ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО, ВКЛЮЧАЮЩЕЕ ЦИКЛОФЕРОН, СПОСОБ ЕГО ПРИГОТОВЛЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ Российский патент 2006 года по МПК A61K31/4375 A61K9/08 A61P35/00 A61P31/12 A61P31/22 A61P31/16 

Изобретение относится к области медицины, в частности к лекарственным средствам, предназначенным для профилактики и лечения острых и хронических респираторно-вирусных инфекций, а также к профилактике онкологических процессов.

Естественные киллеры являются первым "барьером" на пути развития онкологического процесса. Они способны без предварительной сенсибилизации уничтожать широкий спектр опухолевых клеток, а кроме того, оказывать выраженный антивирусный эффект (1-10). К факторам, влияющим на активность данных клеток, можно отнести интерферон, простагландины, гормоны, интерлейкины, липиды, микроэлементы, токсины и психоэмоциональный фон [6, 1, 4, 7, 8, 10, 5].

Интерферон, интерлейкин-2 и ряд микроэлементов, такие как Li, Zn, Mg, Se, Fe, - повышают активность естественных киллеров [6, 10, 1]. И, напротив, экотоксичные факторы, липидный дисбаланс и депрессия снижают активность естественных киллеров [7, 8, 5].

Особенно резко меняется активность естественных киллеров под воздействием интерферона. Достаточно десятиминутного контакта, чтобы активность естественных киллеров увеличилась в несколько раз [6]. Отмечена прямая корреляционная взаимосвязь между концентрацией интерферона и активностью естественных киллеров [3]. При этом небольшие дозы интерферона защищают нормальные клетки от воздействия киллеров, но вместе с тем повышают чувствительность опухолевых и инфицированных вирусом клеток к их воздействию [9]. Кроме того, низкие дозы интерферона способны предохранять естественные киллеры онкологических больных от депрессирующего воздействия цитостатиков.

Возможность повышения чувствительности опухолевых клеток к влиянию киллеров под действием малых доз интерферона представляется весьма важным в практическом отношении, поскольку длительное использование иммуномодуляторов, как и любых других фармакологических препаратов, не является безразличным для организма.

В связи с этим актуальной задачей является разработка методик использования низких доз интерфероногенов.

Наиболее близким по функциональному назначению лекарственным средством к заявляемому средству, способу его приготовления и применения является препарат "Циклоферон", состоящий из кислоты акридонуксусной - 0,15 г, N-метилглюкамина - 0,146 г, вспомогательных веществ - металцеллюлоза, кальций стеариновокислый [11].

Задача изобретения - создание лекарственного средства на основе физиологического раствора с использованием микродоз индуктора интерферона - циклоферона. Для этого предложено средство и способ его изготовления и применения.

Лекарственное средство, включающее циклоферон, характеризующееся тем, что оно содержит циклоферон и физиологический раствор в следующем соотношении мас./ч.: 10^-29-10^-2 мг циклоферона в 1 мл физиологического раствора.

Способ приготовления лекарственного средства, включающего циклоферон, характеризуется тем, что циклоферон последовательно разводят в физиологическом растворе, при этом применяется от 1 до 30 циклов разведения.

Способ приготовления характеризуется тем, при каждом цикле циклоферон разводят не менее чем в 100 раз в физиологическом растворе.

Способ приготовления характеризуется тем, что при каждом цикле раствор перемешивают встряхиванием.

Способ приготовления лекарственного средства характеризуется тем, что разведенный препарат циклоферона в физиологическом растворе смешивается со спиртом в соотношении 58,3 мл препарата - 41,7 мл 96% спирта, благодаря чему получается 40% спиртовой раствор препарата.

Способ приготовления лекарственного средства характеризуется тем, что 0,4 мл 40% спиртового раствора препарата смешивают с не менее чем 8 граммами основы, приготовленной из молочного сахара. Указанная основа может состоять из не менее чем 30 облаток массой 0,27 грамма либо 200 крупинок массой 0,04 грамма.

