СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МАЗИ НА ОСНОВЕ ЛИПОФИЛЬНОЙ ФРАКЦИИ ИЗ ТВЕРДОЙ ОБОЛОЧКИ КОКОСОВОГО ОРЕХА Российский патент 2006 года по МПК A61K9/06 A61K36/00 A61P31/00 A61P29/00 A61P17/02 

Изобретение относится к медицине и касается способов получения препаратов из растительного сырья, которое может быть использовано в качестве наружного противовоспалительного средства, на основе которого может быть получена мазь для наружного лечения порезов, ожогов и т.п.

Известны противовоспалительные мази, в состав которых входят растительные препараты, применяемые для лечения порезов, ожогов: мазь календулы, линимент алоэ и другие [РЛС-Аптекарь / Под ред. Крылова Ю.Ф. - М., 2001. - 1584 с.; Соколов С.Я. Фитотерапия и фитофармакология - М., 2000. - С.224-228].

Наиболее близким прототипом является мазь календулы, характеризующаяся противовоспалительным, ранозаживляющим, бактерицидным (по отношению к стафилококкам, стрептококкам) действием.

Способ получения мази календулы заключается в смешивании 90 г эмульсии консистентной с 20 г настойки календулы [Машковский М.Д. Лекарственные средства. В 2-х т. - М.: Медицина, 1988. - Т.2. - С.424]. Эмульсия консистентная состоит из воды, вазелина, эмульгатора Т-2, взятых в соотношении 30:60:10. [Муравьев И.А. Технология лекарств. В 2-х т. - М.: Медицина, 1980. - Т.2. - С.497]. Настойку календулы (1:10) получают спиртовой (70% этанол) экстракцией цветков и цветочных корзинок ноготков [Машковский М.Д. Лекарственные средства: В 2-х т. - М.: Медицина, 1988. - Т.2. - С.423.].

Недостатком мази календулы является низкая антибактериальная активность. По этой причине при инфицированных поражениях кожи обычно практикуют комбинированное применение мази «Календула» и мазей с антибиотиками. Использование мазей с антибиотиками часто сопровождается дерматитом, аллергией, кандидамикозами [Машковский М.Д. Лекарственные средства: В 2-х т. - М.: Медицина, 1988. - Т.2.- С.199-222]. Кроме того, известно, что вазелин как мазевая основа способен оказывать раздражающее действие на кожу и вызывать вазелинодермию [Тенцова А.И., Грецкий В.М. Современные аспекты исследования и производства мазей. - М.: Медицина, 1980. - С.31]

Вместе с тем, перечень вытяжек, получаемых из растительного сырья и обладающих противовоспалительным действием, и мазей на их основе ограничен [РЛС-Аптекарь / Под ред. Крылова Ю.Ф. - М., 2001. - 1584 с.]. Следовательно, расширение арсенала препаратов растительного происхождения для наружного применения, характеризующихся противовоспалительным действием, является актуальной задачей.

Целью предлагаемого изобретения является разработка способов получения средства для наружного применения, состоящего из липофильной фракции твердой оболочки кокосового ореха (Cocos nucifera), характеризующегося противовоспалительным действием; а также мази, состоящей из липофильной фракции твердой оболочки кокосового ореха, кокосового масла, эмульгатора Т-2 и сока из травы чистотела, характеризующейся противовоспалительным и противомикробным действием.

Поставленная задача достигается тем, что для получения целевого продукта липофильную фракцию из твердой оболочки кокосового ореха выделяют циркуляционной экстракцией хлороформом в течение 7-10 часов с последующим удалением растворителя. В дальнейшем для получения мази смешивают кокосовое масло (масло промышленного производства), эмульгатор Т-2, липофильную фракцию из твердой оболочки кокосового ореха, сок чистотела в соотношении 50:9:1:40.

В литературе отсутствуют данные о возможности применения липофильной фракции из твердой оболочки кокосового ореха как в качестве противовоспалительного средства, так и в составе мази, оказывающей противовоспалительное и противомикробное действие. Липофильную фракцию из твердой оболочки кокосового ореха в составе мягкой лекарственной формы можно использовать в медицинской практике для лечения порезов, ожогов, ран, сопровождающихся инфицированием кожи. Данные свойства явным образом не вытекают для специалиста из уровня техники. Таким образом, предлагаемые решения соответствуют критериям изобретения - «новизна», «изобретательский уровень», «промышленно применимо».

