СРЕДСТВО ДЛЯ КОРРЕКЦИИ ГИПЕРЛИПИДЕМИИ Российский патент 1998 года по МПК A61K35/48 A61K35/48 A61K35/407 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для коррекции гиперлипидемии, как основного фактора развития и прогрессирования атеросклероза.

Известны различные фармакологические препараты, влияющие на ферментативное звено синтеза холестерина в организме.

Так известно использование суспензии клеток фетальной печени для клинического применения (1, 2, 3).

Данные способы направлены на лечение таких нозологических форм заболеваний как синдром печеночной недостаточности и анемия.

Наиболее близким по технической сущности к настоящему изобретению является применение производных оксохинозолина для лечения гиперлипеимии (4).

Недостатком известного способа является общее снижение концентрации липидов в крови с возможным снижением антиатерогенной фракции холестерина в липопротеидах высокой плотности, что может привести к осложнениям в течении ИБС.

Задачей предложенного изобретения является расширение арсенала средств, нормализующих повышенный уровень липидов крови.

Техническим результатом настоящего изобретения является замедление прогрессирования атеросклероза и уменьшение частоты осложнений ишемической болезни сердца, за счет постепенного снижения уровня липидов и активации функции печени реципиента. Указанный результат достигается применением известной суспензии клеток фетальной печени впервые в качестве средства для коррекции гиперлипидемии. Применение фетальной ткани печени человека в качестве средства для коррекции гиперлипидемии обусловлено тем, что печень является основным органом ответственным за регуляцию и синтез холестерина в организме. Кроме того, фетальная ткань печени не обладает фактором иммуногенности и при трансплантации не вызывает осложнений в виде реакции "трансплантат против хозяина". Также известно, что трансплантируемая фетальная ткань донора стимулирует все функции аналогичного органа реципиента /Gale R.P. Fetal liver transplantation. - N.Y. 1985. - P. 73 - 83/.

Установлено снижение уровня общего холестерина 656,2 ± 49,5 мг/дл (48 дней холестериновой диеты) до 383,5 ± 64,5 мг/дл 120 дней, p < 0,01), повышение концентрации антиатерогенной фракции липопротеидов высокой плотности с 24,6 ± 2,8 мг/дл (28 дней) до 32,5 ± 1,9 мг/дл (120 дней, p < 0,01), снижение фракции атерогенных липопротеидов низкой плотности с 576,6 ± 46,2 мг/дл (48 дней) до 331,6 ± 65,3 мг/дл (120 дней, p < 0,05), и липопротеидов очень низкой плотности с 46,9 ± 8,8 мг/дл (48 дней) до 19,4 ± 3,4 мг/дл (120 дней, P < 0,01), снижение концентрации триглицеридов с 230,4 ± 38,4 мг/дл (28 дней) до 96,1 ± 17,2 мг/дл (120 дней, p < 0,01).

Также установлено уменьшение коэффициента атерогенности с 20,2 ± 2,3 (29 дней) до 11,2 ± 2,2 (120 дней, p < 0,01) на фоне холестериновой диеты у животных с трансплантируемой фетальной тканью печени.

Сопоставительный анализ предложенного решения и прототипа показывает, что предлагаемое изобретение отличается от известного тем, что в качестве лекарственного средства для коррекции гиперлипидемии используют суспензию клеток фетальной печени человека. Из приведенного сопоставительного анализа следует, что данное средство соответствует критерию изобретения "новизна".

Средство, составляющее предложенное изобретение, предназначено для использования в здравоохранении.

Возможность его применения подтверждена описанными в заявке приемами и средствами.

Данный способ обеспечивает достижение технического результата, а именно - снижение уровня общего холестерина на 57%, повышение антиатерогенной фракции липопротеидов высокой плотности на 32%, снижение фракции атерогенных липопротеидов низкой плотности на 56%, снижение концентрации липопротеидов очень низкой плотности на 41%, снижение концентрации триглицеридов на 39%, общих липидов на 49%, коэффициента атерогенности на 55%.

Из изложенного следует, что данное изобретение соответствует условию патентоспособности "промышленная применимость".

При анализе известных способов было выявлено в них отсутствие сведений о влиянии отличительных признаков способа на достижение технического результата, следовательно, изобретение соответствует требованию "изобретательский уровень".

Забор фетальной ткани печени человека проводят при проведении медицинских учреждений.

