КОСМЕТИЧЕСКИЙ СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ КОЖИ Российский патент 2006 года по МПК A61K8/49 A61Q19/00 A61K31/35 

Данное изобретение относится к косметическому способу улучшения состояния и внешнего вида кожи и к применению 8-пренилнарингенина при изготовлении топических (для местного применения) композиций для улучшения состояния и внешнего вида кожи.

Кожа подвергается поражению в результате дерматологических расстройств, вредных факторов окружающей среды (ветер, воздушное кондиционирование, центральное отопление и т.д.) или в результате нормального процесса старения (хроностарения), которое может быть ускорено воздействием на кожу солнечных лучей (светостарение). В последние годы сильно возросла потребность в косметических композициях и косметических методах для улучшения внешнего вида и состояния кожи.

Покупатели усиленно ищут «замедляющие старение» косметические продукты, которые лечат или замедляют видимые признаки хроностарения и фотостарения кожи, такие как морщинки, морщины, дряблость кожи, гиперпигментация и старческие пятна.

Покупатели также часто ищут другие благоприятные эффекты от косметических продуктов в добавление к замедлению старения. Концепция «чувствительной кожи» также увеличила потребность покупателей в косметических продуктах, которые улучшают внешний вид и состояние чувствительной, сухой и/или шелушащейся (шершавой) кожи и успокаивают покрасневшую и/или раздраженную кожу. Покупатели также требуют косметические продукты, которые лечат прыщи, угри, пятна и т.п.

WO 98/13020 раскрывает кондиционирующую кожу композицию, содержащую: а) от 0,001 до 10% соединения, выбранного из группы, состоящей из ретинола, сложного эфира ретинола и их смесей; b) от 0,0001 до 50% соединения, которое при концентрации 100 мкМ ингибирует по крайней мере 20% этерификации ретинола, катализируемой LRAT или ARAT, как измерено посредством in vitro микосомальным анализом; где соединение не является амидом жирной кислоты или диметилимидазолидиноном; и с) косметически приемлемый носитель.

Флавононы и флавонолы раскрываются в качестве примеров соединений, которые удовлетворяют тесту in vitro микосомального анализа. Нарингенин среди других компонентов раскрывается как предпочтительный флавонон или флавонол.

8-пренилнарингенин как соединение является известным. Например, в Journal of Endocrinology & Metabolism, vol.83, No 6. Milligan et al. «Identification of a potent phytoestrogen in hops and beer» указывается, что 8-пренилнарингенин является сильным фитоэстрогеном. Структура 8-пренилнарингенина также показана в этой статье. 8-пренилнарингенин встречается в природе в хмеле, из которого он может быть выделен и сконцентрирован.

Авторы неожиданно обнаружили дополнительные неописанные свойства 8-пренилнарингенина, которые являются полезными в косметических композициях для топического нанесения на кожу для обеспечения ранее неописанных благоприятных для ухода за кожей эффектов.

Было обнаружено, что при нанесении на кожу косметических композиций, которые содержат 8-пренилнарингенин или его производные, может быть достигнуто эффективное лечение и предотвращение состояний нормальной кожи, вызванных хроностарением или фотостарением, таких как морщинки, морщины, провисание (дряблость кожи), гиперпигментация и старческие пятна. Также было обнаружено, что применение 8-пренилнарингенина в косметических композициях преимущественно обеспечивает дополнительные благоприятные для кожи эффекты в дополнение к замедлению старения, такие как успокоение чувствительной и/или раздраженной кожи.

В первом аспекте изобретение включает топическую композицию для нанесения на кожу человека, содержащую эффективное количество 8-пренилнарингенина.

Согласно следующему аспекту настоящего изобретения предлагается способ обеспечения по меньшей мере одного благоприятного для косметического ухода за кожей эффекта, выбранного из лечения/профилактики морщинистой, провисающей, старой и/или поврежденной светом кожи; повышения отложения коллагена в коже; повышения образования декорина в коже; успокоения раздраженной, покрасневшей и/или чувствительной кожи; улучшения структуры кожи, гладкости и/или упругости, где способ включает нанесение на кожу топической композиции, содержащей 8-пренилнарингенин и/или его производные.

