ШТАММ BIFIDOBACTERIUM BREVE 79-88, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ КИСЛОМОЛОЧНЫХ, НЕФЕРМЕНТИРОВАННЫХ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ, БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВОК И БАКТЕРИЙНЫХ ПРЕПАРАТОВ Российский патент 2001 года по МПК C12N1/20 A23C9/12 A61K35/74 

Штамм Bifidobacterium breve 79-88, используемый для приготовления лечебно-профилактических кисломолочных, неферментированных пищевых продуктов, биологически активных добавок и бактерийных препаратов.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и представляет собой штамм бифидобактерий вида B.breve, который может быть использован для приготовления лечебно-профилактических кисломолочных, неферментированных пищевых продуктов, биологически активных добавок и бактерийных препаратов.

Препараты-эубиотики и продукты, содержащие в своем составе бифидобактерии, предназначены для нормализации микробиоценоза кишечника людей с дисбактериозами, возникшими в результате неблагоприятных экологических факторов, перенесенных заболеваний, длительной антибиотикотерапии, лучевой и химиотерапии и пр.

Известны зарубежные препараты-эубиотики и кисломолочные продукты, содержащие в своем составе бифидобактерии видов B.bifidum, B.lonqum B.adolescentis, B. breve (патент 2336886, Франция; патент 637297, Швейцария; патенты 2134179, 2421066, ФРГ; патенты 05227946, 0430642, Япния; патент 4645667, США).

В нашей стране с лечебной целью широко используют бактерийные препараты и продукты лечебного питания, содержащие в своем составе отечественные штаммы бифидобактерий видов B.bifidum N 1, 791 (SU авт. св-во 343588, патент 1347221), B. lonqum B379M (патент 849779), B.adolescentis MC-42 (патент 863639). Эти виды наиболее характерны для детей и взрослых и выделяются у них в 39-75% случаев. У 16-36% грудных детей в биоценозе кишечника обнаруживаются еще и виды B.breve и B.infantis. Существуют отечественные штаммы бифидобактерий видов B.breve 79-119 (патенты 2078814, 2078815) и B.infantic 73-15 и 79-43 (патенты 2112034, 2111248), которые предназначены для использования их в составе лечебно-диетических продуктов и бактерийных препаратов.

Качество лечебных продуктов и биопрепаратов во многом зависит от характеристик штамма-продуцента - его технологических свойств и специфической активности. Наличие большого набора биологически активных и технологических штаммов дает возможность выбора наиболее оптимальных для разработки новых моно- и комплексных биопродуктов и препаратов лечебно-профилактического действия. Включение новых производственных штаммов бифидобактерий расширит номенклатуру разрабатываемых бифидосодержащих средств коррекции микробиоценоза кишечника.

Целью настоящего изобретения является штамм Bifidobacterium breve 79-88, способный активно размножаться и наращивать микробную массу в короткие, 16-24 ч, сроки культивирования, сквашивать молоко со стабильным образованием сгустка, обладающий специфической активностью.

Штамм B. breve 79-88 выделен из содержимого кишечника здорового грудного ребенка, депонирован под N 150 в Государственной коллекции микроорганизмов - представителей нормальной микрофлоры человека (ГКНМ) Московского НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н.Габричевского.

Культурально-морфологические свойства штамма. Клетки представляют гр+ полиморфные, с бифуркацией или утолщением на 1-2-х концах, палочки; в жидких питательных средах растут по всему объему, кроме зоны аэробиоза; отдельно выросшие колонии имеют форму комет; логарифмическая фаза роста заканчивается к 16-24 ч.

Физиолого-биохимические свойства. Бесспоровый, неподвижный облигатный анаэроб. Оптимальная температура выращивания 37,5-38^oC. Каталазу не образует, желатину не разжижает. Сбраживает глюкозу с образованием уксусной и L + молочной кислоты без образования газа, закисляя среду выращивания с pH 7,2-7,0 до 4,1-3,9. Ферментирует лактозу, маннозу, целлобиозу, маннит, сорбит, салицин, не утилизирует арабинозу, ксилозу, инулин. При культивировании в молоке сквашивает его к 16-24 ч с образованием сгустка.

Штамм активно наращивал микробную массу на средах разного состава, продуцируя кислоты (табл. 1).

Штамм максимально накапливал микробную массу к 16-24 ч, достигшая в 1 мл lg 8,6-8,95 микробных клеток. Штамм сквашивал молоко с образованием сгустка с хорошими вкусовыми свойствами и высокой концентрацией бифидобактерий. Более энергично штамм продуцировал кислоты на гидролизатно-молочной среде.

Штамм проявлял антагонистические свойства в отношении патогенной и условно-патогенной микрофлоры (табл. 2).

Изучение спектра чувствительности к антибактериальным препаратам выявило, что штамм устойчив к канамицину, неомицину, оксациллину, цефалотину, тетрациклину, полимиксину; чувствителен к ампициллину, бензилпенициллину, карбенициллину, эритромицину, олеандомицину, линкомицину, левомицетину, ристомицину.

Таким образом, предлагаемый штамм B.breve 79-88 технологичен, поскольку активно размножался в питательных средах с накоплением производственной биомассы в короткие, 16-24 ч, сроки культивирования с высокой концентрацией микробных клеток; сквашивая молоко с образованием сгустка; продуцировал кислоты и подавлял рост патогенной и гнилостной микрофлоры; устойчив к ряду антибиотиков.

