УТЕРОЛИН ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ТЕРАПИИ СИМПТОМАТИЧЕСКОГО БЕСПЛОДИЯ У КОРОВ Российский патент 1999 года по МПК A61K35/48 

Изобретение относится к ветеринарии, а точнее к биологическим препаратам, обладающим свойством активизировать (стимулировать) общую неспецифическую резистентность организма и факторы локальной (местной) защиты половых органов у коров.

Известно, что послеродовые заболевания у коров являются одной из главных причин симптоматического бесплодия, а степень заболеваемости животных находятся в прямой зависимости от состояния неспецифической естественной резистентности организма и локальной (местной) устойчивости тканей матки коров. Об этом убедительно свидетельствует тот факт, что заболевают вышеуказанной патологией не все животные стада (группы), а только те, у которых низкий уровень неспецифической защиты (резистентности) организма.

Для активизации естественной резистентности организма в медицине широко используют биогенные препараты (фибс, торфот, экстракт алоэ, пелоидодистилат, экстракт и взвесь плаценты), изготовленные из тканeй животных и растений по методу академика В.П.Филатова (В кн. И.А. Калашник "Тканевые препараты и их применение" - Материалы научно-методического совещания стран - членов СЭВ. Москва, 1976, 198 с.)
Эти препараты обладают широким биологическим действием, способствуют восстановлению физиологических процессов, повышают защитные силы организма. К сожалению, промышленное производство указанных препаратов для нужд ветеринарной практики в стране не налажено.

Недостатком этих препаратов является их высокая стоимость, дефицитность, а главное сложность применения в ветеринарной акушерско-гинекологической практике, что связано с дополнительными расходами на разработку методик их применения для профилактики послеродовой патологии и лечения больных животных.

Наиболее близким техническим решением, выбранным в качестве прототипа данного изобретения, является тканевой препарат - биостимульгин, разработанный сотрудниками ВИЭВ (Инструкция по приготовлению и контролю биостимульгина, утверждена ГУВ МСХ СССР, 13.03.79).

Известно, что биостимульгин обладает общестимулирующим действием на организм животных, активизирует проявление стадии возбуждения полового цикла, а в ряде случаев способствует прекращению воспалительных процессов в гениталиях самок.

Однако биостимульгин имеет ряд существенных недостатков:
- у препарата слабо выражена специфическая направленность, связанная с непосредственным влиянием на факторы локальной (местной) защиты половых органов (матки) животных;
- препарат не содержит мукополиоахаридов, обладающих, как известно, бактерицидными, бактериостатистическими, вирусоингибирующими и вирусонейтрализующими действиями;
- отдаленность лечебно-профилактического эффекта и низкая биологическая активность по сравнению с предлагаемым препаратом;
- отсутствует стабилизация препарата, поэтому срок хранения и использования его ограничен (не более 6 месяцев со дня изготовления).

В этой связи биостимульгин не нашел широкого применения в ветеринарной акушерско-гинекологической практике.

Целью настоящего изобретения является изыскание новых более эффективных биологических препаратов, обладающих свойством стимулировать общую неспецифическую резистентность организма и активизировать естественные факторы локальной (местной) защиты тканей матки коров при профилактике и терапии акушерско-гинекологических заболеваний, обуславливающих симптоматическое бесплодие.

Указанная цель достигается при использовании нового тканевого препарата утеролина нативного (от латинского слова матка), изготовленного из тканей матки коров, ранее переболевших неспецифическими послеродовыми метритами.

В основу технологии получения препарата взята методика академика В.П. Филатова с некоторыми нашими дополнениями (стабилизация и стерилизация препарата).

Изготовление препарата включает следующие этапы:
- заготовка и обработка тканевого сырья;
- консервация на холоде;
- гомогенизация (измельчение тканей);
- экстрагирование и фильтрация;
- стабилизация препарата и стерилизация его текучим паром;
- расфасовка и оценка биологической активности препарата.

Сырьем для изготовления утеролина нативного служит матка коров, не имеющая патологических изменений.

Обработка сырья заключается в следующем: матку коров (одну или более) берут на мясокомбинате или непосредственно в хозяйстве от только что убитых на мясо животных, помещают в чистую стеклянную банку или эмалированную емкость, плотно закрывают и обертывают пергаментной бумагой. Затем помещают в холодильник для консервации и созревания при температуре 2-4^oC и выдерживают в течение 6-7 суток, после чего ткань пропускают через мясорубку и дополнительно через гомогенизатор-302.