Настоящее изобретение относится также к применению 8-пренилнарингенина и/или его производных при изготовлении топической композиции для обеспечения по меньшей мере одного полезного эффекта косметического ухода за кожей, выбранного из лечения/ профилактики морщинистой, провисающей, старой и/или поврежденной светом кожи; повышения отложения коллагена в коже; повышения образования декорина в коже; успокоения раздраженной, покрасневшей и/или чувствительной кожи, улучшения структуры кожи, гладкости и/или упругости.

Другой аспект настоящего изобретения предлагает 8-пренилнарингенин для использования при лечении морщинистой, провисающей, старой и/или поврежденной светом кожи; повышения отложения коллагена в коже; повышения образования декорина в коже; успокоения раздраженной, покрасневшей и/или чувствительной кожи, улучшения структуры кожи, гладкости и/или упругости.

Способы по изобретению и применение 8-пренилнарингенина обеспечивают таким образом замедляющие старение эффекты, которые приводят к образованию гладкой и мягкой кожи с улучшенной эластичностью и уменьшенным или замедленным образованием морщин и старой кожи, с улучшенным цветом кожи. Может быть достигнуто общее улучшение внешнего вида, структуры и состояния, в особенности в отношении блеска, чистоты и общего молодого внешнего вида кожи. Способы по изобретению и применения являются также благоприятными для успокоения и облегчения чувствительной и/или раздраженной кожи. Таким образом, способы по изобретению выгодно обеспечивают широкий круг благоприятных для кожи эффектов.

Эти преимущества могут включать улучшенную гидратацию, структуру/цвет, гладкость, шелковистость, упругость, прочность/эластичность и блеск.

Термин «лечение», как он использован здесь, включает уменьшение, торможение и/или предотвращение вышеупомянутых состояний кожи, таких как сморщенная, старая, поврежденная светом кожа и/или раздраженная кожа, и обычно улучшение качества кожи и улучшение ее внешнего вида и структуры путем предотвращения или снижения появления морщин и увеличения гибкости, упругости, гладкости, мягкости и эластичности кожи. Косметические способы и применения 8-пренилнарингенина и/или его производных согласно изобретению могут быть полезными для лечения кожи, которая уже находится в сморщенном, старом, поврежденном светом и раздраженном состоянии, или для лечения молодой кожи для предотвращения или уменьшения вышеупомянутых вредных изменений в результате нормального процесса старения/светостарения. Изобретение включает также производные свободной молекулы, которые содержат группы 8-пренилнарингенина.

Активный 8-пренилнарингенин, который должен применяться в соответствии с настоящим изобретением, присутствует в топической композиции в эффективном количестве. Обычно общее количество активного вещества находится в пределах от 0,0001 до 50 мас.% композиции. Более предпочтительно количество составляет от 0,001 до 10% и наиболее предпочтительно от 0,01% до 1% для того, чтобы максимизировать полезный эффект при минимальной цене.

Композиция, используемая в соответствии с настоящим изобретением, содержит также дерматологически/косметически приемлемый носитель для того, чтобы действовать как разбавитель, диспергатор или носитель для активного вещества. Носитель может включать вещества, обычно применяемые в продуктах для ухода за кожей, такие как вода, жидкие или твердые умягчители, силиконовые масла, эмульгаторы, растворители, влагоудерживающие вещества, загустители, порошки, пропелленты и т.п.

Носитель обычно будет составлять от 5 до 99,9%, предпочтительно от 25 до 80 мас.% композиции и может в отсутствие других косметических добавок составлять баланс композиции.

Кроме активного соединения, 8-пренилнарингенина, могут быть включены также другие специфические благоприятные для кожи активные вещества, такие как солнцезащитные средства, осветляющие кожу агенты и агенты, способствующие загару кожи. Носитель может также дополнительно включать добавки, такие как отдушки, замутнители, консерванты, красители и буферные агенты.

