МЕТОД ХИМИЧЕСКОГО КЛИРИНГА УДАЛЕННОГО ПРЕПАРАТА С ЦЕЛЬЮ ВЫЯВЛЕНИЯ ЛИМФАТИЧЕСКИХ УЗЛОВ Российский патент 2002 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к патоморфологии и онкологии, когда необходимо осуществить поиск достаточно большого количества лимфатических узлов, в том числе и малого диаметра.

В настоящее время одной из задач в онкологии является точное определение стадии опухолевого процесса. Разрешение этой проблемы позволит более дифференциально подходить к тактике лечения больного как на интраоперационном этапе (определение объема оперативного вмешательства), так и в послеоперационном периоде для решения вопроса о целесообразности прохождения адъювантной химиотерапии.

Определение стадии первичной опухоли (Т) и обнаружение очагов отдаленного метастазирования (М), как правило, не представляет серьезных трудностей. Основные сложности в диагностике связаны с выявлением возможного лимфогенного распространения опухолевого процесса (N).

При этом большинство авторов считают, что чем большее количество лимфатических узлов из разных коллекторов регионарного лимфооттока будет выявлено, тем более точно можно установить стадию заболевания [3].

Одной из наиболее распространенных методик выявления лимфоузлов является пальпаторное исследование клетчатки удаленного препарата. Хотя ряд авторов и указывают на возможность обнаружения до 40 лимфатических узлов с помощью данного метода [1] , большинство исследователей придерживаются мнения, что применение данного способа обычно позволяет выявить не более 5 лимфоузлов в препарате [2] . В тоже время, в большинстве клинических протокольных исследованиях минимальное количество гистологически исследованных лимфатических узлов должно составлять как минимум 8.

Прототипом предлагаемой методики проводки препарата послужил способ, предложенный в 1994 году Morikawa [4]. После отсепаровывания жировой клетчатки от стенки кишки, производилась очистка жировой ткани путем фиксации биоматериала 10% раствором формалина, содержащий 0,01% метиленового синего в течение 48 ч с последующей последовательной проводкой в растворителях: в 70% спирте на 12 ч, 90% спирт 24 часа, 100% спирт 48 часов, в 100% ацетоне 24 часа, в 100% ацетоне 48 часов. Для очистки применялся ксилен с экспозицией 48 часов. В последующем для дополнительного обезжиривания и обесцвечивания повторно использовался ксилен. Лимфатические узлы выявляли с помощью трансиллюминации исследуемого препарата. Применение данного способа позволило в среднем выявить 74 узла на препарат. Однако несмотря на достаточно большое количество выявляемых лимфатических узлов, данный способ достаточно редко применяется в практике в связи с длительностью проводки (более 10 дней) и токсичностью ряда применяемых компонентов. Так, используемый ксилол, является достаточно токсичным препаратом. Он оказывает действие на кровь и костный мозг, раздражает кожу. В организм попадает через легкие. Согласно Американской ассоциации стандартов, максимальная допустимая концентрация ксилола в воздухе составляет 0,02%, что требует специальных условий для работы с ним.

Аналогом предлагаемого способа проводки препарата стала методика, предложенная в 1997 году Коren [6]. Метод заключался в проводке удаленного препарата в растворе, состоящем из 95% этанол - 65%, диэтилового эфира - 20%, ледяной уксусной кислоты - 5% и формалина - 10%. Длительность экспозиции составляла 6 часов. Применение данного метода позволило выявить порядка 12 лимфоузлов на препарат. Отрицательными моментами использования данного способа являются сложность приготовления раствора, большое количество используемых компонентов и малая стабильность раствора, в связи с чем необходимо его приготовление непосредственно перед использованием.

Целью предлагаемого метода является увеличение безопасности и определение достаточного количества лимфатических узлов при относительно небольшом времени проводки.

Предложенный новый способ заключается в следующем. После удаления препарата производится отсепаровывание параректальной клетчатки от стенки кишки. Выделенная жировая ткань растягивается на рамке и погружается в н-гексан. Время экспозиции составляет 3 часа. После этого препарат промывается проточной водой и погружается в 70% этанол с экспозицией 12-14 часов.

Поиск лимфоузлов осуществляется путем последовательной нарезки жировой ткани с шагом 0,3-0,5 см. Лимфатические узлы видны в виде белесоватых образований на фоне бурой жировой клетчатки (см. чертеж).

Применение нового метода позволило выявить в среднем до 31 лимфатических узлов на препарат, при этом минимальное количество составило 16, максимальное - 55 узлов.

Н-гексан относится к слаботоксичным препаратам. По данным Nelson максимальная допустимая концентрация при работе в помещении в течение 8 часов равна 0,05% [5], что в 2,5 раза больше, чем у ксилола. При концентрации н-гексана в воздухе 0,5%, у человека выявляется токсический эффект в виде головокружения. Других серьезных токсических явлений отмечено не было.

