Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, и может быть использовано в иммунотерапии для коррекции иммунного гомеостаза, нарушение которого связано с воздействием антигена.
Широко известны иммунологические методы лечения различных заболеваний путем использования лекарственных средств на основе антигена, который вызывает эти заболевания (см. например, "Клиническая иммунология" под ред. Л. Йегера, М.: Медицина, 1990 г., т. 1, с. 204-208; авт. св. СССР 1131508 кл. A 61 K 39/00, 1984 г.; авт. св. СССР 1169659, кл. A 61 K 39/00, 1985 г.; авт. св. СССР 1178450, кл. A 61 K 39/00, 1985 г.; патент РФ 2098186, кл. A 61 K 39/02, 1997 г.). Однако эти методы лечения достаточно длительны и малоэффективны, особенно для лечения иммунодефицитных заболеваний с невыясненной этиологией.
Наиболее близким к изобретению является способ коррекции нарушенного иммунного гомеостаза, включающий введение антигена, связанного с упомянутым нарушением (см. патент РФ 2092184, кл. A 61 K 39/00, 1997 г.).
Данный способ предусматривает использование в качестве антигенов - протективных антигенов в последовательно возрастающих дозах преимущественно в сочетании с иммуноадъювантами, что усложняет процесс иммунотерапии и не во всех случаях обеспечивает эффективный лечебный результат.
Известны лекарственные средства для коррекции нарушенного гомеостаза на основе обработанного антигенного носителя (см. авт. св. СССР 1123704, кл. A 61 K 39/00, 1984 г.; патент РФ 2092184, кл. A 61 K 39/00, 1997 г.).
Однако известные лекарственные средства на основе антигенного носителя обеспечивают требуемую интенсивность иммунного ответа лишь при значительной дозе, при этом многие из них эффективны лишь в сочетании с адъювантами.
Изобретение направлено на повышение эффективности иммунотерапии за счет нормализации регуляции нарушенных психосоматических функций и/или биологических реакций при минимальных количествах лекарственного средства и исходного антигена.
Решение поставленной задачи обеспечивается тем, что в способе коррекции нарушенного иммунного гомеостаза, сопровождающегося изменением психосоматических функций и/или биологических реакций, включающем введение лекарственного средства на основе вещества, обладающего антигенными свойствами, согласно изобретению в качестве лекарственного средства используют потенцированную форму вещества - антигена, участвующего в регуляции упомянутых функций и/или реакций, полученную путем многократного разведения и встряхивания или растирания по гомеопатическому методу.
Кроме того, решение поставленной задачи обеспечивается тем, что в лекарственном средстве для коррекции нарушенного иммунного гомеостаза на основе обработанного антигенного носителя, согласно изобретению используют потенцированную форму исходного антигена, связанного с нарушением иммунного гомеостаза, полученную путем многократного разведения и встряхивания или растирания по гомеопатическому методу.
При этом в качестве исходного антигена для потенцированной формы используют вещество полипептидной структуры;
при этом в качестве исходного антигена используют вещества липополисахаридной структуры;
при этом в качестве исходного антигена используют вещества полинуклеопептидной структуры.
Для приготовления потенцированной формы из исходного вещества с антигенными свойствами, представляющего собой растворимую в нейтральном растворителе (дистиллированной воде, физиологическом растворе, спирте и т.п.), субстанцию (например, лиофилизированный белок, сухой липополисахарид и т.п.) производят равномерное уменьшение концентрации путем последовательного разведения 1 части упомянутой субстанции в 9 частях (для десятикратного разведения) или в 99 частях (для сотенного разведения) или в 999 частях (для тысячного разведения) нейтрального растворителя с многократным вертикальным встряхиванием ("динамизацией") каждого полученного разведения и использованием отдельных емкостей для каждого последующего разведения до получения требуемой потенции - кратности разведения по гомеопатическому методу (см. например, В. Швабе "Гомеопатические лекарственные средства", М., 1967 г., с. 14-29) в принятых в гомеопатической практике лекарственных формах и разведениях, преимущественно сотенных (С1 - С10000).
Для приготовления потенцированной формы из исходного, ассоциированного с клетками антигена, первоначально из упомянутых клеток или клеточных ядер готовят гомогенат, из которого центрифугированием получают супернатант, который путем последовательного растворения и многократного промежуточного встряхивания по вышеприведенной гомеопатической методике в нейтральном носителе доводят до требуемого разведения, преимущественно сотенного.
Пример 1.
Потенцированное лекарственное средство получают из исходного антигена - основного белка миелина (ОБМ) (бычий) путем многократного последовательного растворения и встряхивания из промышленно произведенного препарата в сотенном разведении, преимущественно на физиологическом растворе.
Способ приема - внутрь, по 1-3 мл потенцированного раствора в разведении С50-С200.
Показания к применению: рассеянный склероз.
Основной фармакологический эффект связан:
со снижением пролиферативного ответа сенсибилизированных Т лимфоцитов на ОБМ.