Для приготовления топической композиции, используемой в способе по настоящему изобретению, может быть применен обычный способ приготовления продуктов для ухода за кожей. Активные компоненты обычно вводят в дерматологически приемлемый носитель удобным способом. Активные компоненты могут быть вначале соответствующим образом растворены или диспергированы в части воды или другого растворителя или жидкости, которая должна быть введена в композицию. Предпочтительными композициями являются эмульсии масло-в-воде или вода-в-масле.

Композиция может быть в форме обычных продуктов для ухода за кожей, таких как крем, гель или лосьон, или т.п. Композиция может быть также в виде так называемого «смываемого» продукта, например геля для ванны или душа, возможно содержащего систему доставки активных веществ для промотирования сцепления с кожей во время мытья. Наиболее предпочтительно продуктом является «оставляемый» продукт, продукт, который наносят на кожу без преднамеренной стадии смывания вскоре после его нанесения на кожу.

Композиция может быть упакована любым подходящим образом, таким как в банку, флакон, тубу, упаковка с вращающимся шариком или подобное, обычным образом.

Способ по настоящему изобретению можно выполнять один или несколько раз ежедневно для кожи, которая требует лечения (обработки). Улучшение внешнего вида кожи обычно становится заметным после 1-3 месяцев в зависимости от состояния кожи, концентрации активных компонентов, используемых в способе по изобретению, количества используемой композиции и частоты, с которой ее применяют. Обычно небольшое количество композиции, например от 0,1 до 5 мл, наносят на кожу из подходящего контейнера или аппликатора и распределяют по коже и/или втирают в нее, используя руки или пальцы, или подходящее устройство. За этим может, необязательно, последовать стадия смывания в зависимости от того, составлена ли композиция как «оставляемый» или «смываемый» продукт.

Для более легкого понимания настоящего изобретения далее приводятся следующие примеры, но только для иллюстрации со ссылками на прилагаемые фигуры, на которых:

- фигура 1 показывает влияние 8-пренилнарингенина на синтез декорина;

- фигура 2 показывает влияние 8-пренилнарингенина на синтез проколлагена;

- фигура 3 показывает влияние 8-пренилнарингенина на уменьшение экспрессии PGE2.

ПРИМЕРЫ

Первый пример демонстрирует замедляющие старение благоприятные воздействия 8-пренилнарингенина.

Из одновременно рассматриваемой европейской патентной заявки заявителей 99908956.8 известно, что местные (топические) обработки ретиноевой кислотой могут быть использованы для того, чтобы вызвать повышение регуляции проколлагена-I и декорина in vivo. С этой целью фрагменты под заголовком «Identification of procollagen I and decorin upregulation in skin in vivo following topical retinoic acid treatment for comparative purposes» этой заявки включены в описание во всей их полноте.

ПРИМЕР 1

Методика оценки синтеза проколлагена I и декорина в фибробластах кожи человека

Приготовление среды, кондиционированной фибробластом кожи

Первичные фибробласты препуция человека с пассажа 2 (П2) высевали в 12-ти луночные планшеты с плотностью 10000 клеток/см² и выдерживали в течение 24 часов в атмосфере 5% двуокиси углерода и 4% кислорода в модифицированной по Дульбеко среде Игла (DMEM) с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки. После этого клетки промывали DMEM, не содержащей сыворотки, и затем дополнительно инкубировали в течение 60 часов. Затем монослои фибробластов опять промывали DMEM, не содержащей сыворотки. Испытуемые реагенты и контрольные носители добавляли к клеткам в трех последовательностях, в конечном объеме 0,4 мл/лунку свежей не содержащей сыворотки DMEM и дополнительно инкубировали в течение 24 часов. Такую среду, кондиционированную фибробластами, или сразу анализировали или мгновенно замораживали в жидком азоте и хранили при -70°С для дальнейших анализов. Затем подсчитывали клетки и данные дот-блотт анализа в последствии стандартизировали исходя из числа клеток.