Применение в качестве экстрагента хлороформа гарантирует максимальную экстракцию липофильной фракции из твердой оболочки кокосового ореха. Температурный режим, продолжительность экстракции выявлены экспериментально и гарантируют оптимальность технологического процесса.

Для выделения липофильной фракции твердой оболочки кокосового ореха измельченное сырье экстрагируют хлороформом в аппарате типа «Сокслет» в течение 7-10 часов до полного истощения сырья. После чего хлороформ удаляют путем испарения под вакуумом при температуре 30-35°С. В фарфоровой или эмалированной емкости при температуре 70-75°С сплавляют 9,0 частей эмульгатора Т-2; 1,0 часть липофильной фракции из твердой оболочки кокосового ореха; 50,0 частей кокосового масла. Смесь охлаждают до температуры 50-55°С и смешивают с 40,0 частями сока чистотела, подогретого до температуры 50-55°С.

Сок чистотела получают по известной технологии [Муравьев И.А. Технология лекарств. В 2-х т. - М.: Медицина, 1980. - Т.1. - С.210].

Пример конкретного выполнения способа.

Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц не более 0,25 мм. Около 200 г твердой оболочки кокосового ореха (точная навеска) взвешивают (точная навеска). Сырье экстрагируют в аппарате типа «Сокслет» в течение 7-10 часов до полного извлечения липидов и отрицательной реакции с 0,1% раствором судана III или отсутствия сине-голубой флуоресценции в УФ-свете.

Параллельно определяют влажность сырья. Все измерения проводят с точностью до 0,0002 г.

Извлечение упаривают под вакуумом до полного удаления хлороформа. Выход экстракта составляет 6,4% от массы воздушно-сухого сырья.

В выпарительной чашке при температуре 70-75°С сплавляют 9,0 г эмульгатора Т-2; 1,0 г липофильной фракции из твердой оболочки кокосового ореха; 50,0 г кокосового масла. Смесь охлаждают до температуры 50-55°С и смешивают с 40,0 г сока чистотела, подогретым до температуры 50-55°С.

При изучении противовоспалительных, ранозаживляющих, противомикробных свойств целевого продукта для сравнения изучали: липофильную фракцию из твердой кожуры кокосового ореха, кокосовое масло, мазь №1 (мазь с липофильной фракцией кожуры кокоса и соком чистотела), мазь №2 (мазь с липофильной фракцией кожуры кокоса и водой очищенной), мазь «Календула» 10% промышленного производства, и проводили 3 серии эксперимента.

Ранозаживляюшую активность целевого продукта изучали на модели термического ожога у крыс [Термические ожоги и ожоговые болезни / Губир Е.В. и др. // Моделирование заболеваний. - М., 1973. - С.59-78; Раны и их лечение в тибетской медицине / Убашеев И.О., Назаров-Рыгдылон В.Э., Баторова С.М., Лоншакова К.С. - Новосибирск: Наука, 1990. - С.106-108]. Эксперимент проводили на белых беспородных крысах обоего пола, содержащихся в общевиварийном режиме, массой 200-220 г. На спине у животных выстригали шерсть площадью 4 см². Затем на выстриженных участках кожи вызывали термический ожог контактным способом с помощью плоскодонной пробирки (площадь дна 3 см²) с водой, нагретой на водяной бане до 100°С. Время экспозиции 20 секунд. Контуры раневой поверхности переносили на кальку и вырезали. Куски кальки взвешивали на торсионных весах. В опытной группе животным сразу после нанесения термического ожога наносили исследуемые лекарственные формы (липофильная фракция из твердой кожуры кокосового ореха, кокосовое масло, мазь №1 - мазь с липофильной фракцией кожуры кокоса и соком чистотела, мазь №2 - мазь с липофильной фракцией кожуры кокоса и водой очищенной, мазь «Календула» 10% промышленного производства), не втирая. Контрольная группа оставалась нелеченой. Нанесение мази проводили в течение недели.

Статистическую обработку результатов всех серий опытов проводили с использованием коэффициента Стьюдента. Результаты исследований представлены в примерах 1-5 и таблице 1.

Пример 1.

Лечение ожоговых ран у животных с помощью липофильной фракции из твердой оболочки кокосового ореха приводило на 2-й день к уменьшению площади раны на 32,0% по сравнению с контролем, на 8-й день к уменьшению площади раны на 66,4% по сравнению с контролем (таблица 1).

Пример 2.

