СПОСОБ КОРРЕКЦИИ ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ У БОЛЬНЫХ ИШЕМИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНЬЮ СЕРДЦА Российский патент 2002 года по МПК A61K35/48 A61P9/10 

Предлагаемое изобретение относится к области медицины, а именно к кардиологии, и может быть использовано в комплексном лечении ишемической болезни сердца (ИБС), обусловленной коронарным стенозирующим атеросклерозом.

Увеличение концентрации продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) над стационарным уровнем рассматривается как универсальный механизм повреждения клетки при различных патологических состояниях, в том числе и при ишемической болезни сердца, обусловленный коронарным атеросклерозом (1).

Известно, что одним из важных звеньев патогенеза атеросклероза является перекисное окисление липидов. По мере прогрессирования заболевания возрастает содержание липоперекисей в сыворотке крови, а антиокислительная активность уменьшается, что свидетельствует о снижении в организме содержания антиоксидантов (2). Коррекция уровня холестерина и липидов крови у больных ИБС стабилизируют течение атеросклероза и способствуют клинической ремиссии (3).

Известен способ коррекции перскисного окисления липидов у больных ишемической болезнью сердца, включающий использование в качестве антиоксиданта препарата предуктал в дозе 60 мг/сут (по 20 мг 3 раза в день), диквертина в дозе 0,08 г/сут (по 0,02 г 4 раза в день) в течение 3-4 недель. При необходимости через 3 месяца курс лечения повторяют. Данные препараты назначают при комплексном медикаментозном лечении ишемической болезни сердца (4,5).

К недостаткам известного способа коррекции процессов перекисного окисления липидов следует отнести то, что эти препараты назначают на длительный срок и через определенный период времени необходим повторный курс лечения. Кроме этого, предуктал противопоказан пациентам с гиперчувствительностью к данному препарату.

Наиболее близким к предлагаемому по терапевтическому эффекту является способ коррекции процессов перекисного окисления липидов, включающий использование в качестве антиоксиданта витамина Е (α-токоферола). Действие α-токоферола в клетке связывают с его способностью выступать в качестве антиоксиданта и стабилизатора клеточных мембран (6).

При коронарном стенозирующем атеросклерозе препарат α-токоферола назначают по 100 мг в сутки с витамином А по 0,125 мг/сут в течение 20-40 дней. Через 3-6 месяцев курс лечения витамином Е повторяют (7).

К недостаткам данного способа следует отнести болезненность и появление инфильтратов при внутримышечных инъекциях, возможность аллергических реакций. Также необходимо соблюдать осторожность при использовании препаратов витамина Е у больных с тяжелым кардиосклерозом и инфарктом миокарда, так как большие дозы данного препарата могут иметь обратный эффект - усугубление процессов перекисного окисления (8).

Задачей заявляемого изобретения является разработка способа, позволяющего корректировать процессы перекисного окисления липидов и уровень продуктов ПОЛ в организме.

Техническим результатом настоящего предложения является восстановление окислительных процессов в организме и, как следствие, клиническая ремиссия в течение ишемической болезни сердца.

Эта задача решается способом, заключающимся в том, что на фоне общепринятой медикаментозной терапии, включающей введение нитратов пролонгированного действия, антагонистов кальция и аспирина дополнительно одномоментно раздельно вводят суспензии фетальных тканей печени, сердца, легких и плаценты плода 16-20 недель в количестве по 1 мл подкожно в переднюю брюшную стенку.

Сопоставительный анализ заявляемого и известных решений показывает, что неизвестно использование комплекса фетальных тканей печени, легкого, сердца, плаценты человека для коррекции процессов ПОЛ у больных коронарным атеросклерозом.

Из приведенного сопоставительного анализа следует, что заявляемое средство соответствует критерию "новизна".

Заявляемый способ обеспечивает достижение усматриваемого заявителем технического результата, а именно - стабилизацию течения ишемической болезни сердца путем восстановления окислительных процессов в организме.

При осуществлении предложенного способа происходит достоверное снижение продуктов перекисного окисления липидов: малонового диальдегида (МДА) и диеновых конъюгатов (ДК) на 29,1 и 22,9%, соответственно; увеличение концентрации антиоксиданта α-токоферола на 37,1%; снижение концентрации общего холестерина в среднем на 10,8%, липопротеидов низкой плотности на 9,3%, триглицеридов на 26,4% (через 1,5 месяца от начала лечения); увеличение антиатерогенной фракции липопротеидов высокой плотности на 7,4% (через 3 месяца от начала лечения).

