Изобретение относится к пищевой промышленности и медицине и может быть использовано как лечебное и профилактическое средство в комплексной терапии желудочно-кишечных заболеваний, заболеваний нервной системы, онкологических заболеваний, иммунодепрессивных состояний, пищевой аллергии, а также для производства продукта лечебно-диетического питания Бифилакт ТУ 9222-001-34960875-97, который также используется в комплексной терапии вышеуказанных состояний и в диетическом питании взрослых и детей. Широкое распространение медикаментозного лечения, стрессовых состояний, нарушений режимов питания, экологически неблагоприятных факторов влечет за собой серьезную проблему очистки организма, устранения побочных действий медикаментов, восстановления нормальной микрофлоры, иммунокоррекции организма.
Известен способ получения бифидумбактерина (фармакопейная статья 42-132 ВС-94, М3 и медицинской промышленности РФ, утверждена 19.07.1994 г.). При этом для получения препарата используют антагонистически активные штаммы Bifidum bacterium bifidum N 1,791 или ЛВА-З.
Для выращивания бактерий используют синтетические питательные среды Блаурокка, питательный агар с глюкозой, рыбопептонный агар, среду на основе гидролизата крови. При этом на одной из указанных сред выращивают штаммы бактерий, которые затем тестируют на биохимические свойства, способность к кислотообразованию, антагонистическую активность, безвредность, количество бактерий в 1 мл. При условии их соответствия требованиям, бактерии помещают в стабилизирующую среду высушивания и лиофилизируют. Полученный препарат представляет собой светло-желтый порошок сухих бактерий с ингредиентами стабилизирующей среды высушивания (сахароза, желатин, молоко обезжиренное) и используется в качестве профилактического и лечебного средства при желудочно-кишечных заболеваниях в разведенном водой состоянии.
К недостаткам способа относится:
- применение искусственных питательных сред, включающих синтетические компоненты с побочными эффектами (пептон, хлорид натрия, натрий фосфорнокислый двузамещенный, железо сернокислое, агар микробиологический и др.)
- низкий терапевтический эффект в связи с тем, что бактерии находятся в биологически и биохимически неактивной форме, обладают низкой колонизирующей способностью, введение препарата бактерий в организм происходит не в среде естественного обитания бактерий, что снижает их активность.
Известен способ получения лактобактерина (Фармакопейная статья 42-252ВС-89, утверждена 12.02.1989 г. МЗ СССР).
Для получения лактобактерина сухого используют антагонистически активные штаммы L. fermentum 90Т-С4 или L. plantarum BP-A3.
Бактерии выращивают также на синтетических средах МРС-1, МРС-4, включающих в себя сернокислый магний, цистеин солянокислый, калий фосфорнокислый двузамещенный, твин-80, пептон и др. Технология получения конечного продукта аналогична вышеописанной. В качестве стабилизирующих сред в продукт вводят желатин пищевой, сахарозу, молоко нежирное. После высушивания полученный продукт является сухим порошком светло-желтого цвета, который также используют после разведения в воде как профилактическое и лечебное средство при желудочно-кишечных заболеваниях.
Недостатками данного аналога являются недостатки, характерные для вышеописанного аналога.
За прототип нами принят способ получения бактериальных композиций для получения препарата лечебно-диетического питания Бифилакта (Инструкция по приготовлению кисломолочного Бифилакта на молочных кухнях, М, 1987 г. Утверждено Главным Управлением лечпрофпомощи детям и матерям МЗ СССР 27.03.87 г., N 11-14/6-33, в дальнейшем в тексте - Бифилакт).
Для приготовления бактериальных композиций при изготовлении Бифилакта применяют сухой бифидумбактерин или жидкую закваску из одного из штаммов бифидобактерий, сухой лактобактерин или жидкую закваску, гидролизатно-молочную среду, молочно-дрожжевую среду.
Закваски бифидобактерий и лактобактерий получают следующим образом. Для этого флакон с лиофилизированным штаммом бифидобактерий культивируют в 75 мл гидролизатно-молочной среды или печеночной среды Блаурокка в течение 24 часов. Закваску из лактобактерий получают из сухого лактобактерина, который засевают в молочно-дрожжевую среду, инкубируют 20-22 часа.
Питательную среду Блаурокка для выращивания бифидобактерий готовят путем совмещения печеночного отвара, пептона сухого, хлорида натрия, L-цистеина, агара микробиологического, последующего кипячения, автоклавирования.