Таким образом, предложенный способ химической очистки клетчатки удаленного препарата позволяет не только выявить достаточное (не меньшее, чем при использовании других подобных методов) количество лимфатических узлов, но и является относительно быстрым по времени, простым в использовании и мало токсичным.

Пример 1: больная М., 46 лет, история болезни 2561-99 г., находилась в ГНЦК с диагнозом рак нижнеампулярного отдела прямой кишки T3NxMO. 27.09.99 больной в плановом порядке было выполнено оперативное вмешательство в объеме брюшно-промежностной экстирпации прямой кишки, расширенная аорто-подвздошно-тазовая лимфаденэктомия. При гистологическом исследовании удаленного препарата - опухоль представлена умеренно дифференцированной аденокарциномой, размером 45 мм в диаметре, прорастающая все слои кишечной стенки и врастающая в окружающую клетчатку на глубину 1 мм. После химического клиринга удаленной жировой клетчатки было выявлено 55 лимфатических узлов, в максимальном диаметре не превышающие 5 мм. При этом в одном лимфоузле диаметром до 2 мм был выявлен метастаз умеренно-дифференцированной аденокарциномы.

Пример 2: больной И. , 40 лет, история болезни 106-00 г., находился в ГНЦК с диагнозом рак нижне-ампулярного отдела прямой кишки T3NxMO. 21.01.00 больному в плановом порядке было выполнено оперативное вмешательство в объеме брюшно-промежностной экстирпации прямой кишки. При гистологическом исследовании удаленного препарата - опухоль представлена низкодифференцированной аденокарциномой, размером 60 мм в диаметре, прорастающая все слои кишечной стенки и не прорастающая в окружающую клетчатку. После химического клиринга удаленной жировой клетчатки было выявлено 43 лимфатических узлов. Лимфоузлы, диаметр которых в максимальном диаметре не превышал 5 мм, составили 62,8% (27) от общего количества. Метастазы низкодифференцированной аденокарциномы были выявлены в двух узлах, один из которых не превышал в своем размере 5 мм.

Таким образом, по сравнению со способом-прототипом, предложенный метод имеет следующие преимущества: прост в выполнении, не требует приготовления сложных растворов, малотоксичен, занимает относительно мало времени, имеет небольшую себестоимость.

ЛИТЕРАТУРА
1. Andreola S., Leo E., Belli F., Bufalino R., Tomasic G., Lavarino C., Baldini MT., Meroni E. Manual dissection of adenocarcinoma of the lower third of the rectum specimens for detection of lymph node metastases smaller than 5 mm //Cancer. - 1996. - Vol. 77, N 4. - P. 607-612.

2. Hida J., Yasutomi M., Maruyama Т., Fujimoto K., Uchida Т., Okuno K. Lymph node metastases detected in the mesorectum distal to carcinoma of the rectum by the clearing method: justification of total mesorectal excision //J. Am. Coll. Surg. - 1997. - Vol. 85, N 6. - Р. 584-588.

3. Mëorschel M., Heintz A., Dutkowski P., Bëottger Т., Junginger Т. Influence of the number of dissected lymph nodes on local recurrence of rectal carcinomas. A staging effect //Chirurg, - 1997. - Vol. 85, N 10. - P. 1023-1028.

4. Morikawa Eiji, Masayuki Yasutomi, Katsuhisa Shindou et. al "Distribution Of Metastatic Lymph Nodes In Colorectal Cancer By The Modified Clearing Method" Dis Colon Rectum, March, 1994, p. 219-223.

5. Nelson K.W. et al., J.Ind.Hyg.Toxicol., 25, p. 282, 1943.

6. Rumellia Koren, Annette Siegal, Baruch Klein et. al "Lymph Node-Revealing Solution", Dis Colon Rectum, 4, 1997, p. 407-10.6

Изобретение относится к медицине, патоморфологии и онкологии, может быть использовано для выявления большого количества лимфатических узлов в жировой клетчатке удаленного препарата. Производят отсепаровывание параректальной клетчатки от стенки кишки. Выделенную жировую ткань растягивают на рамке и погружают в н-гексан. Время экспозиции составляет 3 ч. После этого препарат промывают проточной водой и погружают в 70% этанол с экспозицией 12-14 ч. Поиск лимфоузлов осуществляют путем последовательной нарезки жировой ткани с шагом 0,3-0,5 см. Способ обеспечивает уменьшение времени обнаружения лимфатических узлов. 1 ил.

Способ обнаружения лимфатических узлов в удаленном препарате кишки путем отсепаровывания клетчатки от стенки кишки, растягивания ткани и погружения в раствор, отличающийся тем, что в качестве раствора берут н-гексан, погружают ткань на 3 ч, затем промывают в проточной воде, после чего дополнительно погружают в 70% этанол с экспозицией 12-14 ч и осуществляют нарезку ткани с шагом 0,3-0,5 см, в которой определяют лимфатические узлы с помощью транс-иллюминации.