При выполнении медицинского аборта (срок 8 - 12 недель) в стерильный лоток собирают абортную массу, которую затем фильтруют через сито из нержавеющей стали с диаметром отверстий 0,5 см для отделения жидкой фракции абортной массы, содержащей кровь, околоплодные воды. Стерильным пинцетом абортная масса раскладывается на сите тонким слоем для визуальной идентификации эмбриональной к ткани, в частности брюшной и грудной полости. Выделенные части эмбриона помещают в раствор Хенкса с антибиотиками (пенициллин натриевая соль 500 ЕД и 1 г стрептомицина на 500 мл раствора Хенкса, pH раствора Хенкса 7,3 - 7,4). Получение первично трипсинизированных клеточных культур., Вып. 31, с. 162. п/ред. С.П.Карпова, Томск, 1974/ и транспортируют в контейнере с сухим льдом.

В условиях стерильного бокса клетки фетальной печени человека омывают в среде Хенкса от сгустков и кроветворных элементов, крови (3 - 5 раз в соотношении 1/5 до получения прозрачного раствора).

Непосредственно перед трансплантацией проводят гистологическую верификацию вводимой ткани. Также проводят и бактериологический контроль полученной суспензии.

Суспензию клеток фетальной печени человека в среде Хенкса в соотношении 1: 5 вводят кролику в паравертебральную область подкожно из расчета 50 мг/кг веса животного.

Сущность предложенного способа поясняется примером.

Эксперимент проводили на 40 кроликах породы "шиншилла", как наиболее известной модели для создания экспериментального атеросклероза. Вес животных 2,5 - 3,5 кг, возраст 12 - 18 мес.

Все животные были разделены на три группы.

В первую группу входило 6 животных, которые и явились контролем. Животные второй группы (13 особей) находились на специальной диете, в пищевой рацион которых вводили вещества, содержащие холестерин, из расчета 250 мг/кг веса кролика. Третья группа животных (18 кроликов) находилась на аналогичной холестериновой диете. Кроме этого, им была проведена-трансплантирована суспензия фетельная ткани печени человека.

Длительность эксперимента - 4 мес, в течении которых через 24 дня забирали кровь на биохимические анализы. Всего было произведено 6 заборов анализов. Сроки проведения эксперимента с ноября 1994 г по март 1995 г.

Биохимические исследования проводили на анализаторе "Корона Клинков" /Швеция/ с использованием реагентов фирмы Берингер Мангейм /Германия/. Применяли энзиматические методики, измерение проводили при температуре 37^oC.

Холестерин определяли с использованием фермента холестеринэстеразы по образованию эквивалентного количества перекиси водорода, определяемой спектрофотометрически /Siedel. et al. Clin. Chem. 29 (1075) 1983/.

Содержание холестерина липопротеидов высокой плотности определяли в надосадочной части сыворотки крови после осаждения суммарных атерогенных липопротеидов (липопротеидов низкой и очень низкой плотности). В качестве осадителя использовали смесь фосфорно-вольфрамовой кислоты (0,55 ммоль/л) и хлорид магния (0,25 ммоль/л) /Burstein, M. et al. J. Lipid Res. 11., 583. 1970/.

Триглицериды определяли по методу энзиматического гидролиза, путем освобождения из триглецеридов глицерина, который далее колориметрировали /Kohlmer M. Clin Chem. 32. 63. 1986/.

Фосфолипиды определяли с использованием холин-оксидазы по образованию эквивалентного количества перекиси водорода, которую колориметрировали /Takayama. et al. Clin. Chem. Acta 79.93. 1977/.

Анализу подвергали следующие показатели:
- общий холестерин /ОХ/;
- холестерин липопротеидов высокой плотности /Х лпвп/;
- холестерин липопротеидов низкой плотности /Х лпнп/;
- холестерин липопротеидов очень низкой плотности /Х лпонп/;
- триглицериды /ТГ/;
- фосфолипиды /ФЛ/;
- общие липиды /ОЛ/;
- коэффициент атерогенности /К а/.

Показатели сыворотки крови; ОХ, Хлпвп, ТГ, ФЛ определяют колориметрически, а показатели: Хлпонп=ТГ/5 (отношение), Хлпнп=ОХ - Хлпвп - Хлпонп, коэффициент атерогенности
(Ка) = (ОХ - Хлпвп)/5 /А.Н.Климов, Н.Г.Никульнева, М., 1984, с. 168/.

