Способ прогнозирования возникновения гастроэнтерологического заболевания у детей Советский патент 1986 года по МПК G01N33/50 

ГчЭ Од СЛ

9)

Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии, и может быть использовано для прогнозирования возникновения гастроэнтерологических заболеваний у детей.

Цель изобретения - повышение точности способа (на 28%) за счет определения в слюне содержания молочной кислоты и гистамина.

Способ осуществляют следующим образом.

У ребенка утром натощак собирают слюну в количестве 3,5 мл. Слюну центрифугируют в течение 15 мин при 300 об/мин. В центрифугате определяют концентрацизо молочной кислоты и концентрацию гистамина известными методами.

Ход определения. В центрифужные пробирки наливают 2 мл-2%-ной трихлоруксусной кислоты и 0,4 мл слюны, перемешивают и центрифугируют 10 мин. Берут 1 мл центрифугата, прибавляют 0,5 мл 20%-ного CuSO , 5 мл И 0,5 г окиси кальция (про каленной), тщательно перемешивают стеклянной палочкой до появления голубого окрашивания, оставляют стоять в течение 30 мин, центрифугируют. Затем в охлажденные в ледяной бане про бирки помещают 0,5 мл центрифугата, 2 капли 5%-ного CiiSO , 3 MJI химически чистой концентрированной H-SO (для пробы Соваля), тщательно перемешивают. В контроль берут 1 мл ,4 капли 5%-ного Си80,6мл Н SO Ставят пробирки на 5 мин в кипящую баню, потом в ледяную и добавляют по 2 капли (в контроль 4 капли) пара.оксидифенила. Размешивают палочкой, начиная с контрольной пробы. Пробирки помещают в баню при 33-36 С на ;30 мин после чего - в кипящую баню на 90 с (встряхившот в бане) и опять охлаждают на льду. Колориметрируют на ФЭК-56 в кюветах 5 мм при зеленом фильтре. Содержание молочной кислоты находят по стандартной кривой в мг%, построенной по растворам молочной кислоты с известной концентрацией. Для перевода результата в ммоль/л умножают результат на коэ.(М)ициент 0,111.

Для определения содержания гистамина проводят предварительную обработку слюны; к 2,5 мл слюны приливают равный объем перегнанного ацетона и энергетично встряхивают.

Смесь отгоняют до половины объема под вакуумом на водяной бане при температуре , охлаждают в холодильнике в течение 1 ч и после этого центрифугируют в течение 20 мин при 3000 об/мин.

В пробирку со шлифом наливают 1 мл центрифугата, добавляют 1 мл 1н. НСЮ , 0,2 мл 5н. NaOn, 1 г NaCl и 4 мл бутанол-хлороформной смеси. Пробы энергетнчно встряхивают 3 мин, а затем центрифугируют 10 мин при 1500 об/мин. Водную фазу отсасывают пипеткой, к органической фазе приливают 2 мл 0,1н. NaOH, насыщенного NaCl, встряхивают 2 мин и центрифугируют 10 ,5 мл органической фазы пе:реносят в другие пробирки, содержащие 2,5 мл 0,01н. НС1, встряхивают 3 мин и центрифугируют 10 мин. Кислотную фазу в количестве 1 мл, содержащую гистамин, отсасывают в отдельную пробирку.Затем в эту пробирку приливают 0,2 мл 1н. NaOH, перемешивают и добавляют 0,1 мл 0,1%-ного раствора ортофталевого альдегида в метаноле, снова перемешивают. Через 4 мин приливают 0,1 мл 1,5 М растйора фосфорной кислоты для стабилизации флюорофора.

Объем проб доводят водой до 5 мл и флюориметрируют. Величину флюоресценции измеряют при длине волны испускания 470 нм, используя для возбуждения флюоресценции светофильтр с максимумом пропускания 365 нм.

