N-ЛИПОЕВАЯ АМИНОКИСЛОТА ИЛИ ПЕПТИД, ПРОИЗВОДНЫЕ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ Российский патент 2020 года по МПК C07D339/04 A61K31/385 A61K38/00 A61K38/05 A61K38/06 A61P17/00 C07K5/06 C07K5/08 

ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Варианты осуществления, описанные в настоящем документе, относятся к соединениям, композициям и способам применения композиций, содержащих N-липоевую аминокислоту или N-липоевый пептид, их производное для топического введения пациенту для лечения или профилактики расстройств, заболеваний, симптомов или синдромов, связанных с дерматологическими или косметическими патологическими состояниями или другими расстройствами кожной системы.

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Липоевая кислота, также известная как альфа-липоевая кислота, является одним из наиболее сильных антиоксидантов и широко используется в составах для ухода за кожей в качестве добавки и в качестве терапевтического соединения. Липоевая кислота является важным кофактором для митохондриального энергетического метаболизма. За счет ее применения уменьшается количество других водо- и жирорастворимых витаминов, таких как витамин C, E и глутатион, и регулируется метаболизм глюкозы и процесс воспаления. Липоевая кислота хорошо известна и используется в составах для кожи в качестве соединения, замедляющего старение. Однако применение липоевой кислоты ограничено из-за того, что ей свойственны чувствительность к свету и потеря биологической активности.

Липоевая кислота является важным кофактором для ключевых ферментов в митохондриальном окислительном пути. В клеточной среде она действует в качестве сильнодействующего антиоксиданта и металлохелатора (Gomes et al.). Она широко используется в качестве антиоксиданта в составах для кожи. Липоевая кислота имеет два оптических энантиомера - R- и S-формы липоевой кислоты (Gomes et al.). Липоевая кислота используется в продуктах для ухода за кожей в качестве соединения, замедляющего старение. Однако, поскольку липоевой кислоте свойственна чувствительность к свету, она теряет свою биологическую эффективность под воздействием ультрафиолетового излучения (Wada et al.). Таким образом, более стабильные производные липоевой кислоты идеально подошли бы для защиты кожи и замедления старения.

Некоторые исследования показывают, что липоевая кислота оказывает антимеланогенное действие, поскольку она ингибирует экспрессию тирозиназы - ключевого фермента в процессе меланогенеза (Kim JH et al.). Другие исследования показывают, что производные липоевой кислоты захватывают ДОФА-хинон - промежуточное соединение в пути синтеза меланина. Эти исследования показывают, что производные липоевой кислоты ингибируют синтез меланина посредством более чем одного механизма. Однако, поскольку липоевая кислота имеет лишь ограниченную биодоступность в коже из-за свойственной ей чувствительности к свету, важно разработать более стабильные производные липоевой кислоты.

Кроме того, использование высоких доз липоевой кислоты связано с определенными побочными эффектами, такими как зуд и изъязвление кожи (Gomes et al.).

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к соединению, которое представляет собой новое производное аминокислоты или пептида, содержащее липоевую кислоту, соединенную посредством ковалентной амидной связи с аминокислотой или пептидом. В настоящем изобретении было установлено, что новое производное аминокислоты или пептида, в частности N-липоевая аминокислота или пептид и их производное, и композиции для топического введения пациенту, содержащие производное аминокислоты или пептида в соответствии с изобретением, являются терапевтически эффективными для лечения или профилактики расстройств, заболеваний, симптомов или синдромов, связанных с дерматологическими или косметическими патологическими состояниями или другими расстройствами кожной системы.