Питательную гидролизатно-молочную среду готовят на основе гидролизата обезжиренного молока. Для этого обезжиренное молоко доводят до кипения, кипятят в течение 2 минут, остужают до 45oC, устанавливают pH 8,0-10,0 20% раствором NaOH, добавляют панкреатин, в течение 4 часов помешивают в термостате, постоянно корректируют pH. Добавляют хлороформ и оставляют в термостате до утра. Через сутки доводят pH 30% раствором уксусной кислоты до 4,5; кипятят, отфильтровывают, определяют содержание аминного азота и хлоридов. Остывший гидролизат разводят водой в соотношении 1:1, отливают и добавляют агар-агар, а к оставшейся части - NaCl и пептон. Нагревают, соединяют с расплавленным агаром. Доводят до определенной pH, кипятят, фильтруют, добавляют лактозу и цистеин солянокислый, стерилизуют автоклавированием.
Среду для лактобактерий готовят на основе гидролизата молока способом, описанным выше, к нему добавляют дрожжевой автолизат и глюкозу.
Композицию бактерий для приготовления Бифилакта получают смешивая лактобактерий и бифидобактерий в соотношении 2:1 соответственно.
Недостатки прототипа:
-трудоемкость осуществления способа в связи с большим количеством технологических операций;
- несоблюдение экологической чистоты в связи с применением синтетических добавок при выращивании бактерий;
- высокая себестоимость получаемой композиции в связи со сложностью технологии и большим количеством используемых ингредиентов;
- ненадежность качественных показателей получаемого продукта в связи с отсутствием контроля за созреванием биомассы;
- низкая активность получаемой биомассы
Целью изобретения является повышение качества микробных композиций.
Задачи:
- повышение биохимической активности биомассы;
- получение морфологически зрелой биомассы;
- исключение из технологии производства синтетических добавок и консервантов;
- снижение себестоимости и трудоемкости.
Сущностью изобретения является получение композиции для производства препарата лечебного и диетического питания путем использования Бифилакта в качестве осадителя белков молока для получения сред выращивания бактерий при условии введения его в обезжиренное молоко, последующей фильтрации, раздельного выращивания в фильтрате с глюкозой в концентрации 0,2-0,4% лакто- и бифидобактерий, смешивания их в соотношении 2:1 (до концентрации в молоке 1,0-1,2% лактобактерий и 0,5-0,6% бифидобактерий при получении продукта - Бифилакт ТУ 9222-001-34960875-97) для получения микробной композиции.
Полученной композиции авторы присваивают название "Энтерогс".
Способ получения композиции Энтерогс осуществляют следующим образом:
А) Предварительно готовят питательную среду для выращивания лакто- и бифидобактерий, для этого:
1. готовят осадитель белков молока Бифилакт по прототипу, для этого необходимо:
- молоко коровье заготавливают по ГОСТ 13277-79 не ниже 1 сорта, выдерживающее алкогольную пробу с этиловым спиртом 72% концентрации;
- сухой бифидумбактерин или жидкую закваску из одного из штаммов бифидобактерий;
- сухой лактобактерин или жидкую закваску из одного из штаммов лактобацилл;
- гидролизатно-молочная среда;
- молочно-дрожжевую среда.
Флакон или ампулу с лиофилизированным штаммом бифидумбактерина стерильно вскрывают и наливают 3-5 мл гидролизатно-молочной среды или печеночной среды Блаурокка.
Содержимое ампулы или флакона энергично встряхивают до получения равномерной суспензии и наливают во флакон, содержащий 70 мл гидролизатно-молочной среды (или печеночной среды) выдерживают в термостате при 37-38oC в течение 24 часов.
Для приготовления закваски из лактобактерий используют ампулу с лактобактерином, обычно содержащего 3 дозы, растворяют стерильным физиологическим раствором из расчета 1 мл на 1 дозу препарата, засевают в молочно- дрожжевую среду (гидролизат молока +5% дрожжевого автолизата +0,2% глюкозы) из расчета 1:10 лактобацилл на 10 л среды при температуре 37-38oC.
В молоко, простерилизованное при 0,5 атм (110-112oC) в течение 30 мин или прокипяченное в течение 1 часа и охлажденное до 37-38oC, вносят закваску из В. Bifidum 791 в количестве 1-1,5% одновременно с закваской из лактобацилл в объеме 2-5% к объему продукта. Заквашенное молоко тщательно перемешивают, разливают в стерильные бутылочки, укупоривают и помещают в термостат при 37-38oC. Выдерживают от 10-16 часов до появления сгустка. Получают Бифилакт.