Способ применения лекарственного средства характеризуется тем, что пациенту назначается разовая доза препарата не менее 0,25 - не более 1-ой облатки (0,003 мл - 0,013 мл 40% раствора препарата) или не менее 2-х - не более 8 крупинок (0,004-0,016 мл 40% раствора препарата).

Способ применения лекарственного средства характеризуется тем, что указанные однократные дозы назначаются 1-2 раза в сутки.

Способ применения лекарственного средства характеризуется тем, что указанную суточную дозу применяют курсом от 1-й недели - до 2-х месяцев.

Лекарственное средство характеризуется тем, что оно повышает противовирусную и противоопухолевую активность естественных киллеров не менее чем в 1,8 раза.

Способ хранения лекарственного средства характеризуется тем, что оно не теряет своих лечебных свойств в течение не менее одной недели.

Способ хранения лекарственного средства характеризуется тем, что оно не теряет своих лечебных свойств в течение не менее двух лет.

В ходе экспериментов оценивалось влияние циклоферона на естественную цитотоксическую активность спленоцитов мышей.

Эксперименты проводились на чистолинейных мышах - самцах СЗНА, массой 18-20 г, которым внутривенным способом вводили растворы циклоферона. Для оценки активности естественных киллеров применялся модифицированный изотопный цитотоксический тест Хапшмото и Судо (Малыгин А.М. и соавт., 1984). "Мишенями" в тесте служили клетки хронического эритролейкоза К-562, меченные 3Н-уридином. Для оценки цитотоксической активности спленоцитов высчитывался индекс цитотоксичности (ИЦ), отражающий в % долю погибших клеток. Данные обработаны статистически с использованием t-критерия Стьюдента.

В опытах использовались 6 вариантов концентраций циклоферона:

- 40 мг/мл;

- 20 мг/мл;

- 10 мг/мл;

- 1 мг/мл;

- 10^-2 мг/мл;

- 10^-11 мг/мл

Через 24 часа после введения циклоферона в концентрациях 10 мг/мл цитотоксическая активность киллеров достоверно повышалась (чертеж). Индекс цитотоксичности равнялся 39,4±3,0%; р<0,05.

При увеличении концентрации вводимого циклоферона до 20 мг/мл ИЦ еще более нарастал (45,8±2,4%; р<0,001; чертеж).

Наибольшая активность циклоферона отмечена при концентрации 40 мг/мл (52,7±2,2%; р<0,001; чертеж).

При уменьшении концентрации циклоферона до 1 мг/мл индекс цитотоксичности снижался до уровня в контрольной группе, то есть эффект циклоферона отсутствовал (25,1±3,0%; р>0,05).

Однако при дальнейшем снижении количества вводимого циклоферона до 10^-2 мг/мл цитотоксическая активность естественных киллеров вновь достоверно повышалась (чертеж).

При уменьшении концентрации циклоферона до 10^-11 мг/мл активность естественных киллеров оставалась достоверно повышенной и превышала уровень в контрольной группе в два раза (см. чертеж).

На чертеже приведен индекс цитотоксичности спленоцитов (ИЦ в %) в зависимости от концентрации вводимого циклоферона (ЦФ)

Примечание:

А - ИЦ в контроле;

Б - ИЦ при концентрации ЦФ -10 мг/мл;

В - ИЦ при концентрации ЦФ - 20 мг/мл;

Г - ИЦ при концентрации ЦФ - 40 мг/мл;

Д - ИЦ при концентрации ЦФ - 1 мг/ мл;

Е - ИЦ при концентрации ЦФ -10^-2 мг/мл;

Ж - ИЦ при концентрации ЦФ - 10^-11 мг/мл;

* - достоверность различий с показателем в контроле при р<0,05; ** - достоверность различий при р<0,001; в контрольной группе и в каждом разведении n<12.

