностных клеток - 0, промежуточных - 18, ладьевидных - 82, что позволяет прогнозировать благоприятный исход беременности. Данные обследования способом-прототипом: ХАГ в сыворотке крови определяется (реакция положительная). Прогнозировалось сохранение беременности. При обследовании заявленным способом: ПАМГ-2 в сперме мужа обнаружен в концентрации 1 : 8, что составляет 16 мкг/мл, что позволяет прогнозировать благоприятный исход беременности. Вольной проводилась симптоматическая терапия, направленная на сохранение беременности. Через месяц больная И. была выписана из ОПБ родильного дома с прогрессирующей беременностью, а в сроке 39 недель произошли своевременные роды, родилась девочка, весом 3750 г, длиной тела 52 см. , с оценкой по Апгар 8 - 9 баллов. Через 5 дн мать и ребенок, в удовлетворительном состоянии, были выписаны из родильного дома домой. Таким образом, прогноз родов заявленным способом подтвердился.

Преимущества заявляемого способа.

1. Высокая точность способа - 95%.

2. Абсолютная безопасность и доступность метода - связана с исследованием спермы мужа на ПАМГ-2, поскольку отсутствует необходимость взятия крови у беременной женщины и какое-либо другое ее травмирование.

3. Позволяет рано решить вопрос о целесообразности продолжения или прерывания беременности с момента ее диагностики (2 - 3 нед).

4. Простота и доступность использования тест-систем на ПАМГ-2 позволяют широко его использовать в практическом здравоохранении.

5. Тест-системы на ПАМГ-2 выпускаются несколькими диагностическими фирмами, имеющими права на реализацию. В настоящий момент тест-системы на ПАМГ-2 можно приобрести по адресу: г. Москва., ТОО., "Русь 2".

Таким образом, заявленный способ прогнозирования исхода беременности у женщин с угрожающим выкидышем ранних сроков (до 12 нед) обеспечивает, наряду с высокой точностью и простотой выполнения, полную безопасность для женщины и доступность использования по сравнению со способом-прототипом. Использование предлагаемого способа позволит избрать правильную тактику ведения женщин с угрожающим выкидышем ранних сроков, что будет способствовать снижению частоты невынашивания беременности, снижению экономических затрат на лечение.

Целью изобретения является прогнозирование исхода беременности у женщин с угрожающим выкидышем ранних сроков (до 12 недель) по сперме отца ребенка. Эта цель достигается тем, что прогнозирование исхода беременности у женщин с угрожающим выкидышем ранних сроков осуществляется путем количественного определения плацентарного альфа-2 микроглобулина (ПАМГ-2) в сперме мужа, и при его содержании менее или равном 8 мкг/мл, прогнозируют самопроизвольный выкидыш. При уровне ПАМГ-2 в сперме 16-64 мкг/мл прогнозируют донашивание беременности.

Предлагаемый способ позволяет с высокой точностью прогнозировать выкидыш (95%), является простым и доступным в выполнении. Использование способа способствует выбору правильной тактики ведения женщин с угрожающим выкидышем и тем самым - решению проблемы невынашивания беременности.

Способ прогнозирования исхода беременности у женщин с угрожающим выкидышем ранних сроков путем количественного определения плацентарного альфа-2 микроглобулина (ПАМГ-2), отличающийся тем, что в сперме отца ребенка исследуют ПАМГ-2 и при его содержании менее или равном 8 мкг/мл прогнозируют самопроизвольный выкидыш.