СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИФИДУМБАКТЕРИНА Российский патент 2000 года по МПК A61K35/74 A23C9/12 C12N1/20 

Изобретение относится к области медицинской микробиологии и может быть использовано в медицине и ветеринарии.

Известен способ получения бифидумбактерина, согласно которого в суспензию бактерий B. bifidum 1 в питательной среде после добавления защитной среды высушивания (сахарозожелатиномолочная) вводят аскорбиновую кислоту 2-3 мг/мл суспензии или цистеина 0,2-0,3 мг/мл суспензии с последующей корректировкой pH до 6,8-7,3 ед. раствором бикарбоната (а.с. СССР N1364341, бюл. N1 от 07.01.88 г.).

Следующим аналогом является изобретение средства для лечения и профилактики дисбактериоза. Сущность данного изобретения состоит в том, что средство, включающее лиофилизированную биомассу бифидобактерий, дополнительно содержит лизоцим в количестве 5-20 мг в одной дозе при содержании бифидобактерий 10⁶ - 10⁸КОЕ (патент RU N 2071339, бюл. N1 от 01.01.97 г.).

Наиболее близким техническим решением, выбранным в качестве прототипа, является способ производства бифидумбактерина сухого.

Препарат изготовляют следующим образом. Вначале выращивают маточную культуру бифидобактерий, которую используют для выращивания основной микробной массы. Для этого микробную массу засевают на модифицированную среду Блаурокка из расчета 5-10% от объема питательной среды. Культивирование проводят при температуре (38±1)^oC в течение 36-40 ч, затем в охлажденную биомассу добавляют среду высушивания (сахарозожелатиномолочную) из расчета, чтобы в конечной суспензии было 5-10% сахарозы, 1-1,5% желатина и от 12 до 25% обезжиренного молока. Суспензию разливают в пенициллиновые флаконы, замораживают и высушивают в сублимационных сушилках. Флаконы с высушенным препаратом закрывают герметично в асептических условиях (Регламент производства бифидумбактерина N557-96).

Недостатком этого способа является наличие в среде высушивания казеина, который плохо усваивается бифидобактериями, и, следовательно, создает неблагоприятные условия для их развития. Являясь пробиотиком, препарат не имеет веществ немикробного происхождения, стимулирующих рост и развитие нормальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта. Кроме того, препарат отличается высокой себестоимостью за счет использования в составе защитной среды обезжиренного молока и сахарозы.

Изобретение направлено на создание препарата с более высоким бифидогенным эффектом и более низкой себестоимостью без ухудшения его физико-химических и морфологических свойств.

Сущность изобретения заключается в обогащении защитной среды высушивания препарата пребиотиками путем замены обезжиренного молока на сыворотку с бифидогенным концентратом.

Являясь недорогим продуктом молочная сыворотка по своему составу представляет собой многокомпонентную систему, что значительно повышает пищевую и биологическую ценность продуктов, содержащих ее, со значительным снижением их себестоимости. В молочной сыворотке содержится от 0,8 до 1,0% белков, причем это сывороточные белки, которые отличаются высокой биологической ценностью, обусловленной наличием необходимых для жизнедеятельности живого организма экзогенно-незаменимых аминокислот. Продукты, обогащенные сывороточными белками, обладают диетическим эффектом. При их употреблении создаются благоприятные условия для имплантации кишечной микрофлоры типа Bifidum, что обусловлено повышенной концентрацией лактальбумина. Использование концентратов сывороточных белков позволяет существенно снизить содержание казеина, который не могут усваивать бифидобактерии.

Бифидогенный концентрат получают из творожной сыворотки. Технологический процесс получения концентрата предусматривает следующие операции: сбор и резервирование сыворотки, очистку от жира и казеиновой пыли, пастеризацию и охлаждение, изомеризацию и мутаротацию лактозы, нейтрализацию, сгущение и высушивание.

Бифидогенный концентрат представляет собой сухой мелкопористый порошок от светло-желтого до коричневого цвета, содержащий 95% (не менее) сухих веществ, в том числе 10% (не менее) лактулозы. Кислотность продукта, восстановленного до массовой доли сухих веществ 6,5%, не более 20^oТ - для подсырной сыворотки и не более 75^oТ для творожной сыворотки.

