СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ЧАСТОТЫ ПОВТОРНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ У ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА, СТРАДАЮЩИХ ОСТРЫМИ РЕСПИРАТОРНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ Российский патент 2007 года по МПК G01N33/68 

Изобретение относится к области здравоохранения и найдет применение в педиатрии при прогнозировании кратности острых респираторных заболеваний у часто болеющих детей раннего возраста. Частые повторные заболевания детей представляют серьезную медико-социальную проблему, остающуюся по сей день одной из приоритетных в отечественной педиатрии. Пик заболеваемости ОРЗ у детей отмечается в возрасте от 6 месяцев до 6 лет, что определяется онтогенетическими особенностями данного возрастного периода, в частности, становлением нейроэндокринной и иммунной системы. В последние годы значительное внимание обращается на изучение цитокинов - медиаторов иммунной системы, регулирующих силу и продолжительность иммунного ответа. Баланс проапоптических и антиапоптических механизмов действия цитокинов может свидетельствовать о неблагоприятном течении воспалительного процесса. Под термином ЧБД нередко скрываются хронические, аллергические, врожденные и наследственные заболевания легких, что является одной из наиболее сложных диагностических, патогенетических и терапевтических проблем в пульмонологии (Вельтищев Ю.Е.. Каганов С.Ю., Таль В., 1986). Кроме того, иммунная система чрезвычайно чувствительна к воздействиям окружающей среды, повышению экологических нагрузок, что может результировать в той или иной степени иммунной недостаточности у этих детей (Мизерницкий Ю.Л., 1988, 1996, 1998).

Истоки хронизации бронхолегочного процесса лежат в раннем возрасте, когда еще не завершено созревание иммунной системы, ее дифференцировка в отношении Th-1 или Th-2 направленности иммунного ответа (K.Kawakabi, M.Eboriodou et al., 2002). Особый интерес, на наш взгляд, для оценки эффективности лечения и прогноза исхода заболевания представляет изучение провоспалительных цитокинов ФНО-α и ИНФ-γ.

Фактор некроза опухолей альфа совместно с интерфероном гамма усиливают экспрессию молекул главного комплекса гистосовместимости класса II на макрофагах, что важно для оценки механизмов генетической детерминированности иммунного ответа (Дранник Г.Н. 2003; Соколов Е.И., 1998).

На большом клиническом материале отобраны наиболее информативные показатели, характеризующие цитокиновый профиль у детей раннего возраста, часто и длительно болеющих респираторными заболеваниями: фактор некроза опухолей-альфа (ФНО-α) и интерферон-гамма (ИНФ-γ). Повышение спонтанной продукции ФНО-α и ИНФ-γ характеризует как процессы воспаления, так и процессы элиминации клеток путем прямой цитотоксичности или апоптоза. Индуцированная продукция позволяет оценить состояние клеток иммунной системы, их возможность адекватно отвечать на антигенную стимуляцию. Уровень нарушения продукции этих цитокинов отражает тяжесть патологического процесса, возможность рецедивирования респираторных заболеваний. Проведенными исследованиями по научно-медицинской и патентной литературе выявлены различные способы прогнозирования частоты респираторных заболеваний у детей. Так в работе Данилова Л.А. «Прогнозирование и течение исхода воспалительного процесса верхних дыхательных путей часто болеющих детей на основании оценки функционального состояния системного и местного иммунитета», автореферат диссертации кандидата медицинских наук, Москва, 1992 год, предложен способ оценки течения и исхода острых респираторных заболеваний у детей путем оценки функционального состояния Т-лимфоцитов в лимфоглоточном кольце методом нагрузочных тестов in vitro и в крови. Недостатком метода является низкая возможность прогнозирования частоты повторяемости респираторных заболеваний, так как получаемые данные характеризуют изменения лишь в клеточном звене иммунной системы, а также чрезвычайно проблематична оценка местного иммунитета ввиду анатомофизиологических особенностей верхних дыхательных путей, лимфоглоточного кольца.