В одном общем аспекте варианты осуществления настоящего изобретения относятся к соединению, которое представляет собой новое производное аминокислоты или пептида и имеет следующую общую формулу (I):

N-липоевая кислота- (X)_n-Z-R₁ Формула (I)

или его изомер, свободную кислоту, основание, соль, лактон, амид, гидроксиламид, гидразид, сложный эфир или нитрил,

причем «N-липоевая кислота» представляет собой липоевый (-ые) (Lp) радикал (-ы), присоединенный (-ые) к атому азота амино- или иминогруппы в аминокислотном радикале

(X)_n представляет собой пептид, имеющий n аминокислотных остатков, причем каждый аминокислотный остаток;

X независимо выбран из любого аминокислотного остатка;

n представляет собой целое число, относящееся к диапазону 0-2;

Z представляет собой карбоксиконцевой аминокислотный остаток;

причем каждый из аминокислотных остатков независимо выбран из любой аминокислоты;

R₁ представляет собой OR₂, NHR₃ или NHNHR₄;

R₂ представляет собой H, алкильный, аралкильный или арильный радикал, имеющий до 9 атомов углерода;

R₃ или R₄ независимо представляет собой H, OH, алкильный, аралкильный, арильный или ацильный радикал, имеющий до 9 атомов углерода.

В дополнение к описанному выше боковая цепь каждого из X и Z необязательно и независимо имеет дополнительный функциональный радикал, выбранный из группы, состоящей из OH, SH, NHCONH₂, NHC(=NH)NH₂, NH₂, COOH, CONH₂, имидазолила, пирролидинила и индолила;

причем атом H дополнительного функционального радикала необязательно замещен группой NH₂, ацильным, алкильным, аралкильным или арильным радикалом, имеющим до 9 атомов углерода;

и при этом атом H в NH₂, NHNH₂, NHOH или NH(C=NH)NH₂ необязательно замещен липоевым радикалом.

Типичный ацильный радикал включает в себя, без ограничений, ацетил (Ac), пропаноил (Pa) и бензоил (Bz).

Типичная группа, присоединенная к карбоксиконцевому аминокислотному остатку, включает в себя, без ограничений, OH, OEt, NH₂, NHOH и NHNH₂, NHNHAc, NHNHPa или CN для замещения карбоксигруппы.

В одном варианте осуществления производное липоевой аминокислоты выбирают может быть выбрано из группы, состоящей из: N-Lp-Gly-NH₂; N-Lp-Cys-NH₂; N-Lp-Tyr-NH₂; N-Lp-Tyr(OAc)- NH₂; N-Lp-Pro-NH₂; N-Lp-Cys-OH; N-Lp-Cys-OEt; N-Lp-Cys- (SAc)- OEt; и N-Lp-Cys- (SAc)- NH₂.

В одном варианте осуществления производное липоевого пептида представляет собой липоевый дипептид может быть выбран из группы, состоящей из: N-Lp-Gly-Cys-NH₂; N-Lp-Pro-Cys-NH₂; N-Lp-Cys-Gly-NH₂; N-Lp-Tyr-Gly-NH₂; N-Lp-Gly-Tyr-NH₂; N-Lp-Tyr-Cys-NH₂; N-Lp-Tyr-Cys-OEt; N-Lp-Gly-Cys-OH; и N-Lp-Gly-Cys-OEt.

В другом варианте осуществления производное липоевого пептида представляет собой липоевый трипептид, выбранный из группы, состоящей из: N-Lp-Gly-Cys-Cys-NH₂; N-Lp-Cys-Cys-Cys-NH₂; N-Lp-Tyr-Cys-Cys-NH₂; N-Lp-Gly-Tyr-Cys-NH₂; и N-Lp-Pro-Cys-Cys-NH₂.

В предпочтительном варианте осуществления производное липоевой аминокислоты представляет собой N-Lp-Gly-NH₂, имеющее следующую структуру:

.

Другой аспект изобретения относится к композиции для топического введения пациенту, причем композиция содержит терапевтически эффективное количество соединения (содержащего N-липоевую аминокислоту, или N-липоевый пептид, или их производное), согласно описанию, необязательно с фармацевтически или косметически приемлемым носителем. Соединение может представлять собой любую липоевую аминокислоту, липоевый дипептид и липоевый трипептид, определенные в настоящем описании. В предпочтительном варианте осуществления липоевая аминокислота представляет собой N-Lp-LGly-LNH₂ и предпочтительно имеет структуру, как определено выше.

