СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ НЕОНАТАЛЬНОЙ СМЕРТНОСТИ У ДЕТЕЙ С ПЕРИНАТАЛЬНЫМ ПОРАЖЕНИЕМ ЦЕНТРАЛЬНОЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ Российский патент 2006 года по МПК G01N33/49 

Изобретение относится к медицине, в частности к детской неврологии, и может быть использовано для прогнозирования неонатальной смертности у детей с перинатальным поражением центральной нервной системы.

Известен способ исследования апоптоза в ткани мозга, производимый в эксперименте на животных (Басков А.В. и др. Иммуногистохимическое изучение апоптоза клеток спинного мозга при его экспериментальном повреждении. Архив патологии, Вып. №2, 2002, - с.23.) или посмертно при патологии центральной нервной системы у детей.

Нейрональные потери при перинатальном повреждении нервной системы (гипоксически-ишемическом или травматическом) связаны с некрозом или апоптозом. Запрограммированная смерть нейрона осуществляется под контролем системы функционально связанных генов. Программа смерти, запускаемая "суицидными" генами, реализуется через внутриклеточные белки р53, р54. Обнаружение этих белков лежит в основе известных методов исследования апоптоза в клетках (Ю.И.Барышнев. Перинатальная неврология. "Триада-Х" Москва. 2001. стр.254.).

К недостаткам данного способа прогнозирования неонатальной смертности у детей с перинатальным поражением центральной нервной системы относится то, что исследование апоптоза производят посмертно и определение функционального состояния нервной системы проводится постфактум, к тому же исследование морфологического материала нервной ткани таким способом не дает прогноза состояния пациента для клинической практики.

Все вышеперечисленные недостатки не позволяют осуществить объективный прогноз неонатальной смертности у детей с перинатальным поражением центральной нервной системы.

Задачей, на решение которой направлено заявленное изобретение, является создание способа прогнозирования неонатальной смертности у детей с перинатальным поражением центральной нервной системы.

Технический результат - повышение точности метода за счет объективных критериев прижизненной оценки состояния апоптоза (запрограммированной клеточной гибели) в нервной ткани.

Указанный технический результат при осуществлении изобретения достигается тем, что в известном способе прогнозирования неонатальной смертности у детей с перинатальным поражением центральной нервной системы путем исследования апоптоза в клетках производят исследование клеточного осадка 1 мл ликвора, где при количестве апоптозных клеток 9-10 в 1 мм² прогнозируется летальный исход.

Проведенный заявителем анализ уровня техники, включающий поиск по патентным и научно-техническим источникам информации, позволил установить, что предлагаемый способ не известен и не следует явным образом из изученного уровня техники, т.е. соответствует критериям "новизна" и "изобретательский уровень".

Предлагаемый способ может быть применен в любых лечебных детских учреждениях.

Способ осуществляется следующим образом.

Ребенку с перинатальным повреждением центральной нервной системы (гипоксически-ишемического или травматического генеза) проводят люмбальную пункцию в типичном месте, получают 1-2 мл ликвора. Затем производят цинтрифугирование 1 мл ликвора в пробирке при скорости 1,5-3 тысячи оборотов в минуту, время цинтрифугирования 10-15 минут. Затем собирают клеточный осадок пипеткой и одну каплю наносят на предметное стекло, распределяя равномерно осадок по всему стеклу "мазком". Исследование проводилось непрямым иммунофлюоресцентным методом, с использованием кроличьих моноклональных антител против нуклеотидов ядерной ДНК клеток, находящихся в состоянии апоптоза ("RD Sistems"). В целях сравнения проводилось исследование клеточного состава ликвора здоровых детей (новорожденных). Исследования показали, что у здоровых детей количество клеток, находящихся в состоянии апоптоза в исследуемом материале, было равно 0-1 клетка в 1 мм², у детей с перинатальным повреждением нервной системы средней и тяжелой степени (без нарушения витальных функций) количество клеток в состоянии апоптоза равнялось 2-4 в 1 мм², у больных с перинатальным поражением центральной нервной системы тяжелой степени с нарушением витальных функций за 1-2 суток до летального исхода и посмертно 9-10 клеток в 1 мм².

Проведенная статистическая обработка полученных результатов показала, что при большем количестве апоптозных клеток 9-10 в 1 мм² неонатальная смертность составила 100%. С использованием данной методике исследовано 40 детей, чувствительность метода прогнозирования составила 98,4%.

1. Пример

Ребенку С., 1 сут жизни, диагностирована асфиксия в родах, оценка по шкале Апгар 3 балла. При дополнительном исследовании подтверждено перинатальное поражение центральной нервной системы гипоксически-ишемически-травматического генеза (Нейросонографическое исследование: перивентрикулярная лейкомаляция; ультразвуковое сканирование позвоночника: подвывих в атланто-осевом суставе), клинически зафиксирован тетрапарез, нарушение витальных функций на 2-е сутки и перевод ребенка на искусственную вентиляцию легких. Проведенное по методике прогнозорование неонатальной смертности показало, что количество клеток, находящихся в состоянии апоптоза, в ликворе составило 8-9 в 1 мм², что соответствует 100% летальному исходу. В течение 3-х дней ребенку проводились интенсивные терапевтические мероприятия, в том числе антиапоптозная и нейротрофическая терапия, несмотря на проведение интенсивных адекватных терапевтических мероприятий, наступила остановка сердца и летальный исход. Данный случай показывает, что при несостоятельности системы самообеспечения организма патологические процессы могут приобретать неуправляемое течение, прежде всего в нервной системе. Обеспечение полноценной иннервации органов, в связи с этим не происходит, что привело в данном случае к летальному исходу.

2. Приведенный пример перинатального поражения ЦНС гипоксически-ишемически-травматического генеза не предполагает обязательного летального исхода. Ребенок С. Возраст 10 дней. Внутричерепное кровоизлияние 2 степени, подвывих в атланто-осевом суставе, псевдобульбарный синдром, спастический тетрапарез, кома 2, нарушение функции дыхания с переводом на аппарат искусственной вентиляции легких на 4-е сутки. При определении уровня показателя апоптозных клеток в ликворе выявлено 7 апоптозных клеток в 1 мм², что является прогностически благоприятным прогнозом для выживания. При проведении адекватной терапии ребенку с использованием ноотропных, нейротрофических препаратов и симптоматической терапии на 20-е сутки он переведен из реанимационного отделения в стационарное неврологическое отделение. Самостоятельно дышит, глотает, снизился патологический тонус в конечностях. Выписан на 26 сутки в стабильном состоянии.

Изобретение относится к области лабораторной диагностики и может быть использовано для прогнозирования неонатальной смертности у детей с перинатальным поражением центральной нервной системы. Сущность изобретения состоит в том, что у детей с перинатальным поражением центральной нервной системы исследуют клеточный осадок 1 мл ликвора, подсчитывают количество клеток с признаками апоптоза и при их количестве 9-10 в 1 мм² прогнозируют летальный исход. Техническим результатом является повышение точности прогнозирования неонатальной смертности у детей с перинатальным поражением ЦНС.

Способ прогнозирования неонатальной смертности у детей с перинальным поражением центральной нервной системы путем исследования апоптоза, отличающийся тем, что производят исследование клеточного осадка 1 мл ликвора, где при количестве апоптозных клеток 9-10 в 1 мм² прогнозируют летальный исход.