В работе Чернышовой Г.С. «Эффективность иммунореабилитации детей, часто болеющих вирусными инфекциями», автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук, Ростов-на-Дону, 2004 г., предложен способ оценки исхода и кратности респираторных заболеваний путем изучения субпопуляционного состава лимфоцитов и гуморального звена иммунной системы. Недостатком вышеуказанного метода является низкая прогностическая информативность ввиду изолированной оценки клеточного и гуморального звеньев иммунной системы, ИНФ-γ. Известен способ прогнозирования заболеваемости респираторными инфекциями у детей раннего возраста (Патент РФ №2018832, 1990, МПК G01 №33/493, БИ №16, 1994) путем проведения кардиоинтервалографии (КИТ), по результатам которой рассчитывают величину моды, а на 10 день в пробе мочи проводят цветную осадочную пробу по Кимбаровскому. Недостатком метода является низкая возможность прогнозирования частоты респираторных заболеваний, так как показатели кардиоинтервалографии крайне лабильны у детей раннего возраста, а также техническое выполнение методики у них крайне затруднительно. Известен способ диагностики воспалительных процессов бронхолегочной системы у детей (Патент РФ №2256926, 2003 G 01 №33/68 БИ №20, 2005 г.) путем определения активности ферментов клеток крови сукцинатдегидрогеназы (СДГ) и α-гликофосфогидрогеназы (ГФДГ). Недостатком способа является низкая возможность прогнозирования рецидивов респираторных заболеваний, так как рассматриваются биохимические показатели, являющиеся универсальными критериями воспалительного процесса.

В качестве прототипа взят способ прогнозирования частоты рецидивов инфекционных заболеваний дыхательных путей и стойкость оздоровления у дошкольников (Патент РФ №2169923, 2001 г., G01 №33/53 БИ №18, 2001 г.) путем оценки иммунолабораторных показателей и определения наличия условнопатогенной микрофлоры в кале, лейкоцитарной формулы крови, уровня ИГ А, М, G, бактерицидной функции нейтрофилов в периферической крови с помощью НСТ-теста и фагоцитарной активности нейтрофилов. Недостатком способа является низкая практически-прогностическая значимость, громоздкость вычислений.

Целью изобретения является повышение точности прогнозирования частоты повторных заболеваний у детей раннего возраста страдающими острыми респираторными заболеваниями.

Поставленная цель достигается тем, что при исследовании крови у детей раннего возраста, часто и длительно болеющих респираторными заболеваниями, определяют уровень провоспалительных цитокинов фактора некроза опухолей-альфа и интерферон-гамма митоген-стимулированной и спонтанной продукции и рассчитывают индекс соотношения (ИС) индуцированной и спонтанной продукции. При значении индекса соотношений для фактора некроза опухолей-альфа ниже 0,85 и для интерферона-гамма ниже 0,45 прогнозируют высокую вероятность возникновения острых респираторных заболеваний у детей раннего возраста.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом. У больного утром натощак производят забор венозной крови в количестве 5 мл. Выделенные из крови мононуклеарные клетки культивируют в течение 24-48 часов при 37°С в присутствии 5% СО₂ в полной культуральной среде, содержащей среду RPMI 1640 с 10% инактивированной телячьей сывороткой, 5×10,5 М2-меркаптоэтанола, 2-миллимоль глютамина, 10 миллимоль буфера HEPES 50 мкг/мл гентамицина с добавлением митогенов (липополисахарид-с для индукции фактора некроза опухолей и форболмиристиатацетат для индукции интерферона-гамма). Параллельно оценивают спонтанную продукцию тех же цитокинов, для чего вместо митогена в пробу добавляли равный объем культуральной среды. Уровень цитокинов оценивают в супернатантах с помощью иммунферментного метода с наборами фирмы «Протеиновый контур». В дальнейшем рассчитывают индексы соотношений индуцированной и спонтанной продукции для фактора некроза опухолей альфа и интерферона гамма по формуле:

где ИС - индекс соотношений индуцированной спонтанной продукции ФНО-α и ИНФ-γ.

Клинические примеры.

Пример 1.

