АНТИГИПОКСИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО Российский патент 2003 года по МПК A61K38/05 A61P9/00 A61P43/00 

Изобретение относится к области медицины, в частности к новым антигипоксическим средствам.

В качестве антигипоксантов используют вещества, относящиеся к различным фармакологическим группам: нейролептики, транквилизаторы, адреномиметики, антиоксиданты, антагонисты кальция, стабилизаторы клеточных мембран, ингибиторы циклооксигеназы и т.д [10].

Считается перспективным включение в комплексную терапию церебрального инсульта, инфаркта миокарда, крупозной пневмонии, хронической сердечной недостаточности таких антигипоксантов прямого действия, как натрия оксибутират, гутимин, олифен, амтизол, фосфокреатин, что позволяет повысить эффективность лечения и сократить сроки пребывания больных в стационаре [7, 8, 9] . Антигипоксант стобадин оказывает положительное влияние при нарушениях сердечного ритма [11, 12].

Однако для многих антигипоксантов характерна избирательность и узкая широта терапевтического действия, а также недостаточность антигипоксического эффекта [4] . Так, показано, что использование антигипоксантов (барбитураты короткого действия, бензодиазепины) целесообразно только при тяжелых формах ишемического инсульта, сопровождающегося выраженной общемозговой симптоматикой, а при преобладании очаговой симптоматики необходимы уже другие препараты, повышающие устойчивость к гипоксии - ноотропы [1]. Антигипоксанты центрального действия способны снижать уровень адаптационных возможностей в постгипоксическом периоде [2]. Проведение антигипоксической терапии и профилактики может усиливать патологические процессы [4].

Целью настоящего изобретения является расширение ассортимента антигипоксических средств за счет высокоэффективного и безопасного препарата, оказывающего воздействие на патогенетические механизмы гипоксических состояний различного генеза и лишенного указанных для антигипоксических средств недостатков.

Поставленная цель достигается применением тимогена (L-глутамил-L-триптофана).

Заявляемый препарат широко используется в качестве иммуностимулятора при многих заболеваниях и практически не имеет побочных эффектов [5].

Оценку антигипоксического действия препарата проводили на экспериментальных моделях гиперкапнической, гипобарической, гемической и гистотоксической гипоксии [6], а также на здоровых добровольцах с использованием теста по Штанге и по Генчи [3].

Применение тимогена в качестве антигипоксанта предложено впервые. Заявляемое решение широко применимо, так как тимоген выпускается в промышленных масштабах. Примеры, подтверждающие антигипоксическое действие тимогена, приведены ниже.

Пример 1. Эффективность применения тимогена при гиперкапнической гипоксии.

Исследование проводили на лабораторных белых мышах-самцах массой 17-22 г, разделенных на контрольную и опытную группы по 16 животных в каждой. Опытным животным однократно подкожно вводили тимоген в дозе 10 мкг/кг. Контрольные животные получали соответствующее по объему количество изотонического раствора хлорида натрия. Через 60 минут мышей помещали в герметично закрытый стеклянный сосуд объемом 110 мл. Фиксировали время начала асфиксии, после чего животных освобождали. Условия гипоксии повторяли с теми же животными через 3, 6 и 24 часа.

Первоначально при помещении животных в гермобъем не были зафиксированы достоверные различия во времени наступления асфиксии в опытной и контрольной группах. При повторной гипоксии (через 3 часа) наблюдали статистически достоверное увеличение периода до наступления признаков асфиксии у животных опытной группы по сравнению с контролем на 16,4%. Наиболее значимо антигипоксические свойства тимогена проявлялись при воспроизведении гиперкапнической гипоксии через 6 и 24 часа после введения препарата. Развитие признаков асфиксии в опытной группе отмечали значительно позже, различие с контрольной группой составило 47-51% и было статистически достоверным (таблица 1).