Пролиферативный ответ оценивали в реакции бластгрансформации в суспензии мононуклеарных клеток периферической крови пациента в присутствии основного белка миелина. Оценка проводилась до введения и через 7 суток после введения потенцированного антигена. Пролиферативный ответ после введения потенцированного антигена составил 53% от исходного; со снижением уровня антител к ОБМ в сыворотке.
Уровень антител к ОБМ в сыворотке оценивали с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) на стандартных тест-системах Flow Laboratories (UK). Оценка проводилась до введения, через 7, 14, 21 и 28 суток после введения потенцированного антигена. Статистически достоверное снижение уровня антител отмечено через 14 суток. В дальнейшем уровень антител продолжал снижаться.
Пример 2.
Потенцированное лекарственное средство получают из исходного антигена - липополисахарида E.coli - промышленно произведенного препарата путем многократного последовательного разведения на фосфатно-солевом буфере и встряхивания в сотенном разведении, преимущественно С1-С1000.
Показания к применению: лечение септического процесса, вызванного Е. coli.
В процессе лабораторных исследований определяли влияние потенцированного липополисахарида E.coli на течение септического процесса у мышей, зараженных E.coli.
В контрольной группе мышей внутривенным введением суспензии бактерий Е. coli в дозе 1010 вызывали сепсис.
5 мышам мужского пола линии СВА в опытной группе через 12 часов после введения бактериальной суспензии дополнительно вводили 200 мкл потенцированного липополисахарида (ЛПС) из клеточной стенки E.coli на фосфатно-солевом буфере (ФСБ) в разведении С50.
5 мышам в контрольной группе вводили 200 мкл ФСБ.
Определяли срок выживания мышей.
Результаты исследований приведены в таблице 1.
Вывод:
Парентеральное введение потенцированного видоспецифичного липополисахарида устраняет септическое состояние, вызванное бактериями данного вида.
Пример 3.
Потенцированное лекарственное средство на основе нуклеиновой кислоты получают из исходного антигена - аутологичной ДНК путем выделения ядер мононуклеарных клеток периферической крови пациента, экстрагирования из них ДНК и последующего многократного разведения и встряхивания на физиологическом растворе в потенции С10-С200.
Показания к применению: лечение системной красной волчанки (СКВ).
В процессе клинических испытаний больной В., 20 лет, II степень активности течения СКВ, вводили по 2 мл потенцированной аутологичной ДНК в разведении С50 1 раз каждую неделю.
Титр антиядерных антител в сыворотке оценивали до введения, через 7, 14 и 28 суток после начала введения потенцированной ДНК с помощью общепринятой методики (иммунофлуоресценция на срезах печени крысы). Статистически достоверное снижение титра антиядерных антител отмечено на 14 и 28 сутки.
Таким образом, введение потенцированной аутологичной ДНК при СКВ привело к ремиссии симптомов заболевания и к снижению титра циркулирующих антиядерных антител.
Пример 4.
Потенцированное лекарственное средство получают из исходного вещества с антигенными свойствами - супернатанта гомогената клеток меланомы В16 путем многократного последовательного разведения и встряхивания на фосфатно-солевом буфере в сотенном разведении.
Лабораторные исследования действия потенцированных опухолевых белков на течение опухолевого процесса проводилось на модели меланомы у мышей. Мышам линии C57BL мужского пола подкожно в область задней конечности вводили суспензию клеток меланомы В16 (106). Параллельно получали потенцированные белки из супернатанта гомогената клеток меланомы В16.
После появления клинических симптомов меланомы (через 7 суток) 5 мышам опытной группы вводили подкожно в область холки 200 мкл потенцированных белков на фосфатно-солевом буфере (ФСБ) в разведении С 100. В контроле (5 мышей) вводили 200 мкл ФСБ.
Оценивали выраженность опухолевой прогрессии по степени диссеминации первичного опухолевого узла, по поражению регионарных лимфоузлов, по размеру и морфологии очагов. Также определяли срок выживаемости животных.
Результаты исследований приведены в таблице 2.
Вывод:
Парентеральное введение потенцированных опухолевых белков замедляет прогрессию злокачественной опухоли и увеличивает срок выживаемости.
Пример 5 (in vivo)
Влияние потенцированного антигена на индукцию реакции ГЗТ.
Принцип метода: Сенсибилизированные Т-эффекторные лимфоциты ГЗТ в районе введения разрешающей дозы антигена выделяют медиаторы, приводящие к местной инфильтрации ткани мононуклеарными клетками и НФ, набуханию стромы и локальному отеку. Если антиген инъецируют в стопу задней конечности, наблюдается увеличение ее массы и объема.
Мышей СВА сенсибилизировали путем подкожного введения в область холки метилированного бычьего сывороточного альбумина (МБСА) в различных модификациях:
1) 3 мышам вводили 100 мкл 0,1% МБСА и 100 мкл 0,25% раствора синего Эванса (адъювант) в фосфатно-солевом буфере(ФСБ).
