СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ШЕЙКИ МАТКИ И ВЛАГАЛИЩА Российский патент 1999 года по МПК A61B5/04 

Изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для ранней диагностики воспалительных заболеваний шейки матки и влагалища, а также для контроля до и после лечения при диспансерном обслуживании женщин отнесенных к группе "риска".

Известен способ исследования отделяемого из половых органов в зависимости от диагностических задач: цитологическое изучение влагалищного мазка с целью определения функционального состояния яичников и выявления клеточных элементов новообразований; исследований при некоторых заболеваниях половых органов, а также определения чистоты влагалища и изучения семенной жидкости (см. В.С. Ронин, Г.М. Старобинец, Н.А. Утевский "Руководство к практическим занятиям по методам клинических лабораторных исследований". - Москва, "Медицина". - 1982 г. - С. 143-160). Для мазков берется материал, свободно отделяющийся от стенок влагалища, который после взятия помещают у края чистого, обезжиренного предметного стекла и распределяют его шлифованным стеклом так же, как мазок крови и, как правило, одновременно готовят 2-3 препарата. Затем, не подсушивая материал, фиксируют в смеси Никифорова от 15 до 20 минут (или во время фиксации может длиться до двух недель). После фиксации препараты окрашивают монохромными и полихромными методами.

Недостатком известного способа является то, что, используя монохромные и полихромные методы окраски, можно выявить только один момент жизнедеятельности клеток, поскольку материал подвергается фиксации. Фиксация не позволяет исследовать прижизненное состояние клеток и биокинетические свойства эпителиоцитов слизистой оболочки изучаемого объекта.

Известен способ оценки физиологического состояния организма по электрокинетическим свойствам клеток буккального эпителия (см. М.С. Гончаренко, В.А. Ерещенко "Тест-система оценки физиологического состояния организма по электрокинетическим свойствам клеток буккального эпителия". Методическая разработка. Харьков - 1992). Исследование клеток буккального эпителия (КБЭ) проводится методом взятия соскоба тупым металлическим шпателем, быстрым скользящим движением, по внутренней поверхности правой или левой щеки по средней линии между верхними и нижними деснами. Клетки соскоба со шпателя наносятся на обезжиренное предметное стекло с электропроводящими контактными площадками, равномерно распределяются на нем, затем на поверхность данного материала в качестве фонового состава закапывают каплю физиологического раствора и покрывают покровным стеклом. Для улучшения электропроводимости между контактными площадками и покровными стеклами кладут увлажненные фильтровальные полоски. Микроскопирование нативных клеток проводится без фиксации и окраски при увеличении х400 или 600 при комнатной температуре. Электрокинетические свойства клеток буккального эпителия оцениваются по характеристике их поведения в электрическом поле, процентным отношением подвижных ядер на сто просмотренных в поле зрения клеток.

Недостатком известного способа, взятого за прототип, является то, что он не позволяет достаточно полно отразить нарушение метаболизма в различных органах и тканях, в частности во влагалище и шейке матки.

Сущность изобретения заключается в том, что согласно способу диагностики воспалительных заболеваний шейки матки и влагалища, включающему забор клеток исследуемого органа, помещение их в фоновый состав, нанесенный на предметное стекло, воздействие на клетки в фоновой среде знакопеременным током и проведение исследования биокинетики клеток сразу после помещения клеток в фоновый раствор, в качестве фонового раствора используют молочную кислоту, приготовленную в дистиллированной воде до pH = 4,0 - 4,5, нагретой до 36-38^oC, и дополнительно проводят исследования спустя 10 и 20 минут, поддерживая при этом температуру фонового раствора постоянной и при снижении числа клеток с биокинетикой ниже 37,2% в начале исследования и 27,7% через 10 минут, амплитуды колебания ядер ниже 3,0 мкм в начале исследования и ниже 2,5 мкм через 10 минут, а колебаний цитоплазмы ниже 2,6 мкм в начале исследования и ниже 2,0 мкм через 10 минут и при полном прекращении биокинетики клеток через 20 минут диагностируют воспалительное заболевание шейки матки или влагалища.