Способность штамма 79-88 наращивать биомассу в питательной среде, сквашивать молоко делает возможным использование его в приготовлении кисломолочных, неферментированных пищевых продуктов, биологически активных добавок и бактерийных препаратов.

Пример 1. Использование штамма 79-88 в составе закваски для приготовления кисломолочных продуктов
1.1.1-й пассаж - Лиофилизированный штамм 79-88 в количестве 0,1 г сухой биомассы (1 доза) титруют методом десятикратных разведений в питательной среде до 10^-9. Инкубируют 48-72 ч при 37,5-38^oC.

2-й пассаж - Выросшую культуру из разведений 10^-7 - 10^-9 вводят в объеме 5% в среду накопления (1 л) и культивируют 16-24 ч при 37,5-38^oC (закваска).

3-й пассаж (продукт) - Выросшую закваску в объеме 5% вносят в стерильное молоко и инкубируют 16-24 ч до появления сгустка. Указанным количеством закваски можно получить 50 л продукта с высокой концентрацией бифидобактерий.

1.2. 1-й пассаж - Лиофилизированный штамм 79-88 в количестве 0,1 г сухой биомассы вносят в пробирки с питательной средой и культивируют 24 ч при 37,5-38^oC.

2-й пассаж - Выросшую культуру в количестве 5% вносят в питательную среду (1 л). Инкубируют 16-24 ч при 37,5-38^oC (лабораторная закваска).

3-й пассаж - Выросшую закваску вносят в среду накопления (20 л) в объеме не более 5% и инкубируют при 37,5-38^oC (производственная закваска).

4-й пассаж (продукт) - Производственную закваску вносят в объеме 3-5% в емкости со стерильным молоком и культивируют 16-24 ч при 37,5-38^oC. Данным количеством закваски можно получить 500 л продукта.

Пример 2. Использование штамма 79-88 в составе закваски для приготовления неферментированных пищевых продуктов
1-й пассаж - Лиофилизированный штамм 79-88 в количестве 0,1 г сухой биомассы вносят в пробирки с питательной средой и титруют методом десятикратных разведений до 10^-9; культивируют 48-72 ч при 37,5-38^oC.

2-й пассаж - Выросшую культуру из разведений 10^-7-9 в объеме 5% вносят в среду выращивания и культивируют 16-24 ч при 37,5-38^oC.

3-й пассаж - Полученную биомассу в количестве не более 5% вносят в среду накопления и культивируют 16-24 ч при 37,5-38^oC (закваска).

Получение продукта - Выросшую закваску вносят в пищевое сырье (молоко, соки, квас, пиво, и пр.), перемешивают и разливают в емкости, получая продукт с концентрацией бифидобактерий не менее 10⁶/мл.

Пример 3. Использование штамма 79-88 в составе биологически активной добавки
1-й пассаж - Лиофилизированный штамм 79-88 в количестве 0,1 г сухой биомассы вносят в пробирки с питат. средой и титруют до 10^-9. Инкубируют 48-72 ч при 37,5-38^oC.

2-й пассаж - Выросшую культуру из разведений 10^-7-9 в объеме 5% вносят в питат. среду и культивируют 16-24 ч при 37,5-38^oC.

3-й пассаж - Полученную биомассу в количестве не более 5% вносят в среду накопления и культивируют 16-24 ч при 37,5-38^oC.

Получение биологически активной добавки - Выросшая биомасса представляет жидкий концентрат с высоким, не менее 10⁸/мл, содержанием бифидобактерий, который можно непосредственно использовать в качестве биологически активной добавки лечебно-профилактического действия.

Пример 4. Использование штамма 79-88 для получения бактерийного препарата
Штамм 79-88 1-2-3-го пассажей культивируют в течение 16-24 ч при 37,5-38^oC и pH среды 7,2-7,0. К выращенной биомассе 3-го пассажа добавляют защитные среды высушивания (сахароза 80% и желатина 8% в объеме 10-12%, обезжиренное молоко до 15-20%). Полученную суспензию разливают по 2 мл в ампулы или в пенициллиновые флаконы, замораживают при - 40-45^oC и лиофилизируют из замороженного состояния в вакуум-сушильных аппаратах. Полученный препарат при выпуске содержит не менее 10⁷ живых клеток бифидобактерий, что соответствует требованию НТД (ФС 42-132 ВС-94) на сухой бифидумбактерин.

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм Bifidobacterium breve 79-88 выделен из содержимого кишечника здорового грудного ребенка. Штамм активно развивается в питательных средах разного состава с накоплением производственной биомассы в короткие, 16-24 ч, сроки культивирования и концентрацией микробных клеток в 1 мл lg 8,6-8,95. Штамм сквашивает молоко к 16-24 ч культивирования, образуя сгусток с хорошими вкусовыми и органолептическими свойствами. Штамм обладает специфической активностью, продуцируя кислоты и подавляя рост патогенной и гнилостной микрофлоры. Штамм устойчив к ряду антибактериальных препаратов. 2 табл.

Штамм Bifidobacterium breve (коллекционный N 150 государственной коллекции микроорганизмов - представителей нормальной микрофлоры человека ГКМ МНИИЭМ им. Г. Н.Габричевского), используемый для приготовления лечебно-профилактических кисломолочных, неферментированных пищевых продуктов, биологически активных добавок и бактерийных препаратов.