2) 3 мышам вводили 100 мкл 0,1% МБСА и 100 мкл ФСБ.
3) 3 мышам вводили 200 мкл потенцированного МБСА в ФСБ в разведении С50.
4) 3 мышам вводили 200 мкл ФСБ (контроль).
На шестые сутки под мозольный бугорок IV пальца одной из задних конечностей вводили разрешающую дозу 0,125% МБСА 20 мкл. В контрольную лапу вводили 20 мкл ФСБ.
Оценка результатов.
Через 24 часа после разрешающей инъекции антигена оценивали выраженность местной реакции по разнице массы опытной (Ро) и контрольной лап (Рк). Обе лапки отрезали сразу после забоя животных по выступу кости ниже сочленения мало- и большеберцовой кости и выше пяточного сустава. Индекс реакции (ИР) вычисляли для каждой мыши по формуле: ИР = (Ро-Рк)•100/Рк. При ИР выше 5% отличие от контроля считается достоверным.
Результаты исследований представлены в таблице 3.
Вывод:
Введение антигена в потенцированной форме вызывает активацию клеточного звена иммунитета, сопоставимую с введением антигена с адъювантом.
Пример 6 (in vivo).
Влияние потенцированного антигена на гуморальный иммунный ответ.
Внутривенное введение животным антигена приводит к развитию первичного иммунного ответа в виде выработки иммуноглобулинов, содержание которых в сыворотке можно полуколичественно оценить с помощью твердофазного иммуноферментного анализа.
Кроликам породы шиншилла мужского пола, одинакового возраста и веса внутривенно иммунизировали овальбумином по следующей схеме:
1) 3 кролика - 10 мг овальбумина в 2 мл ФСБ;
2) 3 кролика - потенцированный овальбумин в 2 мл ФСБ в разведении С50;
3) 3 кролика - 2 мл ФСБ (контроль).
Через 5, 7 и 12 суток из вены уха у кроликов забирали кровь, получали сыворотку. Затем в соответствии со стандартной методикой непрямого твердофазного ИФА (с козьими антителами к IgG и IgM кролика, меченными пероксидазой хрена, субстрат - ОФД) анализировали содержание в сыворотке антител к овальбумину.
Путем интерполяции результатов по 5 титрам сыворотки (в области линейной зависимости оптической плотности от титра) определяли титр сыворотки, который давал в ИФА оптическую плотность при 492 нм, равную 1,0.
Результаты исследований приведены в таблице 4.
Вывод:
Введение антигена в потенцированной форме вызывает более ранний и более интенсивный первичный гуморальный иммунный ответ.
Пример 7 (In vitro).
Влияние потенцированного антигена на уровень сенсибилизации лимфоцитов. Оценка с помощью реакции бласт-трансформации лимфоцитов (РБТЛ).
Сенсибилизированные лимфоциты периферической крови способны делиться in vitro в ответ на контакт со специфическим антигеном, и этот процесс отражает функциональную активность иммунокомпетентных клеток.
Мышей СВА сенсибилизировали путем подкожного введения в область холки метилированного бычьего сывороточного альбумина (МБСА) в различных модификациях:
1) 3 мышам вводили 100 мкл 0,1% МБСА и 100 мкл 0,25% раствора синего Эванса (адъювант) в фосфатно-солевом буфере (ФСБ).
2) 6 мышам вводили 200 мкл потенцированного МБСА в ФСБ.
3) 3 мышам вводили 200 мкл ФСБ (контроль).
Через 8 суток мышей декапитировали, стерильно получали кровь, из которой в градиенте фиколл-верографина выделяли мононуклеарные клетки. Концентрацию клеток доводили до 5•105 клеток/мл средой RPMI 1640 с 10% эмбриональной телячьей сыворотки, 12 мМ HEPES, глутамином (300 мкг/мл), антибиотиками - пенициллин и стрептомицин (по 100 мкг/мл).
Автоматическими микропипетками суспензию разливали по 200 мкл в лунки 96-луночного планшета для иммунологических реакций. В лунки контрольных культур каждой из групп добавляли по 20 мкл среды RPMI 1640. В опытные лунки добавляли антиген по следующей схеме:
группа 1-1: по 20 мкл 0,05% раствора МБСА на ФСБ;
группа 2-1: по 20 мкл 0,05% раствора МБСА на ФСБ;
группа 2-2: по 20 мкл потенцированного МБСА на ФСБ в разведении С50;
группа 3-1: по 20 мкл 0,05% раствора МБСА на ФСБ;
группа 3-2: по 20 мкл потенцированного МБСА на ФСБ.
Каждый вариант культуры (без антигена и с антигеном) занимал по 3 лунки.
Культуры на 48 часов помещали в термостат при 37oC во влажную атмосферу с 5% CO2. В течение последних 4 часов культивирования в каждую лунку вносили 20 мкл раствора H3-тимидина с удельной активностью 10 мкКи/мл.
