Изобретение относится к медицинской микробиологии и представляет собой штамм бифидобактерий, который может быть использован для приготовления бактерийных лечебно-профилактических бифидсодержащих препаратов.
Препараты, содержащие в качестве действующего начала бифидобактерии, предназначены для нормализации микрофлоры кишечника людей, страдающих дисбактериозом, возникающим в результате перенесенных кишечных заболеваний, длительной антибиотикотерапии, лучевой и химиотерапии, стрессовых воздействий и т.п.
Известны зарубежные препараты-эубиотики, содержащие в качестве действующего начала бифидобактерии (патент 2336886; патент 2411008, Франция; патент 637297, Швейцария; патент 2134179, патент 2421066, ФРГ). У нас в стране для приготовления бактерийных препаратов применяют отечественные штаммы бифидобактерий видов B.bifidum, B.longum (авт. св. N 343588, патент 1347221, патент 849779, патент 1692021, SU а.с. N 1513029, RU, патент N 2001101, кл. C 12 N 1/20, 1993)
Бифидофлора человека представлена пятью видами B.bifidum, B.longum, B. adolescentis, B.breve и B.infantis. Первые три вида встречаются в биоценозе кишечника с наибольшей частотой, в 39-75% случаях. Виды B.breve и B.iefaetis обнаруживаются реже, в 16-36% случаях и только у детей грудного возраста. Поскольку эти виды свойственны детям раннего возраста, то и использование одного из них, B.breve, при разработке препаратов-эубиотиков на его основе весьма перспективно.
Нами предложен штамм Bifidobacterium breve подвид parvulorum 79-119, способный активно размножаться и наращивать микробную массу в короткие, 16-24 ч, сроки культивирования, и обладающий кислотопродуцирующим и антагонистическими свойствами.
Штамм Bifidobacterium breve 79-119 выделен из содержимого кишечника здорового грудного ребенка в 1979 г, хранится в лиофилизированном состоянии и депонирован под N 153 в Государственной коллекции микроорганизмов - представителей нормальной микрофлоры человека (ГКНМ) Московского НИИ эпидемиологии и микробиологии им Г.Н. Габричевского.
Культурально-морфологические признаки.
Клети палочковидные, изящные, с Y-образными раздвоениями на одном или двух концах; неподвижные, склонные к образованию скоплений, грамположительные. В печеночной среде Блаурокка образует колонии в виде комет. Логарифмическая фаза роста заканчивается к 24 часам. В жидких питательных средах растет по всей высоте объема, кроме зоны аэробиоза.
Физиолого-биохимические признаки.
Неподвижный, бесспорный облигатный анаэроб. Оптимальная температура выращивания 37,5-38oC, pH питательных сред 7,2-7,4. Каталазу не образует, желатину не разжижает. Сбраживает глюкозу с образованием уксусной и L + молочной кислоты без образования газа, закисляя среду выращивания до pH 4,1-3,9. Ферментируют лактозу, маннозу, целлобиозу, вариабельно салицин, не утилизирует арабинозу, ксилозу, инуклин, маннит, сорбит. Сквашивает молоко к 16-24 часам с образованием плотного сгустка.
Штамм генетически маркирован.
Штамм активно наращивает микробную массу на питательных средах культивирования, принятых в производстве бактерийных препаратов (табл.1).
Штамм к 16-24 часам интенсивно размножается в питательных средах с высоким содержанием микробных клеток, что является одним из существенных показателей технологичности штамма.
Штамм обладает специфической активностью кислотообразующей и антагонистической. При культивировании на питательных средах продуцирует кислоты, более энергично- на гидролизатно-молочной (табл.2).
Штамм подавляет рост патогенных и условно-патогенных микроорганизмов - Шигеля Зонне, Флекснера, энтеропатогенных кишечных палочек, стафилококка, протея (табл.3). Излучение спектра чувствительности к 15 применяемым антибактериальным препаратам выявило, что штамм устойчив к канамицину, неомицину, оксациллину, цефалотину, тетрациклину, линкомицину, стрептомицину; среднеустойчив к олеандомицину; чувствителен к ампициллину, бензилпенициллину, карбенициллину, эритромицину, левомицетину, ристомицину, рифампицину.
Из приведенных данных следует, что штамм 79-119 активно размножается на питательных средах, принятых в производстве бактерийных препаратов, с высоким содержанием микробных клеток в короткие, 16-24 ч, сроки культивирования; обладает высококислотопродуцирующими и ингибирующими свойствами в отношении патогенных и условно-патагенных микроорганизмов; обладает устойчивостью к ряду антибактериальных препаратов.
Пример. Штамм 79-119 1-2-3-го пассажей культивируют при 37,5-38oC и pH среды 7,2-7,4 в течение 16-24 ч. К выращенной биомассе добавляют защитные среды высушивания (сахароза 80% и желатина 8% 10-12% обезжиренное молоко до 20% ). Полученную суспензию разливают по 2 ил в ампулы или по 5 мл в пенициллиновые флаконы, замораживают при 40o-45oC и лиофилизируют из замороженного состояния в вакуум-сушильных аппаратах. Полученный препарат при выпуске содержит 108-109 живых клеток бифидобактерий.
Согласно НТД на сухой бифидумбактерин (ФС 42-132 ВС-94) содержание в 1 дозе препарата должна составлять не менее 107 бифидобактерий.
Таким образом, предлагаемый штамм B.breve 79-119 является технологичным, поскольку энергично размножается в питательных средах с накоплением производственной биомассы в короткие сроки культивирования. Штамм можно рекомендовать для использования его в качестве основы при производстве бактерийных препаратов-эубиотиков.
Штамм (Ш) Bibidobacterium breve 79-119 N 153 ГКНИ МНИИЭМ им Г. Н. Габричевского выделен из содержимого кишечника здорового грудного ребенка. Ш активно размножается на питательных средах разного состава с накоплением производственной биомассы в короткие (16 - 24 ч) сроки культивирования. Логарифмическая фаза роста заканчивается к 24 ч, содержание клеток в 1 мл микробной извести составляет lg 9. Ш продуцирует кислоты, антагонистически активен по отношению к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам и проявляет устойчивость к ряду антибактериальных препаратов. 3 табл.
Штамм бактерий Bifidobacterium breve коллекционный N 153 Государственной коллекции микроорганизмов представителей нормальной микрофлоры человека ГКНИ МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского, используемый для получения бактерийных лечебнопрофилактических бифидосодержащих препаратов.