Лечение ожоговых ран у животных с помощью кокосового масла приводило на 2-й день к уменьшению площади раны на 16,0% по сравнению с контролем, на 8-й день к уменьшению площади раны на 50,8% по сравнению с контролем (таблица 1).

Пример 3.

Лечение ожоговых ран у животных с помощью мази №1 (кокосовое масло 50 ч, эмульгатор Т-2 9 ч, липофильная фракция из твердой оболочки кокосового ореха 1 ч, сок чистотела 40 ч) приводило на 2-й день к уменьшению площади раны на 26,0% по сравнению с контролем, на 8-й день к уменьшению площади раны на 55,0% по сравнению с контролем (таблица 1).

Пример 4.

Лечение ожоговых ран у животных с помощью мази №2 (кокосовое масло 50 ч, эмульгатор Т-2 9 ч, липофильная фракция из твердой оболочки кокосового ореха 1 ч, вода очищенная 40 ч) приводило на 2-й день к уменьшению площади раны на 24,0% по сравнению с контролем, на 8-й день к уменьшению площади раны на 53,3% по сравнению с контролем (таблица 1).

Пример 5.

Лечение ожоговых ран у животных с помощью мази «Календула» приводило на 2-й день к увеличению площади раны на 4% по сравнению с контролем, на 8-й день к снижению площади раны на 8% по сравнению с контролем (таблица 1).

Противовоспалительную активность целевого продукта изучали на модели каолинового отека у крыс [Гацура В.В. Методы первичного фармакологического исследования. - М.: Медицина, 1974. - С.125]. Эксперимент проводили на белых беспородных крысах обоего пола, содержащихся в общевиварийном режиме, массой 200-220 г. В качестве флогогенного агента использовали 10% взвесь каолина и вводили ее субплантарно. Исследуемые мази (липофильная фракция из твердой кожуры кокосового ореха, кокосовое масло, мазь №1 - мазь с липофильной фракцией кожуры кокоса и соком чистотела, мазь №2 - мазь с липофильной фракцией кожуры кокоса и водой очищенной, мазь «Календула» 10% промышленного производства) наносили, не втирая, до введения каолина перед каждым измерением, а также после измерения объема лапки. Контрольная группа оставалась нелеченой. Объем конечности крыс измеряли с помощью прибора «Онкометра» до и после введения каолина через 5, 24, 48 часов. Противовоспалительный эффект мазей оценивали по объему жидкости, вытесненной при погружении в нее лапки крысы.

Статистическую обработку результатов всех серий опытов проводили с использованием коэффициента Стьюдента. Результаты исследований представлены в примерах 6-10 и таблице 2.

Пример 6.

На фоне лечения липофильной фракцией из твердой оболочки кокосового ореха величина отека лапок крыс через 5 часов наблюдений уменьшилась в 1,4 раза, через 24 часа в 1,8 раза по сравнению с контрольной группой. В последующие часы проведения опыта сравнительная картина сохранялась (таблица 2).

Пример 7.

На фоне лечения кокосовым маслом величина отека лапок крыс через 5 часов наблюдений уменьшилась в 1,2 раза, через 24 часа в 1,6 раза по сравнению с контрольной группой. В последующие часы проведения опыта сравнительная картина сохранялась (таблица 2).

Пример 8.

На фоне лечения мазью №1 (кокосовое масло 50 ч, эмульгатор Т-2 9 ч, липофильная фракция из твердой оболочки кокосового ореха 1 ч, сок чистотела 40 ч) величина отека лапок крыс через 5 часов наблюдений уменьшилась в 1,5 раза, через 24 часа в 1,9 раза по сравнению с контрольной группой. В последующие часы проведения опыта сравнительная картина сохранялась (таблица 2).

Пример 9.

На фоне лечения мазью №2 (кокосовое масло 50 ч, эмульгатор Т-2 9 ч, липофильная фракция из твердой оболочки кокосового ореха 1 ч, вода очищенная 40 ч) величина отека лапок крыс через 5 часов наблюдений уменьшилась в 1,5 раза, через 24 часа в 1,9 раза по сравнению с контрольной группой. В последующие часы проведения опыта сравнительная картина сохранялась (таблица 2).

Пример 10.

На фоне лечения мазью «Календула» величина отека лапок крыс через 5 часов наблюдений увеличилась в 1,2 раза, через 24 часа в 1,1 раза по сравнению с контрольной группой. В последующие часы проведения опыта сравнительная картина сохранялась (таблица 2).