Клиническая ремиссия выражается в достоверном уменьшении числа приступов стенокардии в сутки, снижении дозы антиангинальной медикаментозной терапии, в увеличении толерантности к физическим нагрузкам, усилении половой функции.

Из изложенного следует, что заявляемое изобретение соответствует условию патентоспособности "промышленная применимость".

При анализе известных способов было выявлено в них отсутствие сведений о влиянии отличительных признаков способа на достижение технического результата, следовательно, изобретение соответствует критерию "изобретательский уровень".

Сущность предлагаемого изобретения состоит во введении в организм человека суспензии фетальных тканей печени, сердца, легких и плаценты.

Основой для использования фетальных тканей является их высокий пластический и функциональный потенциал, отсутствие фактора иммуногенности и возможность стимулирования и/или компенсирования функции аналогичных органов - мишений в организме реципиента.

Так печень является основным органом, выполняющим функции регуляции и синтеза холестерина, липопротеидов, триглицеридов в организме.

Сердце - основной орган, страдающий вследствие развития осложнений ИБС, в результате трансплантации фетальной суспензии клеток получает "свежую" генную информацию о нормальной работе органа.

Использование суспензии фетальных клеток плаценты обусловлено общей положительной реакцией организма реципиента, заключающейся в активации всех обменных процессов.

Фетальная ткань не обладает фактором иммуногенности и при трансплантации не возникает осложнения в виде реакции "трансплантат против хозяина". Трансплантируемая фетальная ткань донора стимулирует все функции аналогичного органа реципиента.

Клиническими исследованиями авторов заявляемого способа установлено, что трансплантация предложенного комплекса суспензий фетальных тканей человека оказывает мягкий коррегирующий и в тоже время пролонгированный эффект воздействия на систему ПОЛ организма - на основные липиды крови, т. е. происходит благоприятное воздействие на течение ИБС, которое выражается в клинической ремиссии - в уменьшении приема препаратов базисной терапии, в расширении возможностей к физической нагрузке, в достоверном уменьшении числа приступов стенокардии в сутки (р <0,01), в усилении половой функции у мужчин, а также происходит замедление прогрессирования патологического процесса - коронарного атеросклероза (10). Так, авторами заявляемого способа на 6-ой месяц наблюдения установлено снижение уровня общего холестерина в среднем на 2,4%, холестерина липопротеидов низкой плотности на 16,6%, увеличение концентрации антиатерогенных липопротеидов высокой плотности ЛПВП на 24,9%.

Заявляемый способ осуществляют следующим образом.

Для осуществления заявляемого способа получение фетальной ткани печени, легких, сердца и плаценты человека проводят при проведении медицинских абортов в специализированных медицинских учреждениях. Полученные фетальные ткани печени, сердца, легких и плаценты обрабатывают по технологии Московского института биологической медицины, гомогенизируют и затем криоконсервируют. После этого полученные суспензии фетальных тканей помещают в отдельные криоконтейнеры и хранят в жидком азоте (при температуре -196^oС).

Непосредственно перед трансплантацией контейнеры с фетальными тканями размораживают на водяной бане при температуре 40^oС в течение 5 мин.

Размороженные суспензии фетальных тканей печени, сердца, плаценты вводят по 1 мл суспензии подкожно в различные области передней брюшной стенки.

Сущность предложенного способа поясняется примером.

В клиническую группу наблюдения были включены 30 пациентов, которые получили трансплантацию фетальных тканей в период с октября 1996 года по декабрь 1998 года.

Все они имели актуальный стенокардический синдром, обусловленный стенозирующим атеросклерозом коронарных артерий, подтвержденный данными коронарографии. Средний возраст больных составил 59,6±10,6 года (от 49 до 72 лет). Длительность заболевания до включения в клиническое исследование составила 5,0±0,4 года. У 90% больных данной группы была выявлена гиперхолестеринемия.

