ШТАММ БАКТЕРИЙ BIFIDOBACTERIUM BREVE, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ЛЕЧЕБНО-ДИЕТИЧЕСКИХ ПРОДУКТОВ ПИТАНИЯ Российский патент 1997 года по МПК C12N1/20 A23C9/12 C12N1/20 C12R1/01 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и представляет собой штамм бифидобактерий, который может быть использован для приготовления лечебно-диетических продуктов питания.

Продукты, содержащие в своем составе бифидобактерии, предназначены для нормализации микрофлоры кишечника людей, страдающих дисбактериозом, возникшим в результате перенесенных кишечных заболеваний, длительной антибиотикотерапии, лучевой и химиотерапии, клинических проявлений эксудативного диатеза у детей раннего возраста, стрессовых воздействий и т.п.

Известны зарубежные кисломолочные продукты-йогурты, включающие в свой состав бифидобактерии видов B. bifidum, B. longum, B. adolescentis, B. breve (патент 2336886, Франция; патент 05227946, патент 04320642 Япония).

В нашей стране в лечебных целях используются кисломолочные продукты - кисломолочный бифидумбактерин, бифилакт, напитки "Угличский" и "Вита", бифивит, бифисанус и пр.), приготовленные на основе штаммов бифидобактерий видов B. bifidum, B. longum, B. adolescentis (патенты 849779, 863639,1347221, авт. св-во 1724154), авт.св. SU, N 1513029, патент RU N 2001101).

В биоценозе кишечника наиболее часто встречаются бифидобактерии видов B. bifidum, B. longum и B. adolescentis (39-75% случаев), виды B. breve и B. infantis обнаруживаются в 16-36% случаях. Поскольку в кишечнике детей в норме пролиферирует вид B. breve, то и использование его в бифидумтерапии также целесообразно.

Предложен штамм Bifidobacterium breve подвид parvulorum 79-119, способный активно наращивать микробную массу и скашивать молоко в короткие, 16-24 ч, сроки культивирования с кислотообразующими и антагонистическими свойствами.

Штамм Bifidobacterium breve 79-119 выделен из содержимого кишечника здорового грудного ребенка в 1979 г, хранится в лиофилизированном состоянии и депонирован под N 153 в Государственной коллекции микроорганизмов - представителей нормальной микрофлоры человека (ГКНМ) Московского НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского.

Культурально-морфологические признаки. Клетки палочковидные, изящные, с У-образными раздвоениями на одном или двух концах; неподвижные склонные к образованию скоплений, грамположительные. Логарифмическая фаза роста заканчивается к 24 часам. В жидких питательных средах растет по всей высоте объема, кроме зоны аэробиоза.

Физиолого-биохимические признаки. Неподвижный, бесспоровый облигатный анаэроб. Оптимальная температура выращивания 37,5-38^oC, pH питательных сред 7,2-7,4. Каталазу не образует, желатину не разжижает. Сбраживает глюкозу с образованием уксусной и L+ молочной кислоты без образования газа, закисляя среду выращивания до PH 4,1-3,9. Ферментирует лактозу, маннозу, целлобиазу, вариабельно салицин, не утилизирует арабинозу, ксилозу, инулин, маннит, сорбит. Сквашивает стерильное молоко к 16-24 часам с образованием плотного сгустка.

Штамм генетически маркирован.

Штамм активно размножается в наращивает микробную массу на питательных средах культивирования и стерильном молоке (табл. 1).

Штамм обладает специфической активностью кислотообразующей и антагонистической.

Штамм подавляет рост патогенных и условно-патогенных микроорганизмов - Шигелл Зонне, Флекснера, энтеропатогенных кишечных палочек, стафилококка, протея (табл.3).

Изучение спектра чувствительности к 15 применяемым антибактериальным препаратам выявило, что штамм устойчив к канамицину, неомицину, оксациллину, цефалотину, тетрациклину, линкомицину, стрептомицину; среднеустойчив к олеандомицину; чувствителен к ампициллину, бензилпенициллину, карбенициллину, эритромицину, левомицетину, ристомицину, рифампицину.

Примеры с использованием штамма 79-119 в составе закваски для приготовления кисломолочного бифидумбактерина.

Пример 1. 1-й пассаж (оживление культуры). Лиофилизированный штамм 79-119 вносят в среду накопления (печеночную, гидролизатно-молочную) из расчета 0,1 г сухой биомассы (1 доза) на 100 мл среды. Посевы инкубируют 24 ч при 37,5 38^oC.

2-й пассаж (получение закваски). Полученную биомассу в количестве 10% вносят в среду накопления (1 л). Инкубируют 16-24 ч при 37,5-38^oC.

Получение продукта. Выросшую закваску в объеме 5- 10% вносят в емкости со стерильным молоком и инкубируют 16-24 ч при 37,5-38^o. В данном случае указанным количеством закваски можно получить 20 л продукта.

Пример 2. 1-й пассаж (оживление культуры). Лиофилизированный штамм 79-119 0,1 г сухой биомассы (1 доза) титруют методом десятикратных разведений в питательной среде и в объеме 10% посевного материала из разведений 10^-7 и 10^-8 переносят в питательную среду (1 л). Инкубируют 48 ч при 37,5 - 38^oC.

2-й пассаж (получение закваски). Полученную биомассу в количестве 10% вносят в среду накопления (10 л). Инкубируют 16-24 ч при 37,5-38^oC.

Получение продукта. Выросшую закваску в объеме 5% вносят в емкости со стерильным молоком и инкубируют 16-24 ч при 37,5-38^oC. В данном случае указанным количеством закваски можно получить 200 л продукта.

Таким образом, предлагаемый штамм 79-119 активно размножается в питательных средах и молоке, сквашивая его к 16-24 ч с образованием приятного на вкус сгустка с высоким содержанием живых бифидобактерий (10⁸-10⁹), что является одним из показателей технологичности штамма при использовании его в производстве лечебно-диетических продуктов.

Согласно "Инструкции по приготовлению кисломолочного бифидумбактерина" (утв. МЗ СССР в 1987 г) содержание в 1 мл продукта должно составлять не менее 10⁸ живых бифидобактерий.

Штамм Bifidobacterium breve 79-119 используют для приготовления лечебно-диетических продуктов лечебного питания. Штамм (Ш) Bifidobacterium breve 79-119 выделен из содержимого кишечника здорового грудного ребенка. Ш активно размножается на питательных средах разного состава и молоке, сквашивая его к 16 - 24 ч культивирования с образованием плотного, приятного на вкус сгустка с высоким содержанием в 1 мл живых бифидобактерий (lg 9). Ш продуцирует кислоты, антагонистически активен по отношению к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам и проявляет устойчивость к ряду антибактериальных препаратов. 3 табл.

Штамм бактерий Bifidobacterium breve, коллекционный N 153 Государственной коллекции микроорганизмов представителей нормальной микрофлоры человека ГКНМ МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского, используемый для приготовления лечебнодиетических продуктов питания.