СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ ОБСТРУКТИВНОГО БРОНХИТА У ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА Российский патент 2003 года по МПК G01N33/74 

Изобретение относится к области здравоохранения и найдет применение в педиатрии при диагностике характера течения обструктивного бронхита у детей раннего возраста. По современным данным обструктивный бронхит встречается с частотой 75-200 на 1000 детей раннего возраста и в 50% случаев является дебютом бронхиальной астмы ("Современные проблемы пульмонологии детского возраста". С.Ю.Каганов, Пульмонология, 1992, 2, стр. 6-12).

Бронхиальная астма является причиной инвалидизации детей и взрослого населения, что приводит к значительным экономическим потерям. Общие расходы, связанные с заболеванием в индустриально развитых странах, составляет 2% процента от всех расходов на здравоохранение (Материалы ВОЗ "Бронхиальная астма. Глобальная стратегия.", 1996 г.). В связи с этим особый интерес представляет поиск новых методов диагностики и прогнозирования течения первичных эпизодов бронхообструкции.

Проведенными исследованиями по научно-медицинской и патентной литературе выявлены различные способы прогнозирования течения обструкции дыхательных путей у детей раннего возраста.

Так, в работе Собх Мунисеф Собхи "Клиническое значение протеиназно-ингибиторной системы у детей первых трех лет жизни с рецидивирующим обструкивным бронхитом и бронхиальной астмой" (автореферат диссертации к.м.н., Москва, 1993 г. ) предлагается способ оценки характера течения обструктивного бронхита методом исследования активности протеолитических ферментов (пептид-гидролазы) бронхиального содержимого и их ингибиторов (а 1-ингибиторы).

Недостатком метода является его высокая инвазивность, а именно использование бронхоскопического исследования, сопровождающегося применением анестезии, механической травматизации дыхательных путей ребенка.

Известен "Способ прогнозирования частоты рецидивов инфекционных заболеваний дыхательных путей и стойкость оздоровления у дошкольников" (патент РФ 2169923, G 01 N 33/53, 33/48, БИ 18, 2001 г.) путем определения наличия условно-патогенной микрофлоры в кале, лейкоцитарной формулы крови, уровня Ig A, M, G, выявлением коррелятивной связи с силой корреляции менее 0,5 определяют напряженность иммунной системы, прогнозируют неблагоприятный вариант течения заболевания. Недостатком метода является его малая информативность, отражение реакции лишь иммунной системы, что не позволяет прогнозировать течение заболевания.

Известен "Способ дифференциальной диагностики бронхиальной астмы и облитерирующего бронхиолита у детей" (патент РФ 2159935, G 01 N 33/52, 33/483, 33/68, БИ 33, 2000 г.). Этот способ взят в качестве прототипа.

Способ заключается в оценке интенсивности флюоресценции жидкости бронхоальвеолярного лаважа. Причем измеряют интенсивность собственной флюоресценции внутриклеточных пиридиннуклеотидов при длине волны возбуждения 356 нм и длине волны регистрации 420-450 нм и флавпротеидов при длине волны возбуждения 440-480 нм и длине регистрации 510-550 нм, определяют отношение собственной флюоресценции внутриклеточных пиридиннуклеотидов и флавпротеидов, при величине отношений более 1 диагностируют бронхиальную астму, а при величине отношений менее 1 - облитерирующий бронхиолит. Недостатком способа является его недостаточная точность прогнозирования течения бронхообструктивного синдрома в сочетании с травматичностью (получение жидкости бронохоальвеолярного лаважа методом бронхоскопии.

Целью изобретения является повышение точности прогнозирования течения обструктивного бронхита у детей раннего возраста, что позволит предотвратить развитие брохиальной астмы.

Поставленная цель достигается исследованием сыворотки крови, в которой определяют содержание дофамина, серотонина и кортизола, и при показателях: увеличение концентрации дофамина до 3,6=1,2 мкг/л по сравнению с возрастной нормой 1,2±0,7 мкг/л, снижение концентрации серотонина до 8,7±2,1 мкг/л по сравнению с возрастной нормой 19±2,3 мкг/л и повышение кортизола до 1000±80,6 нмоль/л по сравнению с нормой 700±50,6 нмоль/л прогнозируют неблагоприятный исход заболевания.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом:
Определение дофамина проводится флюорометрическим методом (Б.М. Коган, И. В. Нечаев, ж. "Лабораторное дело" 1, 1979 г.). 1 мл цельной крови встряхивается в течение 5 мин с 5 мл Н-бутанола.

Затем проба центифугируется 10 мин при 3000 оборотах в мин. Органическую фазу переносят в пробирку, в которой содержится 0,4 мл 0,1% солянокислого цистеина, приготовленного на 0,1 N растворе НС1. В эту же пробирку приливают 6 мл гептана. Пробу встряхивают в течение 3 мин, затем центрифугируют 5 мин при 2000 оборотов в мин. Органическую фазу отбрасывают. Далее в 2 пробирки (контрольную и опытную) отбирают 0,4 мл неорганической фазы. Сюда же приливают 0,4 мл 0,1 моль натрий-ацетатного буфера ЭДТА, рН 6,9. В контрольную пробирку приливают 50 мкл 0,2 моль раствора йода, приготовленного на абсолютном спирте.

