СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПАТОЛОГИИ ГАСТРОДУОДЕНАЛЬНОЙ ЗОНЫ Российский патент 1999 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано при клинических исследованиях биологических материалов.

За последние годы значительно возросла заболеваемость желудочно-кишечного тракта у детей и взрослых, что связано с неблагоприятной экологической обстановкой, стрессовыми ситуациями т.п. Отмечается хронический, упорно рецидивирующий характер заболеваний, тяжелые осложнения, ранняя инвалидизация, что требует разработки достоверных методов распознавания стадии патологического процесса.

Известен способ исследования спектра структур жидкокристаллической фазы кристаллизации сыворотки крови как в корме, так при патологии и постановка диагноза по выявленным особенностям патологических форм (В.Н.Шабалин, С.Н. Шатохина "Кристаллические структуры крови в норме и патологии". Методические рекомендации М., 1992 г., стр. 3-5)
Недостатком этого способа является то, что в исследуемом материале, сыворотке крови, наличие многообразных сложных белков приводит к большому количеству различных структур, которые образуются в процессе кристаллизации. Это усложняет интерпретацию полученных результатов и снижает степень их достоверности. Кроме того, метод инвазивен.

Известен способ определения патологии желудочно-кишечного тракта (Ю.П. Ипатов и др. "Ключи к проблеме гастроэнтерологических заболеваний у детей", Нижний Новгород, 1997 г., стр. 25-28) путем биохимических исследований крови и слюны.

Недостатком этого способа является то, что для уточнения диагноза необходимо провести большой спектр биохимических исследований, требующих дефицитных реактивов, специальной аппаратуры, продолжительного периода времени, а также инвазивность метода.

Известен способ определения патологии желудочно-кишечного тракта (патент РФ по заявке 95100636/14, решение о выдаче патента от 12.09.97 г., БИ N 6, 1997 г.), включающий кристаллографическое исследование слюны с NaCl, анализ результатов по системе кристаллизации NaCl и величине морфотипов жидкокристаллических структур.

Недостатком этого способа является то, что кристаллография сланы проводится только для уточнения состояния здоровья у детей, подвергшихся влиянию малых доз радиации, без учета состояния гомеостаза и уточнения нозологических форм болезни.

Задача, поставленная авторами, - устранить указанные недостатки за счет учета состояния гомеостаза, нарушения которого проявляются в метаболических и морфологических тканевых изменениях, одним из маркеров которых могут служить кристаллографические исследования слюны и экссудата.

Поставленная задача решается за счет того, что в способе определения патологии гастродуоденальной зоны, включающем кристаллографические исследования с NaCl слюны, анализ результатов по системе кристаллизации NaCl и величине морфотипов жидкокристаллических структур, предложено дополнительно проводить кристаллографическое исследование экссудата, при этом по однотипному разветвлению рисунка с NaCl в слюне и экссудате, наличию сферолитов диаметром более 1,0 мк диагностируют воспалительный процесс при адекватной адаптивно-защитной реакции организма, при несоответствии картины кристаллизации слюны и экссудата, отсутствии сферолитов в экссудате диагностируют воспалительный процесс при несостоятельности неспецифических адаптационных механизмов, при неоднотипности разветвления рисунка с NaCl в слюне и экссудате, наличии сферолитов диаметром менее 1,0 мк диагностируют отсутствие патологии желудочно-кишечного тракта.

Кроме того, в предлагаемом способе при получении морфотипов жидкокристаллических структур слюны в виде игловидных или палочковидных форм диагностируют гастродуоденит, а при получении этих морфотипов в виде густой сети переплетенных линий диагностируют язвенную болезнь.

То, что в качестве исследуемого материала дополнительно используют экссудат, позволяет сравнивать морфоструктуры, образующиеся в процессе кристаллизации экссудата и слюны в присутствии NaCl в период мезафазы (жидкокристаллической фазы с наличием различных анизотропных структур), и конечную твердокристаллическую фазу с образованием систем кристаллизации NaCl в зависимости от сложнобелкового состава биожидкости. Эти показатели более доступны для интерпретации результатов, поскольку исследуемые биожидкости проходят через гистогематические барьеры и спектр образующихся структур в слюне и экссудате ограничен.