Изобретение также относится к фармацевтической композиции для топического лечения кожных изменений, связанных со старением, содержащей эффективное количество соединения (содержащего N-липоевую аминокислоту, или N-липоевый пептид, или их производное), как описано выше, и необязательно фармацевтически приемлемый носитель, адаптированный для топической доставки в форме косметического продукта. Соединение может представлять собой любую липоевую аминокислоту, липоевый дипептид и липоевый трипептид, определенные в настоящем описании. В предпочтительном варианте осуществления липоевая аминокислота представляет собой N-Lp-LGly-LNH₂ и предпочтительно имеет структуру, как определено выше. В одном варианте осуществления композиция содержит по меньшей мере одно соединение, которое не является производным N-липоевой аминокислоты или пептида; указанное соединение выбрано из группы, состоящей из солнцезащитного средства; соединения для лечения угревой сыпи; противомикробного соединения; противовоспалительного соединения; антиоксиданта; хелатирующего соединения; регулятора рН; мягчителя; загущающего соединения; консерванта; эмульгатора; влагоудерживающего вещества; увлажнителя; суспендирующего соединения; оптического осветлителя; стабилизатора; вещества, способствующего проникновению; ароматического вещества; и красящего соединения.

Изобретение также относится к способу лечения косметического патологического состояния или дерматологического расстройства, выбранного из группы, состоящей из нарушенной кератинизации, воспаления и изменений, связанных со старением, вызванным воздействием внутренних и внешних факторов, включающий топическое введение пациенту композиции, содержащей терапевтически эффективное количество соединения, содержащего N-липоевую аминокислоту, или N-липоевый пептид, их производное, как описано выше.

В любом из вариантов осуществления косметическое патологическое состояние или дерматологическое расстройство выбрано из группы, состоящей из тонких линий, морщин, возрастных пятен, а также для осветления кожи.

В другом аспекте варианты осуществления настоящего изобретения относятся к композициям для топического введения пациенту, причем композиции содержат терапевтически эффективное количество производного аминокислоты или пептида в соответствии с настоящим изобретением и необязательно фармацевтически или косметически приемлемый носитель.

В еще одном аспекте варианты осуществления настоящего изобретения относятся к способам лечения, профилактики, ослабления или облегчения состояний, расстройств, заболеваний, симптомов или синдромов, связанных с дерматологическими или косметическими патологическими состояниями или другими расстройствами кожной системы у пациента, нуждающегося в таком лечении, причем способ включает топическое введение пациенту композиции, содержащей терапевтически эффективное количество производного аминокислоты или пептида в соответствии с настоящим изобретением.

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к соединению для осветления кожи, причем добавка для осветления кожи содержит новое производное аминокислоты или пептида из настоящего описания. В дополнение к осветлению кожи новое производное аминокислоты или пептида из настоящего описания также может влиять на ингибирование синтеза меланина и/или индукцию синтеза проколлагена.

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к косметической композиции для осветления кожи, содержащей соединение для осветления кожи, как описано выше.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу осветления кожи или воздействия на кожные изменения, связанные со старением, включая тонкие линии и морщины, описанной выше косметической композицией.

В настоящем документе подразумевается, что косметическая композиция включает в себя композицию для топического нанесения на кожу млекопитающих, главным образом людей. Такая композиция может быть по существу отнесена к оставляемым на коже или требующим смывания, и подразумевается, что она включает в себя кондиционеры или тоники, губные помады, цветные косметические средства и обычные композиции для топического нанесения, которые до некоторой степени и по меньшей мере снижают воздействие меланина на кератиноциты. В настоящем документе под осветлением и отбеливанием подразумевается одно и то же, и эти термины включают в себя непосредственно осветление кожи, а также осветление пятен на коже, таких как возрастные пятна и веснушки.