После осаждения клеток на стекловолоконных фильтрах с помощью автоматического сборщика клеток (Harvester) фильтры высушивали; затем каждый участок фильтра, на который были осаждены клетки из каждой лунки, переносили во флакон с 2 мл сцинтилляционной жидкости (на 1 кг толуола 4 г РРО и 0,1 г РОРОР). Подсчет включения изотопа производили в сцинтилляционном счетчике.
Для определения показателя пролиферативной активности лимфоцитов вычисляли среднюю величину включения изотопа в 3 контрольных культурах (спонтанная пролиферация - СП), а также среднюю величину включения изотопа в 3 культурах с антигеном (индуцированная пролиферация - ИП).
Для оценки пролиферативной активности клеток использовали индекс стимуляции (ИС):
ИС = lg(ИП/СП).
Результаты исследований приведены в таблице 5.
Вывод:
Введение антигена в потенцированной форме обеспечивает более активную антиген-специфическую сенсибилизацию Т лимфоцитов. Потенцированный антиген также является более активным индуктором пролиферации сенсибилизированных Т лимфоцитов.
Пример 8 (in vitro).
Влияние потенцированного антигена на миграционную активность лейкоцитов.
Помещенные в лунку агарозной среды лейкоциты способны к спонтанной миграции, образуя вокруг лунки кольцевую зону скопления клеток (зона миграции). По величине этой зоны можно судить о степени миграционной активности лейкоцитов. При воздействии иммунорегуляторных факторов, выделяемых лимфоцитами, может наблюдаться угнетение миграционной способности лейкоцитов.
Мышей СВА сенсибилизировали путем подкожного введения в область холки метилированного бычьего сывороточного альбумина (МБСА): 6 мышам вводили 100 мкл 0,1% МБСА и 100 мкл 0,25% раствора синего Эванса (адъювант) в фосфатно-солевом буфере (ФСБ).
Через 8 суток мышей декапитировали, стерильно получали гепаринизированную кровь (1-2 ЕД гепарина/мл), из которой выделяли лейкоцитарную взвесь. Полученные клетки дважды отмывали средой 199 путем центрифугирования при 850 об./мин в течение 8-10 минут.
Для постановки реакции использовали планшеты с плоскодонными ячейками объемом 0,3 мл. На дно каждой ячейки в центр с помощью микрошприца наносили подложку (1 мкл 0,8% раствора агарозы). Через 10-15 минут пребывания планшет при комнатной температуре на подложку наслаивали 2 мкл суспензии лейкоцитов в 0,2% растворе агарозы, приготовленном на среде 199, содержащей 15% инактивированной эмбриональной телячьей сыворотки.
Планшеты помещали на 5-8 минут в холодильник при 4oC, после чего в каждую ячейку вводили по 0,2 мл среды 199:
1) с 0,05% МБСА;
2) с потенцированным МБСА в разведении С50;
3) контроль - без антигена.
Планшеты помещали в термостат при 37oC на 48 часов.
Оценку результатов проводили под микроскопом (х20) с помощью окулярного микрометра путем определения средних линейных величин миграции клеток в четырех взаимно перпендикулярных направлениях, измеряемых от края агарозной подложки до границы мигрирующего клеточного слоя, условно определяемой в месте перехода зоны мелких клеточных агломератов в зону диффузно расположенных изолированных клеток.
Индекс миграции (ИМ) вычисляли по формуле
ИМ = (L/Lк) • 100%,
где L, Lк - соответственно средние (медианы) величины зоны миграции (в единицах шкалы микрометра) с опытной и контрольной средой, полученные в 12 ячейках. ИМ вычисляли по результатам 5 независимых опытов.
Результаты исследований представлены в таблице 6.
Вывод:
В присутствии потенцированного антигена сенсибилизированные Т лимфоциты более активно секретируют иммунорегуляторные медиаторы, что обеспечивает более активную реакцию торможения миграции лейкоцитов.
Пример 9 (in vitro).
Влияние потенцированного антигена на активность естественных киллеров.
(Принцип метода) Естественные киллеры (ЕК) - клетки лимфоидного ряда, ответственные за независимый от продуктов главного комплекса гистосовместимости спонтанный цитолиз опухолевых и вирус-модифицированных клеток. Активность ЕК определяли в цитотоксическом тесте по лизису меченных радиоизотопами клеток-мишеней (КМ) - опухолевой линии клеток К-562 (миелолейкоз человека). В качестве тестируемых клеток-эффекторов использовали суспензию мононуклеарных клеток периферической крови 5 здоровых доноров.
Суспензию мононуклеарных клеток (эффекторные клетки - ЭК), полученную на градиенте фиколл-верографина, разводили до концентрации 1•107 в 1 мл.