После 24 дня холестериновой диеты, когда биохимические показатели свидетельствовали о гиперхолистеринемии у кроликов во второй и третьих группах, всем животным третьей группы была произведена подкожная трансплантация суспензии клеток фетальной ткани печени человека в среде Хенкса из расчета 50 мг/кг веса животного.

Через 24 дня и в последующие сроки эксперимента (48, 72, 96, 120 дней) трансплантацию проводили в этой же дозе только животным третьей группы.

Всего в течение эксперимента было проведено 5 трансплантаций, одновременно с которыми также осуществляли гистологический и бактериологический контроль вводимой суспензии.

Полученные следующие результаты.

Установлено, что показатели липидного спектра крови через 24 дня холестериновой диеты составили: уровень ОХ повысился в 6,1 раза (610%) у животных второй группы.

В третьей группе ОХ повысился в 5,8 раза (580%).

У животных первой группы (контроль), находившихся на стандартной диете, концентрация ОХ достоверно не увеличивалась (p< 0,01).

Динамика липидного спектра по анализируемым временным промежуткам (исход, через 24, 48, 72, 96, 120 дней эксперимента) в исследуемых группах приведена в табл. 1, 2, 3.

Так, в табл. 1 представлены данные по контрольной группе животных. В течение всего эксперимента изменений уровня холестерина не наблюдалось (p < 0.01).

В табл. 2 отражена динамика липидов в группе кроликов с холестериновой нагрузкой. Установлено стабильное повышение уровня ОХ, снижение фракции Хлпвп, увеличение фракций Хлпнп и Хлпонп, концентрации ТГ и увеличение коэффициента атерогенности по временным промежуткам. Увеличение концентрации ОХ на 34%, снижение Хлпнп на 6%, увеличение Хлпнп на 34%, Хлпонп на 43%, ТГ на 55%, ФЛ на 9%, Ka на 4% в сравнении с показателями 24 дня эксперимента. Также отмечено увеличение концентрации общих липидов на 29%, характеризующее прогрессирование атеросклероза.

В табл. 3 представлена динамика липидов в третьей группе с холестериновой диетой и трансплантируемой суспензией клеток фетальной ткани печени человека. Установлено уменьшение концентрации ОХ на 57%, повышение фракции Хлпвп на 32%, уменьшение фракции Хлпнп на 57%, уменьшение Хлпонп на 41%, ТГ на 42%, снижение Ka на 55%. Данные приведены в сравнении с 28 и 120 днями эксперимента.

Для изучения постадийного процесса формирования атеросклеротических поражений аорты у кроликов одновременно осуществляли гистологические исследования. Проводили макроскопическую количественную оценку площади пораженной липидной интрафильтрацией аорты (по Г.Г. Автандилову). При холестериновой диете площадь поражения во второй группе (без трансплантации суспензии клеток) составила 68%, тогда как в третьей группе ( с трансплантацией суспензии) этот показатель = 48% (данные на 120 день эксперимента).

Установлено, что трансплантируемая суспензия клеток фетальной ткани печени человека улучшает липопротеидный спектр сыворотки крови.

Это проявляется снижением концентрации ОХ, повышением антиатерогенной фракции Хлпвп, снижением фракции суммарных атерогенных липопротеидов Хлпнп и Хлпонп, снижением концентрации ТГ и Ка.

Таким образом, применение данного средства дает возможность расширить диапазоном гипохолестеринемических воздействий в плане альтернативного лечения и профилактики ишемической болезни сердца и ее осложнений у людей.

Источники информации:
1. SU, авт свид. N 493227, кл. A 61 K 17/00, 1975.

2. Бруслик В.Г., Логинов А.С. и др. Способы применения изолированных гепатоцитов для лечения острой печеночной недостаточности // Вестник Российской АМН, 1994, N 5, с. 8-14.)
3. Лаврик С.С., Г.И., Когут и др. Криоконсервирование суспензии клеток фетальной печени для клинического применения // Врачебное дело, 1990, N 1, с. 90 - 93)
4. Патент WO 89/03215, кл. A 61 K 31/505, 1989.

Применения производных оксохинозолина для лечения гиперлипеимии.

Изобретение относится к медицине, а именно к средствам для коррекции гиперлипидемии. Предложено применение суспензии фетальной ткани печени человека в качестве средства для коррекции гиперлипидемии. 3 табл.

Применение суспензии фэтальной ткани печени человека в качестве средства для коррекции гиперлипидемии.