СПОСОБ ПОДАВЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ВИРУСА ПРОСТОГО ГЕРПЕСА В КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК (ВАРИАНТЫ) Российский патент 2003 года по МПК A61K35/64 

Изобретение относится к области медицины и биологии и касается вопросов противовирусной активности препаратов.

В медицинской практике для подавления активности вируса простого герпеса - 1 (ВПГ-1), с целью защиты живого организма от инфицирования указанным вирусом, используют препарат Зовиракс (см. Справочник Видал/Vidal, Лекарственные препараты в России, 1996, стр.242-243). Однако зовиракс при его применении оказывает ряд побочных действий на организм человека со стороны:
- желудочно-кишечного тракта;
- почек;
- кровеносной системы;
- центральной нервной системы.

Он также имеет ряд противопоказаний, например, нельзя его использовать женщинам в период беременности.

Известен способ подавления активности вируса простого герпеса с применением водного раствора меда, полученного по патенту RU 2155051, опубликованному 27.08.2000 г. , свободного от вышеуказанных недостатков, когда для этой цели применяют прототип зовиракса. Согласно техническому решению по патенту 2155051 водный раствор меда получают с использованием в качестве растворителя дистиллированной воды, замороженной при температуре минус 20^oС, с растворением затем меда путем нанесения его на поверхность полученного льда в весовом соотношении 4:1 и выдержкой при охлаждении в течение 20 суток при минус 20^oС для образования кристаллов меда.

Однако в упомянутом решении не известны оптимальные соотношения водного раствора меда и культуральной среды, при которых достигается эффективное лечение ВПГ-1.

Известен также способ подавления герпетической инфекции зовираксом в дозах:
- перорально - по 200 мг 5 раз в сутки;
- внутривенное введение в дозе 5 мг/кг веса каждые 8 часов
(см. Внутренние болезни, под редакцией Т.Р. Харрисона, Медицина, М., 1994, стр.91-92) - прототип. Однако, как было отмечено, он обладает высокой токсичностью и нет приемлемых для организма вводимых доз.

Задачей предлагаемого изобретения является решение вопроса о подавлении активности ВПГ-1 способами с применением препаратов, не обладающих токсичностью, и при оптимальных соотношениях доз.

Это достигается тем, что в известном способе подавления активности ВПГ-1 в культуре клеток, согласно которому в последние вводят водный раствор меда, полученный вышеописанным способом по патенту RU 2155051, в культуру клеток Vero E-G или Нер-2, инфицированных вирусом простого герпеса, водный раствор меда вводят в количестве 0,1÷1,4 мл стандартного 0,5% раствора к 1,9÷1,6 мл культуральной среды.

Кроме того, в способе подавления активности вируса простого герпеса в культуре клеток, согласно которому в культуру клеток, инфицированных вирусом простого герпеса, вводят препарат Зовиракс, дополнительно в культуру клеток вводят водный раствор меда, полученный вышеописанным способом по патенту RU 2155051, при следующем соотношении компонентов:
Зовиракс - 0,0025 - 0,005 мг на 1 мл питательной среды
Водный раствор меда - 0,0125 - 0,5% на 1 мл питательной среды
Согласно фармакопейной статье предприятия (ФСП 42) 000 МП "Северная пчела" водный раствор меда, полученный описанным способом, имеет название "Криомелт МН" (см. стандарт качества лекарственного средства, титульный лист прилагается).

Представлена таблица 1 с результатами исследования противовирусной активности препарата - водного раствора меда (криомелт МН), введенного в культуру клеток Vero E-G или Нер-2, инфицированных вирусом простого герпеса в инфекционно-токсических дозах (ИТД) 1 ИТД и 10 ИТД, в количестве 0,2 мл стандартного 0,5% раствора к 1,8 мл культуральной среды.