Кристаллографическое исследование слюны более точно отражает изменения при заболеваниях органов пищеварения, в связи с ее физиологической ролью в пищеварительной системе, а также участия в поддержании гомеостаза организма. Исследование экссудата позволяет оценить адаптационные возможности организма по неспецифическим факторам защиты. Суждение по этой пробе проводится по интенсивности клеточной миграции в очаг асептического воспаления и составу клеток при смене фаз процесса воспаления.

Установление закономерностей характера кристаллографических изменений в слюне и экссудате, полученных с места локального тканевого асептического воспаления и находящихся в прямой зависимости от функциональных и метаболических сдвигов, позволяет повысить точность диагностики хронизации процесса до 95%. Это достигается тем, что установлен параллелизм активизации полноценной клеточной защиты и изменения структурных морфотипов процесса кристаллизации слюны и многокомпонентного сложнобелкового состава экссудата, стимулирующего функциональную активность нейтрофилов, лимфоцитов, макрофагов в очаге поражения по "воспалительному" типу.

Результаты, полученные при использовании предлагаемого способа, были подтверждены исследованиями морфологии слизистых с места патологии и данными гастрофибродуоденоскопии.

На фиг. 1 представлена кристаллограмма слюны с NaCl, твердокристаллическая фаза. Разветвленные кристаллы. Увеличение х 90 (пример 1). На фиг. 2 - кристаллограмма экссудата с NaCl, твердокристаллическая фаза. Разветвленная система. Увеличение х 160 (пример 1). На фиг.3 - кристаллограмма слюны, жидкокристаллическая фаза. Сферолиты до 3 мк, густая сеть. Увеличение х 90 (пример 1). На фиг. 4 - кристаллограмма экссудата, жидкокристаллическая фаза. Скопление сферолитов, яркие пластовые кристаллы. Увеличение х 160 (пример 1). На фиг. 5 - кристаллограмма экссудата, жидкокристаллическая фаза. Густая сеть жидкокристаллических линий, сферолиты до 4 мк. Увеличение х 90 (пример 1). На фиг.6 - кристаллограмма слюны с NaCl, твердокристаллическая фаза. Разветвленные системы. Увеличение х 90 (пример 2). На фиг.7 - кристаллограмма экссудата с NaCl, твердокристаллическая фаза. Разрозненные кристаллы с 1-3 отростками, линейная структура. Увеличение х 160 (пример 2). На фиг. 8 - кристаллограмма экссудата с NaCl, твердокристаллическая фаза. Разрозненные крупные кристаллы с тонкими извитыми ответвлениями. Увеличение х 90 (пример 2). На фиг.9 - кристаллограмма слюны, жидкокристаллическая фаза. Обилие игловидных и палочковидных анизотропных структур. Увеличение х 90 (пример 2). На фиг. 10 - кристаллограмма экссудата, жидкокристаллическая фаза. Пластовые, холестериновые кристаллы. Увеличение х 90 (пример 2). На фиг. 11 - кристаллограмма слюны с NaCl, твердокристаллическая фаза. Единичные разрозненные кристаллы. Увеличение х 90 (пример 3). На фиг. 12 - кристаллограмма слюны, жидкокристаллическая фаза. Единичные жидкокристаллические линии. Увеличение х 90 (пример 3). На фиг. 13 - кристаллограмма экссудата с NaCl, твердокристаллическая фаза. Единичные разрозненные кристаллы. Увеличение х 90 (пример 3). На фиг. 14 - кристаллограмма экссудата, жидкокристаллическая фаза. Единичные жидкокристаллические линии. Увеличение х 90 (пример 3).

Осуществление способа показано на конкретных клинических примерах.

Пример 1. Больная Н. , 13 лет (ист. бол. N1982, 1997 г.), поступила с диагнозом: язвенная болезнь 12-перстной кишки. Диагноз: верифицирован гастрофибродуоденоскопией и морфологическим исследованием биоптата слизистой.

Обследование по предлагаемому способу проведено после проведения комплексной терапии, включая иммуностимулирущий препарат "Деринат".

Исследовали твердо и жидкокристаллические фазы кристаллизации в смешанной слюне, полученной натощак после тщательного полоскания рта кипяченой водой.

Твердокристаллическая структура исследовалась путем введения в слюну 0,9%-ного (водного раствора NaCl в соотношении 1:1. Две капли полученной смеси помещались на стеклянную подложку, высушивались при комнатной температуре, картина кристаллизации оценивалась с увеличением х 90 в обычном световом микроскопе.

