БИОЛОГИЧЕСКИЙ ПРЕПАРАТ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ У МОЛОДНЯКА ЖИВОТНЫХ Российский патент 2002 года по МПК A61K35/66 A61K39/07 

Изобретение откосится к ветеринарии и биотехнологии, а именно к ветеринарной микробиологии.

Известен биологический препарат ПАБК (пропионово-ацидофильная бульонная культура), изготовленная из пропионовых (Bact. propioni shermanii) и ацидофильных (Bact. acidophilum) бактерий, выращенных на дрожжево-сывороточном бульоне. Применяют телятам с профилактической целью 30-70 мл, с лечебной 50-90 мл; поросятам с профилактической целью 15-25 мл, с лечебной 20-30 мл при заболевании желудочно-кишечного тракта (Наставление по применению биологического препарата ПАБК (пропионово-ацидофильной бульонной культуры), утверждено Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 14 марта 1980 г.).

Однако препарат ПАБК обладает слабой антагонистической активностью и не обеспечивает полного восстановления нормальной микрофлоры кишечника.

В настоящее время широко известны биологические препараты для лечения и профилактики инфекционных заболеваний - пробиотики на основе микроорганизмов из рода Bacillus (Смирнов В.В. и др. "Современные представления о механизмах лечебно-профилактического действия пробиотиков из бактерий рода Bacillus"//Микробиологический журнал, 1993, т. 55, 5, с. 92-112).

В частности, известен профилактический биопрепарат "Субалин", содержащий рекомбинатный штамм Bacillus subtilis ВКПМ В-4759 с содержанием 1•10⁹-1•10¹⁰ живых микробных клеток в 1 мл физиологического раствора и наполнитель - сыворотку крови крупного рогатого скота, молоко и т.д. (RU 2035185 С, опубл. 20.05.95).

Недостатком данного препарата является отсутствие патогенетического действия, а именно воздействия непосредственно на саму слизистую оболочку желудочно-кишечного тракта.

Наиболее близким аналогом является биопрепарат "Бактисубтил", содержащий чистую, сухую культуру Bacillus subtilis. Его рекомендуют при острой и хронической диарее различного генеза: при изменении режима питания и качественного состава пищи, при нарушении метаболизма и всасывания; аллергического генеза; как вспомогательное средство при диарее инфекционного генеза; кишечном дисбактериозе (особенно вследствие лечения антибиотиками широкого спектра действия) (Лекарственные препараты зарубежных фирм в России. - Справочник. - М.: АстроФармСервис, 1993, с. 188).

Препарат "Бактисубтил" применяют также в ветеринарных целях при расстройстве функции пищеварения (Михайлова М.В. и др. "Эффективность иммунотерапии собак, больных чумой"//Экологические аспекты эпизоотологии и патологии животных: Материалы международной научно-производственной конференции, Воронеж, 1999, с. 199-120).

Однако известный препарат "Бактисубтил" обладает недостаточной антагонистической активностью и не проявляет патогенетического действия. Кроме того, препарат имеет сложную технологию получения, т.к. включает операции по отмывке бактериальных клеток от компонентов питательной среды и концентрирования бактерий.

Задачей изобретения является создание комплексного биологического препарата на основе живой культуры Bacillus subtilis и отвара лекарственных растений (фитосреды), характеризующегося одновременным антибактериальным, иммуномодулирующим и патогенетическим действием.

Технический результат изобретения заключается в повышении профилактического действия и сокращении сроков лечения желудочно-кишечных заболеваний у молодняка животных при использовании препарата за счет синергетического эффекта, обусловленного увеличением в фитосреде ингибирующей активности по отношению к гнилостной микрофлоре и устойчивости к кислой среде желудка штамма Bacillus subtilis 4/97, а также лечебно-профилактическим воздействием на слизистую оболочку желудочно-кишечного тракта.

Сущность изобретения заключается в следующем.

Препарат содержит культуру штамма Bacillus subtilis 4/97 в концентрации не менее 10⁸ спор в 1,0 мл питательной среды на основе отвара из клубней и вегетативной части топинамбура, мелиссы и травы тысячелистника обыкновенного, взятых при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Клубни топинамбура - 2,0-3,0
Вегетативная часть топинамбура - 2,0-3,0
Трава мелиссы - 2,0-3,0
Трава тысячелистника обыкновенного - 2,0-3,0
Вода - Остальное
Штамм Bacillus subtilis 4/97, входящий в состав препарата, является новым, выделен с вегетативной части топинамбура и селекционирован с использованием традиционных микробиологических приемов по признаку интенсивности роста на фитосреде и антагонистической активности по отношению к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам. Штамм хранится в коллекции микроорганизмов Уральской государственной академии ветеринарной медицины.

Штамм Bacillus subtilis 4/97 характеризуется следующими свойствами.

Культурально-морфологические свойства. Палочки, размер клеток 1,5-4,0 мкм на 0,4-0,8 мкм. По Граму окрашиваются положительно. Споры образуют, капсулы не образуют. Тип дыхания - аэробный. Дает интенсивный рост на жидкой фитосреде (10¹⁰-10¹⁵ кл./мл) с образованием на поверхности коричневой морщинистой пленки, оседающей на дно пробирки через 4-8 суток. Образует коричневые морщинистые колонии на агаризованной фитосреде.

Биохимические свойства. В течение 24-48 ч пептонизирует молоко.

Штамм продуцирует антибиотик широкого спектра действия, подавляющий рост сальмонелл и эшерихий, продуцирует протеолитические ферменты, витамины и иммуномодуляторы.