Дот-блотт анализ на проколлаген-I и декорин протеин в среде, кондиционированной дермальными фибробластами

Образцы кондиционированной среды от дермальных фибробластов, обработанных носителем (в качестве контроля) или испытуемыми реагентами, дополняли 20 мМ дитиотреитола (разведение 1:10 200 мМ исходного раствора) и 0,1% додецилсульфата натрия (разведение 1:100 10% исходного раствора), хорошо перемешивали и затем инкубировали при 75°С в течение 2 минут. Стандарт для анализа получали серийным разведением неразбавленной кондиционированной фибробластами среды от фибробластов, засеянных из расчета 10000 клеток/см² в 175 см³ колбе и выдержанных в не содержащей сыворотку DMEM, как описано выше.

Далее анализируемые пробы наносили в трех последовательностях на предварительно смоченный лист проницаемой мембраны Immobilon-P, используя 96-ти луночный аппарат Bio-Dot от Bio-Rad, как описано в инструкции изготовителя. Наносили приблизительно 200 мкл среды на лунку. Среде давали фильтроваться через мембрану под действием силы тяжести (30 минут), после чего мембрану дважды промывали PBS (200 мкл). Этим PBS смывам давали фильтроваться через мембрану под действием силы тяжести (2×15 минут). Затем аппарат Bio-Dot подсоединяли к вакуумному устройству и проводили третью и последнюю промывку PBS под разрежением. Аппарат отсоединяли, мембрану извлекали и быстро нарезали, как требовалось, перед помещением в блокирующий буфер на ночь при 4°С.

Мембраны, подготовленные для определения декорина, блокировали 3% (мас./об.) BSA/ 0,1% (об.) Tween-20 в PBS, тогда как мембраны для анализа проколлагена-I блокировали 5% (мас./об.) порошкового обезжиренного молока/ 0,05% Tween-20 в PBS. На следующий день мембраны зондировали при разведении 1:10000 первичных антител к проколлагену-I человека (MAB1912; крысиный моноклон; Chemicon Int. Inc., Temecula, CA), или декорина человека (кроличий поликлон; Biogenesis) в течение 2 часов при комнатной температуре. Затем мембраны последовательно промывали TBS/0,05% Tween-20 (3×5 минут) и затем инкубировали с разведением 1:1000 ¹²⁵I-конъюгированных антикрысиных или антикроличьих, по потребности, фрагментов F(ab')2 (Amersham) в течение 1 часа при комнатной температуре.

Вслед за тем полоски Immobilon опять промывали TBS/Tween-20 (3×5 минут) перед тем, как дать им высохнуть на воздухе при комнатной температуре. Высушенные мембраны заворачивали в целлофан и экспонировали в камере фосфорного экрана Molecular Dynamics в течение 16-18 часов. В конце этого периода экспонированный экран сканировали фосфороимеджером (Molecular Dynamics Phosphoroimager SF), используя программное обеспечение ImageQuant^ТМ. Интенсивность точек оценивали компьютерным анализом образов, используя цифровые преобразования ImageQuant^ТМ, стандартизовали к числу клеток и определяли влияние различных испытуемых реагентов на синтез декорина и проколлагена-I относительно значения контрольной обработки носителем в 100 условных единиц.

ТЕСТЫ

Результаты анализов показаны графически на фигурах 1 и 2. Для нормализации результатов влияние испытуемого соединения определяли относительно значения контроля обработанного носителем, принятого за 100 условных единиц.

Для сравнения проводили опыт с ретиноевой кислотой для оценки ее влияния на синтез декорина фибробластами кожи человека. Результаты на фигурах 1 и 2 показывают, что 8-пренилнарингенин существенно повышает синтез как проколлагена-I, так и декорина фибробластами кожи человека по сравнению с контролем.

Уровень декорина в коже связан с улучшенным состоянием и внешним видом кожи. Повышение уровня декорина в коже является важным для регулируемого и правильного отложения коллагена в коже, которое связано со многими благоприятными для кожи эффектами, такими как разглаживание морщин и дермальное восстановление поврежденной светом кожи.

