3(5)-ГЕТЕРОАРИЛЗАМЕЩЕННЫЕ ПИРАЗОЛЫ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ КИНАЗЫ P38 Российский патент 2005 года по МПК C07D401/14 A61K31/415 A61P19/02 

Перекрестная ссылка на родственную заявку

Настоящая заявка имеет приоритет первоначальной заявки на патент США 60/047535, поданной 22 мая 1997 г.

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к новой группе пиразольных соединений, к композициям и к способам лечения нарушений, опосредованных киназой р38.

Предпосылки создания изобретения

Активируемые митогеном протеинкиназы (MAP) представляют собой семейство контролируемых пролином серин/треонин-киназ, которые активируют свои субстраты путем двойного фосфорилирования. Киназы активируются различными сигналами, включая пищевой и осмотический стресс, УФ-излучение, факторы роста, эндотоксин и воспалительные цитокины. Группа р38 МАР-киназы состоит из различных изоформ семейства MAP, включая р38α , р38β и р38γ , и наряду с другими киназами (например, MAPКАР-2 и МАРКАР-3) ответственна за фосформирование и активацию факторов транскрипции (например, ATF2, CHOP и MEF2C). Изоформы р38 активируются бактериальным липополисахаридом (ЛПС), физическим и химическим стрессом и провоспалительными цитокинами, включая фактор некроза опухоли (ФНО-α ) и интерлейкин-1 (ИЛ-1). Продукты фосфорилирования р38 опосредуют производство воспалительных цитокинов, включая ФНО и ИЛ-1, а также циклооксигеназы-2.

ФНО-α представляет собой цитокин, который первоначально продуцируется активированными моноцитами и макрофагами. Избыточное или нерегулируемое производство ФНО является одним из факторов, опосредующих многочисленные заболевания. Современные исследования показали, что ФНО обусловливает патогенез ревматоидного артрита. Дополнительные исследования показали, что ингибирование ФНО находит широкое применение при лечении воспаления, воспалительного заболевания кишечника, рассеянного склероза и астмы.

ФНО также участвует в возникновении вирусных инфекций, таких как ВИЧ, инфекций, возбудителями которых среди прочего являются вирус гриппа, вирус герпеса, включая вирус герпеса простого типа I (HSV-1), вирус герпеса простого типа II (HSV-2), вирус цитомегалии (CMV), вирус ветряной оспы (VZV), вирус Эпстайна-Барра, человеческий герпесвирус-6 (HHV-6), человеческий герпесвирус-7 (HHV-7), человеческий герпесвирус-8 (HHV-8), вирус ложного бешенства и ринотрахеита.

ИЛ-8 представляет собой другой провоспалительный цитокин, который продуцируется одноядерными клетками, фибробластами, эндотелиальными клетками и кератиноцитами и который связан с различными состояниями, включая воспаление.

ИЛ-1 продуцируется активированными моноцитами и макрофагами и участвует в воспалительной реакции. ИЛ-1 играет определенную роль во многих патофизиологических реакциях, включая ревматоидный артрит, лихорадку и снижение резорбции кости.

ФНО, ИЛ-1 и ИЛ-8 воздействуют на многие клетки и ткани, и они важны в качестве медиаторов воспаления широкого спектра болезней и болезненных состояний. Ингибирование этих цитокинов путем ингибирования киназы р38 с успехом применяется для устранения, уменьшения и облегчения многих таких болезненных состояний.

Различные пиразолы были описаны ранее. В патенте США 4000281 на имя Beiler и Binon описаны 4,5-арил-, гетероарилзамещенные пиразолы, обладающие антивирусной активностью в отношении как РНК-овых вирусов, так и ДНК-овых вирусов, таких, как миксовирусы, аденовирусы, риновирусы и различные вирусы из группы герпеса. В заявке WO 92/19615, опубликованной 12 ноября 1992 г., описаны пиразолы в качестве новых фунгицидов. В патенте США 3984431 на имя Сueremy и Renault описаны производные пиразол-5-уксусной кислоты, обладающие противовоспалительной активностью. В частности, описана [1-изобутил-3,4-дифенил-1Н-пиразол-5-ил] уксусная кислота. В патенте США 3254093 на имя Huisgen и др. описан способ получения пиразолов. В WO 83/00330, опубликованной 3 февраля 1983 г., описан новый способ получения производных дифенил-3,4-метил-5-пиразола. В WO 95/06036 описано получение пиразола и его производных. В патенте США 5589439 на имя Т.Goto и др. описаны производные тетразола и их применение в качестве гербицидов. В ЕР 515041 описаны производные пиримидилзамещенного пиразола в качестве новых сельскохозяйственных фунгицидов. В японском патенте 4145081 описаны производные пиразолкарбоновой кислоты в качестве гербицидов, применяемых на полях риса-падди, на сухих полях, а также на участках, не имеющих сельскохозяйственного значения. В японском патенте 5345772 описаны новые производные пиразола, обладающие выраженной ингибирующей активностью в отношении ацетилхолинэстеразы.

Также описано применение пиразолов для лечения воспаления. В японском патенте 5017470 описан синтез производных пиразола а качестве противовоспалительных, антиревматических, антибактериальных и антивирусных лекарственных средств. В заявке ЕР 115640, опубликованной 30 декабря 1983 г., описаны производные 4-имидазолилпиразола в качестве ингибиторов синтеза тромбоксана. В частности, описан 3-(4-изопропил-1-метилциклогекс-1-ил)-4-(имидазол-1-ил)-1Н-пиразол. В заявке WO 97/01551, опубликованной 16 января 1997 г., описаны пиразольные соединения в качестве антагонистов аденозина. В частности, описан 4-(3-оксо-2,3-дигидропиридазин-6-ил)-3-фенилпиразол. В патенте США 5134142 на имя Matsuo и др. описаны 1,5-диарилпиразолы, обладающие противовоспалительной активностью.

В патенте США 5559137 на имя Adams и др. описаны новые пиразолы (1,3,4-замещенные) в качестве ингибиторов цитокинов, предназначенные для лечения связанных с цитокинами заболеваний. В частности, описан 3-(4-фторфенил)-1-(4-метилсульфинилфенил)-4-(4-пиридил)-5Н-пиразол. В заявке WO 96/03385, опубликованной 8 февраля 1996 г., описаны 3,4-замещенные пиразолы, обладающие противовоспалительной активностью. В частности, описан 4-[1-этил-4-(4-пиридил)-5-трифторметил-1H-пиразол-3-ил]бензолсульфонамид.

Было установлено, что пиразольные соединения по изобретению могут применяться в качестве ингибиторов киназы р38.

Описание изобретения

Класс замещенных пиразолильных соединений, пригодных для лечения опосредованных киназой р38 заболеваний, представлен соединениями формулы 1:

где R¹ выбирают из группы, включающей гидрид, алкил, циклоалкил, алкенил, алкинил, гетероциклил, циклоалкилалкилен, галоалкил, гидроксиалкил, аралкил, алкоксиалкил, меркаптоалкил, алкилтиоалкилен, амино, алкиламино, ариламино, аминоалкил, алкиламиноалкилен, гетероциклилалкилен, аминокарбонилалкилен и алкиламинокарбонилалкилен,

R² выбирают из группы, включающей гидрид, алкил, алкенил, алкинил, гетероциклил, галоалкил, гетероциклилалкил, амино, алкиламино, аминоалкил, алкокси, алкилтио, карбокси, алкоксикарбонил, карбоксиалкил, аминокарбониламино, алкиламинокарбониламино, алкилсульфонил, аминосульфонил, алкилсульфониламино, аминосульфониламино, алкиламиносульфониламино и алкиниламино, причем гетероциклильные и гетероциклилалкильные группы необязательно замещены одним или несколькими радикалами, независимо друг от друга выбранными из группы, включающей алкилтио, алкисульфонил, алкилсульфинил, галоген, алкил, алкокси, арилокси, аралкокси, гетероциклил, галоалкил, амино, циано и гидрокси,

Ar¹ обозначает арил, необязательно замещенный одним или несколькими радикалами, независимо друг от друга выбранными из группы, включающей галоген, алкил, алкенил, алкинил, алкокси, алкенокси, алкилдиокси, алкилтио, алкилсульфинил, алкилсульфонил, амино, аминокарбонил, циано, алкоксикарбонил, формил, аминосульфонил, алкиламино, нитро, ариламино, алкилкарбониламино, галосульфонил, аминоалкил и галоалкил, и

HetAr² обозначает пиридинил, пиримидинил или хинолинил, необязательно замещенный одним или несколькими радикалами, независимо друг от друга выбранными из группы, включающей алкилтио, алкилсульфонил, алкилсульфинил, галоген, алкил, гетероциклил, алкокси, аралкокси, галоалкил, амино, циано, аралкил, алкиламино, циклоалкиламино, циклоалкениламино, ариламино, алкиниламино и аралкиламино, или их фармацевтически приемлемыми солями или их таутомерами.

Соединения формулы I могут применяться для лечения любого нарушения или болезненного состояния у человека и других млекопитающих, которые опосредуются или вызываются избыточным или нерегулируемым производством ФНО или киназы р38 у такого млекопитающего, но не ограничены этой областью применения. Таким образом, настоящее изобретение относится к способу лечения опосредованного цитокином заболевания, который включает введение эффективного количества взаимодействующего с цитокином соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли или его таутомера.

Соединения формулы I могут применяться для лечения воспаления у пациента и в качестве жаропонижающих средств для лечения лихорадки, но не ограничены этой областью применения. Соединения по изобретению могут применяться для лечения артрита, включая ревматоидный артрит, спондилоартропатии, подагрический артрит, остеоартрит, системную красную волчанку и ювенильный артрит, в частности остеоартрит, подагрический артрит и другие относящиеся к артриту состояния, но их применение не ограничено этими заболеваниями. Такие соединения могут применяться для лечения легочных нарушений или воспаления легких, включая респираторный дистресс-синдром взрослых, легочный саркоидоз, астму, силикоз и хроническое воспалительное заболевание легких. Соединения также могут применяться для лечения вирусных и бактериальных инфекций, включая сепсис, септический шок, сепсис, вызываемый грамотрицательными бактериями, малярию, менингит, кахексию, вызванную инфекцией или злокачественной опухолью, кахексию, вызванную синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИДом), СПИД, связанный со СПИДом комплекс болезней (ССК), пневмонию и болезни, вызываемые герпесвирусом. Соединения также могут применяться для лечения болезней, связанных с резорбцией кости, таких как остеопороз, эндотоксического шока, синдрома токсического шока, связанного с реперфузией повреждения, аутоиммуного заболевания, включая реакцию "трансплантат против хозяина" и отторжения аллотрансплантата, сердечно-сосудистых заболеваний, включая атеросклероз, тромбоз, застойную сердечную недостаточность и связанное с реперфузией повреждение сердца, связанного с реперфузией повреждения почки, болезни печени, нефрита и связанной с инфекцией миалгии.

Соединения по изобретению также могут применяться для лечения гриппа, рассеянного склероза, рака, диабета, системной красной волчанки (СКВ), болезней, имеющих кожные проявления, таких как псориаз, экзема, ожоги, дерматит, келоидные образования и образование рубцов на ткани. Соединения по изобретению также могут применяться для лечения нарушений желудочно-кишечного тракта, таких как воспаление кишечника, болезнь Крона, гастрит, синдром болезненной чувствительности кишечника и язвенный колит. Соединения также могут применяться для лечения болезней глаза, таких как ретинит, ретинопатии, увеит, глазная фотофобия и острое повреждение ткани глаза. Соединения по изобретению также могут применяться для лечения ангиогенеза, включая неоплазию, метастазов, офтальмологических нарушений, таких как отторжение трансплантата роговицы, окулярная неоваскуляризация, неоваскуляризация сетчатки, включая неоваскуляризацию, вызванную повреждением или инфекцией, диабетическую ретинопатию, ретролентальную фиброплазию и неоваскулярную глаукому, язвенных болезней, таких как язва желудка, патологических, но не связанных со злокачественной опухолью нарушений, таких как гемангиома, включая гемангиому новорожденных, ангиофиброма носоглотки и авускулярный некроз кости, диабетической нефропатии и кардиомиопатии и заболеваний женской репродуктивной системы, таких как эндометриоз. Соединения по изобретению также могут применяться для предупреждения продуцирования циклооксигеназы-2.

Помимо их применения для лечения человека эти соединения также могут применяться в ветеринарии для лечения домашних животных, экзотических животных и сельскохозяйственных животных, включая млекопитающих, грызунов и т.п. Более предпочтительная группа животных включает лошадей, собак и кошек.

Соединения по настоящему изобретению также могут применяться для совместной терапии, частично или полностью заменяя другие общепринятые противовоспалительные средства, а также вместе со стероидами, ингибиторами циклооксигеназы-2, нестероидными противовоспалительными лекарствами (НСПВЛ), DMARDS, иммунодепрессантами, ингибиторами 5-липоксигеназы, антагонистами LTB₄ и ингибиторами гидролазы LTA₄.

В контексте настоящего описания понятие "опосредованное ФНО нарушение" относится к любому и ко всем нарушениям и болезненным состояниям, в которых принимает участие ФНО и которые либо находятся под контролем самого ФНО, либо под контролем другого монокина, высвобождаемого под действием ФНО, такого как ИЛ-1, ИЛ-6 или ИЛ-8, но не ограничено ими. Следовательно, болезненное состояние, при котором, например, основным компонентом является ИЛ-1, продуцирование или действие которого опосредуется ФНО или он секретируется под воздействием ФНО, должно рассматриваться как состояние, опосредуемое ФНО.

В контексте настоящего описания понятие "опосредованное р38 заболевание" относится к любому и ко всем нарушениям и болезненным состояниям, в которых принимает участие р38 и которые либо находятся под контролем самой киназы р38, либо под контролем другого фактора, высвобождаемого под действием р38, такого как ИЛ-1, ИЛ-6 или ИЛ-8, но не ограничено ими. Следовательно, болезненное состояние, в котором, например, основным компонентом является ИЛ-1, продуцирование или действие которого опосредуется р38 или он секретируется под воздействием р38, должно рассматриваться как состояние, опосредуемое р38.