Клетки мишени (КМ) К-562 (3-го дня культивирования) метили 3Н-уридином в дозе 3 мкКи на 1 мл клеточной культуры. Для этого клеточную взвесь в концентрации 5•105 в 3 мл культуральной среды инкубировали с изотопом (удельная активность 24 Ки/мМ) 1 час при 37oC, трижды отмывали средой Игла с 10% бычьей сывороткой и антибиотиками, центрифугировали при 400g при 20oC 10 минут. Отмытые клетки-мишени выдерживали в культуральной среде 2 часа при 37oC и еще раз отмывали с целью удаления дериватов изотопа, не включившегося в РНК клеток-мишеней. После этого готовили рабочую взвесь меченых KM, которая содержит в 1 мл 1•106 клеток и 5 мкг панкреатической РНК-азы.
Цитотоксическую реакцию проводили в круглодонных 96-луночных микропланшетах. В каждую ячейку помещали по 100 мкл рабочей взвеси и меченых КМ и 100 мкл суспензии ЭК, которую разводили так, чтобы выдерживалось соотношение ЭК: КМ = 50: 1; 25: 1; 12:1. Каждое разведение ЕК помещали в три ячейки. Контрольными пробами являлись меченые КМ без добавления ЭК. В опытную серию ячеек вносили также 20 мкл потенцированного антигена опухоли, С50, полученного путем потенцирования гомогенизата клеток линии К-562 в ФСБ. В остальные лунки добавляли по 20 мкл ФСБ.
1 серия: ЭК+КМ (+ ФСБ)
2 серия: ЭК + КМ + потенцированный антиген КМ
3 серия: КМ (+ ФСБ)
Заполненный планшет инкубировали 16 часов во влажной атмосфере при 37oC в CO2-инкубаторе. После инкубации содержимое ячеек переносили на мембранные фильтры с диаметром пор 2,5 мкм, отмывали.
Функциональную активность ЕК оценивали по разнице радиоактивности, выявляемой на сцинтилляционном β-счетчике в ячейках, содержащих и не содержащих ЕК. Индекс цитотоксичности определяли по формуле
ИЦ = (ИМПт/ИМПк - 1) • 100.
ИМПт, ИМПк - число импульсов в тест-ячейках и контрольных ячейках.
Находили среднее значение ИЦ у 5 здоровых доноров (± стандартное отклонение).
Результаты исследований приведены в таблице 7.
Вывод:
Потенцированный антиген, выделенный из опухоли, повышает цитотоксическую активность естественных киллеров в отношении клеток опухоли.
Пример 10 (In vivo).
Влияние потенцированного антигена на отторжение аллотрансплантата.
В качестве реципиентов использовались мыши мужского пола линии СВА.
В качестве доноров использовались мыши мужского пола линии С57В1.
Потенцированный антиген получали из гомогената трансплантата из кожи хвоста мыши-донора. Потенцированный антиген в физиологическом растворе (2 мл, С50) вводили per os мышам-реципиентам однократно за сутки до трансплантации (5 мышей, группа 1) и через сутки после трансплантации (5 мышей, группа 2). В контроле (5 мышей) вводили физ. раствор.
Методика пересадки кожи с хвоста на спину. Мышь донора усыпляли и отрезали хвост. Хвост протирали этанолом и разрезали кожу ножницами вдоль хвоста. Пинцетом полностью отделяли кожу. Дале кожу разрезали на кусочки размером 5х10 мм. У мышей-реципиентов на фоне глубокого наркоза вырезали кусочек кожи спины. Поверхность среза была несколько больше поверхности трансплантата. Трансплантат переносили на рану и фиксировали анкерпластом. Сверху клали повязку с ланолином и влажную гипсовую повязку, которую удаляли через неделю. После удаления гипса проводился ежедневный осмотр трансплантатов и оценка реакции отторжения.
Результаты исследований приведены в таблице 8.
Вывод:
Пероральное введение реципиенту потенцированного антигена из кожи донора до или после трансплантации кожи снижает активность отторжения аллотрансплантата и удлиняет срок его выживаемости.
Пример 11.
Больной P., 38 лет. Диагноз: Рассеянный склероз, инвалид II группы, прогрессирующее течение.
Заболел 12 лет назад. Преобладающая симтоматика - перемежающиеся парезы нижних конечностей (на высоте обострения не способен передвигаться самостоятельно, в состоянии ремиссии передвигается с костылями), атактическая походка, интенционный тремор, рассеянная микросимтоматика со стороны черепно-лицевых нервов, редкие эпиприступы. С каждым годом обострения удлиняются, сопровождаясь все более выраженной слабостью в ногах. Проводимая гормотерапия прогредлентность заболевания не сдерживает.
Последние 1,5 года через день по утрам получает по 2 мл потенцированного препарата в разведении С100, полученного из антигена - основного белка миелина (ОБМ) (бычий). Состояние заметно улучшилось - увеличилась мышечная сила в конечностях, обострений нет. Передвигается самостоятельно. Эпиприступы за период приема потенцированного ОБМ наблюдались дважды. Из координационных расстройств присутствует лишь интенционный тремор.