При исследовании антимикробной активности целевого продукта использовали метод, основанный на способности лекарственных веществ диффундировать в агар, зараженный тест-культурами микроорганизмов, и подавлять рост последних [Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / Под ред. М.О.Биргера. - М.: Медицина, 1982. - С.172-177]. Определение активности изучаемых составов мазей проводили в чашках Петри одинакового диаметра с ровным и плоским дном. В чашки, устанавливаемые горизонтально, наливали по 15 мл расплавленного питательного агара. Слой агара в чашке Петри заливали 1-2 мл взвеси испытуемого микроба в физиологическом растворе. Затем излишек взвеси полностью удаляли, подсушивали поверхность агара в течение 30 минут. Затем сверлом (6 мм диметром) пробуравливали 4-6 отверстий («колодцев») на расстоянии 2,5 см от центра и на одинаковом расстоянии друг от друга «колодцы» заполняли образцами мазей. Чашки оставляли при комнатной температуре на 30 минут, после чего чашки ставили в термостат при температуре 37°С, не переворачивая, строго горизонтально, чтобы получить круглые зоны. Через 16 часов измеряли зоны угнетения. Результаты эксперимента представлены в таблице 3 и примерах 11-15.

Пример 11

Липофильная фракция твердой оболочки кокосового ореха не вызывает угнетения роста микроорганизмов Staphylococcus abony ГИСК 103/39; Staphylococcus aureus ATTC 6538-P; Candida albicans ATCC 885-653; Aspergillus niger BKMF 1119; Esherichia coli ATCC 25922; Pseudomonas aemginosa ГИСК 453 (таблица 3).

Пример 12.

Кокосовое масло не вызывает угнетения роста микроорганизмов Staphylococcus abony ГИСК 103/39; Staphylococcus aureus ATTC 6538-P; Candida albicans ATCC 885-653; Aspergillus niger BKMF 1119; Esherichia coli ATCC 25922; Pseudomonas aeruginosa ГИСК 453 (таблица 3).

Пример 13.

Мазь №1 вызывает угнетение роста микроорганизмов Staphylococcus abony ГИСК 103/39 18±2 мм; Staphylococcus aureus ATTC 6538-P 19±1 мм; Candida albicans ATCC 885-653 18±2 мм; Aspergillus niger BKMF 1119 22±3 мм; Esherichia coli ATCC 25922 16±2 мм; Pseudomonas aeruginosa ГИСК 453 17±2 мм (таблица 3).

Пример 14.

Мазь №2 не вызывает угнетения роста микроорганизмов Staphylococcus abony ГИСК 103/39; Staphylococcus aureus ATTC 6538-P; Candida albicans ATCC 885-653; Aspergillus niger BKMF 1119; Esherichia coli ATCC 25922; Pseudomonas aeruginosa ГИСК 453 (таблица 3).

Пример 15.

Мазь «Календула» не вызывает угнетения роста микроорганизмов Staphylococcus abony ГИСК 103/39; Staphylococcus aureus ATTC 6538-P; Candida albicans ATCC 885-653; Aspergillus niger BKMF 1119; Esherichia coli ATCC 25922; Pseudomonas aeruginosa ГИСК 453 (таблица 3).

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к способу получения мази, обладающей противовоспалительной и противомикробной активностью. Способ получения мази, обладающей противовоспалительной и противомикробной активностью, включающий измельчение растительного сырья - твердой оболочки кокосового ореха - до определенного размера частиц, экстракцию хлороформом в течение определенного времени, удаление растворителя и выделение липофильной фракции, далее сплавляют эмульгатор Т-2, липофильную фракцию, кокосовое масло при определенных условиях, затем смесь охлаждают до определенной температуры и смешивают с соком чистотела, подогретого до определенной температуры. Способ позволяет получить мазь с повышенной противовоспалительной и противомикробной активностью. 3 табл.

Способ получения мази, обладающей противовоспалительной и противомикробной активностью, путем экстракции растительного сырья и последующего смешивания экстракта с эмульгатором-Т2, отличающийся тем, что растительное сырье - твердую оболочку кокосового ореха измельчают до размера частиц не более 0,25 мм и экстрагируют хлороформом в течении 7-10 ч, удаляют растворитель и выделяют липофильную фракцию, далее при 70-75°С сплавляют эмульгатор Т-2, липофильную фракцию, кокосовое масло, взятые в соотношении 9:1:50, затем смесь охлаждают до температуры 50-55°С и смешивают с 40 частями сока чистотела, подогретого до температуры 50-55°С.