Жидкокристаллические структуры исследовались путем помещения слюны в количестве 0,02 мл в негерметичную камеру, образованную между подложкой (предметным стеклом новым, обработанным спиртом) и покровным стеклом. Процесс кристаллизации в этом случае замедлялся, что позволяло через 24 ч описать структуру жидкокристаллической фазы в поляризационном или световом микроскопе, при этом препарат помещался между скрещенными поляризационными пленками.

Исследования экссудата проводились с места локального асептического воспаления, вызванного скарификацией эпидермиса кожи в виде густой переплетающейся сети размером 1,5•1,5 см². На один угол скарифицированного участка накладывали беззольный круглый бумажный фильтр диаметром 0,3 см. Весь скарифицированный участок плотно закрывали 1/3 предметного стекла, обработанного спиртом. Стекло закрепляли лейкопластырем и снимали его через 8 ч (нейтрофильная фаза защиты) и 24 ч (макрофагально-лимфатическая фаза). Наложенный на скарификационную зону бумажный фильтр сразу же пинцетом помещали в 0,5 мл 0,9%-ный раствор NaCl, налитый в пластиковую пробирку. Через 2 ч нахождения в растворе из экстрагированной жидкости приготавливали препараты по описанной выше методике, но без разведения.

Результаты кристаллизации слюны (фиг.1) и экссудата (фиг.2) у больной показали наличие однотипных разветвленных структур NaCl в твердокристаллической фазе; в жидкокристаллической фазе слюны (фиг.3) и экссудата (фиг.4, 5) - наличие сферолитов диаметром более 1,0 мкм и обилие густой сети жидкокристаллических линий толщиной более 0,7 мкм.

Полученные данные говорят о наличии воспалительного процесса в гастродуоденальной зоне, а именно язвенной болезни, и об адекватности местного ответа на воспаление. Эти результаты коррелируют с данными состоятельности клеточной защиты на иммунной основе через 24 ч: в препарате количество нейтрофилов - 63%, лимфоцитов - 21%, макрофагов в стадии функциональной активности - 16%.

Больной был продолжен курс лечения.

Пример 2. Больная С., 14,5 лет (ист. бол. N12064, 1997 г.), поступила с диагнозом: гастродуоденит. Диагноз подтвержден гастрофибродуоденоскопией. Больна 5 лет, неоднократно лечилась в стационаре, девочка из группы часто болеющих детей. Обследование по предлагаемому способу проведено после курса комплексной терапии и улучшения клинического состояния больной. Исследовали твердо и жидкокристаллические фазы кристаллизации в слюне и экссудате по методике, описанной в примере 1.

Результаты обследования показали: в твердокристаллической фазе в слюне (фиг.6) обнаружены типично разветвленные кристаллические системы NaCl, характеризующие наличие воспалительного компонента; в жидкокристаллической фазе в слюне (фиг.9) обнаружено наличие сферолитов диаметром 1,2 - 1,8 мкм, обилие игловидных и палочковидных анизотропных структур; в экссудате в твердокристаллической фазе (фиг. 7, 8) - большие кристаллы NaCl с 1-3 отростками, иногда с ответвлениями в виде тонких извитых линейных структур (аллергический компонент); в жидкокристаллической фазе экссудата (фиг. 9, 10) - обилие пластовых холестериновых кристаллов, отсутствие сферолитов.

Таким образом, выявлено несоответствие картины кристаллизации экссудата и слюны, что свидетельствует о наличии воспаления желудочно-кишечного тракта, а именно подтверждает диагноз - гастродуоденит, при слабости защитных реакций у больной и наличии аллергических признаков. Больной была проведена коррекция лечения.

Пример 3.

Больная С. , 12 лет, (ист. бол. N14435, 1997 г.). Поступила с диагнозом хронический пиелонефрит, стадия ремиссии, пузырно-мочеточниковый рефлюкс.

Были проведены исследования по предлагаемому способу. В слюне (фиг.11) больной не обнаружено типичных разветвленных систем NaCl, в жидкокристаллической фазе (фиг. 12) обнаружено небольшое количество мелких просовидных сферолитов диаметром до 0,4 мкм, единичные жидкокристаллические линии. В экссудате с места асептического воспаления кожи обнаружены в твердокристаллической фазе единичные разветвленные системы NaCl (фиг.13), в жидкокристаллической фазе (фиг. 14) сферолиты диаметром до 0,6 мкм, много холестериновых пластовых структур. Полученные данные не подтверждают наличие воспалительного процесса в гастродуоденальной системе. Данные гастродуоденоскопии подтвердили полученный результат.