Таким образом, данные экспериментов свидетельствовали о том, что использование препарата, включающего в себя физиологический раствор и сверхмалые дозировки циклоферона, позволяло в 1,8-1,9 раза повышать питотоксическую активность естественных киллеров.

Примеры

Примеры реализации изобретения приведены ниже.

Примеры на лекарственное средство,

Пример 1. Лекарственное средство, содержащее 10^-1 мг циклоферона в 1 мл физиологического раствора

Пример 2. Лекарственное средство, содержащее 10^-5 мг циклоферона в 1 мл физиологического раствора

Пример 3. Лекарственное средство, содержащее 10^-11 мг циклоферона в 1 мл физиологического раствора

Пример 4. Лекарственное средство, содержащее 10^-23 мг циклоферона в 1 мл физиологического раствора

Пример 5. Лекарственное средство, содержащее 10^-29 мг циклоферона в 1 мл физиологического раствора

Примеры на способ приготовления.

Пример 1. Приготавливают лекарственное средство, включающее циклоферон, характеризующееся тем, что циклоферон в концентрации 10 мг/мл разводят в физиологическом растворе в 100 раз, что соответствует одному циклу разведения. При этом препарат перемешивают встряхиванием. Полученный препарат циклоферона в физиологическом растворе смешивается со спиртом в соотношении 58,3 мл препарата - 41,7 мл 96% спирта, благодаря чему получается 40% спиртовой раствор препарата, содержащий 10^-1 мг циклоферона в 1 мл.

Пример 2. Приготавливают лекарственное средство, включающее циклоферон, характеризующееся тем, что циклоферон в концентрации 10 мг/мл разводят в физиологическом растворе в 1000000 раз, что соответствует 3-м циклам разведения. При этом препарат перемешивают встряхиванием. Полученный препарат циклоферона в физиологическом растворе смешивается со спиртом в соотношении 58,3 мл препарата - 41,7 мл 96% спирта, благодаря чему получается 40% спиртовой раствор препарата, содержащий 10^-5 мг циклоферона в 1 мл.

Пример 3. Приготавливают лекарственное средство, включающее циклоферон, характеризующееся тем, что циклоферон в концентрации 10 мг/мл разводят в физиологическом растворе в 10¹² раз, что соответствует 6-ти циклам разведения. При этом препарат перемешивают встряхиванием. Полученный препарат циклоферона в физиологическом растворе смешивается со спиртом в соотношении 58,3 мл препарата - 41,7 мл 96% спирта, благодаря чему получается 40% спиртовой раствор препарата, содержащий 10^-11 мг циклоферона в 1 мл.

Пример 4. Приготавливают лекарственное средство, включающее циклоферон, характеризующееся тем, что циклоферон в концентрации 10 мг/мл разводят в физиологическом растворе в 10 раз, что соответствует 12-ти циклам разведения. При этом препарат перемешивают встряхиванием. Полученный препарат циклоферона в физиологическом растворе смешивается со спиртом в соотношении 58.3 мл препарата - 41,7 мл 96% спирта, благодаря чему получается 40% спиртовой раствор препарата, содержащий 10^-23 мг циклоферона в 1 мл.

Пример 5. Приготавливают лекарственное средство, включающее циклоферон, характеризующееся тем, что циклоферон в концентрации 10 мг/мл разводят в физиологическом растворе в 10³⁰ раз, что соответствует 15-ти циклам разведения. При этом препарат перемешивают встряхиванием. Полученный препарат циклоферона в физиологическом растворе смешивается со спиртом в соотношении 58,3 мл препарата - 41,7 мл 96% спирта, благодаря чему получается 40% спиртовой раствор препарата, содержащий 10^-29 мг циклоферона в 1 мл.