Лабораторные данные следующие:
Снижение пролиферативного ответа сенсибилизированных Т лимфоцитов на ОБМ.
Пролиферативный ответ оценивали в реакции бласттрансформации в суспензии мононуклеарных клеток периферической крови пациента в присутствии основного белка миелина. Оценка проводилась до введения и через 7 суток после введения потенцированного антигена. Пролиферативный ответ после введения потенцированного антигена составил 53% от исходного.
Снижение уровня антител к ОБМ в сыворотке.
Уровень антител к ОБМ в сыворотке оценивали с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) на стандартных тест-системах Flow Laboratories (UK). Оценка проводилась до введения, через 7, 14, 21 и 28 суток после введения потенцированного антигена. Статистически достоверное снижение уровня антител отмечено через 14 суток. В дальнейшем уровень антител продолжал снижаться.
Пример 12.
Больная С., 43 года. Диагноз: Аутоиммунный тироидит Хашимото.
Заболела 3 года назад. Периодически возникающие обострения проявляются симптомами гипотироза. При осмотре у эндокринолога в январе 1997 года находилась в состоянии нестойкой ремиссии; жаловалась на затруднение при глотании, чувство нехватки воздуха, общую слабость. При осмотре обнаружено симметричное увеличение щитовидной железы II-III степени. Железа при пальпации плотная, узловатая, болезненная. Назначена терапия: по 5 капель спиртового раствора два раза в день потенцированного антигена - тиреоглобулина свиного в потенции С12. Через 1,5 месяца после начала лечения увеличения щитовидной железы нет, глотание свободное. Жалоб не предъявляет. С профилактической целью продолжает принимать один раз в месяц потенцированный тиреоглобулин свиной по 1 мл, С12.
Лабораторные данные следующие:
Снижение пролиферативного ответа сенсибилизированных Т лимфоцитов на тиреоглобулин;
Пролиферативный ответ оценивали в реакции бласттрансформации в суспензии мононуклеарных клеток периферической крови пациента в присутствии тиреоглобулина. Оценка проводилась до введения и через 7 суток после введения потенцированного антигена. Пролиферативный ответ после введения потенцированного антигена составил 57% от исходного.
Снижение уровня циркулирующих антител к тиреоглобулину.
Уровень антител к тиреоглобулину в сыворотке оценивали с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) на стандартных тест-системах Flow Laboratories (UK). Оценка проводилась до введения, через 7, 14, 21 и 28 суток после введения потенцированного антигена. Статистически достоверное снижение уровня антител отмечено через 14 суток. В дальнейшем (на 21 и 28 сутки) уровень антител продолжал снижаться.
Пример 13.
Больная Т., 40 лет. Диагноз: Ревматоидный артрит.
Больна в течение 11 лет. В клинической картине превалирует пароксизмальные поражение суставов ступней, в меньшей степени - кистей, утренняя скованность. Противовоспалительная терапия не сдерживает прогредлентность процесса: болезненность и опухлость суставов, а также выраженность эрозии при рентгенологическом исследовании с каждым годом нарастает, увеличивается длительность обострений.
Прием внутрь по 5 мл водного раствора дважды в день потенцированного антигена - человеческого коллагена II типа в разведении С24 заметно улучшил течение болезни. Через 3
недели терапии исчезла опухлость и болезненность суставов, а также утренняя скованность. Больная самостоятельно передвигается.
Лабораторные данные следующие:
Снижение пролиферативного ответа сенсибилизированных Т лимфоцитов на коллаген II типа;
Пролиферативный ответ оценивали в реакции бласттрансформации в суспензии мононуклеарных клеток периферической крови пациента в присутствии человеческого коллагена II типа. Оценка проводилась до введения и через 7 суток после введения потенцированного антигена. Пролиферативный ответ после введения потенцированного антигена составил 45% от исходного.
Снижение уровня циркулирующих антител к коллагену II типа.
Уровень антител к коллагену в сыворотке оценивали с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) на стандартных тест-системах Flow Laboratories (UK). Оценка проводилась до введения, через 7, 14, 21 и 28 суток после введения потенцированного антигена. Статистически достоверное снижение уровня антител отмечено через 14 суток. В дальнейшем (на 21 и 28 сутки) уровень антител продолжал снижаться.
Пример 14.
Больной С. , 48 лет, инвалид II группы, в течение 5 лет наблюдается в психоневрологическом диспансере с диагнозом "Психоорганический синдром травматического генеза. Астенический вариант".
В клинической картине преобладает выраженная церебрастения, психическая истощаемость, метеолобильность. Постоянно жалуется на головную боль и утомляемость, плохую память. Проводимая терапия: ноотропин, курсы витаминов В6 и В12, седативные средства значительного изменения состояния не вызывает.
В январе - феврале 1997 года получал приготовлений по правилам гомеопатии потенцированный препарат мозгового видоспецифического тканеспецифического белка 14-3-2 в потенции С200 по 5 гранул, насыщенный потенцированным спиртовым раствором, один раз в день.