Полученный гомогенат (тканевой фарш) взвешивают и заливают экстрагентом - физиологическим раствором в соотношении 1:5, тщательно перемешивают, выливают в стеклянную бутыль, укупоривают, обертывают пергаментной бумагой и помещают в холодильник для экстрагирования при температуре 2-4^oC в течение 24 ч.

После суточного экстрагирования тканевую массу фильтруют через марлю, слегка отжимая и дополнительно через плотный стерильный ватно-марлевый фильтр (можно фильтровальную бумагу или многослойный фильтр).

Полученный фильтрат стабилизируют маннитом из расчета 2% на 100 мл препарата.

Стабилизированный таким образом препарат расфасовывают во флаконы, закрывают резиновыми пробками с алюминиевыми колечками и подвергают дробной стерилизации текучим паром (в течение 3-х дней по 30 мин).

Методом хроматографии при помощи аминокислотного анализатора в приготовленном препарате обнаружены и идентифицированы все незаменимые аминокислоты, комплексы полипептидов, видоизмененные компоненты нуклеиновых и карбоновых кислот, обладающих высокой биологической активностью. Выявлены углеводы и макро- и микроэлементы, в состав которых входят кальций, фосфор, марганец, цинк, медь, никель, железо. Кроме того, препарат содержит витамины группы - А, В, В₂, В₁₂. Поэтому в препарате действующим началом являются не только биогенные стимуляторы (вещества "сопротивления"), образующиеся в процессе ограниченного аутолиза при его изготовлении, но и белковый комплекс с микро-, макроэлементами и витаминами.

Полученный препарат обладает следующими свойствами, необходимыми для достижения цели изобретения:
1. Длительной стабильностью при хранении в течение срока не менее 2-х лет (срок наблюдения) со 100%-ной биологической активностью против 6 месяцев для биостимульгина (прототип).

2. Способствует быстрому восстановлению нарушений в гуморальном и клеточном иммунитете, стимулирует механизмы общей неспецифической естественной резистентности организма; под влиянием утеролина в крови животных достоверно увеличивается содержание гемоглобина, эритроцитов и лейкоцитов, повышается уровень бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови, активизируется фагоцитарно-поглотительная и защитная функции РЗС (см. примеры конкретного исполнения табл. 1-2).

3. Обладает выраженной специфической направленностью действия на половые органы, при этом активизируются факторы локальной (местной защиты тканей матки, усиливаются антимикробные свойства их и сопротивляемость к микробному фактору, что препятствует развитию воспалительного процесса в гениталиях, а при его наличии - более быстрому разрешению.

4. Адекватно эффективен при использовании его для профилактики и терапии в сочетании с этиотропными средствами в акушерско-гинекологической патологии у коров, обуславливающими симптоматическое бесплодие (см. примеры конкретного исполнения и отчет производственного испытания препарата).

Количественное соотношение компонентов, при котором достигается цель изобретения, следующее:
Ткань матки - 20
Маннит (стабилизатор) - 2
Физиологический раствор (экстрагент) - Остальное
Пример 1. Изучение влияния утеролина нативного на факторы общей неспецифической резистентности организма животных.

Исследования проведены на базе АО "Родина" Улетовского района Читинской области.

В качестве модели в опыт было взято 30 клинически здоровых новорожденных телят черно-пестрой породы, которых разделили по принципу аналогов на три равные группы - две опытные и одну контрольную по 10 голов в каждой. До введения препаратов (для установления исходных фоновых данных), а затем на 5-й и 10-й день после введения препарата от всех телят взята кровь и подвергнута исследованию на гематологические и иммунологические показатели.

Первая группа телят была обработана утеролином нативным, вторая группа биостимульгином. Препараты вводили подкожно в дозе 0,1 мл на 1 кг массы тела животного. Указанная доза взята из расчета дозировки, установленной для биостимульгина (прототип).

Животным контрольной группы вводили физиологический раствор в той же дозе, что и препараты.

Pезультаты исследований представлены в табл. 1 и 2.

Из данных табл. 1 видно, что у телят контрольной группы на 11-е сутки показатели крови существенно не отличались от таковых до начала применения препаратов в опытных группах.

В 1-й опытной группе, где применяли утеролин нативный, на 11-е сутки концентрация гемоглобина по сравнению с фоновыми показателями и контролем возросла на 14,55%, количество эритроцитов на - 17,38%, лейкоцитов на - 11,44% и лимфоцитов на - 17,85%.

Число юных палочкоядерных, сегментоядерных нейтрофилов и эозинофилов уменьшилось соответственно на 26,07%, 28,8%, 8,22% и 10,0% при P < 0,0001.

Количество базофилов и моноцитов не изменилось.