Поскольку ФНО-β имеет выраженную структурную гомологию с ФНО-α (также известным как кахектин) и поскольку каждый из них индуцирует аналогичные биологические реакции и связывается с одним и тем же клеточным рецептором, а синтез и ФНО-α , и ФНО-β ингибируется соединениями по настоящему изобретению, в контексте данного описания оба эти фактора обозначаются как "ФНО", если специально не указано иное.

Предпочтительный класс соединений включает такие соединения формулы I, в которых

R¹ выбирают из группы, включающей гидрид, (низш.)алкил, (низш.)циклоалкил, (низш.)циклоалкилалкилен, (низш.)галоалкил, (низш.)гидроксиалкил, (низш.)алкенил, (низш.)алкинил, (низш.)гетероциклил, (низш.)аралкил, (низш.)алкоксиалкил, (низш.)меркаптоалкил, (низш.)алкилтиоалкилен, амино, (низш.)алкиламино, (низш.)ариламино, (низш.)аминоалкил, (низш.)алкиламиноалкилен, (низш.)гетероциклилалкилен, (низш.)аминокарбонилалкилен и (низш.)алкиламинокарбонилалкилен,

R² выбирают из группы, включающей гидрид, (низш.)алкил, (низш.)алкенил, (низш.)алкинил, (низш.)галоалкил, (низш.)гетероциклил, (низш.)гетероциклилалкилен, амино, (низш.)алкиламино, (низш.)алкиниламино, (низш.)аминоалкил, (низш.)алкилтио, (низш.)карбокси, (низш.)алкоксикарбонил, (низш.)карбоксиалкил, (низш.)аминокарбониламино, (низш.)алкиламинокарбониламино, (низш.)алкилсульфонил, (низш.)аминосульфонил, (низш.)алкилсульфониламино, (низш.)аминосульфониламино и (низш.)алкиламиносульфониламино, причем гетероциклильные и гетероциклилалкильные группы необязательно замещены одним или несколькими радикалами, независимо друг от друга выбранными из группы, включающей (низш.)алкилтио, (низш.)алкисульфонил, (низш.)алкилсульфинил, галоген, (низш.)алкил, (низш.)алкокси, арилокси, (низш.)гетероциклил, (низш.)галоалкил, амино и циано,

Ar¹ выбирают из группы, включающей фенил, бифенил и нафтил, причем Ar¹ необязательно замещен одним или несколькими радикалами, независимо друг от друга выбранными из группы, включающей (низш.)алкилтио, (низш.)алкилсульфонил, аминосульфонил, галоген, (низш.)алкил, (низш.)алкенил, (низш.)алкинил, (низш.)алкилсульфинил, циано, (низш.)алкоксикарбонил, аминокарбонил, формил, (низш.)алкилкарбониламино, (низш.)галоалкил, (низш.)алкокси, (низш.)алкиолдиокси, (низш.)алкенилокси, амино, (низш.)алкиламино, (низш.)аминоалкил, ариламино, нитро и галосульфонил, и

HetAr² обозначает пиридинил или пиримидинил, необязательно замещенные одним или несколькими радикалами, независимо друг от друга выбранными из группы, включающей (низш.)алкилтио, (низш.)алкилсульфонил, (низш.)алкилсульфинил, галоген, (низш.)алкил, (низш.)гетероциклил, (низш.)алкокси, (низш.)аралкокси, (низш.)галоалкил, амино, циано, (низш.)аралкил, (низш.)алкиламино, (низш.)циклоалкиламино, (низш.) ариламино, (низш.)алкиниламино и (низш.)аралкиламино,

или фармацевтически приемлемые соли или таутомеры этих соединений.

Класс соединений, представляющих особенный интерес, состоит из соединений формулы I, в которых

R¹ выбирают из группы, включающей гидрид, метил, этил, изопропил, трет-бутил, изобутил, трихлорэтил, пентафторэтил, гептафторпропил, дифторэтил, дифторпропил, дихлорэтил, дихлорпропил, винил, аллил, этинил, пропаргил, морфолинил, пиперидинил, пиперазинил, бензил, фенилэтил, морфолинометил, морфолиноэтил, пирролидинилметил, пеперазинилметил, пиперидинилметил, пиридинилметил, тиенилметил, метоксиметил, этоксиметил, амино, метиламино, диметиламино, фениламино, метиламинометил, диметиламинометил, метиламиноэтил, диметиламиноэтил, циклопропил, циклопентил, циклогексил, циклогексилметил, гидроксиметил, гидроксиэтил, метилтио и метилтиометил,

R² выбирают из группы, включающей гидрид, метил, этил, пропил, изопропил, трет-бутил, изобутил, фторметил, дифторметил, трифторметил, хлорметил, дихлорметил, трихлорметил, пентафторэтил, гептафторпропил, дифторхлорметил, дихлорфторметил, дифторэтил, дифторпропил, дихлорэтил, дихлорпропил, амино, N-метиламино, N,N-диметиламино, этиниламино, пропаргиламино, пиперидинил, пиперазинил, морфолинометил, пиперазинилметил, пиперидинилметил, пиридинилметил, пирролидинилметил, тиенилметил, тиазолилметил, оксазолилметил, пиримидинилметил, хинолилметил, изохинолинилметил, имидазолилметил, бензимидазолметил, фурилметил, пиразинилметил, аминокарбониламино, метиламинокарбониламино, диметиламинокарбониламино, этиламинокарбониламино, диэтиламинокарбониламино, метилсульфониламино, этилсульфониламино, аминосульфониламино, метиламиносульфониламино, диметиламиносульфониламино, этиламиносульфониламино и диэтиламиносульфониламино,

Ar¹ выбирают из группы, включающей фенил, бифенил и нафтил, причем Ar¹ необязательно замещен одним или несколькими радикалами, независимо друг от друга выбранными из группы, включающей метилтио, метилсульфинил, метилсульфонил, фтор, хлор, бром, аминосульфонил, метил, этил, изопропил, трет-бутил, изобутил, циано, метоксикарбонил, этоксикарбонил, аминокарбонил, метилкарбониламино, трифторметил, дифторметил, фторметил, трихлорметил, дихлорметил, хлорметил, аллил, винил, этинил, пропаргил, метокси, этокси, пропилокси, н-бутокси, амино, метиламино, этиламино, диметиламино, диэтиламино, аминометил, аминоэтил, N-метил, N-фениламино, фениламино, дифениламино, нитро и хлорсульфонил, и

HetAr² выбирают из группы, включающей пиридинил и пиримидинил, причем HetAr² необязательно замещен одним или несколькими радикалами, независимо друг от друга выбранными из группы, включающей метилтио, метилсульфинил, метилсульфонил, фтор, хлор, бром, метил, этил, изопропил, трет-бутил, изобутил, метоксил, этоксил, феноксил, бензоксил, фенэтил, трифторметил, фторметил, дифторметил, амино, бензиламино, пропаргиламино, циклопропиламино, циклобутиламино, циклопентиламино и циано,

или их фармацевтически приемлемых солей или их таутомеров.

Другой класс соединений, представляющих особый интерес, состоит из таких соединений формулы I, в которых

R¹ обозначает гидрид, метил, этил, гидроксиэтил, пропаргил, диметиламиноэтил или морфолиноэтил,

R² выбирают из группы, включающей гидрид, метил, этил, амино, аминокарбониламино, метиламинокарбониламино, метилсульфониламино, аминосульфониламино и метиламиносульфониламино,

Ar¹ обозначает фенил, необязательно замещенный одним или несколькими радикалами, независимо друг от друга выбранными из группы, включающей метилтио, метилсульфинил, метилсульфонил, фтор, хлор, бром, аминосульфонил, метил, этил, изопропил, трет-бутил, изобутил, циано, метоксикарбонил, этоксикарбонил, аминокарбонил, метилкарбониламино, трифторметил, дифторметил, фторметил, трихлорметил, дихлорметил, хлорметил, метокси, этокси, пропилокси, н-бутокси, амино, метиламино, этиламино, диметиламино, диэтиламино, аминометил, аминоэтил, N-метил, N-фениламино, фениламино, дифениламине, нитро и хлорсульфонил, и

HetAr² необязательно замещен одним или несколькими радикалами, независимо друг от друга выбранными из группы, включающей метилтио, метилсульфинил, метилсульфонил, фтор, хлор, бром, метил, этил, изопропил, трет-бутил, изобутил, метоксил, этоксил, феноксил, бензоксил, трифторметил, фторметил, дифторметил, амино, пропаргиламино и циано,

или их фармацевтически приемлемых солей или их таутомеров.

Еще один класс соединений, представляющих наибольший интерес, состоит из таких соединений формулы I, в которых

R¹ обозначает гидрид или метил,

R² обозначает гидрид или метил,

Ar¹ обозначает фенил, необязательно замещенный одним или несколькими радикалами, независимо друг от друга выбранными из группы, включающей фтор, хлор, метил, этил, трифторметил, метокси, этокси, диметиламино и нитро, и

HetAr² необязательно замещен одним или несколькими радикалами, независимо друг от друга выбранными из группы, включающей метил, хлор, фтор и трифторметил,

или их фармацевтически приемлемых солей или их таутомеров.

Семейство конктретных соединений, представляющих особый интерес среди соединений формулы I, состоит из следующих соединений и их таутомеров и фармацевтически приемлемых солей:

4-(3-метил-4-фенил-1Н-пиразол-5-ил)пиридин;

4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-3-амин;

N-[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-3-ил]метансульфонамид;

N-[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-3-ил]-N'-метилсульфамид;

[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-3-ил]мочевина;

[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-3-ил]сульфамид;

4-(4-хлорфенил)-1-метил-3-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-5-амин;

N-[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-3-ил]-N'-метилмочевина;

4-[4-(4-фторфенил)-1Н-пиразол-3-ил]пиридин;

4-[4-(4-фторфенил)-1-метил-1Н-пиразол-3-ил]пиридин;

4-(4-фторфенил)-3-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-1-этанол;

4-(4-фторфенил)-N,N-диметил-3-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-1-этанамин;

4-[2-[4-(4-фторфенил)-3-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-1-ил]этил]морфолин;

4-[4-(4-хлорфенил)-1Н-пиразол-3-ил]пиридин;

4-(4-фенил-1H-пиразол-5-ил)пиридин;

1-метил-4-[2-[4-(4-фторфенил)-3-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-1-ил]]пиперидин;

1-метил-4-[2-[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-1-ил]]пиперидин.

Понятие "гидрид" обозначает одноатомный водород (Н). Этот водородный радикал может быть присоединен, например, к атому кислорода с получением гидроксильного радикала, или два водородных радикала могут быть присоединены к атому углерода с получением метиленового (-СН₂-) радикала. При использовании либо индивидуально, либо в сочетании с другими понятиями, такими как "галоалкил", "алкилсульфонил", "алкоксиалкил", "гидроксиалкил", "меркаптоалкил", понятие "алкил" обозначает линейные или разветвленные радикалы, имеющие от одного до примерно двадцати атомов углерода или предпочтительно от одного до примерно двенадцати атомов углерода. Более предпочтительными алкильными радикалами являются "(низш.)алкильные" радикалы, имеющие от одного до примерно десяти атомов углерода. Наиболее предпочтительные (низш.)алкильные радикалы имеют от одного до примерно шести атомов углерода. Примерами таких радикалов являются метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, изоамил, гексил и т.п. Понятие "алкенил" обозначает линейные или разветвленные радикалы, имеющие по меньшей мере одну двойную углерод-углеродную связь и включающие от двух до примерно двадцати атомов углерода или предпочтительно от двух до двенадцати атомов углерода. Более предпочтительными алкенильными радикалами являются "(низш.)алкенильные" радикалы, имеющие от двух до примерно шести атомов углерода. Примерами алкенильных радикалов являются этенил, пропенил, аллил, бутенил и 4-метилбутенил. Понятие "алкенил" и "(низш.)алкенил" обозначает радикалы, имеющие "цис-" и "транс"-ориентацию, или в другом варианте "Е"- и "Z"-ориентацию. Понятие "алкинил" обозначает линейные или разветвленные радикалы, имеющие по меньшей мере одну тройную углерод-углеродную связь и включающие от двух до примерно двадцати атомов углерода или предпочтительно от двух до двенадцати атомов углерода. Более предпочтительными алкинильными радикалами являются "(низш.)алкинильные" радикалы, имеющие от двух до примерно шести атомов углерода. Примерами алкинильных радикалов являются пропаргил, 1-пропинил, 2-пропинил, 1-бутин, 2-бутенил и 1-пентинил. Понятие "циклоалкил" обозначает насыщенные карбоциклические радикалы, имеющие от трех до примерно двенадцати атомов углерода. Более предпочтительными циклоалкильными радикалами являются "(низш.)циклоалкильные" радикалы, имеющие от трех до примерно восьми атомов углерода. Примерами таких радикалов являются циклопропил, циклобутил, циклопентил и циклогексил. Понятие "циклоалкилалкилен" обозначает алкильные радикалы, замещенные циклоалкильным радикалом. Более предпочтительными циклоалкилалкиленовыми радикалами являются "(низш.)циклоалкилалкиленовые" радикалы, которые обозначают (низш.)алкильные радикалы, замещенные (низш.)циклоалкильным радикалом, как он определен выше. Примерами таких радикалов являются циклопропилметил, циклобутилметил, циклопентилметил и циклогексилметил. Понятие "циклоалкенил" обозначает частично ненасыщенные карбоциклические радикалы, имеющие от трех до двенадцати атомов углерода и одну или две двойные связи, но необязательно конъюгированные ("циклоалкилдиенил"). Более предпочтительными циклоалкенильнымии радикалами являются "(низш.)циклоалкенильные" радикалы, имеющие от четырех до примерно восьми атомов углерода. Примерами таких радикалов являются циклобутенил, циклопентенил и циклогексенил. Понятие "циклоалкенилалкилен" обозначает алкильные радикалы, замещенные циклоалкенильным радикалом. Более предпочтительными циклоалкенилалкиленовыми радикалами являются (низш.)циклоалкенилалкиленовые радикалы, которые обозначают алкильные радикалы, замещенные (низш.)циклоалкенильным радикалом, как он определен выше. Примерами таких радикалов являются циклобутенилметил, циклопентенилметил и циклогексенилметил. Понятие "галоген" обозначает галогены, такие как фтор, хлор, бром или йод. Понятие "галоалкил" обозначает радикалы, в которых один или несколько алкильных углеродных атомов замещен галогеном, как он определен выше. В частности, под это определение подпадают моногалоалкильные, дигалоалкильные и полигалоалкильные радикалы. Моногалоалкильный радикал в качестве одного из примеров может включать любой из таких атомов, как йод, бром, хлор или фтор. Дигало- и полигалоалкильные радикалы могут иметь два или большее количество одних и тех же атомов галогена или комбинацию различных атомов галогена. Понятие "(низш.)галоалкил" обозначает радикалы, имеющие от одного до шести атомов углерода. Примерами галоалкильных радикалов являются фторметил, дифторметил, трифторметил, хлорметил, дихлорметил, трихлорметил, пентафторэтил, гептафторпропил, дифторхлорметил, дихлорфторметил, дифторэтил, дифторпропил, дихлорэтил и дихлорпропил. Понятие "гидроксиалкил" обозначает линейные или разветвленные алкильные радикалы, имеющие от одного до примерно десяти атомов углерода, любой из которых может быть замещен одним или большим количеством гидроксильных радикалов. Более предпочтительными гидроксиалкильными радикалами являются "(низш.)гидроксиалкильные" радикалы, имеющие от одного до шести атомов углерода и один или большее количество гидроксильных радикалов. Примерами таких радикалов являются гидроксиметил, гидроксиэтил, гидроксипропил, гидроксибутил и гидроксигексил. Понятия "алкокси" и "алкилокси" обозначают линейные или разветвленные радикалы, которые содержат оксигруппу и каждый из которых имеет алкильные фрагменты, включающие от одного до примерно десяти атомов углерода. Более предпочтительными алкоксильными радикалами, являются "(низш.)алкоксильные" радикалы, имеющие от одного до шести атомов углерода. Примерами таких радикалов являются метокси, этокси, пропокси, бутокси и тре-бутокси. Понятие "алкоксиалкил" обозначает алкильные радикалы, имеющие один или большее количество алкоксильных радикалов, присоединенных к алкильному радикалу с образованием, например, моноалкоксиалкильных и диалкоксиалкильных радикалов. "Алкоксильные" радикалы дополнительно могут быть замещены одним или большим количеством атомов галогена, такими как фтор, хлор или бром, с образованием "галоалкоксильных" радикалов.