Одной из причин гастродуоденита, эрозивных и язвенных процессов в гастродуоденальной зоне являются заболевания, протекающие с нарушением микроциркуляторных процессов, в частности вибрационная болезнь. По предлагаемому способу было обследовано 8 больных в возрасте от 45 до 56 лет с давностью заболевания вибрационной болезнью более 6 лет и наличием обострения гастродуоденита, протекающего латентно, часто без болевого синдрома. Диагноз верифицирован данными гастрофибродуоденоскопии и гистологическим исследованием биоптатов слизистой.

До начала лечения у 6 обследуемых в слюне установлено наличие "воспалительного компонента", а в экссудате с места локального асептического воспаления выявлено наличие только линейной структуры в виде конгломератов из NaCl, наличие холестериновых кристаллов деформированной конфигурации и единичные жидкокристаллические линии. Это расценено как неадекватная защитная реакция.

По результатам кристаллографического исследования слюны и экссудата после терапии, включающей иммуностимулирующие препараты у всех больных установлено наличие менее выраженного "воспалительного компонента" в виде обилия однотипных разветвленных структур твердокристаллической фазы того и другого материала, в жидкокристаллической фазе наличие структур в виде игловидных и палочковидных форм и сферолитов диаметром более 1,2 мкм. Это расценено как адекватная защитная реакция на воспалительный процесс в гастродуоденальной зоне. Полученные данные позволяют рекомендовать включение в терапию этих больных различных иммуномодулирующих препаратов.

Предлагаемый способ позволяет исключить операции по зондированию желудочно-кишечного тракта, что приводит к упрощению и ускорению способа, снижению его травматичности. Кроме того, диагностическая точность способа повышается.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано при клинических исследованиях биологических материалов. В предлагаемом способе, включающем кристаллографические исследования с NaCl слюны, анализ результатов по системе кристаллизации NaCl и величине морфотипов жидкокристаллических структур, предложено дополнительно проводить кристаллографическое исследование экссудата. По однотипному разветвлению рисунка с NaCl в слюне и экссудате, наличию сферолитов диаметром более 1 мкм диагностируют воспалительный процесс при адекватной адаптивно-защитной реакции организма. При несоответствии картины кристаллизации слюны и экссудата, отсутствии сферолитов в экссудате диагностируют воспалительный процесс при несостоятельности неспецифических адаптационных механизмов. При неоднотипности разветвления рисунка с NaCl в слюне и экссудате, наличии сферолитов диаметром менее 1 мкм диагностируют отсутствие патологии желудочно-кишечного тракта. При получении морфотипов жидкокристаллических структур слюны в виде игловидных или палочковидных форм диагностируют гастродуоденит, а при получении этих морфотипов в виде густой сети переплетенных линий диагностируют язвенную болезнь. Способ позволяет исключить операции по зондированию желудочно-кишечного тракта, что приводит к упрощению и ускорению способа, снижению его травматичности. Кроме того, диагностическая точность способа повышается. 1 з.п. ф-лы, 14 фиг.

1. Способ определения патологии гастродуоденальной зоны, включающий кристаллографические исследования с NaCl слюны, анализ результатов по системе кристаллизации NaCl и величине морфотипов жидкокристаллических структур, отличающийся тем, что дополнительно проводят кристаллографическое исследование экссудата, при этом по однотипному разветвлению рисунка с NaCl в слюне и экссудате, наличию сферолитов диаметром более 1 мкм диагностируют воспалительный процесс при адекватной адаптивно-защитной реакции организма, при несоответствии картины кристаллизации слюны и экссудата, отсутствии сферолитов в экссудате диагностируют воспалительный процесс при несостоятельности неспецифических адаптационных механизмов, при неоднотипности разветвления рисунка с NaCl в слюне и эксудате, наличии сферолитов диаметром менее 1 мкм диагностируют отсутствие патологии желудочно-кишечного тракта. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что при получении морфотипов жидкокристаллических структур слюны в виде игловидных или палочковидных форм диагностируют гастродуоденит, а при получении этих морфотипов в виде густой сети переплетенных линий диагностируют язвенную болезнь.