Во 2-й опытной группе, где использовали биостимульгин, гематологические показатели на 11-е сутки увеличились незначительно: гемоглобин - на 1,36%, что на 13,19% ниже, чем у телят 1-й опытной группы, эритроциты - на 2,62%, или на 15,78% меньше, чем в 1-й опытной группе, и лейкоциты на 0,68%, или на 10,76% ниже, чем у телят 1-й опытной группы. Количество лимфоцитов осталось на прежнем уровне.

Число юных палочкоядерных, сегметноядерных нейтрофилов и эозинофилов уменьшилось соответственно на 4,48%, 0,4%, 0,18% и 0,5% по отношению к исходным (фоновым) данным и контролю (при P < 0,05).

Телята 1-й опытной группы, обработанные утеролином нативным, имели более высокие показатели естественной резистентности, чем контрольные и телята 2-й опытной группы (табл. 2).

Суммарное количество иммуноглобулинов в сыворотке телят составило: в 1-й опытной группе 39,8 ≤ 0,7 г/л против 24,4 ± 0,21 г/л во 2-й группе, обработанных биостимульгином. Наименьшее содержание иммуноглобулинов отмечалось в сыворотке телят контрольной группы - 22,7 ± 0,11 г/л.

У телят 1-й группы после применения утеролина нативного на 11-е сутки содержание общего белка в крови по отношению к контролю на 23,7 г/л и на 22,6 г/л, чем у телят 2-й опытной группы.

Бактерицидная активность сыворотки крови на 11-е сутки повысилась до 62,3%, что на 41,4% выше, чем у телят контрольной группы.

Во 2-й опытной группе животных, где использован биостимульгин, этот показатель был на 23,9% активности ниже, чем у животных 1-й опытной группы.

Утеролин нативный также способствовал достоверному повышению клеточных факторов иммунной защиты организма, которые проявлялись в активизации фагоцитарной активности нейтрофилов. Так, у телят 1-й опытной группы после применения препарата факоцитарная активность нейтрофилов была наиболее высокой - 67,6%, что на 17,9% активности больше, чем у телят контрольной группы (P < 0,001). У телят 2-й опытной группы фагоцитарная активность составила 50,1%, что на 17,5% меньше, чем в 1-й опытной группе животных (P < 0,05).

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что предлагаемый тканевой препарат - утеролин нативный - достоверно активизирует как гуморальные, так и клеточные факторы неспецифической резистентности организма животных.

Иммуномодулирующeе и стимулирующее действие утеролина нативного на клеточные и гуморальные механизмы защиты в организме телят достигаeт максимума через 10 дней после применения препарата.

Пример 2. Влияние утеролина нативного на факторы местной защиты половых органов у коров.

Известно, что в половых органах коров имеются ряд необходимых специфических и неспецифических факторов локального иммунитета. Основным же фактором локальной защиты являются поли- и мононуклиарные фагоциты и иммунореактивный фермент лизоцим. Поэтому эти два показателя и были взяты в качестве критерия оценки влияния утеролина нативного в сравнении с биостимульгином на факторы локальной защиты половых органов у коров.

На базе совхоза "Застепенский" Читинского района были проведены два опыта.

В первом опыте изучали фоновые показатели локальной защиты половых органов (матки) у коров с нормальным течением родового и послеродового периода и при его патологических осложнениях (задержание последа, гипотония и атония матки). С этой целью в период массовых отелов подобрали две равные группы коров-аналогов по 10 коров в каждой: 1-я группа коров с нормальным течением родов и послеродового периода, 2-я группа коров с патологическими осложнениями (задержание последа, гипотония и атония матки).

На 2-4-й день после родов от животных обеих групп взята маточная слизь (лохии) для изучения фагоцитарной и лизоцимной активности.

Результаты определения фагоцитарной активности нейтрофилов и иммунореактивного фермента лизоцима маточной слизи, лохий у коров с нормальным течением послеродового периода и при патологических осложнениях его отражены в табл. 3.

Из данных табл. 3 видно, что показатели фагоцитарной активности нейтрофилов маточной слизи, лохий у коров с нормальным течением послеродового периода значительно выше, чем у коров с наличием послеродовых осложнений. При этом фагоцитарный индекс нейтрофилов в 1-й группе коров в 2,84 раза выше, чем у коров 2-й группы, а процент фагоцитоза на 22,3%.

Содержимое иммунореактивного фермента лизоцима у коров 1-й группы было больше на 32,5 мкг/мл и составляло 78,7 ± 11,0 мкг/мл против 46,2 ± 6,0 мкг/мл во 2-й группе коров при P < 0,002.