В ходе проводимой терапии явления церебрастении исчезли, заметно улучшилась память. Больной субъективно считается практически здоровым, способным приступить к прежней работе оператора ЭВМ.
Пример 15.
Больной Т. , 21 год. Поступил в наркологическое 4 отделение с диагнозом "Опийная наркомания II ст. Абстинентный синдром". Традиционная дезинтоксикационная терапия, проводимая в течение 1-х суток, заметного улучшения не принесла. Со 2-х суток больному был назначен приготовленный по правилам гомеопатии потенцированный мозгоспецифичный белок S-100 в потенции С 1000 в виде 45% спиртового раствора - по 5 капель ежечасно.
Через 2 часа после первого приема больной почувствовал себя значительно лучше: исчезли боли в костях, слезотечение, чувство тревоги и больной заснул. К концу нахождения в отделении третьих суток явления абстиненции были практически купированны.
Пример 16.
Больной Д., 42 года, в течение 8 лет наблюдается в поликлинике у нарколога по месту жительства с диагнозом "Хронический алкоголизм II ст., псевдодипсоманическая форма". Несмотря на проводимые лечебные мероприятия, продолжает злоупотреблять алкоголем, длительность запоев увеличивается, периоды воздержания уменьшаются.
С марта 1997 года получает 1 раз в неделю по 2 мл водного раствора С50, приготовленного по правилам гомеопатии потенцированного препарата мозгоспецифического белка α2 -гликопротеида. Постепенно уменьшилось влечение к алкоголю, больной начал реже принимать спиртные напитки, а с 15 мая 1997 года не употребляет их совсем. По состоянию на 10 марта 1998 года находится в состоянии ремиссии, влечения к спиртному нет.
Пример 17.
Больной П., 25 лет, в течение ряда лет страдает амиотрофическим склерозом (пояснично-крестцовая форма), проявляющийся спастикоатрофическими парезами ног. Проводимая терапия заметного эффекта не приносила. С декабря 1996 года ежедневно однократно утром получает по 1 таблетке потенцированного мозоспецифического глиально-фибриллярного белка С30. Постепенно состояние больного улучшилось: появилась чувствительность в голенях и стопах, исчезли мышечные спазмы, увеличилось мышечная сила в пораженных конечностях, снизились рефлексы. С января 1997 года ранее лежачий больной начал передвигаться с помощью палочки.
Пример 18.
Больной X. , 16 лет. Поступил в реанимацию с травматическим шоком и обильным кровотечением из поврежденных нижних конечностей. При переливании по жизненным показателям крови той же группы у больного развилась острая пирогенная реакция, купированная введением потенцированной крови в разведении С 12 того же донора.
Пример 19.
Больной X. , 40 лет. Страдает более 20 лет хроническим алкоголизмом. В феврале 1998 года больному подкожно введен таблестированный препарат тетурам, блокирующий фермент ацетальдегидроксидазу. Через 10 дней после указанной процедуры больной возобновил прием алкоголя, вследствие чего у него развилось тяжелое соматовегетативное состояние: наступило покраснение и чувство жара в лице и верхней части туловища, чувство стеснения в груди, затруднение дыхания, сердцебиение, чувство страха, мелкоразмашистый тремор; снизилось артериальное давление.
Введение перорально 5 капель потенцированного препарата ацетальдегидроксидазы в разведении С 12 однократно в течение 30 минут нормализовало состояние больного.
Пример 20.
Влияние потенцированного плазмина (фибринолизана) на показатели фибринолиза.
Кроликам породы шиншилла мужского пола одинакового возраста вводили фибринолизин (официнальный препарат, получаемый из плазмы крови человека) по следующей схеме:
1) 1 группа (5 кроликов) - 100 ЕД фибринолизина в 2 мл изотонического раствора натрия хлорида, внутривенно.
2) 2 группа (5 кроликов) - потенцированный фибринолизин в разведении С50, в 2 мл изотонического раствора натрия хлорида, внутривенно.
3) 3 группа (5 кроликов) (контроль) - 2 мл изотонического раствора натрия хлорида, внутривенно.
Через 2 часа у кроликов брали цельную нестабилизированную кровь (5 мл) и проводили тромбоэластографию в соответствии со стандартной методикой.
Показатели фибринолиза оценивали по времени уменьшения упругости образовавшегося сгустка после достижения максимальных значений до 1/5 от максимальной величины (Т).
Результаты исследований представлены в таблице 9.
Вывод:
Потенцированный фибринолизин ускоряет фибринолиз в цельной нестабилизированной крови. Эффект потенцированного фибринолизина более выражен по сравнению с фибринолизином в терапевтической дозе.
Пример 21.
Влияние потенцированного цитохрома С на активность окислительного фосфорилирования.