Заявляемый способ позволяет выявить соотношение клеток с выраженной биокинетической активностью и без нее, а также особенности кинетики ядер и цитолеммы. Инкубирование в оптимальной среде с молочной кислотой обеспечивает длительную биокинетику клеток, что делает возможным всесторонне исследовать адаптационные возможности эпителиоцитов и проводить сравнительную характеристику адаптации клеток в зависимости от времени инкубации. Применение способа многократно повышает значимость цитокинетических исследований для клиники, которая будет способствовать выявлению наиболее ранних признаков заболеваний тканей органов малого таза женщин, а также может быть использовано для прогностических целей.

Заявляемый способ прост и атравматичен, не требует больших затрат, средств и времени. Высокая чувствительность способа позволяет использовать его для дифференциальной диагностики заболеваний женской половой системы и некоторых гормональных нарушений. Короткое время исследования позволяет относить его к экспресс-способу.

Способ осуществляется следующим образом.

Шпателем забирают клетки шейки матки или влагалища. Помещают клетки в 3 капли теплого (36-38^oC) раствора 0,3% молочной кислоты (это соответствует pH = 4,0-4,5), приготовленной на дистиллированной воде в качестве фонового состава.

Эпителиоциты шейки матки и влагалища для исследования помещают на обезжиренное предметное стекло камеры с серебряными электродами и нагревательными элементами, создающими заданную температуру. На поверхность раствора с клетками помещают обезжиренное покровное стекло. Между серебряными контактами и краем покровного стекла накладывают фильтры, предварительно смоченные вышеуказанным раствором. После подготовки клеток к исследованию электроды переводят в режим формирования знакопеременного поля. С помощью окулярного микрометра МОВ-1-А и прибора для подсчета подвижных и неподвижных клеток в течение 1-3 минут проводят исследование эпителиоцитов сразу после их помещения в камеру, а также в динамике спустя 10 и 20 минут.

Сразу после помещения клеток в камеру для исследования выявляется максимальное количество клеток с биокинетикой ядер и цитоплазмы:
- в группе практически здоровых людей оно составляет 40% ± 2,8%, средняя амплитуда колебания ядер 4,2 ± 1,2 мкм, цитолеммы - 3,0 ± 0,4 мкм;
- в группе больных женщин в среднем оно составляет соответственно 25,1% ± 3,4%, амплитуда колебаний ядер 2,6 ± 0,3 мкм, цитолеммы - 1,2 ± 0,2 мкм.

Через 10 минут исследования обнаруживается снижение показателей биокинетики клеток, а именно:
- в группе практически здоровых женщин процентное содержание клеток с биокинетикой составляет 23,6% ± 2,6%, амплитуда колебания ядер - 3,3 ± 0,8 мкм, цитолеммы - 1,5 ± 0,6 мкм;
- в группе больных женщин у большинства происходит прекращение биокинетики, процент клеток с биокинетикой составляет 0,05% ± 0,01%, амплитуда колебаний ядер равна 0,5 ± 0,1 мкм, цитолеммы - 0,5 ± 0,2 мкм.

Через 20 минут происходит полное прекращение биокинетики клеток в группе больных женщин, а в группе практически здоровых кинетика составляет 14,7% клеток.

Примеры из клинической практики с использованием заявленного способа:
Пример 1.

Больная Чиркова М.К., 19 лет.

Жалобы на боли внизу живота. При осмотре шейки матки выявлена отечность, незначительная гиперемия. Взят мазок-отпечаток из области шейки матки. Проведено биокинетическое исследование с последующей окраской мазка. При биокинетическом исследовании у 50 эпителиоцитов выявлено 15 клеток с биокинетикой (30%) с амплитудой колебаний: ядер 2,0 ± 0,2 мкм, цитолеммы - 2,5 ± 0,1 мкм. Через 10 минут исследования было констатировано отсутствие клеток с биокинетикой.