Косметическая композиция настоящего изобретения может быть выполнена в форме жидкости, лосьона, крема, сыворотки, геля, бруска мыла или тоника или может наноситься посредством маски или патча для лица. Композиция настоящего изобретения представляет собой ту композицию, которая по меньшей мере осветляет кожу, причем подразумевается, что кожа включает в себя кожу на лице, шее, груди, спине, кистях, руках, ногах и волосистой части головы.

Другой вариант осуществления относится к терапевтической композиции, содержащей соединение (содержащее N-липоевую аминокислоту, или N-липоевый пептид, или их производное) для лечения дерматологического расстройства. Другой вариант осуществления относится к использованию соединения (содержащего N-липоевую аминокислоту, или N-липоевый пептид, или их производное) в получении лекарственного средства, предназначенного для лечения дерматологического расстройства.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение обеспечивает использование соединения в соответствии с настоящим изобретением в получении лекарственного средства для лечения дерматологического расстройства. В дополнительном аспекте настоящего изобретения также предложен способ получения лекарственного средства, содержащего композицию в соответствии с настоящим изобретением. Предпочтительно способ настоящего изобретения включает стадию, на которой стерилизуют лекарственное средство. Дерматологическое расстройство может представлять собой любое расстройство, обсуждаемое в настоящем описании.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

На Фиг. 1 показано, что N-Lp-Gly-NH₂ (L20) значительно блокирует синтез меланина в здоровых эпидермальных меланоцитах новорожденного человека.

На Фиг. 2 показано, что L20 значительно блокирует синтез меланина в здоровых 3-мерных сокультурах Melanoderm взрослого человека.

На Фиг. 3 показано, что L20 значительно индуцирует синтез проколлагена в здоровых 3-мерных сокультурах Epiderm.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Аминокислота представляет собой органическую кислоту, имеющую один или более щелочных радикалов, таких как радикалы амино, гуанидино, имино или гидразин, присоединенных к любому атому углерода, отличному от первого атома углерода. Существует 20 стандартных аминокислот, которые представлены химическими названиями, такими как «глицин», или сокращенными обозначениями, такими как трехбуквенное «Gly» или однобуквенное «G. В настоящем описании будет использоваться как однобуквенное, так и трехбуквенное обозначение. Все стандартные аминокислоты, за исключением глицина, имеют стереоизомеры, т. е. энантиомер с L- и D-формой. В большинстве природных пептидов и белков все аминокислоты имеют L-форму. D-формы некоторых аминокислот вырабатываются микроорганизмами или содержатся в антибиотиках и оказывают ингибирующее и антагонистическое действие. Например, D-аланин, D-аспарагиновая кислота и D-глутаминовая кислота содержатся в стенках бактериальных клеток, а D-глутаминовая кислота, D-аспарагиновая кислота и D-фенилаланин содержатся в антибиотике бацитрацине. Нестандартная аминокислота представляет собой аминокислоту, которая не является стандартной аминокислотой. Примеры нестандартных аминокислот включают в себя, без ограничений, β-аланин и таурин. Нестандартные аминокислоты могут существовать в D- или L-форме.

Для 20 стандартных аминокислот используются следующие однобуквенные и трехбуквенные обозначения: аланин (A, Ala), аргинин (R, Arg), аспарагиновая кислота (D, Asp), аспарагин (N, Asn), цистеин (C, Cys), глицин (G, Gly), глутаминовая кислота (E, Glu), глутамин (Q, Gln), гистидин (H, His), изолейцин (I, Ile), лейцин (L, Leu), лизин (K, Lys), метионин (M, Met), фенилаланин (F, Phe), пролин (P, Pro), серин (S, Ser), треонин (T, Thr), триптофан (W, Trp), тирозин (Y, Tyr) и валин (V, Val).