Понятие "арил" индивидуально или в сочетании обозначает карбоциклическую ароматическую систему, содержащую одно, два или три кольца, причем эти кольца могут быть соединены друг с другом в виде боковых цепей или могут быть слиты. Более предпочтительными арильными радикалами являются 6-12-членные арильные радикалы. Примерами таких радикалов являются фенил, нафтил, тетрагидронафтил, индан и бифенил. Арильные фрагменты также могут быть замещены в пригодном для замещения положении одним или несколькими заместителями, независимо друг от друга выбранными из группы, включающей, например, галоген, алкил, алкенил, алкинил, алкокси, алкенокси, алкилдиокси, алкилтио, алкилсульфинил, алкилсульфонил, амино, аминокарбонил, циано, алкоксикарбонил, формил, аминосульфонил, алкиламино, нитро, ариламино, алкилкарбониламино, галосульфонил, аминоалкил и галоалкил, алкоксиалкил, алкиламиноалкил, карбоксиалкил, алкоксикарбонилалкил, аминокарбонилалкил, аралкокси, гидроксил, ацил, карбокси, аминокарбонил и аралкоксикарбонил. Понятие "алкилдиокси" обозначает алкилдиоксильный мостик, такой как метилендиоксильный мостик, между двумя кольцевыми атомами углерода арильного фрагмента.

Понятие "гетероциклил" обозначает насыщенные, частично ненасыщенные и ненасыщенные содержащие гетроатом кольцевые радикалы, которые также могут называться как "гетероциклил", "гетероциклоалкенил" и "гетероарил" соответственно, причем гетероатомы могут быть выбраны из группы, включающей азот, серу и кислород. Примерами насыщенных гетероциклильных радикалов являются насыщенная 3-6-членная гетеромоноциклическая группа, содержащая 1-4 атома углерода (например, пирролидинил, имидазолидинил, пиперидино, пиперазинил и т.д.); насыщенная 3-6-членная гетеромоноциклическая группа, содержащая 1-2 атома кислорода и 1-3 атома азота (например, морфолинил и т.д.); насыщенная 3-6-членная гетеромоноциклическая группа, содержащая 1-2 атома серы и 1-3 атома азота (например, тиазолидинил и т.д.). Примерами частично ненасыщенных гетероциклильных радикалов являются дигидротиофен, дигидропиран, дигидрофуран и дигидротиазол. Гетероциклильные радикалы, такие как радикалы тетразолия и пиридиния, могут включать пятивалентый азот. Понятие "гетероарил" обозначает ненысыщенные гетероциклильные радикалы. Примерами гетероарильных радикалов являются ненасыщенная 3-6-членная гетеромоноциклическая группа, содержащая 1-4 атома азота, например пирролил, пирролидинил, имидазолил, пиразолил, пиридил, пиримидил, пиразинил, пиридазинил, триазолил (например, 4Н-1,2,4-триазолил, 1Н-1,2,3-триазолил, 2Н-1,2,3-триазолил и т.д.), тетразолил (например, 1H-тетразолил, 2Н-тетразолил и т.д.) и т.д.; ненасыщенная сконденсированная гетероциклильная группа, содержащая 1-5 атомов азота, например индолил, изоиндолил, индолизинил, бензимидазолил, хинолил, изохинолил, индазолил, бензотриазолил, тетразолпиридазинил (например, тетразол[1,5-b]пиридазинил и т.д.) и т.д.; ненасыщенная 3-6-членная гетеромоноциклическая группа, содержащая атом кислорода, например пиранил, фурил и т.д.; ненасыщенная 3-6-членная гетеромоноциклическая группа, содержащая атом серы, например тиенил и т.д.; ненасыщенная 3-6-членная гетеромоноциклическая группа, содержащая 1-2 атома кислорода и 1-3 атома азота, например оксазолил, изоксазолил, оксадиазолил (например, 1,2,4-оксадиазолил, 1,3,4-оксадиазолил, 1,2,5-оксадиазолил и т.д.) и т.д.; ненасыщенная сконденсированная гетероциклическая группа, содержащая 1-2 атома кислорода и 1-3 атома азота (например, бензоксазолил, бензоксадиазолил и т.д.); ненасыщенная 3-6-членная гетеромоноциклическая группа, содержащая 1-2 атома серы и 1-3 атома азота, например тиазолил, тиадиазолил (например, 1,2,4-тиадиазолил, 1,3,4-тиадиазолил, 1,2,5-тиадиазолил и т.д.) и т.д.; ненасыщенная сконденсированная гетероциклильная группа, содержащая 1-2 атома серы и 1-3 атома азота (например, бензотиазолил, бензотиадиазолил и т.д.) и т.п. Понятие "гетероарил" также обозначает радикалы, в которых гетероциклильные радиклы сконденсированы с арильными радикалами. Примерами таких слитых бициклических радикалов являются бензофуран, бензотиофен и т.п. Такая гетероциклильная группа может иметь от 1 до 3 заместителей, таких как алкил, гидроксил, галоген, алкокси, оксо, амино и алкиламино. Понятие "гетероциклилалкилен" обозначает замещенные гетероциклилом алкильные радикалы. Более предпочтительными "гетероциклил-алкиленовыми" радикалами являются "(низш.)гетероциклилалкиленовые" радикалы, имеющие от одного до шести атомов углерода и гетероциклильный радикал.

Понятие "алкилтио" обозначает радикалы, соедержащие линейные или разветвеленные алкильные радикалы, включающие от одного до примерно десяти атомов углерода, присоединенных к двухвалентному атому серы. Более предпочтительными алкилтиорадикалами являются (низш.)алкилтиорадикалы, имеющие от одного до шести атомов углерода. Примерами таких "(низш.)алкилтиорадикалов" являются метилтио, этилтио, пропилтио, бутилтио и гексилтио. Понятие "алкилтиоалкилен" обозначает радикалы, содержащие алкилтио-радикал, присоединенный через двухвалентный атом серы к алкильному радикалу, имеющему от одного до примерно десяти атомов углерода. Более предпочтительные алкилтиоалкиленовые радикалы обозначают "(низш.)алкилтиоалкиленовые" радикалы, включающие алкильные радикалы, имеющие от одного до шести атомов углерода. Примеры таких (низш.)алкилтиоалкиленовых радикалов включают метилтиометил. Понятие "алкилсульфинил" обозначает радикалы, содержащие линейный или разветвленный алкильный радикал, имеющий от одного до примерно десяти атомов углерода, присоединенный к двухвалентному радикалу -S(=О). Более предпочтительными алкилсульфинильными радикалами являются "(низш.)алкилсульфинильные" радикалы, включающие алкильные радикалы, имеющие от одного до шести атомов углерода. Примерами таких (низш.)алкилсульфинильных радикалов являются метилсульфинил, этилсульфинил, бутилсульфинил и гексилсульфинил. Понятие "сульфонил", когда оно используется индивидуально или в сочетании с другими понятиями, такими как "алкилсульфонил" или "галосульфонил", обозначает двухвалентный радикал, т.е., -SO₂-. Понятие "алкилсульфонил" обозначает алкильные радикалы, присоединенные к сульфонильному радикалу, причем алкил имеет указанные выше значения. Более предпочтительными алкилсульфонильными радикалами являются "(низш.)алкилсульфонильные" радикалы, имеющие от одного до шести атомов углерода. Примерами таких (низш.)алкилсульфонильных радикалов являются метилсульфонил, этилсульфонил и пропилсульфонил. "Алкилсульфонильные" радикалы могут быть дополнительно замещены одним или большим количеством атомов галогена, таких как фтор, хлор или бром, с образованием галоалкилсульфонильных радикалов. Понятие "галосульфонил" обозначает атомы галогена, присоединенные к сульфонильному радикалу. Примерами таких галосульфонильных радикалов являются хлорсульфонил и бромсульфонил. Понятия "сульфамил", "аминосульфонил" и "сульфонамидил" обозначают NH₂O₂S-.

Понятие "карбонил" независимо от того, используется ли оно индивидуально или в сочетании с другими понятиями, такими как "алкоксикарбонил", обозначает радикал -(С=O)-. Понятия "карбокси" или "карбоксил" независимо от того, используются ли они индивидуально или в сочетании с другими понятиями, такими как "карбоксиалкил", обозначают радикал -СО₂Н. Понятие "карбоксиалкил" обозначает алкильные радикалы, замещенные карбоксильным радикалом. Более предпочтительными являются "(низш.)карбоксиалкильные" радикалы, которые обозначают (низш.) алкильные радикалы, как они определены выше, замещенные карбоксигруппой. Примерами таких (низш.)карбоксиалкильных радикалов являются карбоксиметил, карбоксиэтил и карбоксипропил. Понятие "алкоксикарбонил" обозначает радикал, содержащий алкоксильный радикал, как он определен выше, присоединенный через атом кислорода к карбонильному радикалу. Более предпочтительными являются "(низш.)алкоксикарбонильные" радикалы, алкильные фрагменты которых имеют один-шесть атомов углерода. Примерами таких (низш.)алкоксикарбонильных (сложноэфирных) радикалов являются метоксикарбонил, этоксикарбонил, пропоксикарбонил, бутоксикарбонил и гексилоксикарбонил. Понятие "алкоксикарбонилалкилен" обозначает алкильные радикалы, замещенные алкоксикарбонильным радикалом, как он определен выше. Более предпочтительными являются "(низш.)алкоксикарбонилалкиленовые" радикалы, алкильные фрагменты которых имеют один-шесть атомов углерода. Примерами таких (низш.)алкоксикарбонилалкиленовых радикалов являются метоксикарбонилметилен, этоксикарбонилметилен, метоксикарбонилэтилен и этоксикарбонилэтилен. Понятие "алкилкарбонил" обозначает радикалы, в которых алкильные радикалы присоединены к карбонильному радикалу. Примерами таких радикалов являются метилкарбонил, этилкарбонил, пропилкарбонил, бутилкарбонил и пентилкарбонил. Понятие "аралкил" обозначает алкильные радикалы, замещенные арилом. Предпочтительными аралкильными радикалами являются "(низш.)аралкильные" радикалы, в которых (низш.) алкильные группы замещены одной или большим количеством аркльных групп. Примерами таких групп являются бензил, дифенилметил, трифенилметил, фенилэтил и дифенилэтил. Арил в указанном аралкиле дополнительно может быть замещен галогеном, алкилом, алкоксигруппой, галоалкилом и галоалкоксигруппой. Понятия "бензил" и "фенилметил" являются взаимозаменяемыми. Понятие "гетероциклилалкилен" обозначает насыщенные, частично ненасыщенные и ненасыщенные алкильные радикалы, замещенные гетероциклилом, такие как пирролидинилметил, пиридилметил, хинолилметил, тиенилметил, фурилэтил и хинолилэтил. Гетероарил в гетероаралкильном (ненасыщенные замещенные гетероциклилом алкильные радикалы) может быть дополнительно замещен галогеном, алкилом, алкоксигруппой, галоалкилом и галоалкоксигруппой. Понятие "арилокси" обозначает арильные радикалы, присоединенные через атом кислорода к другим радикалам. Понятие "аралкокси" обозначает аралкильные радикалы, присоединенные через атом кислорода к другим радикалам.