Сравнительный опыт с ретиноевой кислотой (1 мкм) показал повышение регуляции декорина, 138 3 14 (р = 0,035, n = 4), определенное относительно величины контроля, обработанного носителем, в 100 условных единиц. Неожиданно эти данные дополнительно показывают, что достигнутая величина повышения регуляции и синтеза декорина фибробластами кожи человека превышает таковую величину для исходного замедляющего старение восстанавливающего активного вещества, ретиноевой кислоты.

Были проведены дополнительные сравнительные тесты для сравнения повышения регуляции проколлагена-I и декорина с использованием 8-пренилнарингенина и других известных эстрогенов или фитоэстрогенов.

В тестах была использована та же процедура, которая описана выше.

Первоначально были получены результаты для известных эстрогенов/фитоэстрогенов в среде, которая содержала фенол красный (сам по себе обладающий эстрогенной активностью). Затем тесты были повторены с 8-пренилнарингенином и другими известными эстрогенами/фитоэстрогенами в среде, которая не содержала фенол красный. Результаты представлены ниже в таблицах 1 и 2.

Таблица 1
Процент увеличения уровней проколлагена-I и декорина, выделяемых фибробластами человека, культивированными в среде, содержащей фенол красныйАктивное соединение при 1 μM (в среде, содержащей фенол красный)Проколлаген-IДекорин17-β-эстрадиол107,7121Резвератрол102,1113,1Дайдзеин11898,9Генистеин124114

Данные представлены в условных единицах относительно контрольной величины для носителя, принятой за 100.

Таблица 2
Процент увеличения уровней проколлагена-I и декорина, выделяемых фибробластами человека, культивированными в среде без фенола красногоАктивное соединение при 1 μM (среда не содержит фенол красный)Проколлаген-IДекорин8-пренилнарингенин35080017-β-эстрадиол170130Дайдзеин152252Генистеин200240

Данные представлены в условных единицах относительно контрольной величины для носителя, принятой за 100.

Из приведенных выше результатов испытаний ясно, что 8-пренилнарингенин является намного более лучшим индуктором проколлагена-I и декорина, чем сами другие известные эстрогены или фитоэстрогены. Не желая быть связанными теорией, предполагается, что 8-пренилнарингенин не действует как фитоэстроген, но может промотировать синтез двух восстанавливающих маркеров по другому молекулярному пути.

ПРИМЕР 2

Анализ PGE2 фибробластов

Следующий пример показывает, что 8-пренилнарингенин может эффективно снизить базальные уровни простагландина Е₂ (PGE2), секретируемого фибробластами in vitro.

Первичные фибробласты препуция человека с пассажа 2 (П2) высевали в 96-ти луночные планшеты с плотностью 10000 клеток/ лунку и выдерживали в течение 24 часов в атмосфере 5% двуокиси углерода в модифицированной по Дульбеко среде Игла (DMEM), дополненной 10% фетальной телячьей сыворотки. 8-пренилнарингенин растворяли в этаноле, добавляли в свежую клеточную среду (конечная концентрация 1% EtOH в DMEM, дополненной 10% фетальной телячьей сыворотки), добавляли к клеткам в лунках в трех последовательностях и инкубировали дополнительно в течение 24 часов. Форбалмиристатацетат (PMA) (Sigma) добавляли к среде и клетки инкубировали дополнительно в течение 24 часов. РМА действует как стрессор, который вызывает у клеток окислительный стресс и воспалительную реакцию. Затем фибробласты/среду анализировали, как описано ниже, немедленно или мгновенно замораживали в жидком азоте и хранили при -70°С для дальнейших анализов.

Анализ простагландина Е2 (PGE2)

Для анализа PGE2 отбирали объемы 50 мкл культуральной среды после осторожного встряхивания культурального планшета. Уровни PGE2 в среде определяли набором для иммуноанализа Biotrak PGE2 (Amersham, UK). Анализ основан на конкуренции между непомеченным PGE2 пробы и фиксированным количеством помеченного пероксидазой хрена PGE2 за ограниченное количество фиксированного специфичного антитела PGE2. Концентрации непомеченного PGE2 пробы определяли по стандартной кривой, которую получали одновременно.