Бифилакт вносят в доведенное до 95oC обезжиренное молоко в количестве 750 мл на 2 л молока в качестве осадителя белков.
Створоженные белки молока удаляют фильтрацией, а оставшийся фильтрат повторно пастеризуют, вносят раствор глюкозы до конечной концентрации 0,2-0,4%. Полученную среду остужают до температуры 35-37oC. В полученной среде раздельно выращивают бифидум- и лактобактерии. В 250 мл полученной среды вносят ампулу бифидумбактерина для выращивания B.bifidum 791. Для выращивания L.plantarum 8 РАЗ в 250 мл полученной среды вносят ампулу лактобактерина. Помещают среды с бактериями на культивирование при 37oC. Через 18 - 20 часов культивирования контролируют рост культур микроскопически. Для этого 0,2 мл бактериальной суспензии помещают на стекло, делают мазок, мазок окрашивают по Грамму. Через 18-20 часов культивирования в культуре B.bifidum 791 наблюдают кокковые формы B.bifidum 791, а в культуре L.plantarum 8 РАЗ - наблюдают палочковые и кокковые формы L.plantarum 791 в равном соотношении. Культуру L. plantarum 8 PA3 оставляют дозревать еще 6 часов, а культуру В. bifidum 791 - 22 часа. За это время при очередном морфологическом контроле в культуре L.plantarum 8 РАЗ все лактобактерии культуры преимущественно палочковидной формы, бактерии в культуре B.bifidum 791 также имеют вид, в основном, полярно окрашенных полиморфных палочек. Культуры считают морфологически зрелыми и используют для приготовления композиции Энтерогс путем их смешивания (в соотношении: 1 часть культуры бифидумбактерий и 2 части культуры лактобактерий; конечная концентрация в молоке культуры бифидумбактерий 0,5-0,6%, а культуры лактобактерии - 1,0-1,2%), далее композицию Энтерогс используют или для терапевтических целей или для приготовления продукта лечебно-диетического питания Бифилакт-ТУ 9222-001- 34960875-97.
Для доказательства поставленных задач с использованием предлагаемой композиции Энтерогс нами был получен препарат лечебно-диетического питания Бифилакт ТУ 9222-001- 34960875-97.
Для его приготовления применяют:
а) молоко коровье обезжиренное по ГОСТ 13277 не ниже 1 сорта, выдерживающее алкогольную пробу с этиловым спиртом 72% концентрации;
б) композицию Энтерогс, полученную из лакто- и бифидобактерий.
В обезжиренное молоко пастеризованное при 0,5 атм (110-112oC) в течение 30 мин. и охлажденное до 37-38oC вносят композицию Энтерогс (концентрация культуры B. bifidum 791 - 0,5-0,6%, концентрация культуры лактобактерий - 1,0-1,2%). После выдерживания заквашенного молока при 37-38oC получают препарат Бифилакт-ТУ 9222-001-34960875-97.
Бифилакт ТУ 9222-001-34960875-97 можно использовать в качестве осадителя белков вместо Бифилакта при приготовлении сред выращивания лакто- и бифидумбактерий при приготовлении композиции Энтерогс. Полученный препарат Бифилакт ТУ 9222-001-34960875 имеет следующие показатели по сравнению с Бифилактом по прототипу (см. табл.1).
В процессе приготовления партий препарата лечебно-диетического питания Бифилакт ТУ 9222-001-34960875-97 нами разработаны оптимальные концентрации глюкозы в среде выращивания бифидум- и лактобактерий и оптимальные соотношения суспензий выращенных бифидум - и лактобактерий для получения композиции Энтерогс (табл. 2 и 3).
Способ получения композиции Энтерогс для производства Бифилакта ТУ 9222-001-34960875-97 апробирован в производственных условиях АОЗТ ПК "Кубаньтехносервис" в течение 3 мес, на свыше 100 партиях.
Пример 1.
Получали Бифилакт вышеописанным способом в качестве осадителя белков молока. В 2л пастеризованного обезжиренного молока, нагретого до 95oC ввели 750 мл Бифилакта и через 2 минуты профильтровали створоженный белок, в фильтрат добавили раствор глюкозы до концентрации 0,2%. Получили питательную среду для выращивания лакто- и бифидобактерий (B.bifidum 791, L.plantarum 8 РАЗ). Питательную среду разделили и ввели в одну часть среды лиофилизированную культуру бифидобактерий, а в другую - лактобактерий. Вырастили культуры под морфологическим контролем до их полного созревания. Затем в обезжиренное молоко ввели лактобактерии до концентрации 1,0% и бифидобактерии - до концентрации 0,5% (композицию Энтерогс), соблюдая соотношение 2:1, при температуре 37oC, выдержали заквашенное молоко в течение 5 часов. Полученный Бифилакт ТУ 9222-001- 34960875-97 оценили по следующим качественным характеристикам:
Консистенция, внешний вид - равномерный сгусток, сыворотки 1/10 объема.