Понятие "аминоалкил" обозначает алкильные радикалы, замещенные аминогруппами. Более предпочтительными являются "(низш.)аминоалкильные" радикалы. Примерами таких радикалов являются аминометил, аминоэтил и т.п. Понятие "алкиламино" обозначат аминогруппы, замещенные одним или двумя алкильными радикалами. Предпочтительными являются "(низш.)алкиламиногруппы", в которых алкильные фрагменты имеют от одного до шести атомов углерода. Приемлемые (низш.)алкиламиногруппы могут быть монозамещеными N-алкиламиногруппами или дизамещеными N,N-алкиламиногруппами, такими как N-метиламино, N-этиламино, N,N-диметиламино, N,N-диэтиламино или т.п. Понятие "ариламино" обозначает аминогруппы, замещенные одним или двумя арильными радикалами, такие как N-фениламино. "Ариламиногруппы" могут быть дополнительно замещены на арильном кольцевом фрагменте радикала. Понятие "аминокарбонил" обозначает амидную группу формулы -C(=O)NH. Понятие "алкиламинокарбонил" обозначает аминокарбонильную группу, замещенную одним или двумя алкильными радикалами на атоме азота аминогруппы. Предпочтительными являются радикалы "N-алкиламинокарбонил" и "N,N-диалкиламинокарбонил". Более предпочтительными являются радикалы "(низш.)-N-алкиламинокарбонил" и "(низш.)-N,N-диалкиламинокарбонил", в которых (низш.)алкильные фрагменты имеют указанные выше значения. Понятие "аминокарбониламино" обозначает радикалы, имеющие один или большее количество аминокарбонильных радикалов, присоединенных к аминогруппе. Понятие "алкиламинокарбониламино" обозначает радикалы, имеющие один или большее количество алкильных радикалов, присоединенных к аминокарбониламиногруппе. Предпочтительными являются радикалы "(низш.)алкиламинокарбониламино", в которых (низш.)алкильные фрагменты имеют указанные выше значения. Понятие "алкилкарбониламино" обозначает аминогруппы, замещенные одним или большим количеством алкилкарбонильных радикалов. Более предпочтительными "алкилкарбониламино "группами являются радикалы "(низш.)алкилкарбониламино", в которых (низш.)алкилкарбонильные радикалы, имеющие указанные выше значения, присоединены к аминогруппам. Понятие "алкиламиноалкилен" обозначает радикалы, в которых один или большее количество алкильных радикалов присоединены к аминоалкильному радикалу. Понятие "алкилсульфониламино" обозначает радикалы, в которых один или большее количество алкилсульфонильных радикалов присоединено к аминогруппе. Предпочтительными являются радикалы "(низш.)алкилсульфониламино", в которых (низш.)алкильные фрагменты имеют указанные выше значения. Понятие "аминосульфониламино" обозначает радикалы, в которых один или большее количество аминосульфонильных радикалов присоединено к аминогруппе. Понятие "алкиламиносульфониламино" обозначает радикалы, в которых один или большее количество алкильных радикалов присоединено к аминосульфониламиногруппе. Предпочтительными являются радикалы "(низш.) алкиламиносульфониламино", в которых (низш.)алкильные фрагменты имеют указанные выше значения.

Дополнительные понятия, которые используются для описания заместителей пиразольного кольца и не определены конкретно в настоящем описании, определяются аналогично тому, как это проиллюстрировано в вышеприведенных определениях. Как указано выше, более предпочтительными заместителями являются заместители, которые содержат (низш.)-радикалы. Если не указано иное, понятие "(низш.)" в контексте настоящего описания обозначает каждый алкильный радикал, являющийся заместителем пиразольного кольца, в котором один или большее количество алкильных радикалов имеет от одного до примерно шести атомов углерода; каждый алкенильный радикал, являющийся заместителем пиразольного кольца, в котором один или большее количество алкенильных радикалов имеет от двух до примерно шести атомов углерода; каждый алкинильный радикал, являющийся заместителем пиразольного кольца, в котором один или большее количество алкинильных радикалов имеет от двух до примерно шести атомов углерода; каждый циклоалкильный или циклоалкенильный радикал, являющийся заместителем пиразольного кольца, в котором один или большее количество циклоалкильных и/или циклоалкенильных радикалов представляет собой 3-8-членный кольцевой циклоалкильный или циклоалкенильный радикал соответственно; каждый арильный радикал, являющийся заместителем пиразольного кольца, в котором один или большее количество арильных радикалов представляет собой моноциклический арильный радикал; каждый гетероциклильный радикал, являющийся заместителем пиразольного кольца, в котором один или большее количество гетероциклильных радикалов представляет собой 4-8-членный кольцевой гетероциклил.

Настоящее изобретение включает таутомерные формы соединений формулы I. Как описано ниже, пиразолы формул I и I' являются эквивалентными по магнитным характеристикам и по структуре вследствие протопропной таутомерной природы водорода:

Настоящее изобретение также относится к соединениям формулы I, имеющим один или большее количество асимметричных атомов углерода. Для специалистов в данной области очевидно, что те пиразолы по настоящему изобретению, которые имеют асимметричные атомы углерода, могут находиться в форме диастереомеров, рацематов или в оптически активных формах. Все эти формы подпадают под объем изобретения. Более конкретно настоящее изобретение включает энантиомеры, диастериомеры, рацемические смеси и другие их смеси.

Настоящее изобретение далее относится к фармацевтической композиции, предназначенной для лечения опосредованного ФНО расстройства, опосредованного киназой р38 расстройства, воспаления и/или артрита, которая включает терапевтически эффективное количество соединения формулы I или его терапевтически приемлемой соли или его таутомера в сочетании по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым носителем, адъювантом или разбавителем.

Настоящее изобретение также относится к терапевтическому методу лечения опосредованного ФНО расстройства, опосредованного киназой р38 расстройства, воспаления и/или артрита у пациента, причем этот метод включает лечение пациента, имеющего такое нарушение или чувствительного к такому нарушению или состоянию, терапевтически эффективным количеством соединения формулы I

где R¹ выбирают из группы, включающей гидрид, алкил, циклоалкил, алкенил, алкинил, гетероциклил, циклоалкилалкилен, галоалкил, гидроксиалкил, аралкил, алкоксиалкил, меркаптоалкил, алкилтиоалкилен, амино, алкиламино, ариламино, аминоалкил, алкиламиноалкилен, гетероциклилалкилен, аминокарбонилалкилен и алкиламинокарбонилалкилен,

R² выбирают из группы, включающей гидрид, алкил, алкенил, алкинил, гетероциклил, галоалкил, гетероциклилалкил, амино, алкиламино, аминоалкил, алкокси, алкилтио, карбокси, алкоксикарбонил, карбоксиалкил, аминокарбониламино, алкиламинокарбониламино, алкилсульфонил, аминосульфонил, алкилсульфониламино, аминосульфониламино, алкиламиносульфониламино и алкиниламино, причем гетероциклильные и гетероциклилалкильные группы необязательно замещены одним или несколькими радикалами, независимо друг от друга выбранными из группы, включающей алкилтио, алкилсульфонил, алкилсульфинил, галоген, алкил, алкокси, арилокси, аралкокси, гетероциклил, галоалкил, амино, циано и гидрокси,

Ar¹ обозначает арил, необязательно замещенный одним или несколькими радикалами, независимо друг от друга выбранными из группы, включающей галоген, алкил, алкенил, алкинил, алкокси, алкенокси, алкилдиокси, алкилтио, алкилсульфинил, алкилсульфонил, амино, аминокарбонил, циано, алкоксикарбонил, формил, аминосульфонил, алкиламино, нитро, ариламино, алкилкарбониламино, галосульфонил, аминоалкил и галоалкил, и

HetAr² обозначает пиридинил, пиримидинил или хинолинил, необязательно замещенный одним или несколькими радикалами, независимо друг от друга выбранными из группы, включающей алкилтио, алкилсульфонил, алкилсульфинил, галоген, алкил, гетероциклил, алкокси, аралкокси, галоалкил, амино, циано, аралкил, алкиламино, циклоалкиламино, циклоалкениламино, ариламино, алкиниламино и аралкиламино,

или его фармацевтически приемлемой соли или его таутомера.

К семейству соединений формулы I также относятся их фармацевтически приемлемые соли. Понятие "фармацевтически приемлемые соли" обозначает соли, обычно применяемые для получения солей щелочных металлов и для получения аддитивных солей свободных кислот или свободных оснований. Природа соли не имеет решающего значения при условии, что она является фармацевтически приемлемой. Пригодные фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли соединений формулы I могут быть получены из неорганической кислоты или из органической кислоты. Примерами таких неорганических кислот являются соляная, бромистоводородная, йодистоводородная, азотная, угольная, серная и фосфорная кислоты. Приемлемые органические кислоты могут быть выбраны из группы, включающей такие классы органических кислот, как алифатические, циклоалифатические, ароматические, аралифатические, гетероциклильные, карбоновые и сульфоновые кислоты, примерами которых являются муравьиная, уксусная, пропионовая, янтарная, гликолевая, глюконовая, молочная, яблочная, винная, лимонная, аскорбиновая, глюкуроновая, малеиновая, фумаровая, пировиноградная, аспарагиновая, глютаминовая, бензойная, антраниловая, мезиловая, стеариновая, салициловая, пара-гидроксибензойная, фенилуксусная, миндальная, эмбоновая (памовая), метансульфоновая, этансульфоновая, бензолсульфоновая, пантотеновая, толуолсульфоновая, 2-гидроксиэтансульфоновая, сульфаниловая, циклогексиламиносульфоновая, альгиновая, β -гидроксимасляная, галактаровая и галактуроновая кислоты. Пригодные фармацевтически приемлемые соли, образованные присоединением оснований к соединениям формулы I, включают соли металлов и органические соли.

Более предпочтительные соли металлов включают соли щелочного металла (группа Iа), соли щелочно-земельного металла (группа IIа) и соли других физиологически приемлемых металлов, но не ограничены ими. Такие соли могут представлять собой соли алюминия, кальция, лития, марганца, калия, натрия и цинка. Предпочтительные органические соли представляют собой соли третичных аминов и четвертичного аммония, включая, в частности, трометамин, диэтиламин, N,N'-дибензилэтилендиамин, хлорпрокаин, холин, диэтаноламин, этилендиамин, меглумин (N-метилглукамин) и прокаин. Все эти соли могут быть получены общепринятыми способами из соответствующего соединения формулы I путем взаимодействия, например, соответствующей кислоты или основания с соединением формулы I.

Общие способы синтеза

Соединения по изобретению могут быть синтезированы согласно следующим способам, представленным на схемах I-VI, где заместители R¹-R³ и Ar¹, HetAr² имеют значения, приведенные выше для формулы I, если дополнительно не указано иное.

На схеме I представлен трехстадийный процесс получения пиразола 5 по настоящему изобретению. На стадии 1 взаимодействием полученного из арилметила кетона 1 с полученным из пиридина альдегидом 2 либо в растворителе, таком как бензол или толуол, в присутствии основания, такого как пиридин, либо в смеси кислот, таких как уксусная кислота и бромистоводородная кислота, получают α ,β -ненасыщенный кетон 3. На стадии 2 в присутствии основания, такого как гидроксид натрия, α ,β -ненасыщенный кетон 3 превращают в соответствующий эпоксид 4 обработкой раствором перекиси водорода при комнатной температуре. На стадии 3 эпоксид 4 конденсируют с гидразином в приемлемом растворителе, таком как этанол, при температуре, верхний предел которой соответствует температуре кипения, получая пиразол 5. В другом варианте пиразол 5 может быть получен обработкой кетона 3 гидразидом тозила в присутствии кислоты, такой как уксусная кислота, при кипячении с обратным холодильником.

На схеме II представлены три пути синтеза пиразола 12, содержащего гетероароматическое кольцо. Согласно первому пути синтеза кетон 6 конденсируют с гидразином 7 с получением замещенного гидразина 9, который затем подвергают взаимодействию с ацилгалоидом или с ангидридом 10 при низкой температуре, получая ацилгидразон 11. Путем нагревания до 200° С гидразон 11 превращают в пиразол 12. Согласно второму пути синтеза ацилгидразон 11 получают непосредственно взаимодействием кетона 6 с ацилгидразидом 8 при комнатной температуре. Ацилгидразид 8 может быть получен взаимодействием гидразина с эфиром карбоновой кислоты. Нагревая ацилгидразон 11, как описано выше, получают пиразол 12. Согласно третьему пути синтеза кетон 6 обрабатывают ацилгидразидом 8 при температуре в диапазоне от комнатной до ~200° С, непосредственно получая пиразол 12. В другом варианте эта реакция конденсации может быть проведена в кислом растворителе, таком как уксусная кислота, или в растворителе, содержащем уксусную кислоту.

Цианкетон 13 может быть синтезирован согласно способу, описанному I. Lantos и др., J.Org. Chem., том 53, стр.4223-4227 (1988), для синтеза соединения, имеющего фтор в пара-положении (X означает пара-F). Этот способ, включенный в настоящее описание в качестве ссылки, может применяться для синтеза цианкетонов, таких как 12, в которых Х выбирают, например, из группы, включающей галоген, алкил и алкокси. Цианкетоны, такие как 13, могут быть превращены в пиразолы 14 взаимодействием с гидразином в приемлемом растворителе, таком как бензол или толуол. Может использоваться катализатор, такой как уксусная кислота. Когда применяют незамещенный гидразин, полученные при этом кольцевые атомы азота пиразола не имеют никаких заместителей, кроме водорода на одном из кольцевых атомов азота. Когда используют замещенный гидразин, такой как метилгидразин, полученный в результате реакции продукт, т.е. пиразол 14, имеет заместителя на кольцевом атоме азота, соседним с аминированным кольцевым атомом углерода, как показано на схеме I. Образовавшийся в результате аминопиразол 14 может быть ацилирован или сульфонилирован с получением замещенного аминопиразола 15 обработкой активированной карбоновой или сульфоновой кислотой в приемлемом растворителе, таком как пиридин. Примеры приемлемым образом активированной карбоновой кислоты включают уксусный ангидрид или бензоилхлорид. Примеры соответствующим образом активированной сульфоновой кислоты включают метилсульфонилхлорид, пара-толуолсульфонил или сульфамилхлорид.

На схеме IV проиллюстрирован синтез 3-пиридил-4-арилпиразолов по настоящему изобретению. Бензоат 16 сначала подвергают взаимодействию с пиридином 17 в присутствии основания, такого как алкоксид щелочного металла (предпочтительно метоксид натрия), в приемлемом растворителе, таком как тетрагидрофуран. Последующей обработкой кислотой, предпочтительно минеральной кислотой, такой как соляная кислота, получают дезоксибензоин 18. Этот дезоксибензоин 18 затем превращают в кетон 19 обработкой избытком диметилацеталя диметилформамида. Затем кетон 19 подвергают взаимодействию с гидразином в приемлемом растворителе, таком как этанол, получая смесь пиразолов 20 и 21. На схеме IV R⁴ обозначает один или большее количество радикалов, независимо друг от друга выбранных из необязательных заместителей, описанных выше для Ar, a R⁵ обозначает один или большее количество радикалов, независимо друг от друга выбранных из необязательных заместителей, описанных выше для HetAr².