Пример 6. Приготавливают лекарственное средство по любому из перечисленных выше примеров 1-5. В дальнейшем 0,4 мл 40% спиртового раствора препарата смешивают с 8 граммами основы, приготовленной из молочного сахара. Указанная основа может состоять из не менее чем 30 облаток массой 0,27 грамма. При этом одна облатка массой 0,27 грамма содержит 0,013 мл 40% раствора препарата.

Пример 7. Приготавливают лекарственное средство по любому из перечисленных выше примеров 1 5. В дальнейшем 0,4 мл 40% спиртового раствора препарата смешивают с 8 граммами основы, приготовленной из молочного сахара. Указанная основа может состоять из 200 крупинок массой 0,04 грамма. При этом одна крупинка массой 0,04 грамма содержит 0,002 мл 40% раствора препарата.

Примеры на способ применения.

Пациенту назначается разовая доза препарата - не менее 0,25 облатки (0,00325 мл 40% раствора препарата) - не более 1 облатки (0,013 мл 40% раствора препарата), или 2-8 крупинок (0,004-0,016 мл 40% раствора препарата).

Пример 1. Разовая доза, назначаемая пациенту, составляет 0,25 облатки (0,00325 мл 40% раствора препарата).

Пример 2. Разовая доза, назначаемая пациенту, составляет 0,5 облатки (0,0065 мл 40% раствора препарата).

Пример 3. Разовая доза, назначаемая пациенту, составляет 1 облатку (0,013 мл 40% раствора препарата).

Указанные в предыдущих примерах на способ применения (1-3) однократные дозы назначаются 1-2 раза в сутки курсом от 1-2-х недель до 1-2-х месяцев.

Пример 4. Разовая доза, назначаемая пациенту, составляет 2 крупинки (0,004 мл 40% раствора препарата).

Пример 5. Разовая доза, назначаемая пациенту, составляет 4 крупинки (0,008 мл 40% раствора препарата).

Пример 6. Разовая доза, назначаемая пациенту, составляет 6 крупинок (0,012 мл 40% раствора препарата).

Пример 7. Разовая доза, назначаемая пациенту, составляет 8 крупинок (0,016 мл 40% раствора препарата).

Указанные в предыдущих примерах на способ применения (4-7) однократные дозы назначаются 1-2 раза в сутки курсом от 1-2-х недель до 1-2-х месяцев.

При использовании предложенного препарата, в котором индуктор интерферона содержится в сверхмалых дозировках, его побочные эффекты практически полностью исключаются, в то время как лечебный эффект сохраняется, что является очевидным преимуществом перед производимым фармацевтической промышленностью аналогом.

Лекарственное средство характеризуется тем, что оно повышает противовирусную и противоопухолевую активность естественных киллеров не менее чем в 1,8 раза.

Хранят лекарственное средство в сухом, защищенном от света, месте при температуре не выше 25°С.

Показания к применению.

Препарат применяют при:

профилактике и лечении гриппа и острых респираторно-вирусных инфекций;

герпетической инфекции;

хронических вирусных гепатитах В и С;

профилактике онкологических заболеваний.

Источники информации

1. Жаворонкова А.А., Кудрин А.В. Микроэлементы и естественная киллерная активность// Арх. патол., 1996, 58, N6, с.65-70.

2. Малыгин А.М., Погодина О.Н., Чернышова М.Д., Фель В.Я. Исследование противоопухолевого действия лимфоцитов молодых и гепатэктомированных мышей линии СЗНА// Иммунология, 1984, N4, с.46-49.

3. Славина Е.Г. Лимфоциты - естественные киллеры (НК-клетки) - эффекторные клетки естественной противоопухолевой резистентности / Иммунология опухолей. М.: ВИНИТИ, 1984, том 13, с.98-141.

4. Asea A., Hansson М., Czerkinsky С., Houze Т., Hermodsson S., Strannegard О., Hellstrand К. Histaminergic regulation of interferon-gamma (BFN-y) production by human natural killer (NK) cells// Clin. and exp.hnmunol., 1996, 105, N2, p.376-382.