Во втором опыте изучено влияние утеролина нативного в сравнительном аспекте с биостимульгином на показатели локальной защиты половых органов (матки) у коров. Для этого было сформировано две группы глубокостельных коров-аналогов по 15 голов в каждой.

За 30-20 и 10 дней до родов животных обеих групп обработали испытуемыми тканевыми препаратами по следующей схеме:
коров 1-й группы - утеролином нативным;
коров 2-й группы - биостимульгином.

Препараты вводили подкожно в дозе 0,1 мл на 1 кг массы тела животного. За животными вели регулярное наблюдение, а в период родов учитывали характер течения родового акта и послеродового периода, наличие послеродовых осложнений.

На 2-3-й день после родов от животных обеих групп брали маточную слизь или лохии для исследования показаний местной защиты половых органов (фагоцитарная активность нейтрофилов, лизоцимная активность иммунореактивного фермента).

Результаты этих исследований приведены в табл. 4.

Из данных табл. 4 видно, что после применения утеролина нативного все показатели местной защиты матки в послеродовом периоде у коров 1-й группы находились на достаточно высоком уровне и достоверно отличались от таковых у животных 2-й группы. При этом фагоцитарный индекс был выше в 3,2 раза, процент фагоцитаза нейтрофилов маточной слизи увеличился на 28,2%, а активность иммунореактивного фермента лизоцима на 41,1%, что обеспечило высокую резистентность тканей матки и их сопротивляемость к микробному фактору. У всех коров 1-й группы послеродовый период протекал нормально. У 5 коров 2-й группы с низкими показателями факторов местной защиты на 5-6-e сутки после родов диагностированы острые послеродовые метриты.

Следовательно, предлагаемый новый тканевой препарат - утеролин нативный - в отличиe от биостимульгина обладает высоким биологическим действием на факторы местной защиты половых органов.

Пример 3. Научно-производственный опыт по применению утеролина нативного для профилактики послеродовой акушерско-гинекологической патологии у коров.

Для опыта на молочном комплексе совхоза "Макавеевский" Читинского района было подобрано 190 клинических здоровых коров черно-пестрой породы, находящихся в запуске (сухостойный период), которых разделили по принципу аналогов на две равные группы - опытную и контрольную.

В каждой группе были сформированы модельные подгруппы животных по 10 голов для изучения клинико-физиологического статуса организма, морфологического профиля крови, бактерицидной активности сыворотки крови, лизоцимной активности молозива и его цитологического состава.

Коровам опытной группы назначали утеролин нативный, животным контрольной группы - биостимульгин. Тканевые препараты применяли по следующей схеме: за 30-20 и 10 дней до родов. Оба препарата вводили подкожно в дозе 0,1 мл на 1 кг массы тела животного.

В течение 3-5 месяцев за животными опытной и контрольной групп и полученного от них приплода вели регулярное клиническое наблюдение.

Морфологические показатели крови и бактерицидную активность ее сыворотки от коров модельных групп исследовали до применения препаратов и через 5-10 дней после их введения, а от растелившихся коров в первые 3-5 дней после родов. Дополнительно изучили лизоцимную активность молозива и его цитологический состав.

Полученные данные в процессе проведенного опыта показали, что утеролин нативный оказывает выраженное положительное влияние на иммунобиологическую реактивность (показатели неспецифической резистентности) организма и клинико-физиологический статус коров-матерей, а также полученный от них приплод.

У коров опытной группы после введения утеролина нативного достоверно увеличилось содержание в крови гемоглобина на 9,7 г/л, эритроцитов на 3,4 млн/мл³ и лейкоцитов на 4,6 тыс/мл³.

Лейкоцитарная формула смещается влево, что свидетельствует о повышении защитных реакций организма.

Показатели бактерицидной активности сыворотки крови у коров опытной группы в предродовом периоде и в течение первых 5-7 дней после родов были выше, чем в контрольной группе на 26,7 ± 1,4% и составили 58,8 ± 2,6% против 32,1 ± 3,3% активности в контрольной группе.

Лизоцимная активность молозива в первые сутки после родов у коров опытной группы также значительно выше, чем в контрольной группе, при этом разница величины диаметра зоны задержки роста тест-микроба (Micrococcus lysaedeiticus) была равна 27 млн.