3-пиримидил-4-арилпиразолы по настоящему изобретению могут быть синтезированы согласно схеме IV путем замены пиридина 17 на соответствующий пиримидин.

На схеме V гидроксиалкилпиразолы 22 и 23 превращают в сульфонатные производные взаимодействием с алкил- или с арилсульфонилгалогенидом. Эти сульфонаты затем подвергают взаимодействию с аммиаком или с первичными или вторичными аминами, получая соответствующие 1-аминопиразолы 24 и 25 соответственно. На схеме V n равно 1, 2, 3, 4 или 5, R⁴ и R⁵ имеют значения, указанные для схемы IV, a R⁶ и R⁷ независимо друг от друга выбирают, например, из группы, включающей водород, алкил и арил, или они вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 4-8-членное кольцо которое может содержать один или большее количество дополнительных гетероатомов, выбранных из кислорода, азота и серы.

Схема VI аналогична схеме IV за исключением того, что дезоксибензоин 18 сначала подвергают взаимодействию с гидразином в приемлемом растворителе, таком как этанол, получая гидразин 26. Гидразин 26 затем превращают в пиразол 20 (а не в смесь пиразолов 20 и 21, как показано на схеме IV) обработкой избытком диметилацеталя диметилформамида. На схеме VI R⁴ и R⁵ имеют значения, указанные для схемы V.

В приведенных ниже примерах подробно описаны способы получения соединений формулы I. Эти подробные описания подпадают под объем изобретения и служат для иллюстрации описанных выше общих способов синтеза, которые представляют собой составную часть изобретения. Эти подробные описания приведены только для целей иллюстрации и не направлены на ограничение объема изобретения. Все части представляют собой массовые части, а температура приведена в градусах Цельсия, если не указано иное. Для всех соединений приведен ЯМР-спектр, согласующийся с их установленным строением. В некоторых случаях установленное строение подтверждено в экспериментах с использованием ядерного эффекта Оверхаузера (ЯЭО).

В примерах использованы следующие сокращения и обозначения:НСlсоляная кислотаMgSO₄сульфат магнияNa₂SO₄сульфат натрияNaIO₄периодат натрияNaHSO₃бисульфит натрияNaOHгидроксид натрияКОНгидроксид калияP₂O₅пентоксид фосфораМеОНметанолEtOHэтанолНОАс (или АсОН)уксусная кислотаEtOAcэтилацетатH₂ОводаH₂O₂перекись водородаСH₂Cl₂метиленхлоридNaOMeметоксид натрияччас(ы)минминута (ы)ТГФтетрагидрофуранТСХтонкослойная хроматографияДСКдифференциальная сканирующая калориметрияt_киптемпература кипенияt_плтемпература плавленияэкв.эквивалент

Пример 1

4-(3-метил-4-фенил-1Н-пиразол-5-ил)пиридин

Стадия 1: Получение 3-фенил-4-(4-пиридил)-3-бутен-2-она

3-фенил-4-(4-пиридил)-3-бутен-2-он получали согласно способу, описанному у Reichert и Lechner, Arzneim.-Forsch. 15, 36 (1965) (публикация включена в настоящее описание в качестве ссылки).

Стадия 2: Получение 3-фенил-4-(4-пиридил)-3,4-эпокси-2-бутанона

К перемешиваемому раствору 3-фенил-4-(4-пиридил)-3-бутен-2-она (стадия 1) (500 мг, 2,24 ммоль) в метаноле (10 мл) при комнатной температуре добавляли водный раствор (9 мл) гидроксида натрия (100 мг, 2,24 ммоль) и перекись водорода (0,5 мл 30%-ного водного раствора, 4,4 ммоль). После перемешивания в течение 2 ч добавляли хлорид натрия и реакционную смесь экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали в вакууме, получая неочищенный 3-фенил-4-(4-пиридил)-3,4-эпокси-2-бутанон (385 мг, 65%) в виде масла. Его использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.

Стадия 3: Получение 4-(3-метил-4-фенил-1Н-пиразол-5-ил)пиридина

Раствор 3-фенил-4-(4-пиридил)-3,4-эпокси-2-бутанона (стадия 2) (350 мг, 1,46 ммоль) и безводного гидразина (0,7 мл, 20 ммоль) в этаноле (3 мл) выдерживали при кипячении с обратным холодильником в течение 4 ч. Реакционную смесь охлаждали и растворитель выпаривали досуха. Образовавшийся остаток очищали хроматографией (силикагель, смесь ацетон/гексан 1:1), получая требуемый продукт в виде кристаллического твердого вещества, которое перекристаллизовывали из этилацетата и гексана, получая чистый 4-(3-метил-4-фенил-1Н-пиразол-5-ил)пиридин (145 мг, 42%): t_пл 164-165° С.

Элементный анализ: рассчитано для С₁₅Н₁₃N₃ (235,29): С 76,57, Н 5,57, N 17,86; обнаружено: С 76,49, Н 5,45, N 17,70.

Соединения из примеров 2-8 синтезировали согласно описанному выше способу (в частности согласно схеме III), используя соответствующие исходные реагенты.

Пример 2

4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-3-амин

Цианкетон 1, приведенный на схеме III, в котором Х обозначает фтор в пара-положении, синтезировали согласно способу, описанному у I. Lantos и др., J. Org. Chem., 53, 4223-4227 (1988) (публикация включена в настоящее описание в качестве ссылки). Раствор, содержащий цианкетон (10 г, 41 ммоль), гидрат гидразина (2,5 мл) и уксусную кислоту (5,2 мл) в бензоле (100 мл), выдерживали при кипячении с обратным холодильником в течение 4 ч. Реакционную смесь охлаждали и экстрагировали 3 н. НСl. Объединенные кислые экстракты подщелачивали до значения рН 10, используя концентрированный гидроксид аммония при охлаждении. Щелочной водный слой экстрагировали метиленхлоридом и объединенные органические экстракты сушили над сульфатом магния.

Осушитель отфильтровывали и фильтрат концентрировали в вакууме, получая неочищенный 4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-3-амин, который очищали перекристаллизацией из этилацетата и гексана. Очищенный 4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-3-амин имел t_пл 178-180° С (капилляр).

Элементный анализ: рассчитано для C₁₄H₁₁N₄F· 0,25H₂O: С 64,99, Н 4,48, N 21,65; обнаружено: С 64,99, Н 4,48, N 21,54.

Пример 3

N-[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1-Н-пиразол-3-ил]метансульфонамид

Раствор, содержащий 4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-3-амин (200 мг, 0,77 ммоль), полученный согласно примеру 2, и метансульфонилхлорид (90 мг) в пиридине (5 мл), перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Пиридин удаляли в вакууме и остаток обрабатывали метиленхлоридом и водой. Образовавшийся осадок фильтровали, получая N-[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1H-пиразол-3-ил]метансульфонамид. Дополнительная порция N-[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1H-пиразол-3-ил]метансульфонамида содержалась в метиленхлоридном слое. Метиленхлоридный слой упаривали в вакууме и остаток очищали хроматографией на силикагеле, используя смесь этилацетата и метанола в качестве элюентов. Очищенный N-[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1H-пиразол-3-ил]метансульфонамид имел t_пл 168-170° С.

Элементный анализ: рассчитано для C₁₅H₁₃N₄SO₂F· 0,25H₂O: С 53,48, Н 4,04, N 16,63; обнаружено: С 53,41, Н 3,78, N 16,52.

Пример 4

N-[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-3-ил]-N'-метилсульфамид

Метилсульфамилхлорид синтезировали, выдерживая при кипячении с обратным холодильником раствор метилсульфаминовой кислоты (1,0 г) в оксихлориде фосфора (10 мл) в течение 6 ч. Избыток оксихлорида фосфора удаляли в вакууме и оставшееся масло применяли для синтеза продукта без дополнительной обработки. Раствор 4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-3-амина (200 мг, 0,77 ммоль), полученного согласно примеру 2, и примерно 1 ммоль вышеуказанного масла в пиридине (5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь упаривали в вакууме и остаток очищали хроматографией на силикагеле, используя этилацетат и смеси этилацетата и метанола в качестве элюентов, получая N-[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-3-ил]-N'-метилсульфамид в виде кристаллического твердого вещества, t_пл 194-195° С.

Элементный анализ: рассчитано для C₁₅H₁₄N₅SO₂F· 1,0H₂O: С 49,31, Н 4,41, N 19,17; обнаружено: С 49,13, Н 3,97, N 19,01.

Пример 5

[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1H-пиразол-3-ил]мочевина

Суспензию, содержащую 4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1H-пиразол-3-амин (200 мг, 0,77 ммоль), полученный согласно примеру 2, в растворе дитрет-бутилкарбоната (185 мг, 0,9 ммоль) и 4-диметиламинопиридина (ДМАП) (10 мг) в метиленхлориде (10 мл), перемешивали при комнатной температуре в течение 20 мин, и в это время суспендируемый продукт растворялся. Добавляли N-пропиламин (50 мг) и продолжали перемешивание в течение 1 ч при комнатной температуре. Затем реакционную смесь выдерживали при кипячении с обратным холодильником в течение 15 мин, охлаждали и упаривали в вакууме. Обработка этилацетатом и гексаном приводила к выпадению кристаллов трет-бутоксикарбонильного производного, t_пл 183-184° С.

Элементный анализ: рассчитано для C₁₉H₁₉N₄O₂F: С 64,40, Н 5,40, N 15,81; обнаружено: С 64,66, Н 5,63, N 15,63.

Раствор указанного выше трет-бутоксикарбонильного производного (100 мг, 0,3 ммоль) в тетрагидрофуране обрабатывали аммиаком при 80° С в толстостенной склянке для реакций под давлением в течение 12 ч. Реакционную смесь упаривали в вакууме и остаток очищали хроматографией на силикагеле, используя в качестве элюентов смеси этилацетата и метанола. Полученная таким путем очищенная [4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1H-пиразол-3-ил] мочевина имела t_пл 224-225° С.

Элементный анализ: рассчитано для C₁₅H₁₂N₅O: С 60,60, Н 4,07, N 23,56; обнаружено: С 60,21, Н 4,11, N 23,30.

Пример 6

[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-3-ил] сульфамид

Сульфамилхлорид синтезировали из хлорсульфонилизоцианата согласно способу, описанному R.Graft в Chemische Berichte, стр.509 (1959) (публикация включена в настоящее описание в качестве ссылки). Раствор, содержащий 4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-3-амин (200 мг, 0,77 ммоль), полученный согласно примеру 2, сульфамилхлорид (100 мг, 0,8 ммоль) и триэтиламин (200 мг, 2 ммоль) в бензоле (5 мл), и ацетонитрил (5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь упаривали в вакууме, остаток обрабатывали водой и подщелачивали до рН 7 с помощью гидроксида аммония. Образовавшийся осадок очищали хроматографией на силикагеле, используя в качестве элюентов смеси этилацетата и метанола. Полученный таким образом очищенный [4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-3-ил] сульфамид имел t_пл 201-202°С.

Элементный анализ: рассчитано для C₁₄H₁₂N₅SO₂F: С 50,44, Н 3,63, N 21,01; обнаружено: С 50,43, Н 3,45, N 20,89.

Пример 7

4-(4-хлорфенил)-1-метил-3-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-5-амин

Раствор, содержащий приведенный на схеме III цианкетон 1 (1,5 г, 5,19 ммоль), в котором Х обозначает хлор в пара-положении, метилгидразин (0,35 мл) и уксусную кислоту (0,75 мл) в бензоле (15 мл), выдерживали при кипячении с обратным холодильником в течение 3,5 ч. Реакционную смесь охлаждали и экстрагировали 3 н. НСl. Водный слой концентрировали на роторном испарителе и затем подщелачивали с помощью гидроксида аммония. Образовавшийся осадок перекристаллизовывали из метанола, получая чистый 4-(4-хлорфенил)-1-метил-3-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-5-амин, t_пл 257-258° С.

Элементный анализ: рассчитано для C₁₅H₁₃N₄Cl: С 63,27, Н 4,60, N 19,68; обнаружено: С 62,93, Н 4,45, N 19,64.

Пример 8

N-[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-3-ил]-N'-метилмочевина

Раствор, содержащий 4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-3-амин (100 мг, 0,39 ммоль), полученный согласно примеру 2, метилизопианат (22 г, 0,38 ммоль) и 4-диметиламинопиридин (2,5 мг) в метиленхлориде (10 мл), перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Реакционную смесь упаривали в вакууме. Остаток растирали с гексаном и твердый продукт фильтровали, получая чистую N-[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-3-ил]-N'-метилмочевину, t_пл 212-213° С.

Элементный анализ: рассчитано для C₁₆H₁₄N₅FO: С 61,73, Н 4,53, N 22,50; обнаружено: С 61,63, Н 4,55, N 22,47.

Соединения из примеров 9-11 синтезировали согласно способам, описанным выше (в частности, по схеме IV), с использованием соответствующих исходных реагентов.

Пример 9

4-[4-(4-фторфенил)-1Н-пиразол-3-ил]пиридин

Стадия 1

Метилизоникотинат (13,7 г, 0,1 моль) и этил-4-фторфенилацетат (18,2 г, 0,1 моль) смешивали вместе, а затем добавляли метоксид натрия (8,1 г, 0,15 ммоль). Смесь нагревали до 60-70° С в течение 24 ч, пропуская через склянку азот для удаления метанола. Затем добавляли концентрированную соляную кислоту (50 мл) и реакционную смесь выдерживали при кипячении с обратным холодильником в течение 3 ч. После добавления воды (30 мл) реакционную смесь экстрагировали хлороформом и водную фазу нейтрализовали до рН 6-7 с помощью водного гидроксида натрия (1М). Образовавшийся осадок собирали фильтрацией, промывали водой и сушили в вакууме, получая 10 г 2-(4-фторфенил)-1-(4'-пиридил)этан-1-она (выход: 46%). ¹H-ЯМР: согласуется с установленным строением продукта и/или его таутомера.