В опытную пробирку приливают 0,2 мл 0,1 N щелочного сульфита, приготовленного на 5N растворе NaOH. Через 2 мин в опытную пробирку приливается раствор щелочного сульфита, а в контрольную раствор йода. Через 3 мин в обе пробирки приливается 0,4 мл 5 N раствора усксусной кислоты. Все пробы ставят в кипящую баню на 6 мин. Затем охлаждают на льду и снимают показатели флюоресценции на спектрфлюометре Hittachi 3000. Для дофамина длина волны возбуждения 320 нм, а длина волны поглощения 375 нм.

Определение серотонина проводится также флюорометрическим методом. Для определения содержания серотонина в пробирку отбирается 0,4 мл неорганической фазы, приливается 0,1 мл 0,1 N ортофталевого альдегида, приготовленного на метаноле. Затем к пробе добавляют 6 мл 10 N раствора НС1. Пробу ставят в кипящую баню на 10 мин. Затем интенсивность флюоресценции снимают также на спектрфлюометре Hittachi относительно контрольной пробы. Для серотонина длина волны возбуждения 357 нм, а длина волны поглощения 470 нм.

Для расчета концентрации серотонина и дофамина используется формула, где за единицу флюоресценции принимается интенсивность стандартного раствора концентрации 0,001 мкг/л:
0,01х1000х1 мл показателей флюоресценции опытной пробы
0,4 мл (объем окислителей) х показатель флюоресценции стандарта.

Определение кортизола проводится иммуноферментным анализом с использованием стандартных наборов для определения кортизола в сыворотке крови. Для этого 50 мкл крови приливают в ячейку планшеты и при постоянном встряхивании инкубируют в термостате в течение 30 мин. Затем сыворотку отбирают, ячейку планшеты отмывают трижды фосфатным буфером и приливают 50 мкл конъюгата. Через 15 мин после развития окрашивания в темноте добавляют 20 мкл стабилизатора (концентрированный НС1). Интенсивность окрашивания пробы измеряют на вертикальном фотометре при длине волны 460 нм. Расчет концентрации кортизола проводится по калибровочной кривой, прилагаемой к прибору.

Клинические примеры
1. Больной Голда М., 11 месяцев, поступил в Детскую Больницу 2 с диагнозом: обструкивный бронхит, дыхательная недостаточность 2. Комплекс клинико-лабораторных исследований включал оценку показателей предлагаемым методом. Выявлено: содержание серотонина 6,52 мкг/л, дофамина 3,75 мкг/л, кортизола 1100 нмоль/л, что свидетельствовало о неблагоприятном прогнозе течения заболевания. Дальнейшие наблюдения за больным в течение двух лет выявило манифестацию бронхообструктивного синдрома, а именно формирование бронхиальной астмы.

2. Больной Чиноян Л., 8 месяцев, поступил в Детскую Больницу 2 с диагнозом: обструктивный бронхит, дыхательная недостаточность 2. Ребенку проведено комплексное клинико-лабораторное исследование согласно предлагаемому способу. Выявлено: содержание серотонина 20,7 мкг/л, дофамина 1,3 мкг/л, кортизола 670 нмоль/л. Прогнозировался благоприятный вариант течения заболевания, что в последующем подтверждено в процессе динамического наблюдения в течение двух лет.

Предлагаемый нами метод опробирован на большом клиническом материале (238 больных). Данные представлены в таблице.

Предлагаемый способ по сравнению с прототипом позволяет с большей точностью прогнозировать неблагоприятный исход обструктивного бронхита - переход в бронхиальную астму.

Изобретение относится к области медицины, в частности к педиатрии. Способ обеспечивает повышение точности прогнозирования течения обструктивного бронхита у детей раннего возраста. Проводят исследование биологической жидкости, при этом в сыворотке крови определяют показатели дофамина, серотонина, кортизола и при увеличении дофамина до 3,6±1,2 мкг/л (норма 1,2±0,7 мкг/л), снижении серотнина до 8,7±2,1 мкг/л (норма 19±2,3 мкг/л), увеличении кортизола до 1000±80,6 нмоль/л (норма 700±50,6 мкг/л) прогнозируют неблагоприятный исход обструктивного бронхита - переход в бронхиальную астму. 1 табл.

Способ прогнозирования течения обструктивного бронхита у детей раннего возраста методом исследования биологической жидкости, отличающийся тем, что в сыворотке крови определяют показатели дофамина, серотонина, кортизола и при увеличении дофамина до 3,6±1,2 мкг/л (норма 1,2±0,7 мкг/л), снижении серотонина до 8,7±2,1 мкг/л (норма 19±2,3 мкг/л), увеличении кортизола до 1000±80,6 нмоль/л (норма 700±50,6 нмоль/л) прогнозируют неблагоприятный исход обструктивного бронхита - переход в бронхиальную астму.