Параллельно с опытом проводят анлиз стандартного раствора и контрольной пробы. Стандарт: 0,05 и 0,1 мкг/мл гистамина доводят до 1,5 мл , приливают 0,5 мл 1н. НСЮ и проводят через все этапы опыта. Контроль: 1,5 мл HjO 0,5 мл 1н. НСЮ и проводят через все пробы. Расчет:

А-0,1 мкг

6,17(мкмоль/л) Б 1 мл

где А - интенсивность фл ооресценции

пробы за вычетом контроля; Б - интенсивность стандартной пробы за вычетом контроля; 6,17 гкоэффициент пересчета. В качестве критерия неблагоприятного прогноза берут уровень индекса молочная кислота/гистамин ниже 1,4. Частота встречаемости снгокенного индекса молочная кислота/гистами в группе эдоровьос детей 33%, а у детей с гастроэнтерологической пато логией 69%. П р и м е р 1. Валера К, , 4 года отнесен к группе часто болеющих детей, В анамнезе у него частые (67 раз в год) острые распираторные заболевания, грипп, отит, аденоиды II степени. Сам факт частой заболев емости считается риском по гастроэн терологической патологии (вероятнос Для уточнения степени риска маль чику было дополнительно проведено исследование слюны по предлагаемому способу. Для этого определены в сл не концентрации молочной кислоты и гистамина и их соотношение, которые соответственно равны 1,11 ммоль/л (норма 1,7 ммоль/л) 1,24 мк-моль/л (норма 0,99 мк-моль/л), 0,89 (норма 3 ,25) . Таким образом, индекс МК/Г, равньй 0,89, что нике нормы в 3,6 раза, является объективным доказательством риска гастроэнтерологического.заболевания . Мальчик в течение 1 г находился под диспансерным наблюдением, неоднократно осматривался врачом-педиатром. В связи с появлением жалоб на непостоянные боли в животе он был госпитализирован в клинику, где на основании всестороннего комплексного обследования был поставлен клинический диагноз: хронический гастродуоденит. Приме р 2. Марина А., 6 лет, посещает детский комбинат. Девочка отнесена к группе здоровых В анам незе инфекционные заболевания отсутствуют. Распираторные заболевания 12 раза в год. Физическое развитие соответствует возрасту. С целью прогнозирования возникновения гастроэнтерологического заболевания, у девочки была исследована слюна, определено в ней содержание молочной кислоты и гистамина, которые соответственно равны 1,23 м1-1оль/л и 0,87. Соотношение МКГ/Г равно 1,23 /0,87 1,41. Таким образом, индекс МК/Г, равный 1,41 указывает на отсутствие риска возникновенш гастроэнтерологичес кого заболевания. При катамйестическом наблюдении отмечено, что девочка никаких жалоб не предъявляет, в том числе гастроэнтерологических. Повторное исследование слюны по предлагаемому способу показало, что индекс МК/Г слюны равен 1,56. Заключение врача-педиатра: здорова. Предлагаемьй способ позволяет повысить точность прогнозирования на 28%. На осуществление способа не требуется больших затрат времени, он может быть проведен в течение 4-5 ч (известньо способ - несколько дней). Формула изобретения Способ прогнозирования возникновения гастроэнтерологического заболевания у детей путем исследования слюны, отличающийся тем, что, с целью повьшения точности способа, в слюне определяют содержание молочной кислоты и гисталиша и при значении отношения этих показателей 1,4 и ниже прогнозируют возникновение заболевания.

Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии, и может быть применено для прогнозирования возникновения гастроэнтерологических заболеваний у дестей. Цель изобретения - повьшение точности способа. У ребенка натощак собирают слюну в количестве 3,5 мл. Слюну центрифугируют 15 мин при 3000 об/ /мин. Б центрифуге известными методами определяют концентрацию молочной кислоты и гистамина. При значеi нии отношения эти показателей 1,4 и ниже прогнозируют возникновение заСЛ болевания .