Цитохром С в виде официнального препарата (из ткани сердца крупного рогатого скота) вводили чистолинейным крысам мужского пола одинакового возраста по следующей схеме:
1) 5 крыс - 1 мг цитохрома С в 2 мл изотонического раствора натрия хлорида, подкожно.
2) 5 крыс - потенцированный цитохром С (С50) в 2 мл изотонического раствора натрия хлорида, подкожно.
3) 5 крыс (контроль) - 2 мл изотонического раствора натрия хлорида, подкожно.
Через 4 часа крыс забивали, в соответствии со стандартной методикой из печени выделяли интактные митохондрии.
Интактные митохондрии в среде с субстратами окисления (калия сукцинат, 10 мМ) и кислородом характеризуются низкой скоростью дыхания. При добавлении акцепторов энергии, аккумулирующейся в дыхательной цепи (АДФ + неорганический фосфат), скорость дыхания резко возрастает. Скорость истощения акцепторов энергии характеризует активность окислительного фосфорилирования в дыхательной цепи. Время истощения акцепторов энергии определяли по полярографической кривой регистрации потребления кислорода митохондриями (АДФ/t) на единицу массы суспензии митохондрий.
Активность окислительного фосфорилирования оценивали по параметру полярографической кривой - АДФ/t (моль/мин • мг белка).
Результаты исследований приведены в таблице 10.
Вывод:
Потенцированный цитохром С стимулирует окислительное фосфорилирование (стимулирует тканевое дыхание) более активно, чем цитохром С в терапевтической дозе.
Пример 22.
Влияние потенцированного инсулина на концентрацию глюкозы в крови.
Здоровым кроликам породы шиншилла вводили инсулин для инъекций по следующей схеме:
1) 5 кроликов - 5 ЕД (единиц действия) в 2 мл в воде, подкисленной соляной кислотой, подкожно, однократно.
2) 5 кроликов - потенцированный инсулин в разведении С50 в 2 мл воды для инъекций.
3) 5 кроликов (контроль) - 2 мл воды для инъекций.
До введения инсулина, через 20 минут, 1 и 4 часа после инъекции у кроликов забирали кровь и определяли содержание глюкозы глюкозооксидазным методом по окислению фенолфталеина (в ммоль/л).
Результаты исследований приведены в таблице 11.
Вывод:
Потенцированный инсулин вызывает более быстрое снижение уровня глюкозы в крови, чем инсулин в терапевтической дозе.
Пример 23.
Влияние потенцированного тиреостимулирующего гормона на концентрацию в крови тироксина.
Здоровым кроликам породы шиншилла вводили тиротропин для инъекций по следующей схеме:
1) 5 кроликов - 5 ЕД (единиц действия) в 2 мл изотонического раствора натрия хлорида.
2) 5 кроликов - потенцированный тиротропин в 2 мл в разведении С50 изотонического раствора натрия хлорида.
3) 5 кроликов (контроль) - 2 мл изотонического раствора натрия хлорида.
До введения тиротропина, через 12, 24 и 48 часов после введения у кроликов забирали кровь и определяли общий уровень тироксина (в мкг%) с помощью стандартной методики радиоиммунного анализа.
Результаты исследований приведены в таблице 12.
Вывод:
Потенцированный тиротропин более активно стимулирует повышение уровня общего тироксина в крови, чем тиротропин в терапевтической дозе.
Пример 24.
Влияние потенцированного коллагена на течение раневого процесса.
У кроликов породы шиншилла асептически удаляли лоскут кожи размером 3 см2 и изучали влияние следующих препаратов на течение раневого процесса:
1) 5 кроликов - пленка коллагеновая, смоченная изотоническим раствором хлорида натрия;
2) 5 кроликов - потенцированный коллаген (1 типа), в разведении С50, в изотоническом растворе хлорида натрия;
3) 5 кроликов (контроль) - изотонический раствор хлорида натрия.
После обработки одним из указанных препаратов рану закрывали марлевой повязкой. Ежедневно производили осмотр раны, оценивали площадь (S) раневой поверхности, время образования рубца. Толщину рубца оценивали на срезе через 1 месяц (после усыпления кроликов).
Результаты исследований приведены в таблице 13.
Вывод:
Потенцированный коллаген 1 типа при местном применении ускоряет срок заживления асептической раны, ускоряет образование рубца, способствует образованию относительно более нежного рубца.
Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, и может быть использовано в иммунотерапии для коррекции иммунного гомеостаза, нарушение которого связано с воздействием антигена. Сущность способа заключается в том, что используют потенцированную форму вещества - антигена, участвующего в развитии патологических процессов. Получают лекарство из этого антигена путем многократного разведения и встряхивания или растирания по гомеопатическому методу. В качестве исходного антигена используют вещество полипептидной структуры, вещество липополисахаридной структуры или вещество полинуклеотидной структуры. Способ повышает эффективность иммунотерапии при минимальных количествах лекарственного средства и исходного антигена. 4 з.п. ф-лы, 13 табл.
| СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ | 1993 |
|
RU2092184C1 |