За 2 недели до начала исследований медикаментозная терапия у данных больных была максимально стандартизирована и включала нитраты пролонгированного действия (кордикет в дозе 40 мг в сутки) и антагонисты кальция (коринфар 60 мг в сутки) с сочетанием с аспирином 1 раз в день в дозе 0,125 мг в сутки.

Ограничений в привычной диете не проводилось.

Все пациенты получили местное введение в область передней брюшной стенки суспензий фетальных тканей печени, сердца, легких и плаценты плода 16-20 недель в количестве по 1 мл подкожно. Каждая из суспензий содержала по 1 г фетальных тканей в 5 мл криоконсерванта /питательной среды 199/.

Определение исследуемых параметров проводили до лечения и с последующим контролем через 3 недели, 1,5; 3 и 6 месяцев. При статистической обработке результатов использовали метод вариационной статистики с вычислением коэффициента t Стьюдента.

Показатели перекисного окисления липидов крови у данных пациентов представлены в таблице 1.

Показатели липидного спектра крови данных пациентов представлены в таблице 2.

Контрольную группу составила группа пациентов в количестве 20 человек, которые получили медикаментозное лечение, включающее нитраты пролонгированного действия (кордикет 20 мг 2 раза в день), антагонисты кальция (коринф 20 мг 3 раза в день) и аспирин (0,125 мг в сутки).

В таблице 3 представлены результаты контрольной группы через 6 месяцев от начала лечения.

Данные, приведенные в таблицах 1 и 2, свидетельствуют о позитивном влиянии на течение ИБС трансплантации суспензий фетальных тканей, что подтверждает изменение показателей процесса перекисного окисления липидов и липидного спектра. Отчетливое повышение антиокислительной активности на 56,4% наблюдается через 1,5 месяца от начала лечения, концентрация витамина Е (α-токоферола) увеличилась на 37,1% и, как следствие, снизились концентрации продуктов перекисного окисления: малонового диальдегида и диеновых конъюгатов на 29,1 и 22,9% соответственно. В результате нормализации процессов перекисного окисления нормализуется липидный спектр крови, что выражается в достоверном снижении концентрации общего холестерина на 10,8%, холестерина низкой плотности на 9,3%, холестерина очень низкой плотности на 27,8%, триглицеридов на 26,4%, фосфолипидов и общих липидов на 12,2 и 16,4% соответственно (результаты, полученные через 1,5 месяца от начала лечения), а также повышением концентрации липопротеидов высокой плотности на 7,4% (через 3 месяца от начала лечения). Тенденция к нормализации липидного уровня и процессов перекисного окисления липидов наблюдалась в течение 6 месяцев от начала лечения.

В приведенном примере стабилизация показателей липидного спектра крови в течение 6 месяцев свидетельствуют о клинической ремиссии заболевания и о замедлении процесса прогрессирования коронарного атеросклероза.

Определение антиокислительной активности сыворотки крови проводили по методу Клебанова Г. И. (11) при длине волны, равной 532 нм (λ = 532 нм), далее измеряли и рассчитывали концентрацию диеновых конъюгатов методом Гаврилова при λ = 232 нм (12) и ТБК-активных продуктов по методу Yagi К. при λ = 532 и 580 нм (13). Флуориметрическим методом определяли содержание α-токоферола (14).

Биохимические исследования проводили с использованием стандартных наборов фирмы Boehringer Mannheim (Германия) на биохимическом анализаторе "Corona" фирмы LKB (Швеция).

Холестерин определяли с использованием реагентов фермента холестерин эстеразы по образованию эквивалентного количества перекиси водорода, определяемой спектрофотометрически (15).

Содержание холестерина липопротеидов высокой плотности определяли в надосадочной части сыворотки после осаждения суммарных атерогенных липопротеидов (ЛПНП и ЛПОНП). В качестве осадителя использовали смесь фосфорно-вольфрамовой кислоты (0,55 мл/л) и хлорид магния (0,25 мл/л) (16).

Триглицериды определяли по методу энзиматического гидролиза путем освобождения из глицеридов глицерина, который определяли колометрически (17).

Фосфолипиды определяли с использованием холиноксидазы по образованию эквивалентного количества перекиси водорода, которую колориметрировали (18).