Цитологическая картина молозива представлена следующими показателями: у коров опытной группы число лимфоцитов с 38,7 ± 0,08% в день родов к 5-7-му дню после родов уменьшилось до 31,0 ± 0,02%. Количество эозинофилов и моноцитов - соответственно с 3,46 ± 0,2% до 0,33 ± 0,3% и с 25,0 ± 0,4 до 14,62 ± 0,08%
Содержание сегментоядерных нейтрофилов в день родов составило 34,0 ± 0,03%, а на 7-й день после родов снизилось до 21,3 ± 0,04%; у животных контрольной группы (обработанных биостимульгином) в эти же сроки исследования количество эозинофилов, нейтрофилов и лимфоцитов достоверно больше, а моноцитов - меньше.

Эозинофильный и нейтрофильный лейкоцитоз, а также лимфоцитоз у животных контрольной группы свидетельствуют о значительном поступлении клеток РЭС из крови в ткани молочной железы, что является защитным фактором угнетения неспецифической резистентности этого органа и возможного развития патологического процесса.

Нормальное течение родов отмечено у 90% коров опытной группы, а в контроле 78,8%. Затяжные роды (слабые схватки и потуги, преждевременное отхождение околоплодных вод) в опытной группе наблюдались на 11,2% меньше, чем в контрольной.

Задержание последа в опытной группе было только у 4 коров, а в контрольной у 17. Следовательно, применение утеролина нативного животным в период сухостоя позволило снизить данную патологию в 4,2 раза. В опытной группе коров в 8,4 раза было меньше животных с послеродовой субинволюцией и в 5,3 раза воспалительных процессов в гениталиях (послеродовые метриты).

Острые послеродовые маститы были диагностированы у 7 опытных коров и у 22 контрольных, или на 31,4% больше, чем в опытной группе.

Живая масса новорожденных телят опытной группы превосходила таковую телят контрольной группы на 1,86 кг, или на 6,9%.

Мертворожденных телят в опытной группе коров не было, а в контрольной - 3 теленка.

Физиологически здоровые телята в опытной группе составили 81%, а в контрольной - 56,3%. Слабые телята в опытной группе составили 11,5%, а в контрольной - 39,8%, при этом заболеваемость телят неонатальными болезнями (желудочно-кишечными, респираторными) и их падеж в первые 10-20 дней жизни в опытной группе диагностированы в 4,6 раза меньше, чем в контрольной.

Назначение стельным коровам в период сухостоя и в первые дни после родов утеролина нативного оказало благотворное воздействие на их последующую воспроизводительную способность. Так, продолжительность бесплодия у каждой коровы в опытной группе по сравнению с контрольной сократилась на 14,2 дня, а оплодотворяемость в первую стадию возбуждения полового цикла на 6,4%.

Таким образом, проведенный научно-производственный опыт и полученные результаты дают основание сделать заключение о перспективности применения предлагаемого препарата утеролина нативного с целью профилактики послеродовой акушерско-гинекологической патологии у коров, повышения их воспроизводительной функции в послеродовый период и предупреждения неонатальных болезней новорожденных телят.

Утеролин нативный обладает выраженным направленным действием, так как органы и ткани, из которых он готовится, имеют непосредственное отношение к воспроизводительным функциям, антнатальному (внутриутробному) и раннему постнатальному развитию плода, обмену веществ и регуляторным механизмам.

По механизму действия утеролин нативный является естественным стимулятором и регулятором защитных сил организма и тех органов, из которых он изготавливaется.

С экологической точки - это биологически чистый, абсолютно безвредный нативный препарат, он не оказывает побочного действия на организм животных, не обладает аллергическими и анафилактогенными свойствами, гистоминоподобным эффектом и коммуляцией.

Экономическая эффективность утеролина нативного показана в примерах конкретного выполнения и отчете о производственном испытании опытных партий утеролина нативного.

Изобретение относится к препаратам для профилактики и лечения акушерско-гинекологических заболеваний, обуславливающих симптоматическое бесплодие у коров. Препарат получают следующим образом. Матку коров помещают в посуду, затем в холодильник для консервации, затем измельчают, заливают физиологическим раствором в соотношении 1: 5, фильтруют и стабилизируют маннитом 2 % на 100 мл препарата. Препарат обеспечивает сокращение сроков бесплодия у коров и повышение их оплодотворяемости в первую стадию возбуждения полового цикла на 6,4 %. 4 табл.

Препарат для профилактики и терапии симптоматического бесплодия коров, включающий экстракт тканей матки коров и содержащий биологически активные вещества, отличающийся тем, что, с целью повышения активности и лечебно-профилактической эффективности, в качестве экстракта тканей матки препарат содержит экстракт тканей матки коров, переболевших неспецифическими послеродовыми метритами, и дополнительно маннит и физиологический раствор при следующем количественном соотношении компонентов:
Экстракт тканей матки - 20,0
Маннит - 2,0
Физиологический раствор - Остальное