Стадия 2

Полученный по описанной выше методике 2-(4-фторфенил)-1-(4'-пиридил)этан-1-он (1 г) растворяли в 50 мл тетрагидрофурана и добавляли диметилацеталь N,N-диметилформамида (5 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 дней. После выпаривания растворителя образовавшийся твердый продукт промывали гексаном и получали 1 г виниламина. Этот виниламин (0,5 г) растворяли в этаноле (15 мл) и добавляли гидрат гидразина (5 мл). Смесь перемешивали при 0° С в течение 2 ч и затем упаривали досуха. После перекристаллизации из метанола/воды получали 400 мг 4-[4-(4-фторфенил)-1Н-пиразол-3-ил] пиридина с выходом 91%. МС 240 (М+1); ¹H-ЯМР: согласуется с установленным строением продукта.

Элементный анализ: рассчитано для C₁₄H₁₀FN₃·_{0,2H2O: С 69,24, Н 4,32, N 17,30; обнаружено: С 69,54, Н 4,06, N 17,43.}

Пример 10

4-[4-(4-фторфенил)-1-метил-1Н-пиразол-3-ил]пиридин

При замене на стадии 2 в примере 9 гидрата гидразина на метилгидразин получали 4-[4-(4-фторфенил)-1-метил-1Н-пиразол-3-ил]пиридин (N-метильное производное, соответствующее соединению из примера 9). После очистки перекристаллизацией из толуола и гексана получали чистый 4-[4-(4-фторфенил)-1-метил-1Н-пиразол-3-ил] пиридин с выходом 57%. МС m/z: 254 (М+1). ¹Н-ЯМР: согласуется с установленным строением продукта.

Элементный анализ: рассчитано для C₁₅H₁₂FN₃: С 71,13, Н 4,78, N 16,69; обнаружено: С 70,99, Н 4,68, N 16,65.

Пример 11

4-(4-фторфенил)-3-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-1-этанол и 4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-1-этанол

Работали аналогично примеру 9 за исключением того, что гидрат гидразина заменяли на 2-гидроксиэтилгидразин. После перекристаллизации из толуола и гексана получали 4-(4-фторфенил)-3-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-1-этанол и 4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1H-пиразол-1-этанол в виде смеси с выходом 67%. ¹H-ЯМР: согласуется с установленным строением продукта. МС m/z: 284 (М+1).

Элементный анализ: рассчитано для C₁₆H₁₄FN₃O: С 67,83, Н 4,98, N 14,83; обнаружено: С 67,86, Н 5,04, N 14,85.

Соединения из примеров 12 и 13 синтезировали согласно описанному выше способу (в частности, согласно схеме V), используя соответствующие исходные реагенты.

Пример 12

4-(4-фторфенил)-N,N-диметил-3-(4-пиридинил)-1H-пиразол-1-этанамин и 4-(4-фторфенил)-N,N-диметил-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-1-этанамин

4-(4-фторфенил)-3-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-1-этанол (или 4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1H-пиразол-1-этанол) (1,36 г), полученный согласно примеру 11, растворяли в 30 мл пиридина и охлаждали до 0° С, после чего добавляли метансульфонилхлорид (0,6 мл). После перемешивания при 0° С в течение примерно 12 ч добавляли примерно 20 г льда и смесь экстрагировали толуолом (300 мл). Остаток, полученный после упаривания, использовали без дополнительный очистки. 0,7 г полученного выше соединения растворяли в метаноле (25 мл) и добавляли раствор диметиламина/ТГФ (4М, 2 мл). Реакционную смесь выдерживали при кипячении с обратным холодильником в течение 12 ч, затем упаривали досуха. Остаток очищали хроматографией (метанол/дихлорметан, 1:10). Таким путем получали смесь 4-(4-фторфенил)-N,N-диметил-3-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-1-этанамина и 4-(4-фторфенил)-N,N-диметил-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-1-этанамина. ¹Н-ЯМР: согласуется с установленным строением продукта. МС m/z: 311 (М+1).

Элементный анализ: рассчитано для С₁₈Н₁₉F· 0,55Н₂: С 67,50, Н 6,33, N 17,49; обнаружено: С 67,21, Н 6,46, N 17,14.

Пример 13

4-[2-[4-(4-фторфенил)-3-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-1-ил]этил]морфолин и 4-[2-[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-1-ил]этил]морфолин

Для получения смеси 4-[2-[4-(4-фторфенил)-3-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-1-ил]этил]морфолина и 4-[2-[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-1-ил]этил]морфолина работали аналогично примеру 11 за исключением того, что диметиламин заменяли на морфолин. МС m/z: 353 (М+1).

Элементный анализ: рассчитано для C₂₀H₂₁N₄OF· 0,5H₂: С 66,47, Н 6,14, N 15,50; обнаружено: С 66,57, Н 6,27, N 15,14.

Соединение из примера 14 синтезировали согласно описанному выше способу (в частности, согласно схеме VI), используя соответствующие исходные реагенты.

Пример 14

4-[4-(4-фторфенил)-1-метил-1Н-пиразол-3-ил]пиридин

2-(4-фторфенил)-1-(4'-пиридил)этан-1-он (0,5 г, 0,00232 моль), полученный на стадии 1 в примере 9, смешивали с 98%-ным метилгидразином (0,2 г, 0,00462 моль) в 10 мл этанола, содержащего 0,1 мл уксусной кислоты в колбе Эрленмейера объемом 50 мл. После острожного кипячения (30 мин в паровой бане) брали небольшой образец смеси, помещали в глубокий вакуум и исследовали с помощью ЯМР с целью подтвердить завершение образования гидразона. Реакционную смесь концентрировали до пастообразной массы, после чего добавляли 3,6 мл диметилацеталя ДМФ (0,027 моль) и нагревали до 80° С в течение 30 мин, при этом получали прозрачный вязкий раствор желтого цвета. Проверяли, закончилась ли реакция (с помощью ТСХ или ЯМР), смесь концентрировали и растворяли в 20 мл хлороформа. После промывки водой (10 мл) органический слой экстрагировали 15 мл 10%-ной НСl. Водный слой затем обрабатывали 0,5 г активированного древесного угля при 70° С в течение 10 мин, фильтровали через целит, острожно нейтрализовали до рН 7-8 при интенсивном перемешивании и охлаждении. Мелкозернистый беловатый осадок фильтровали и сушили. С помощью ЯМР установлено, что строение продукта согласуется с предполагаемым. Получали с количественным выходом осадок, представляющий собой 4-[4-(4-фторфенил)-1-метил-1Н-пиразол-3-ил]пиридин, который фильтровали, промывали простым эфиром и сушили. Выход: 0,45 г (77%). МС m/z: 254.

Элементный анализ: рассчитано: С 62,18, Н 4,52, N 14,50; обнаружено: С 62,39, Н 4,07, N 14,24.

Пример 15

4-[4-(4-хлорфенил)-1Н-пиразол-3-ил]пиридин

4-[4-(4-хлорфенил)-1Н-пиразол-3-ил]пиридин получали согласно примеру 9 за исключением того, что этил-4-фторфенилацетат заменяли на этил-4-хлорфенилацетат; t_пл 204-207° С.

Элементный анализ: рассчитано: С 65,76, Н 3,94, N 16,43; обнаружено: С 65,44, Н 3,78, N 16.04.

Пример 16

4-(4-Фенил)-1Н-пиразол-5-ил)пиридин

4-(4-фенил)-1Н-пиразол-5-ил)пиридин получали согласно примеру 9 за исключением того, что этил-4-фторфенилацетат заменяли на этилфенилацетат.

Пример 17

1-метил-4-[2-[4-(4-фторфенил)-3-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-1-ил]]пиперидин и 1-метил-4-[2-[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-1-ил]]пиперидин

Эти соединения могут быть получены способом синтеза, описанным в примере 11, при замене гидроксиэтилгидразина на 4-гидразино-N-метилпиперидин. 4-гидразино-N-метилпиперидин синтезировали согласно способу, описанному у Ebnoether и др., Helv. Chim. Acta (1959) 42, 533, 541, 560. Образовавшуюся смесь разделяли на соответствующие чистые вещества, указанные в заголовке, хроматографией на силикагеле, используя в качестве элюента метанол/дихлорметан (1:10) или другую пригодную систему растворителей.

Биологическая оценка

Анализ киназы р38

Клонирование человеческой киназы р38α

Кодирующую область кДНК человеческой р38α получали ПЦР-амплификацией РНК, выделенной из линии клеток моноцитов человека ТНР.1. Первую цепь кДНК синтезировали с использованием общей РНК следующим образом. 2 мкг РНК отжигали с 100 нг произвольных гексамерных праймеров в 10 мкл реакционной смеси путем нагревания до 70°С в течение 10 мин с последующим выдерживанием в течение 2 мин на льду. Затем синтезировали кДНК, добавляя 1 мкл РНК_sin (фирма Promega, Мэдисон, шт. Висконсин), 2 мкл 50 мМ дНТФ, 4 мкл пятикратного (5х) буфера, 2 мкл 100 мМ ДТТ и 1 мкл (200 ед.) обратной транскриптазы AMV (вирус миелобластоза птиц) из набора Superscript II™ . Произвольный праймер, дНТФ и реагенты Superscript™ приобретали у фирмы Life-Technologies, Гейтерсбург, шт. Миннесота. Реакционную смесь инкубировали при 42° С в течение 1 ч. Амплификацию кДНК р38 проводили путем добавления аликвот по 5 мкл реакционной смеси, содержащей обратную транскриптазу, к 100 мкл реакционной смеси для ПЦР (полимеразная цепная реакция), содержащей следующие компоненты: 80 мкл дН₂О, 2 мкл 50 мМ дНТФ, по 1 мкл каждого из праймеров, обеспечивающих синтез по ходу и против хода транскрипции (50 пмоль/мкл), 10 мкл 10-кратного буфера и 1 мкл полимеразы Expand™ (фирма Boehringer Mannheim). ПЦР-праймеры обеспечивали включение сайтов BamHI на 5'- и 3'-концы амплифицированного фрагмента, и они были получены от фирмы Genosys. Праймеры, обеспечивающие синтез по ходу и против хода транскрипции, имели следующие последовательности:

5'-GATCGAGGATTCATGTCTCAGGAGAGGCCCA-3' и

5'-GATCGAGGATTCTCAGGACTCCATCTCTTC-3'

соответственно. ПЦР-амплификацию проводили в термоячейке типа DNA Thermal Cycler (фирма Perkin Elmer) путем проведения 30 следующих циклов: 94° в течение 1 мин, 60° в течение 1 мин и 68° в течение 2 мин. После амплификации избыток праймеров и невключенные дНТФ удаляли из амплифицированного фрагмента с помощью набора Wizard™ PCR prep (фирма Promega) и расщепляли с помощью BamHI (фирма New England Biolabs). BamHI-фрагмент лигировали с обработанной BamHI ДНК плазмиды pGEX 2T (фирма PharmaciaBiotech) с использованием Т-4 ДНК лигазы (фирма New England Biolabs) согласно способу, описанному у Т. Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2-е изд. (1989). Полученным в результате лигирования продуктом трансформировали химически компетентные клетки штамма Е. coli DH10B, поставляемые фирмой Life-Technologies, следуя инструкциям производителя. Плазмидную ДНК выделяли из полученных колоний бактерии с помощью набора Pi-omega Wizard™ miniprep. Плазмиды, содержащие соответствующий BamHI-фрагмент, секвенировали в термоячейке типа DNA Thermal Cycler (фирма Perkin Elmer) с помощью Prism™ (фирма Applied Biosystems Inc.). Выявляли клоны кДНК, которые кодировали обе изоформы человеческой р38a (Lee и др., Nature 372, 739). Один из клонов, который содержал кДНК р38α -2 (CSBP-2), встроенную в сайт клонирования плазмиды pGEX 2T, расположенный на 3'-конце кодирующей области GST, обозначили как pMON 35802. Установленная последовательность этого клона точно соответствовала последовательности клона кДНК, описанной Lee и др. Эта плазмида экспрессии позволяет получить слитый протеин GST-p38α .

Экспрессия человеческой р38α

Слитый протеин GST/p38a экспрессировали с использованием плазмиды pMON 35802 в штамме Е. coli DH10B (фирмы Life-Technologies, Gibco-BRL). Культуры выращивали в течение ночи в бульоне Лурия (LB), содержащем 100 мг/мл ампициллина. На следующий день 500 мл свежего LB-бульона инокулировали 10 мл выращенной в течение ночи культуры и выращивали в колбе объемом 2 л при 37° С при постоянном встряхивании до достижения культурой коэффициента поглощения 0,8 при 600 нм. Экспрессию слитого протеина индуцировали, добавляя изопропил-b-D-тиогалактозидазу (ИПТГ) до конечной концентрации 0,05 мМ. Культуры встряхивали в течение 3 ч при комнатной температуре и собирали клетки центрифугированием. Клеточный дебрис хранили в замороженном состоянии до очистки протеина.

Очистка киназы р38α

Все химические реагенты получены от фирмы Sigma Chemical Co., если не указано иное. После ферментации в пяти встряхиваемых колбах объемом 1 л собирали 20 г клеточного дебриса Е. coli и ресуспендировали в объеме забуференного фосфатом физиолигического растовра (ЗФР) (140 мМ NaCl, 2,7 мМ КСl, 10 мМ Na₂HPO₄, 1,8 мМ КН₂РO₄, рН 7,3) до 200 мл. Концентрацию дитиотреитола (ДТТ) в клеточной суспензии доводили до 5 мМ с помощью 2М ДТТ и затем распределяли поровну между пятью коническим пробирками Фалькона объемом 50 мл. Клетки облучали ультразвуком (устройство Ultrasonics, модель W375) с использованием зонда размером 1 см три раза по 1 мин (пульсация) на льду. Лизированный клеточный материала удаляли центрифугированием (12000× g, 15 мин) и осветленный супернатант вносили в глутатион-сефарозную смолу (фирма Pharmacia).