Противовоспалительный потенциал испытуемых соединений оценивали по способности соединений снижать базальные уровни выделяемого PGE2 по сравнению с контролем. Полученные результаты показаны на фигуре 3.

PGE2 является хорошо известным медиатором воспаления кожи, см. Greaves et al. «Prostagludus, leokotriemes, phospholipase, platelet actualing factor and cytokines: an integrated approach to inflamation of human skin», Arch. Dermatol.Res. (1988) 280 [supp]:533-541. Результаты показывают, что фибробласты, обработанные 8-пренилнарингенином, продуцируют меньше провоспалительного простагландина PGE2, понижая тем самым воспалительный потенциал кожи.

ПРИМЕР 3

Приведенная ниже рецептура описывает крем масло-в-воде, пригодный для способов и применений в соответствии с настоящим изобретением. Процентное содержание указано по массе композиции.

 мас.%Минеральное масло48-Пренилнарингенин1,15Brij 56*4Alfol 16RD*4Триэтаноламин0,75Бутан-1,3-диол3Ксантановая смола0,3ОтдушкаQ.s.(дост. кол)Бутилированный гидрокситолуол0,01Водадо 100

* Brij 56 - эфир цетилового спирта РОЕ (10)

Alfol 16RD - цетиловый спирт

ПРИМЕР 4

Приведенная ниже рецептура описывает эмульсионный крем в соответствии с настоящим изобретением.

Полное химическое название или название по CTFAТорговое названиемас.%8-пренилнарингенин 2,0Двунатрий EDTASequestrin Na20,05Магний-алюминиевый силикатVeegum Ultra0,6МетилпарабенMethyl Paraben0,15СиметиконDC Antifoam Emulsion0,01Бутиленгликоль-1,3Butylene Glycol 1,33,0ГидроксиэтилцеллюлозаNatrosol 250HHR0,5Глицерин, USPGlycerine USP2,0Ксантановая смолаKeltrol 10000,2ТриэтаноламинTriethanolamine (99%)1,2Стеариновая кислотаPristerene 49113,0Пропилпарабен NFPropylparaben NF0,1ГлицерилгидростеаратNaturechem GMHS1,5Стеариловый спиртLanette 18 DEO1,5ИзостеарилпальмитатProtachem ISP6,0Октаноат С12-С15 спиртов Hetester FAO3,0ДиметиконSilicone Fluid 200(50 cts)1,0Холестерин NFCholesterol NF0,5СорбитанстеаратSorbitan Stearate1,0Бутилированный гидрокситолуолEmbanox BHT0,05ТокоферилацетатVitamin E Acetate0,1Стеарат ПЭГ-100Myrj 592,0Стеароиллактилат натрияPationic SSL0,5Гидроксикаприловая кислотаHydroxycaprylic Acid0,1РетинилпальмитатVitamin A Palmitate0,06Альфа-бисабололAlpha-bisabolol0,2Вода, DI q.s. до 100

Обе вышеприведенные местные (топические) композиции примеров 3 и 4 могут обеспечить эффективное косметическое лечение для улучшения внешнего вида сморщенной, старой, поврежденной светом и/или воспаленной кожи при нанесении на кожу, которая ухудшена старением или светостарением, или при нанесении на молодую кожу для предотвращения или торможения таких ухудшающих изменений. Композиции могут быть приготовлены обычным способом.

Изобретение относится к косметическому способу улучшения состояния и внешнего вида кожи и к применению 8-пренилнарингенина при изготовлении топических (для местного применения) композиций для улучшения состояния и внешнего вида кожи. Изобретение предотвращает состояния нормальной кожи, вызванные хроностарением или фотостарением, такие как морщинки, морщины, провисание (дряблость кожи), гиперпигментация и старческие пятна. 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 4 табл., 3 ил.

1. Топическая композиция для ухода за кожей, содержащая:

(a) 8-пренилнарингенин в количестве между 0,0001 и 50% от массы композиции и

(b) дерматологически приемлемый носитель.