5. Finkelstein B.B., Shevchenko E.V. Pathomembranons alterations for a decrese the ability of mononuclears to kill oncotransformed cells// Exp.Oncology, 1998, v.20, N1, p48-52.

6. Herberman R.B., Ortalado J.R., Timonen Т., Reynolds C.W., Djeu J.Y., Petska S., Stanton J. Interferon and natural killer (NK) cells. Texas Reports on Biology and Medicine, 1982, vol. 41, p.390-395.

7. Ross P.S., De Swart R.L., Timmerman H.H., Reijaders P.J.H., Vos J.G., Van Loveren H., Osterhaus A.D.M.E. Supression of natural killer cell activity in harbor seals (Phoca vitulina) fed Baltic sea herring// A quat. ToxicoL, 1996, 34, N1, p.71-84.

8. Schleiter Steven J., Keller Steven E., Bartlett Jacqueline A., Eckhold Hattan M., Delaney Beveriy R. Immunity in yong adults with major depressive disorder// Amer. J.Psychiatr., 1996,153, N 4, р.477-482.

9. Trinchieri G., Santoli D., Granato D., Perussia B. Antagonistic effects of interferons on the cytotoxity mediated by natural killer cells. Fed. Proc., 1981, vol.40, p.2705-2710.

10. Yomeda K., Osaki Т., Yamamoto T. IL-2 signalling Т and natural killer (NK) cells associated with their class I - non - restricted killing activity// Clin. and exp.hnmunol., 1996, 106, N1, p.179-186.

11. Препарат "Циклоферон", таблетки, покрытые кишечнорастворимой оболочкой 0,15 г per. номер: Р №001049/02-2002.

Изобретение относится к медицине и касается лекарственного средства для профилактики и лечения гриппа и острых респираторных инфекций, герпетической инфекции, хронических вирусных гепатитов В и С и профилактики онкологических заболеваний, содержащего циклоферон и отличающегося тем, что оно содержит физиологический раствор в следующем соотношении компонентов: 10^-29-10^-2 мг циклоферона в 1 мл физиологического раствора, а также к способу приготовления и к способу применения данного лекарственного средства. Лекарственное средство по настоящему изобретению повышает противовирусную и противоопухолевую активность естественных киллеров не менее чем в 1,8 раза. 3 н. и 4 з.п. ф-лы, 1 ил.

1. Лекарственное средство для профилактики и лечения гриппа и острых респираторных инфекций, герпетической инфекции, хронических вирусных гепатитов В и С и профилактики онкологических заболеваний, содержащее циклоферон и отличающееся тем, что содержит физиологический раствор в следующем соотношении компонентов: 10^-29-10^-2 мг циклоферона в 1 мл физиологического раствора.2. Способ приготовления лекарственного средства по п.1, характеризующийся тем, что циклоферон последовательно разводят в физиологическом растворе, при этом исходная концентрация циклоферона составляет 1 мг/мл, применяется от 1 до 15 циклов разведения, и при каждом цикле циклоферон разводят не менее чем в 100 раз в физиологическом растворе.3. Способ приготовления по п.2, характеризующийся тем, что при каждом цикле раствор перемешивают встряхиванием.4. Способ применения лекарственного средства по п.1, характеризующийся тем, что пациенту назначается разовая доза препарата не менее 0,003-0,013 мл 40% раствора препарата или не менее 0,004-0,016 мл 40% раствора препарата.5. Способ применения лекарственного средства по п.4, характеризующийся тем, что указанные однократные дозы назначаются 1-2 раза в сутки.6. Способ применения лекарственного средства по п.5, характеризующийся тем, что указанную суточную дозу применяют курсом от 1 недели - до 2 месяцев.7. Лекарственное средство по п.1, характеризующееся тем, что оно повышает противовирусную и противоопухолевую активность естественных киллеров не менее чем в 1,8 раза.