Таким образом, тимоген оказывал антигипоксическое действие на модели гиперкапнической гипоксии, а также повышал адаптационные возможности организма в постгипоксический период, что является существенным достоинством препарата.

Пример 2. Действие тимогена на модели гипобарической гипоксической гипоксии.

Для моделирования острой гипобарической гипоксии использовали проточную камеру с поглотителем углекислого газа при внешней температуре 18-22^oС. Осуществляли "подъем" крыс со скоростью 50 м/с до высоты 11500-12000 м - смертельной площадки (чему соответствовало давление 145 мм рт.ст. или 0,2 атм). Определяли время жизни на смертельной площадке (от момента подъема на смертельную площадку до наступления смерти животного), время потери позы (время нахождения в барокамере до момента, когда крыса принимала боковое положение и утрачивала способность поддерживать позу), выживаемость (количество животных, выдержавших пребывание на смертельной площадке в течение 20 мин в % от общего числа животных).

За 1 час до помещения животного в барокамеру в опытной группе крысы получали подкожно тимоген в дозе 10,0 мкг/кг, в контрольной - соответствующий объем изотонического раствора хлорида натрия.

При исследовании защитного действия тимогена на данной модели установлено, что в контрольной группе, состоявшей из 18 крыс, погибли все животные. При этом время потери позы составило 2,04±0,11 мин; а длительность жизни 4,07±0,48 мин. При профилактическом введении тимогена из 18 животных выжило 4, время потери позы и время жизни погибших животных статистически достоверно не отличались от контрольного и составляли соответственно 1,85±0,08 мин и 3,79±0,56 мин.

Таким образом, тимоген оказывал антигипоксическое действие на модели гипобарической гипоксической гипоксии.

Пример 3. Действие тимогена на модели гемической гипоксии.

В качестве еще одной модели гипоксии мы выбрали модель острой гемической гипоксии, которую воспроизводили при помощи метгемоглобинобразования, достигаемого путем введения крысам анилина в дозе 500 мг/кг подкожно. Тимоген вводился в дозе 10 мкг/кг подкожно за 1 час до анилина. В каждой группе (опытная, контрольная) было по 10 животных.

После введения крысам анилина наблюдалось постепенное развитие нарушения проводимости миокарда (как атриовентрикулярной, так и внутрижелудочковой) с урежением частоты сердечных сокращений, амплитуды зубцов R и S постепенно увеличивались, затем уменьшались (таблица 2). Гибель животного наступала через 126,9±14,9 мин в 100% наблюдений.

Профилактическое введение тимогена приводило к стабилизации сердечного ритма, на атриовентрикулярную проводимость препарат не влиял, так при его применении не происходило изменения динамики величины интервала PQ. Применение препарата способствовало увеличению амплитуд зубцов ЭКГ. Продолжительность жизни животных тимоген удлинял до 141,5±8,6 мин.

Таким образом, на модели гемической гипоксии тимоген проявлял антигипоксические свойства, что кроме выраженной тенденции к увеличению продолжительности жизни животных проявлялось в улучшении энергетического состояния миокарда.

Пример 4. Действие тимогена на модели гистотоксической гипоксии.

Опыт проводили на 32 мышах-самцах массой 16-20 г, по 16 животных в опытной и контрольной группах. Гемическую гипоксию вызывали однократным внутрибрюшинным введением натрия нитропруссида в дозе 25 мг/кг. За 1 час до этого животные опытной группы получали однократно подкожно раствор тимогена в дозе 10 мкг/кг, в качестве плацебо в контрольной группе использовали изотонический раствор хлорида натрия. Фиксировали продолжительность жизни животных.

Тимоген статистически достоверно повышал продолжительность жизни мышей на 33% (см. чертеж), оказывая антигипоксическое действие на модели гистотоксической гипоксии.

Пример 5. Влияние тимогена при проведении пробы с задержкой дыхания.