При изучении окрашенного мазка выявлены нейтрофилы и макрофаги.

Используя данные объективного обследования, цитологических исследований, в частности кинетики клеток и окраски мазка, поставлен диагноз: кольпит.

Пример 2.

Больная Загребина Л.В., 43 года.

Жалобы на боли внизу живота. При пальпации боли возникают в области яичников. При осмотре влагалища, шейки матки патологических изменений не выявлено.

Проведено цитокинетическое исследование 50 клеток в мазке-отпечатке шейки матки. Выявлено 17 клеток с биокинетикой (34%). Амплитуда колебаний: у ядер - 2,0 ± 0,18 мкм, у цитолеммы - 2,5 ± 0,12 мкм. Через 10 минут исследования биокинетики клеток не выявлено. Отмечено набухание эпителиоцитов. На основании исследования поставлен диагноз: острый двусторонний сальпингоофарит.

Пример 3.

Ахметгареева Т.М., 28 лет - медосмотр.

С диагностической целью проведено биокинетическое исследование. При исследовании 50 эпителиоцитов шейки матки выявлена биокинетика 26 клеток (52%), амплитуда колебаний ядра равна 6,0 ± 1,2 мкм, амплитуда колебаний цитолеммы - 4,8 ± 1,3 мкм. Через 10 минут и через 20 минут исследование продолжено. Изучены 50 эпителиоцитов, из них через 10 минут 18 (36,0%), через 20 минут 6 (12,0%) проявляют биокинетическую активность с амплитудой колебаний ядер соответственно 3,2 ± 0,9 мкм и 1,1 ± 0,07 мкм, а цитолеммы - 2,5 ± 0,6 мкм и 1,5 ± 0,3 мкм. Заключение: здорова.

Способ может быть использован в медицине, в частности в акушерстве и гинекологии. У обследуемой женщины шпателем забирают клетки шейки матки или влагалища. В дистиллированную воду добавляют молочную кислоту до рН = 4,0-4,5 (фоновый раствор), наносят его на предметное стекло, добавляют клетки исследуемого органа и воздействуют на них знакопеременным током. Исследование проводят сразу же после помещения клеток в раствор молочной кислоты, а затем спустя 10 и 20 мин. При этом температуру фонового состава на протяжении всего периода исследований поддерживают равной 36-38^oС. При снижении числа клеток с биокинетикой ниже 37,2% в начале исследования и 27,7% - через 10 мин, амплитуды колебаний ядер ниже 3,0 мкм в начале исследования и ниже 2,5 мкм через 10 мин, колебаний цитолеммы ниже 2,6 мкм в начале исследования и ниже 2,0 мкм через 10 мин и при полном прекращении биокинетики клеток через 20 мин диагностируют воспалительное заболевание шейки матки или влагалища. Способ более прост и атравматичен, не требует больших затрат, средств и времени. Способ обладает высокой чувствительностью и коротким временем исследования.

Способ диагностики воспалительных заболеваний шейки матки и влагалища, включающий забор клеток исследуемого органа, помещение их в фоновый состав, нанесенный на предметное стекло, воздействие на клетки в фоновой среде знакопеременным током и проведение исследования биокинетики клеток сразу после помещения в фоновый раствор, отличающийся тем, что в качестве фонового раствора используют молочную кислоту, приготовленную в дистиллированной воде до pH = 4,0 - 4,5, нагретую до 36 - 38^oC, дополнительно проводят исследования через 10 и 20 мин, поддерживая при этом температуру фонового раствора постоянной, и при снижении числа клеток с биокинетикой ниже 37,2% в начале исследования и 27,7% через 10 мин, амплитуды колебаний ядер ниже 3,0 мкм в начале исследования и ниже 2,5 мкм через 10 мин, а колебаний цитолеммы ниже 2,6 мкм в начале исследования и ниже 2,0 мкм через 10 мин и при полном прекращении биокинетики клеток через 20 мин диагностируют воспалительное заболевание шейки матки или влагалища.