Такие показатели крови, как: общий холестерин, холестерин ЛПВП, триглицериды, фосфолипиды определяют колориметрически, следующие показатели математически; ЛПОНП определяли отношением ТГ/5; холестерин ЛПНП-ОХ-Хлпвп-Хлпонп= Хлпнп; коэффициент атерогенности Ка:
(ОХ-Хлпвп)/Хлпвп (19).

Таким образом, заявляемый способ позволяет корректировать процессы перекисного окисления липидов и уровень продуктов ПОЛ в организме и, как следствие получить клиническую ремиссию в течение ишемической болезни сердца.

Литература
1. Cholbi M. R. , Paya and Icaraz: Experimentia, 47 (2). - 1991. - Р. 195-199.

2. Демитриев Л. Ф. Биохимические аспекты атерогенеза: рольантиоксидантов //Терапевтический архив, 1995. - 12. - М. : Медицина. - С. 73-77.

3. Владимиров Ю. А. , Арчаков А. И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. - М. : Наука, 1972. - 252 с.

4. Регистрация лекарственных средств. РЛС - Доктор //Под ред. Крылова Ю. Ф. , 2-е издание. М. , 1999. - С. 770.

5. Средство для комплексной терапии заболеваний "Диквертин": получение, стандартизация, фармакологические свойства и клинические исследования /Тюкавкина Н. А. , Руленко И. А. , Колесник Ю. А. и др.

6. Верболович В. П. , Подгорный И. Л. , Подгорная Л. М. и др. Влияние α-токоферола в водорастворимой форме на мембраны эритроцитов человека при их контакте с кислородом //Биол. науки. - 1990. - 11 - С. 35-42.

7. Машковский М. Д. Лекарственные средства. Т. 2. - М. : Медицина, 1987. - С. 26.

8. Машковский М. Д. Лекарственные средства. Т. 2. - М. : Медицина, 1987. - С. 34.

9. Gale R. P. Fetal liver transplantation. - N. V. 1985. -P. 73-83.

10. Трансплантация фетальных тканей и клеток человека. - М. , 1996. - С. 86-91.

11. Клебанов Г. И. , Бабенкова И. В. , Теселкин Ю. О. Оценка антиокислительной активности плазмы крови с применением желточных липопротеидов //Лаб. дело. - 1988. - 5. - С. 59-62.

12. Гаврилов В. Б. , Мишкорудная М. И. Определение диеновых коньюгатов в сыворотке крови. - Лаб. дело. - 1983. - 3. - С. 33-36.

13. Yagi К. , Nishigaki I. , Ohama H. Measurement of serum TBA-value. //Vitamins. - 1968. - V. 37. - 1. - Р. 105-112; в модификации Yagi Y. , Matsuda M. , Yagi K. Fomation of lipopеroxide in isdated sciatic nerve by chinoform-terric chelate //Expenmentia. - 1976. - V. 32. - 7. - P. 905-906.

14. Taylor S. L. , Lamden M. P. , Tappel A. L. //Lipids. - 1976. -V. 11. - 7. - P. 530-538.

15. Siedel et al. Clin. Chem. 29 (1075) 1983.

16. Burstein M. Et al. J. Lipid. Res. 11. 583. 1970.

17. Kohlmeir M. Clin. Chem. 32, 63, 1986.

18. Takayama et al. Glin. Chim. Acta 79; 93. 1977.

19. Климов А. Н. , Никульчева, 1984. - 168 с.

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для коррекции перекисного окисления липидов у больных ишемической болезнью сердца. Проводят комплексное лечение нитратами пролонгированного действия, антагонистами кальция и аспирином. Дополнительно вводят суспензии фетальных тканей печени, сердца, легких и плаценты плода 16-20 недель одномоментно раздельно подкожно в переднюю брюшную стенку в количестве 1 мл. Способ позволяет нормализовать липидный спектр крови и процессы ПОЛ. Это замедляет прогрессирование коронарного атеросклероза и улучшает результаты лечения больных. 3 табл.

Способ коррекции перекисного окисления липидов у больных ишемической болезнью сердца, включающий введение нитратов пролонгированного действия, антагонистов кальция и аспирина, отличающийся тем, что дополнительно одномоментно раздельно вводят суспензии фетальных тканей печени, сердца, легких и плаценты плода 16-20 недель в количестве по 1 мл подкожно в переднюю брюшную стенку.