Глутатион-сефарозная аффинная хроматография

К 200 мл осветленного супернатанта добавляли 20 мл 50%-ной суспензии глутатион-сефарозы в ЗФР и инкубировали порциями в течение 30 мин при комнатной температуре. Смолу собирали центрифугированием (600× g, 5 мин) и промывали 2× 150 мл ЗФР/1% Тритона Х-100, а затем 4× 40 мл ЗФР. Для выделения киназы р38 из слитого протеина GST-p38 глутатион-сефарозную смолу ресуспендировали в 6 мл ЗФР, содержащего 250 ед. тромбин-протеазы (фирма Pharmacia, удельная активность>7500 ед./мг) и осторожно перемешивали в течение 4 ч при комнатной температуре. Глутатион-сефарозную смолу удаляли центрифугированием (600× g, 5 мин) и промывали 2× 6 мл ЗФР. Промытые ЗФР фракции и расщепленный супернатант, содержащий протеинкиназу, объединяли и концентрацию фенилметилсульфонилфторида (ФМСФ) доводили до 0,3 мМ.

Анионобменная хроматография на колонке Mono Q

Расщепленную тромбин-протеазой киназу р38 далее очищали с помощью анионобменной ЖХБР- (жидкостная хроматография быстрого разрешения) хроматографии. Расщепленный тромбин-протеазой образец разбавляли 2 раза буфером А (25 мМ HEPES, рН 7,5, 25 мМ бета-глицерофосфат, 2 мМ ДТТ, 5% глицерина) и загружали в анионобменную колонку типа Mono Q HR 10/10 (фирма Pharmacia), уравновешенную буфером А. Колонку элюировали градиентом соли (160 мл 0,1М-0,6М NaCl/буфер А, скорость потока 2 мл/мин). Собирали пик киназы р38, элюирующийся при концентрации NaCl 200 мМ, и концентрировали до 3-4 мл с помощью концентратора типа Filtron 10 (фирма Filtron Corp.).

Гель-фильтрация на Sephacryl S100

Концентрированный образец киназы р38, полученный после хроматографии на колонке Mono Q, очищали гель-фильтрацией (колонка HiPrep 26/60 Sephacryl S100 фирмы Pharmacia, уравновешенная буфером Б (50 мМ HEPES, рН 7,5, 50 мМ NaCl, 2 мМ ДТТ, 5% глицерина)). Протеин элюировали с колонки с помощью буфера Б при скорости потока 0,5 мл/мин и протеин выявляли путем абсорбции при 280 нм. Содержащие киназу р38 фракции (выявленные с помощью электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (ДСН)) объединяли и замораживали при -80° С. Как правило, из очищенного протеина, полученного после ферментации Е. coli во встряхиваемых колбах объемом 5 л, получали 35 мг киназы р38.

Исследование in vitro

Способность соединений ингибировать человеческую киназу р35α оценивали in vitro двумя методами. Первый метод основан на способности активированной человеческой киназы р35а фосфорилировать биотинилированный субстрат PHAS-I (фосфорилируемый, устойчивый к действию температуры и кислой среды, индуцируемый инсулином протеин) в присутствии γ -³²Р-АТФ (³²Р-АТФ). PHAS-I биотинилировали до анализа и далее в процессе анализа выявляли фосфорилированный субстрат. Киназу р38 активировали с помощью МКК6. Соединения тестировали в диапазоне концентраций от 100 до 0,001 мкМ, полученных с использованием 10-кратных серийных разведении в 1%-ном ДМСО. Каждую концентрацию ингибитора тестировали трижды.

Все реакции проводили в 96-луночных планшетах из полипропилена. Каждая реакционная лунка содержала 25 мМ HEPES, рН 7,5, ацетат магния (10 мМ) и немеченый АТФ (50 мкМ). Для достижения достаточного уровня сигнала при анализе была необходима активация р38. Биотинилированный PHAS-I использовали в количестве 1-2 мкг на объем реакционной смеси 50 мкл в конечной концентрации 1,5 мкМ. Активированную человеческую киназу р38α использовали в количестве 1 мкг на 50 мкл объема реакционной смеси в конечной концентрации 0,3 мкМ. γ -³²Р-АТФ использовали для выявления процесса фосфорилирования PHAS-I. Удельная активность ³²Р-АТФ составляла 3000 Ки/ммоль и применяли 1,2 мкКи/50 мкл объема реакционной смеси. Реакцию проводили либо в течение 1 ч, либо в течение ночи при 30°С.

После инкубации 20 мкл реакционной смеси переносили в фильтрационный планшет с адсорбированным стрептавидином, обладающим высоким сродством к биотину (SAM-streptavidin-matrix, фирма Promega), предварительно смоченный забуференным фосфатом физиологическим раствором. Осуществляли контакт перенесенной реакционной смеси со стрептавидиновой мембраной планшета фирмы Promega в течение 1-2 мин. После захвата биотинилированного PHAS-I с включенной меткой ³²P с целью удаления невключенного ³²Р-АТФ каждую лунку трижды промывали 2М NaCl с 1% фосфорной кислоты, трижды промывали дистиллированной водой и в завершение один раз промывали 95%-ным этанолом. Фильтрационные планшеты сушили на воздухе и в лунки добавляли 20 мкл сцинтилляционной жидкости. Планшеты запечатывали и подсчитывали радиоактивность.

Также использовали второй метод анализа, основанный на способности киназы р38α индуцировать фосфорилирование EGFRP (рецепторный пептид эпидермального фактора роста, 21-мерный) в присутствии ³³Р-АТФ. Соединения тестировали в диапазоне концентраций от 100 до 0,001 мкМ, полученных с использованием 10-кратных серийных разведений в 1%-ном ДМСО. Каждую концентрацию ингибитора тестировали трижды. Активность соединений оценивали в реакционных объемах 50 мкл в присутствии 25 мМ HEPES, рН 7,5 10 мМ ацетата магния, 4% глицерина, 0,4% бычьего сывороточного альбумина, 0,4 мМ ДТТ, 50 мкМ немеченого АТФ, 25 мкг EGFRP (200 мкМ) и 0,05 мкКи γ -³³Р-АТФ. Реакции инициировали, добавляя 0,09 мкг активированного очищенного слитого протеина GST-человеческая киназа р38α . Активацию проводили с помощью GST-MKK6 (5:1, р38:МКК6) в течение 1 ч при 30° С в присутствии 50 мкМ АТФ. После инкубации в течение 60 мин при комнатной температуре реакцию прекращали, добавляя 150 мкл смолы типа AG 1Х8 в 900 мМ натрий-формиатном буфере, рН 3 (1 объем смолы на 2 объема буфера). Смеси перемешивали трижды с помощью пипетки и смоле давали осесть. Верхнюю фракцию осветленного раствора общим объемом 50 мкл переносили из реакционных лунок на планшеты типа Microlite-2. Затем в каждую лунку планшета Microlite добавляли 150 мкл сцинтилляционной жидкости Microscint 40 и планшеты запечатывали, перемешивали и подсчитывали радиоактивность.

Анализы клеточного ФНО

Способ выделения одноядерных клеток из периферической крови человека

Цельную кровь человека собирали в пробирки типа Vacutainer, содержащие ЭДТК в качестве антикоагулянта. Образец крови (7 мл) осторожно наносили слоями на 5 мл среды для выделения клеток PMN (фирма Robbins Scientific) в круглодонной ценрифужной пробирке объемом 15 мл. Образец центрифугировали при 450-500× g в течение 30-35 мин в центрифуге с качающимся ротором при комнатной температуре. После центрифугирования верхний слой клеток удаляли и трижды промывали с помощью ЗФР, включающем кальций или магний. Клетки центрифугировали при 400× g в течение 10 мин при комнатной температуре. Клетки ресуспендировали в бессывороточной питательной среде для макрофагов (Macrophage Serum Free Medium) (фирма Gibco BRL) в концентрации 2 млн клеток/мл.

Стимуляция с помощью ЛПС одноядерных клеток из периферической крови человека (ОПК)

ОПК-клетки (0,1 мл, 2 млн/мл) совместно инкубировали с 0,1 мл соединения (конечная концентрация 10-0,41 мкМ) в течение 1 ч в плоскодонных 96-луночных микротитрационных планшетах. Соединения предварительно растворяли в ДМСО и разбавляли в ТСМ до конечной концентрации ДМСО 0,1%. Затем добавляли ЛПС (фирма Calbiochem, конечная концентрация 20 нг/мл) в объеме 0,010 мл. Культуры инкубировали в течение ночи при 37° С. Затем супернатанты удаляли и тестировали с помощью ELISA в отношении ФНО-α и ИЛ1-β . Жизнеспособность анализировали с помощью MTS. После удаления 0,1 мл супернанатнта к оставшемуся 0,1 мл клеток добавляли 0,020 мл MTS. Клетки инкубировали при 37° С в течение 2-4 ч, а затем измеряли оптическую плотность (ОП) при 490-650 нм.

Поддержание и дифференциация линии клеток человеческой гистоцитической лимфомы U937

Клетки линии U937 (АТСС) размножали в среде RPMI 1640, содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки, 100 ед./мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 2 мМ глутамина (фирма Gibco). У 50 миллионов клеток в 100 мл среды индуцировали окончательную дифференциацию моноцитов путем 24-часовой инкубации с 20 нг/мл форбол-12-миристат-13-ацетата (фирма Sigma). Клетки промывали центрифугированием (200× g в течение 5 мин) и ресуспендировали в 100 мл свежей среды. Через 24-48 ч клетки собирали, центрифугировали и ресуспендировали в культуральной среде из расчета 2 млн клеток/мл.

Стимуляция с помощью ЛПС продуцирования ФНО клетками линии U937

Клетки линии U937 (0,1 мл, 2 млн/мл) инкубировали с 0,1 мл соединения (конечная концентрация 0,004-50 мкМ) в течение 1 ч в 96-луночных микротитрационных планшетах. Соединения готовили в виде 10 мМ маточных растворов в ДМСО и разбавляли культуральной средой, получая конечную концентрацию ДМСО 0,1%, которая использовалась в опытах на клетках. Затем добавляли 0,02 мл ЛПС (Е. coli, конечная концентрация 100 нг/мл). После инкубации в течение 4 ч при 37° С с помощью ELISA определяли количественное содержание ФНО-α , выделившегося в культуральную среду. Ингибирующее действие выражали в виде IC₅₀ (мкМ).

Исследование на крысах

Эффективность новых соединений в отношении ингибирования продуцирования ФНО также оценивали, используя в качестве модели крыс, которым вводили ЛПС. В качестве этой модели использовали самцов крыс линии Harlen Lewis [фирма Sprague Dawley Co.]. Каждой крысе весом примерно 300 г не давали корма в течение ночи перед опытом. Как правило, соединения вводили орально через желудочный зонд (хотя в некоторых случаях также использовали внутрибрюшинное, подкожное и внутривенное введение) за 1-24 ч до введения ЛПС. Крысам вводили внутривенно через хвостовую вену 30 мкг/кг ЛПС [Salmonella typhosa, фирма Sigma Co.]. Через 1 ч после введения ЛПС брали образцы крови путем сердечной пункции. Образцы сыворотки хранили при -20° С до количественного определения ФНО-α с помощью твердофазного иммуноферментного анализа ("ELISA") [фирма Biosource]. Дополнительные детали анализа описаны у Perretti М. и др. в Br.J.Pharmacol. (1993), 110, 868-877) публикация включена в настоящее описание в качестве ссылки).

Исследование на мышах

Моделирование на мышах индуцированного ЛПС продуцирования ФНО-α

Продуцирование ФНО-α индуцировали у 10-12-недельных самок мышей линии BALB/c путем введения через хвостовую вену 100 нг липополисахарида (из S.typhosa) в 0,2 мл физиологического раствора. Через 1 ч у мышей брали кровь из ретроорбитального синуса и с помощью ELISA количественно оценивали концентрации ФНО в сыворотке, полученной после свертывания крови. Как правило, максимальные количества ФНО в сыворотке находились в диапазоне от 2 до 6 нг/мл через 1 ч после инъекции ЛПС.

Тестируемые соединения вводили голодным мышам орально через желудочный зонд в виде суспензии в 0,2 мл смеси, содержащей 0,5% метилцеллюлозы и 0,025% Твина 20 в воде, за 1 ч или за 6 ч до инъекции ЛПС. Результаты, полученные через 1 ч, позволяют оценить активность соединения, выраженную в виде максимальной концентраций в плазме (С_max), а результаты, полученные через 6 ч, позволяют оценить продолжительность действия соединения. Эффективность в каждый момент времени определяли в виде процента ингибирования уровней ФНО в сыворотке по сравнению с данными, полученными для мышей, которым вводили ЛПС и только носитель.

Индукция и оценка индуцированного коллагеном артрита у мышей

Артрит индуцировали у мышей согласно способу, описанному у J.M.Stuart, Collagen Autoimmune Arthritis, Annual Rev. Immunol. 2: 199 (1984) (публикация включена в настоящее описание в качестве ссылки). В частности, артрит индуцировали у 8-12-недельных самцов мышей линии DBA/I путем введения в основание хвоста в 0-й день 50 мг коллагена типа II цыпленка (СII) (предоставленного доктором Marie Griffiths, Университет шт. Юта, Солт-Лейк-Сити, шт. Юта) в полном адъюванте Фрейнда (фирма Sigma). Объем раствора для инъекции составлял 100 мкл. Животным делали на 21-й день бустерную инъекцию, для чего использовали 50 мкг СИ в неполном адъюванте Фрейнда (объемом 100 мкл). Животных обследовали несколько раз каждую неделю в отношении симптомов артрита. Каждое животное, у которого были обнаружены краснота или припухлость лап, считалось заболевшим артритом. Количественную оценку артрита лап в баллах осуществляли по методу, описанному у Wooley и др.. Genetic Control of Type II Collagen Induced Arthrotis in Mice: Factors influencing Disease Susceptibility and Evidence for Multiple MHC Accociated Gene Control., Trans. Proc. 15: 180 (1983). Серьезность заболевания каждой лапы оценивали в баллах, используя трехбалльную шкалу (максимальный балл для каждого животного 12). Наличие у животных любого покраснения или припухлости пальцев или лапы оценивали баллом 1. Сильную припухлость всей лапы или деформацию оценивали баллом 2. Анкилоз суставов оценивали баллом 3. Животных обследовали в течение 8 недель. В каждой группе использовали 8-10 животных.