Проводили пробу с задержкой дыхания на вдохе (проба Штанге) и на выдохе (проба Генчи). В качестве испытуемых выступили здоровые добровольцы, мужчины в возрасте 22-26 лет, которые были разделены на опытную и контрольную группы по 15 человек. У каждого добровольца пробы проводились дважды с интервалом в 7 дней: первое исследование - фоновое и второе - с предварительным (за 15 мин до исследования) интраназальным введением раствора 100 мкг тимогена (по 8-10 капель 0,01%-ного стерильного раствора в каждый носовой ход в течение 5-7 минут) или стерильного изотонического раствора хлорида натрия в соответствующем объеме (двойным слепым методом). Длительность задержки дыхания определяли по секундомеру.

В контрольной группе при проведении пробы Штанге время задержки дыхания увеличилось на 6,7%, а при проведении пробы Генчи уменьшилось на 5,3%, но данные изменения были статистически недостоверными. В опытной группе наблюдали при проведении обеих проб статистически достоверное увеличение времени задержки дыхания на 26% и 20% соответственно (таблица 3).

Таким образом, тимоген оказывал антигипоксическое действие при его использовании у людей, что проявлялось в увеличении времени задержки дыхания как на вдохе, так и на выдохе.

Источники информации
1. Гусев Е.И., Скворцов В.И. Современные представления о лечении острого церебрального инсульта. //Консилиум-Медикум. - 2000. - Т.2, 2. - С. 3-8.

2. Кораблев М.В., Лукиенко П.И. //Противогипоксические средства. Минск, Беларусь, 1976.

3. Лечебная физкультура и врачебный контроль: Учебник под редакцией В.А. Епифанова, Г.Л. Апанасенко. - М.: Медицина, 1990.

4. Лукьянова Л.Д. Биоэнергетические механизмы формирования гипоксических состояний и подходы к их фармакологической коррекции. //Фармакологическая коррекция гипоксических состояний (сборник трудов института фармакологии АМН СССР). Под ред. проф. Л.Д. Лукьяновой, М., 1989. - С. 11-44.

5. Машковский М.Д. Лекарственные средства, 2 т. М.: Медицина, 1998.

6. Методические рекомендации по экспериментальному изучению препаратов, предлагаемых для клинического изучения в качестве антигипоксических средств. - М., 1990.

7. Недошивин А.О., Кутузова А.Э., Перепеч Н.Б. Применение милдроната в комплексной терапии хронической сердечной недостаточности. //Клин. медицина, 1999; 3: 41-3.

8. Недошивин А. О. , Перепеч Н.Б. Применение неотона (экзогенного фосфокреатина) в комплексной терапии хронической сердечной недостаточности. //Клин. медицина, 1996; 6: 45-8.

9. Перепеч Н.Б. Полная нейрогуморальная блокада - что дальше? //Консилиум-Медикум. - 2001. - Т.2, 2. - С. 13-17.

10. Фармакологическая коррекция гипоксических состояний (материалы 2-ой всесоюзной конференции), ч. I-III, Гродно, 1991.

11. Misik V., Ondrias К., Stasko A. EPR spectroscopy of free radical intermediates of antiarrhythmic-antihypoxic drug stobadine, a pyridoindole derivative. //Life Sci. - 1999. - Vol. 65, 18-19. - С. 1879-1881.

12. Ondrias K., Hromadova M. Antiarrhythmic-antihypoxic drug stobadine inhibits copper-induced peroxidation of low density lipoprotein. //Pharmazie. - 1992. - Vol. 47, 5. - С. 392.

Предложено антигипоксическое средство, представляющее собой тимоген (L-глутамил-L-триптофан). Изобретение расширяет арсенал средств указанного назначения, в том числе при гиперкапнической, гипобарической, гемической и гистотоксической гипоксии. 3 табл., 1 ил.

Применение тимогена (L-глутамил-L-триптофана) в качестве антигипоксического средства.