Представлена таблица 2 с результатами исследования комплексного взаимодействия зовиракса и вышеупомянутого водного раствора меда (Криомелт МН). Результаты исследований показывают, что при введении водного раствора меда в культуру клеток, инфицированных вирусом простого герпеса в дозе 1 ИТД, индекс защиты (ИЗ) клеток составляет до 80%, а при дозе в 10 ИТД ИЗ клеток равен 60%. Применение водного раствора меда в указанных дозах: 0,1÷0,4 мл стандартного 0,5% раствора к 1,9÷1,6 мл культуральной среды способствует улучшению жизнеспособности клеток, усилению их мембранного потенциала.

Введение Криомелта МН в комплексе с 0,005 мг/мл зовиракса в культуру клеток, инфицированных ВПГ в дозе 1 или 10 ИТД, приводит к значению ИЗ клеток до 100%.

Экспериментально установлено, что введение данного препарата в многослойную культуру без вируса способствует стабилизации рН культуральной среды и улучшению морфологии клеток. Данный факт может играть важную роль при использовании его в культивировании клеток и вирусологических исследованиях.

Изобретение относится к медицине и биологии и касается вопросов противовирусной активности препаратов. Подавление активности вируса простого герпеса в культуре клеток осуществляют способом, согласно которому в культуру клеток Vero E-G или Нер-2, инфицированных вирусом простого герпеса, вводят водный раствор меда (Криомелт МН), полученный с использованием бидистиллированной воды путем ее замораживания до получения льда и охлаждения его с выдерживанием до достижения температуры в массе льда не выше -20^oС, с растворением затем меда путем нанесения его на охлажденную поверхность льда в количестве 20-25 мас.% и выдержкой его при охлаждении до образования кристаллов меда по всему объему льда в количестве 0,1-0,4 мл стандартного 0,5% раствора к 1,9-1,6 мл культурной среды. Подавление активности вируса простого герпеса в культуре клеток осуществляют способом, согласно которому в культуру клеток, инфицированных вирусом простого герпеса, вводят препарат Зовиракс и, кроме того, дополнительно в культуру клеток вводят водный раствор меда (Криомелт МН) при следующем соотношении компонентов: зовиракс 0,0025÷0,005 мг на 1 мл питательной среды; водный раствор меда - 0,0125÷0,5 на 1 мл питательной среды. Технический результат: способ обеспечивает подавление активности вируса простого герпеса в культуре клеток человека препаратами, не обладающими токсичностью, и при оптимальных соотношениях доз. 2 с.п.ф-лы, 2 табл.

1. Способ подавления активности вируса простого герпеса в культуре клеток, характеризующийся тем, что в культуру клеток Vero E-G или Hep-2, инфицированных вирусом простого герпеса, вводят водный раствор меда, полученный с использованием бидистиллированной воды путем ее замораживания до получения льда и охлаждения его с выдерживанием до достижения температуры в массе льда не выше минус 20^oC, с растворением затем меда путем нанесения его на охлажденную поверхность льда в количестве 20-25 мас.% и выдержкой его при охлаждении до образования кристаллов меда по всему объема льда, в количестве 0,1-0,4 мл стандартного 0,5% раствора к 1,9-1,6 мл культурной среды. 2. Способ подавления активности вируса простого герпеса в культуре клеток, характеризующийся тем, что в культуру клеток, инфицированных вирусом простого герпеса, вводят препарат Зовиракс и водный раствор меда, полученный с использованием бидистиллированной воды путем ее замораживания до получения льда и охлаждения его с выдерживанием до достижения температуры в массе льда не выше минус 20^oС, с растворением затем меда путем нанесения его на охлажденную поверхность льда в количестве 20-25 мас.% и выдержкой его при охлаждении до образования кристаллов меда по всему объему льда, при следующем соотношении компонентов:
Зовиракс - 0,0025-0,005 мг на 1 мл питательной среды
Водный раствор меда - 0,0125-0,5% на 1 мл питательной средым