Больной Женя Ш. - 2 г. 2 мес, поступил в городскую детскую больницу №2 с диагнозом острый (простой) бронхит на 3-й день заболевания. Состояние при поступлении средней тяжести. Умеренно выражены катаральные симптомы, влажный кашель. Кожные покровы бледные, умеренный периоральный цианоз. Перкуторно в легких коробочный оттенок звука, аускультативно в верхних отделах сухие и единичные влажные среднепузырчатые хрипы. Из анамнеза выяснено, что ребенок в течение последнего времени (года) перенес 7 раз острые респираторные заболевания. Наряду с общеклиническими исследованиями ребенку проведена оценка иммунного статуса, цитокинового профиля по вышеописанной методике Выявлено, что индекс соотношений для фактора некроза опухолей альфа (ФНО-альфа) равен 0,34, для интерферона гамма (ИНФ-гамма), что расценено как истощение моноцитарно-макрофагального звена иммунной системы. Назначен комплекс лечебно-реабилитационных мероприятий, включающий препараты, стабилизирующие цитокиновый профиль. Катамнестическое наблюдение выявило достоверное снижение частоты повторных респираторных заболеваний.

Пример 2. Больной Илья Р. - 1 год. 8 мес. Поступил в городскую детскую больницу №2 с диагнозом ОРВИ, ринорфарингит на 3-й день заболевания. Состояние при поступлении средней тяжести. Отмечается редкий сухой кашель, затрудненное носовое дыхание. В легких при аускультации жесткое дыхание, сухие хрипы. Ребенок дважды перенес пневмонию, ежемесячно болеет ОРЗ. При исследовании цитокинового профиля выявлены индексы соотношений: для ФНО-альфа 0,47, для ИНФ-гамма 0,32, что свидетельствует о снижении иммуноадаптационных возможностях организма ребенка и возможности возникновения повторных респираторных заболеваний.

Проведение целенаправленных лечебно-реабилитационных мероприятий позволило снизить частоту респираторных заболеваний в течение года. В сравнительном порядке проведены катамнестические исследования у 32 детей раннего возраста, часто болеющих респираторными заболеваниями, которым не проводилось исследование по вышеописанной методике. Дети получали терапию согласно общепринятым схемам. Выявлено, что у детей этой группы сохранялась высокая частота респираторных заболеваний (более 5-6 раз в год).

Предлагаемым способом обследовано 148 детей.

Способ прогнозирования частоты повторных респираторных заболеваний у детей раннего возраста позволяет повысить возможность прогнозирования частоты респираторных заболеваний путем оценки уровня провоспалительных цитокинов: фактора некроза опухолей-альфа и интерферона-гамма, и провести комплекс целенаправленных лечебно-реабилитационных мероприятий.

Изобретение относится к области здравоохранения, а именно к педиатрии. Для осуществления способа прогнозирования частоты повторных заболеваний у детей раннего возраста, страдающих острыми респираторными заболеваниями, в крови определяют индуцированную митогенами и спонтанную продукцию провоспалительных цитокинов: фактора некроза опухолей альфа (ФНО-α) и интерферона гамма (ИНФ-γ) мононуклеарными клетками, рассчитываются индексы соотношений индуцированной и спонтанной продукции цитокинов и при значении индекса соотношений для фактора некроза опухолей альфа ниже 0,85, а для интерферона гамма ниже 0,45 определяют возможность повторных респираторных заболеваний. Использование способа позволяет повысить точность прогнозирования.

Способ прогнозирования частоты возникновения повторных респираторных заболеваний у детей раннего возраста, включающий определение иммунологических показателей, отличающийся тем, что определяют индуцированную митогенами и спонтанную продукцию провоспалительных цитокинов: фактора некроза опухолей альфа (ФНО-альфа) и интерферона гамма (ИНФ-гамма) мононуклеарными клетками, выделенными из крови, рассчитывают индексы соотношений индуцированной и спонтанной продукции цитокинов и при значении индекса соотношений для фактора некроза опухолей альфа ниже 0,85, а для интерферона гамма ниже 0,45 определяют возможность повторных респираторных заболеваний.