Препарат задают животным перорально в виде жидкости: поросятам выпаивают по 1,0 мл 2-3 раза в сутки, телятам - по 10,0 мл 2-3 раза в сутки, ягнятам - по 5,0 мл 2-3 раза в сутки, жеребятам - по 15,0 мл 2-3 раза в сутки.

Препарат хранят в сухом и темном месте при температуре от 4-8^oС. Срок хранения препарата 1 год со дня изготовления.

Препарат не оказывает отрицательного действия на организм животных, что подтверждено в опытах на лабораторных животных, удобен и прост в изготовлении и применении.

Биологический препарат обладает взаимодополняющим двойным действием: отвар лекарственных растений обладает патогенетическим свойством (вяжущим, спазмолитическим, болеутоляющим, успокаивающим нервную систему действием, стимулирует деятельность желудочно-кишечного тракта, снимает воспалительные процессы в кишечнике и способствует регенерации эпителия). Культура микроорганизмов сохраняет и регулирует физиологическое равновесие кишечной флоры.

Сочетание штамма Bacillus subtilis 4/97 с отваром трав в количественном соотношении согласно изобретению обеспечивает синергетическое лечебно-профилактическое действие и значительно эффективнее способствует восстановлению нормобиоценоза кишечника, чем каждый из его компонентов в отдельности. Все указанные отличительные признаки являются необходимыми, а вместе - достаточными для достижения технического результата и получения биологического препарата с выраженным патогенетическим и этиотропным действием.

В доступной авторам литературе не найдено описания биологического препарата, в котором сочетались микроорганизмы - антагонисты и фитотерапевтическая композиция.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Штамм В. subtilis 4/97 культивируют на жидкой среде (фитосреде), приготовленной на отваре из клубней и вегетативной части топинамбура, травы мелиссы и тысячелистника.

Для этого берут 20-30 г клубней топинамбура по сухому веществу, 20-30 г вегетативной части топинамбура (листья, соцветие), 20-30 г травы мелиссы, 20-30 г травы тысячелистника и заливают водой в количестве 1000.0 мл. Состав кипятят в течение 25-30 мин на слабом огне. После остывания отвар процеживают, доводят до исходного объема, стерилизуют дробно. Посев бактерий штамма B. subtilis 4/97 на питательную среду проводят в соотношении 1:100. Культивирование производят при активной аэрации в течение 48-72 часов при температуре 37-40^oС. Полученный препарат должен содержать не менее 10⁸ спор в 1,0 мл.

Далее контролируют активность полученного препарата по следующим основным показателям:
содержание активных спор штамма В. subtilis 4/97 определяют методом десятикратных разведений препарата в фитосреде. Препарат считается активным, если рост в ряду десятикратных разведений отмечен не менее чем в восьмом разведении.

Антагонистическую активность препарата определяют по отношению к тест-культурам Е. coli и Salmonella spp. в мясопептонном бульоне с последующим высевом после инкубации при 37,5-38^oС на среду Эндо.

Препарат контролируют также на отсутствие посторонней микрофлоры микроскопией мазков, окрашенных по Грамму, и путем посева образцов на среду Китт-Тароцци, скошенный мясопептонный агар, среду Сабуро.

После контроля препарат расфасовывают в стеклянные хорошо вымытые, стерильные флаконы, вместимостью 100, 200, 500 см³, которые плотно закрывают резиновыми пробками и обкатывают алюминиевыми колпачками, обеспечивающими стерильность.

Пример 2. Полученный по примеру 1 препарат применяют для лечения телят с признаками диареи. Диагноз ставят на основании клинических признаков (повышение температуры тела, профузный понос).

В эксперименте используют 40 телят от 20-дневного до 3-месячного возраста. Формируют две группы животных по принципу аналогов по 20 телят в каждой группе. Всем телятам проводят симптоматическое лечение (сердечные средства, солевые растворы - внутривенно).

Животным первой группы задают перорально заявляемый препарат по 10 доз 3 раза в день.

Животным второй группы задают перорально "Бактисубтил" по 3 капсулы 3 раза в день.

Лечение проводят до исчезновения клинических признаков.

Результаты эксперимента представлены в таблице.

Из таблицы видно, что у 75% животных первой группы признаки диареи проходят на первые сутки, на вторые сутки - у остальных телят. Во второй группе признаки диареи проходят в основном на 2-3 сутки.

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к ветеринарной микробиологии и терапии. Биологический препарат содержит культуру штамма Bacillus subtilis 4/97 в концентрации не менее 10⁸ спор в 1 мл питательной среды, состоящей из отвара лекарственных растений: топинамбура, мелиссы, тысячелистника при следующем соотношении компонентов, мас.%: клубни топинамбура 2,0-3,0; вегетативная часть топинамбура 2,0-3,0; трава мелиссы 2,0-3,0; трава тысячелистника обыкновенного 2,0-3,0; вода до 100. Биологический препарат безвреден, обладает выраженным патогенетическим действием, высоким терапевтическим эффектом и широким спектром действия. 1 табл.

Биологический препарат для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний у молодняка животных, содержащий культуру Bacillus subtilis, отличающийся тем, что из культур Bacillus subtilis он содержит культуру штамма Bacillus subtilis 4/97 в концентрации не менее 10⁸ спор в 1,0 мл питательной среды на основе отвара из клубней и вегетативной части топинамбура, мелиссы и травы тысячелистника обыкновенного, взятых при следующем соотношении компонентов, мас. %:
Клубни топинамбура - 2,0 - 3,0
Вегетативная часть топинамбура - 2,0 - 3,0
Трава мелиссы - 2,0 - 3,0
Трава тысячелистника обыкновенного - 2,0 - 3,0
Вода - Остальное