Приготовление и введение соединений

Соединения, которые тестировали на мышах, имеющих индуцированный коллагеном артрит, готовили в виде суспензии в 0,5%-ной метилцеллюлозе (фирма Sigma, Сэнт-Луис, шт. Миссури), 0,025%-ном Твине 20 (фирма Sigma). Суспензии соединений вводили орально через желудочный зонд в объеме 0,1 мл дважды в день. Лечение начинали на 20-й день после инъекции коллагена и продолжали ежедневно до последнего обследования на 56-й день. Оценку в баллах поражения артритом лап проводили согласно описанному выше способу.

Результаты, полученные в вышеописанных опытах, приведены ниже в таблице. Результаты по определению ингибирования р38 и полученные с использованием линии клеток U937, выражены в виде IC₅₀-значений (мкМ). Результаты, полученные на мышах с использованием ЛПС (мЛПС), выражены в виде процента ингибирования.

ТаблицаПримерp38α ¹ (мкМ)р38α ² (мкМ)U937 (мкМ)мЛПС (6 ч при 30 mpk)130,0013,3510,00 2 6,2110,61 3 2,55>10,00 4 0,234,705451,98 5,53 6  10,00 7 5,4810,00 8  10,00 92,443,460,647442107,230,41,598776110,6951040 120,94110-5 130,86>1022 155,90,75 32Примечания:
 ¹результаты для р38α , полученные in vitro с помощью анализа с использованием PHAS-I,
 ²результаты для р38α , полученные in vitro с помощью анализа с использованием EGFRP.

Настоящее изобретение также относится к классу фармацевтических композиций, включающих в качестве активных веществ соединения по настоящему изобретению в сочетании с одним или с большим количеством нетоксичных фармацевтически приемлемых носителей, и/или разбавителей, и/или адъювантов (в целом обозначены в настоящем описании как "носители") и при необходимости с другими активными ингредиентами. Активные вещества по изобретению могут вводиться любым пригодным для этой цели методом, предпочтительно в форме фармацевтической композиции, предназначенной для выбранного пути введения, и в дозе, эффективной для соответствующего лечения. Активные вещества и композиции, например, могут вводиться орально, внутривенно, внутрибрюшинно, подкожно, внутримышечно или местно.

Для орального введения фармацевтическая композиция может быть изготовлена в форме, например, таблетки, капсулы с мягким или твердым покрытием, лепешек, диспергируемых порошков, суспензии или жидкости. Фармацевтическую композицию предпочтительно изготавливают в виде стандартной дозы, содержащей определенное количество действующего вещества. Примерами таких стандартных доз являются таблетки или капсулы. Действующее вещество также может быть введено путем инъекции (внутривенно, внутримышечно, подкожно или струйно) в виде композиции, в которой в качестве приемлемого носителя может использоваться, например, физиологический раствор, декстроза или вода. Значение рН композиции может регулироваться при необходимости приемлемой кислотой, основанием или буфером. В состав композиции также могут быть включены приемлемые наполнители, диспергирующие вещества, смачивающие или суспендирующие агенты, включая маннит или ПЭГ 400. Приемлемая парентеральная композиция также может включать соединение, изготовленное в виде твердой стерильной композиции, в частности в виде лиофилизированного порошка, в пузырьках для инъекции. Для растворения композиции перед инъекцией может быть добавлен водный раствор. Количество терапевтически активных соединений, которое может вводиться, и режим дозирования для лечения болезненного состояния с помощью соединений и/или композиций по изобретению зависит от различных факторов, включая возраст, вес, пол и медицинское состояние пациента, серьезность воспаления или связанного с воспалением нарушения, пути и частоты введения, и от конкретного применяемого соединения и, таким образом, может варьироваться в широких пределах. Фармацевтические композиции могут содержать активные вещества в диапазоне примерно от 0,1 до 1000 мг, предпочтительно в диапазоне примерно от 7,0 до 350 мг. Суточная доза может составлять примерно от 0,01 до 100 мг/кг веса тела, предпочтительно от примерно 0,1 до примерно 50 мг/кг веса тела и наиболее предпочтительно от примерно 0,5 до примерно 30 мг/кг веса тела. Суточная доза может вводиться от одного до четырех раз в день. В случае кожных заболеваний может оказаться предпочтительным наносить местно препаративную форму соединений по настоящему изобретению на поврежденный участок 2-4 раза в день. При заболеваниях глаза или других наружных тканей, например рта и кожи, композиции предпочтительно применяют в виде геля, аэрозоля, мази или крема для местного нанесения или в виде суппозитория с общим содержанием активных веществ, например, от 0,075 до 30 мас.%, предпочтительно от 0,2 до 20 мас.% и наиболее предпочтительно от 0,4 до 15 мас.%. При приготовлении препаративной формы в виде мази действующие вещества могут применяться либо с парафиновой основой, либо со смешивающейся с водой основой мази. В другом варианте действующие вещества могут быть изготовлены в виде эмульсионного крема с основой типа масло в воде. При необходимости водная фаза основы крема может включать по крайней мере 30 мас.% многоатомного спирта, такого как пропиленгликоль, бутан-1,3-диол, маннит, сорбит, глицерин, полиэтиленгликоли и их смеси. Композиция для местного применения при необходимости может включать соединение, которое усиливает абсорбцию или проникновение действующего вещества через кожу или другие пораженные участки. Примеры таких веществ, усиливающих проникновение через кожу, включают диметилсульфоксид и близкие аналоги. Соединения по изобретению могут вводиться с помощью трансдермального устройства. Предпочтительно местное нанесение может осуществляться с использованием устройства типа бляшки, состоящей либо из резервуара и мембраны пористого типа, либо из твердых матриц различного типа. В любом случае активное вещество непрерывно выделяется из резервуара или микрокапсул через мембрану в проницаемый для активного вещества адгезивный слой, который находится в контакте с кожей или со слизистой оболочкой реципиента. Если активное вещество абсорбируется кожей, то реципиенту активное вещество вводится с контролируемой и заранее определенной скоростью. В случае микрокапсул капсулирующий агент также может функционировать в качестве мембраны. Трансдермальная бляшка может включать соединения в пригодной системе растворителей вместе с адгезивной системой, такой как акриловая эмульсия и полиэфирная бляшка. Масляная фаза эмульсии по изобретению может быть получена из известных ингредиентов известным способом. Хотя фаза может состоять только из эмульгатора, она также может включать смесь, состоящую по крайней мере из одного эмульгатора и жира или масла либо и жира, и масла. Предпочтительно гидрофильный эмульгатор включают вместе с липофильным эмульгатором, который действует в качестве стабилизатора. Предпочтительно включать как масло, так и жир. Вместе эмульгатор(ы) со стабилизатором(ами) или без него (них) образует(ют) так называемый эмульсионный воск, а воск вместе с маслом и жиром образует так называемую основу эмульсионной мази, которая образует масляную дисперсионную фазу композиции в виде крема. Эмульгаторы и стабилизаторы эмульсии, пригодные для использования в препаративной форме по настоящему изобретению, включают среди прочего Твин 60, Спан 80, цетостеариловый спирт, миристиловый спирт, глицеринмоностеарат и лаурилсульфат натрия. Выбор приемлемых масел и жиров для препаративной формы основан на достижении требуемых косметических свойств, поскольку растворимость действующего вещества в большинстве масел, которые предпочтительно используются в фармацевтических композициях в виде эмульсии, является очень низкой. Таким образом, крем предпочтительно должен представлять собой нежирный, не окрашивающий и смываемый продукт, обладающий приемлемой консистентностью для того, чтобы избежать вытекания из туб или других контейнеров. Могут использоваться алкиловые эфиры одно- или двухосновных кислот с прямой или с разветвленной цепью, такие как диизоадипат, изоцетилстеарат, диэфиры пропиленгликоля и жирных кислот кокосового масла, изопропилмиристат, децилолеат, изопропилпальмитат, бутилстеарат, 2-этилгексилпальмитат или смесь сложных эфиров с разветвленной цепью. Они могут применяться индивидуально или в сочетании в зависимости от требуемых свойств. В другом варианте могут использоваться липиды с высокой температурой плавления, такие как белый мягкий парафин и/или жидкий парафин или другие минеральные масла.

Композиции, пригодные для местного введения в глаз, также могут представлять собой глазные капли, в которых активные вещества растворяют или суспендируют в приемлемом для активных веществ носителе, прежде всего в водном растворителе. Противовоспалительные активные вещества предпочтительно присутствуют в таких композициях в концентрации от 0,5 до 20%, предпочтительно от 0,5 до 10% и особенно предпочтительно в концентрации примерно 1,5 мас.%. Для терапевтических целей активные вещества такой композиции по изобретению, как правило, объединяют с одним или с несколькими адъювантами, пригодными для требуемого пути введения. При введении перорально соединения могут быть смешаны с лактозой, сахарозой, порошкообразным крахмалом, эфирами целлюлозы и алкановых кислот, алкиловыми эфирами целлюлозы, тальком, стеариновой кислотой, стеаратом магния; оксидом магния, натриевыми и кальциевыми солями фосфорной и серной кислот, желатином, аравийской камедью, альгинатом натрия, поливинилпирролидоном и/или поливиниловым спиртом и затем таблетированы или инкапсулированы для удобства введения. Такие капсулы или таблетки могут включать композицию с контролируемым выходом, которая может представлять собой дисперсию активного вещества в гидроксипропилметилцеллюлозе. Композиции для парентерального введения могут быть приготовлены в форме водных или неводных изотонических стерильных инъецируемых растворов или суспензий. Эти растворы и суспензии могут быть получены из стерильных порошков или гранул, имеющих один или несколько носителей или разбавителей, указанных выше при описании композиции для орального введения. Соединения могут быть растворены в воде, полиэтиленгликоле, пропиленгликоле, этаноле, кукурузном масле, хлопковом масле, арахисовом масле, кунжутном масле, бензиловом спирте, хлориде натрия и/или в различных буферах. Другие адъюванты и методы введения хорошо и широко известны в области фармацевтики.

Все патенты и заявки на патенты, указанные в настоящем описании, включены в него в качестве ссылки. Хотя изобретение описано на примере конкретных вариантов его осуществления, такие варианты не должны рассматриваться как ограничивающие объем изобретения.

Изобретение относится к новым 3(5)-гетероарил замещенным пиразолам формулы I

его таутомерам, или фармацевтически приемлемым солям этого соединения или таутомера, где R¹ означает гидрид, пиперидинил, замещенный метилом, низший алкил, низший алкил, замещенный гидрокси, низший алкил, замещенный низшим алкиламино, низший алкил, замещенный морфолино; R² означает гидрид, низший алкил, амино, аминокарбониламино, низший алкиламинокарбониламино, низший алкилсульфониламино, аминосульфониламино, низший алкиламиносульфониламино; Ar¹ означает фенил, необязательно замещенный одним или несколькими независимо выбранными галогеновыми заместителями; HetAr² означает пиридинил; при условии, что R² не означает амино, н-пропил, когда HetAr² означает пиридинил, а также при условии, что HetAr² не означает 2-пиридинил, когда R² означает Н, низший алкил. Соединения I обладают ингибирующей активностью в отношении р38 киназы, что позволяет использовать их в фармацевтической композиции для лечения ряда заболеваний. 8 c. и 17 з.п. ф-лы, 1 табл.

1. 3(5)-Гетероарилзамещенный пиразол, его таутомер или фармацевтически приемлемая соль этого соединения или таутомера, где соединение соответствует структуре формулы I

где R¹ выбирают из группы, включающей гидрид, пиперидинил, замещенный метилом, (низ.)алкил, (низ.)алкил, замещенный гидрокси, (низ.)алкил, замещенный (низ.)алкиламино, (низ.)алкил, замещенный морфолино;

R² выбирают из группы, включающей гидрид, (низш.)алкил, амино, аминокарбониламино, (низш.) алкиламинокарбониламино, (низш.)алкилсульфониламино, аминосульфониламино и (низш.)алкиламиносульфониламино;

Ar¹ обозначает фенил, необязательно замещенный одним или несколькими независимо выбранными галогеновыми заместителями;

HetAr² обозначает пиридинил, при условии, что R² не означает амино, н-пропил, когда HetAr² является пиридинилом, а также при условии, что HetAr² не означает 2-пиридинил, когда R² означает водород, (низш.)алкил.

4-(3-метил-4-фенил-1Н-пиразол-5-ил)пиридин;

N-[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-3-ил]метансульфонамид;

N-[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-3-ил]-N'-метилсульфамид;

[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-3-ил]мочевина;

[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-3-ил]сульфамид;

4-(4-хлорфенил)-1-метил-3-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-5-амин;

N-[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-3-ил]-N'-метилмочевина;

4-[4-(4-фторфенил)-1Н-пиразол-3-ил]пиридин;

4-[4-(4-фторфенил)-1-метил-1Н-пиразол-3-ил]пиридин;

4-(4-фторфенил)-3-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-1-этанол;

4-(4-фторфенил)-N,N-диметил-3-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-1-этанамин;

4-[2-[4-(4-фторфенил)-3-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-1-ил]этил]морфолин;

4-[4-(4-хлорфенил)-1Н-пиразол-3-ил]пиридин;

1-метил-4-[2-[4-(4-фторфенил)-3-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-1-ил]]пиперидин;

1-метил-4-[2-[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-1-ил]]пиперидин.

4-(3-метил-4-фенил-1Н-пиразол-5-ил)пиридин;

N-[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-3-ил]метансульфонамид;

N-[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-3-ил]-N'-метилсульфамид;

[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-3-ил]мочевина;

[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-3-ил]сульфамид;

4-(4-хлорфенил)-1-метил-3-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-5-амин;

N-[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-3-ил]-N'-метилмочевина;

4-[4-(4-фторфенил)-1Н-пиразол-3-ил]пиридин;

4-[4-(4-фторфенил)-1-метил-1Н-пиразол-3-ил]пиридин;

4-(4-фторфенил)-3-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-1-этанол;

4-(4-фторфенил)-N,N-диметил-3-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-1-этанамин;

4-[2-[4-(4-фторфенил)-3-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-1-ил]этил]морфолин;

4-[4-(4-хлорфенил)-1Н-пиразол-3-ил]пиридин;

1-метил-4-[2-[4-(4-фторфенил)-3-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-1-ил]]пиперидин;

1-метил-4-[2-[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-пиразол-1-ил]]пиперидин.