В результате мутаротации и изомеризации лактозы концентрат содержит в своем составе лактозу, лактулозу, а также галактозу. При этом часть лактозы находится в дефицитной бета-форме. Обладая бифидогенным эффектом эти углеводы стимулируют развитие полезной микрофлоры живого организма, которая приводит к снижению pH жидкости кишечника в результате образования молочной кислоты, что, в свою очередь, ингибирует рост патогенной микрофлоры.

Из-за дефицита необходимых ферментов лактулоза не расщепляется в верхних отделах желудочно-кишечного тракта и, достигая прямой кишки, используется бифидобактериями, рост которых резко увеличивается.

Смесь молочной сыворотки с бифидогенным концентратом готовят путем смешивания их в соотношении (34-35):1, что позволит заменить оптимальное количество сахарозы, исключая тем самым увеличение концентрации углеводов (в частности моносахаров) в защитной среде выше того уровня, который вызывает обезвоживание (плазмолиз) бактериальных клеток.

Благодаря наличию в концентрате моносахаров представляется возможность частичного сокращения сахарозы, что позволяет повысить устойчивость бифидобактерий бактерий к неблагоприятным воздействиям, в частности к сушке, не изменяя защитных свойств среды высушивания. Поэтому бактериальную массу смешивают с защитной средой в определенном соотношении и получают суспензию клеток бифидобактерий, готовую к высушиванию сублимацией.

Препарат бифидумбактерин изготавливают следующим образом. Вначале выращивают маточную культуру бифидобактерий, которую используют для выращивания основной микробной массы, которую по окончании культивирования охлаждают, соединяют с защитной средой из расчета, чтобы в конечной суспензии было 5-8% сахарозы, 1-1,5% желатина и 12-25% смеси молочной сыворотки и бифидогенного концентрата. Причем соотношение в смеси молочной сыворотки и бифидогенного концентрата составляет (34-35): 1, кислотность не более 20^oТ. После этого проводят коррекцию pH полученной смеси. Суспензию разливают в пенициллиновые флаконы, высушивают. Флаконы с высушенным препаратом закрывают герметично в атмосфере воздуха стерильными резиновыми пробками и обкатывают металлическими колпачками. Весь технологический процесс осуществляют в асептических условиях с поэтапным контролем за отсутствием посторонней микрофлоры и количества живых бифидобактерий.

Пример 1. К 1 л суспензии бактерий B.bifidum 1 в питательной среде добавляют 200 мл смеси сыворотки с бифидогенным концентратом, 207 мл сахарозожелатиновой среды (1-1,5% желатина, 5-8% сахарозы). pH полученной суспензии устанавливают 7,0-7,2. После розлива суспензии во флаконы (ампулы) проводят лиофильное высушивание препарата по известной технологии.

Готовый препарат представляет собой сухую микробную массу живых, антагонистически активных бифидобактерий (BifidOmbacterium bifidum 1), лиофилизированную в среде культивирования с добавлением в среду высушивания молочной сыворотки с бифидогенным концентратом.

Препарат представляет собой кристаллическую или пористую массу разных оттенков бежевого или серого цвета.

Одна доза препарата содержит от 10⁷ КОЕ/мл бифидобактерий, хорошо растворим в воде, водных растворах и молоке.

При рассмотрении экономической целесообразности использования предложенной модификации защитной среды определена возможность снижения себестоимости препарата за счет дешевого сырья при сохранении физико-химических и морфологических свойств, ферментативной и специфической активности штамма.

Препарат является синбиотиком, содержащим жизнеспособные клетки бифидофлоры и их стимуляторы, которые представлены основными компонентами бифидогенного концентрата.

Изобретение относится к области медицинской микробиологии и может быть использовано в медицине и ветеринарии. Способ включает выращивание бактерий Bifidobacterium bifidum 1, введение в биомассу сахарозожелатиномолочной защитной среды. Защитная среда в качестве молочной основы содержит смесь молочной сыворотки и бифидогенного концентрата в соотношении (34 - 35) : 1. Полученную суспензию лиофильно высушивают. Способ позволяет получить препарат с более высоким бифидогенным эффектом и более низкой себестоимостью.

Способ получения бифидумбактерина, включающий выращивание микробной массы бактерий Bifidobacterium bifidum 1 на питательной среде, смешивание ее с сахарозожелатиномолочной защитной средой и лиофильное высушивание полученной суспензии, отличающийся тем, что микробную массу смешивают с защитной средой, содержащей в качестве молочной основы смесь молочной сыворотки и бифидогенного концентрата в соотношении (34 - 35) : 1.