Вкус и запах - кисломолочный, без посторонних привкусов и запахов.
Цвет - молочно-белый по всей массе.
Кислотность - 60oТ.
Содержание живых микробных клеток в 1 мл продукта - 1015.
Пример 2.
Получили Бифилакт вышеописанным способом в качестве осадителя белков молока. Затем в 2 л пастеризованного обезжиренного молока, нагретого до 95oC ввели 750 мл Бифилакта и через 2 минуты профильтровали створоженный белок, в фильтрат добавили р-р глюкозы до концентрации 0,4%. Получили питательную среду для выращивания лакто- и бифидобактерий (B.bifidum, L.plantarum). Вырастили культуры под морфологическим контролем до их полного созревания. Затем в обезжиренное молоко ввели лактобактерий до концентрации 1,2% и бифидобактерий до концентрации 0,6 (композицию Энтерогс), соблюдая соотношение 2: 1, при температуре 37oC, выдержали заквашенное молоко в течение 5 часов. Полученный Бифилакт ТУ 9222-001-34960875-97 оценили по следующим качественным характеристикам:
Консистенция, внешний вид - равномерный сгусток, сыворотки 1/10 объема.
Вкус и запах - кисломолочный, без посторонних привкусов и запахов.
Цвет - молочно-белый по всей массе.
Кислотность - 60oТ.
Содержание живых микробных клеток в 1 мл продукта - 1015.
Предлагаемый способ приготовления композиции Энтерогс не предусматривает использование синтетических добавок в средах выращивания бактерий, в связи с этим композиция Энтерогс и получаемый на ее основе Бифилакт ТУ 9222-001-34960875-97 экологически чисты. Скорость созревания Бифилакта ТУ 9222-001- 34960875, получаемого на основе бактериальной композиции Энтерогс в 2-3 раза выше, чем Бифилакта по прототипу. Себестоимость композиции Энтерогс в 5-6 раз ниже стоимости заквасок, получаемых для производства препарата Бифилакт с использованием синтетических сред.
Изобретение относится к пищевой промышленности и медицине и может быть использовано как лечебное и профилактическое средство при желудочно-кишечных заболеваниях, заболеваниях нервной системы, в онкологии, при иммунодепрессивных состояниях, а также в диетическом питании взрослых и детей. Сущностью изобретения является однократное получение Бифилакта и использование его в качестве осадителя белков обезжиренного молока. Полученную суспензию фильтруют, в фильтрат вводят глюкозу до концентрации 0,2 - 0,4% и получают питательную среду, на которой раздельно выращивают лакто- и бифидобактерии. Вводят их в обезжиренное молоко до концентрации 1,0 - 1,2 и 0,5 -0,6% соответственно и после культивирования до морфологической зрелости смешиванием получают композицию заквасок Энтерогс, которую далее используют для получения препарата Бифилакт ТУ 9222-001-34960875-97, который впоследствии используют вместо Бифилакта, воспроизводя весь цикл выращивания бакерий. Полученная композиция является высококачественным средством для получения диетического и лечебного продукта для лечения дисбактериоза и целого ряда сопутствующих ему заболеваний желудочно-кишечного тракта, коррекции нарушений обмена веществ, иммунодепрессивных состояний, лечения заболеваний нервной системы и крови, для очистки организма после курсов лечения. 3 табл.
Способ получения композиции для производства препарата лечебного и диетического питания Бифилакт, предусматривающий приготовление питательной среды, раздельное выращивание культур бифидобактерий Bifidobacterium bifidum 791 и лактобактерий Lactobacillus plantarum 8 РАЗ и последующее смешивание полученных заквасок в соотношении 1 : 2, отличающийся тем, что раздельное выращивание культур бифидобактерий и лактобактерий ведут на питательной среде, полученной осаждением белков обезжиренного молока Бифилактом, фильтрацией их и введением в полученный фильтрат глюкозы до концентрации 0,2 - 0,4%, полученные закваски смешивают с получением композиции Энтерогс.