Для нестандартных аминокислот используются следующие буквенные обозначения: β-аланин (bAla), 4-аминобензойная кислота (Aba), 2-аминобутановая кислота (Abu), 4-аминобутановая кислота (4Abu), 2-аминоизобутановая кислота (Aib), 5-аминолевулиновая кислота (All), аллиин (Ali), 2-аминоадипиновая кислота (Aad), 3-аминоадипиновая кислота (bAad), аминопимелиновая кислота (Apa); 3-аминотирозин (Atyr), канаванин (Cav), каналин (Can), цилиатин (Cil), цистеиновая кислота (Cya), цистеинсульфиновая кислота (Csa), цитруллин (Cit); креатин (Cre), креатинин (Crn); 2,3-диаминоянтарная кислота (Dsa); 2,4-диаминобутановая кислота (Dbu); 2,3-диаминопропановая кислота (Dpr); 3,4-дигидроксифенилаланин (Dopa); 3,5-дийодтирозин (Dtyr); гомоаргинин (Har), гомосерин (Hser), гомоцистеин (Hcys), гомоцитруллин (Hcit), гидроксилизин (Hyl); 3-гидроксипролин (3Hyp); 4-гидроксипролин (4Hyp); 2-гидрокси-4-аминобутановая кислота (Haba); 3-гидрокси-4-аминобутановая кислота (Hyba); 4-гидроксиорнитин (Horn); 4-гидроксиаспарагиновая кислота (Hasp); 4-гидроксифенилглицин (Hpg); 3-йодтирозин (Ityr), лантионин (Lan), β-лизин (βLys); α-метилаланин (Mala); β-метиласпарагиновая кислота (Mas), 4-метилпролин (Mpro); 2-метилсерин (Mser); N-метилгистидин (Mhis); орнитин (Orn); фенилглицин (Pgly); 3-фенилсерин (Pser); саркозин (Sar); S-аллилцистеин (Sac); теанин (The); тироксин (Thy); 3,5,3'-трийодтиронин (Tth); и таурин (Tau).

В настоящей заявке используются следующие термины и аббревиатуры: липоевый, Lp; формил (Fo); ацетил (Ac); пропаноил (Pa); бензоил (Bz); пироглутамил (Pyro); фенилацетил (PhAc); бензилоксикарбонил (Z); сложный метиловый эфир (OMe); сложный этиловый эфир (OEt); сложный пропиловый эфир (OPr); сложный бутиловый эфир (OBu); сложный трет-бутиловый эфир (OtBu); сложный гексиловый эфир (OHex); сложный октиловый эфир (OOc); сложный бензиловый эфир (Obzl).

Пептид с амидными ковалентными связями образуется из по меньшей мере двух аминокислот, когда в ходе реакции синтеза дегидратации карбоксигруппа одной аминокислоты вступает в реакцию с аминогруппой другой аминокислоты. Дипептид представляет собой пептид, который содержит два аминокислотных остатка. Трипептид представляет собой пептид, который содержит три аминокислотных остатка. Пептиды могут быть дополнительно выполнены с возможностью модифицирования посредством замен или получения производных. Каждый пептид может иметь различные химические и физические свойства и обладает различными биологическими и фармакологическими действиями.

В настоящем документе «производное» соединения определяется как молекула соединения, образованная посредством замены одной или более функциональных групп в соединении. Примеры такой замены включают в себя ацилирование групп OH, NH₂, NHNH₂, NHOH и NH(C=NH)NH₂, эстерификацию групп COOH, замену COOH амидом, гидроксиламидом, гидразидом или нитрилом или замещение H в NH₂, NHNH₂, NHOH или NH(C=NH)NH₂ или липоевым радикалом.

В одном общем аспекте варианты осуществления настоящего изобретения относятся к соединению, которое представляет собой новое производное аминокислоты или пептида и имеет следующую общую формулу (I):

N-липоевая кислота- (X)_n-Z-R₁ Формула (I)

или его изомер, свободную кислоту, основание, соль, лактон, амид, гидроксиламид, гидразид, сложный эфир или нитрил,

причем «N-липоевая кислота» представляет собой липоевый (-ые) (Lp) радикал (-ы); присоединенный (-ые) к атому азота амино- или иминогруппы в аминокислотном радикале,

причем (X)_n представляет собой пептид, имеющий n аминокислотных остатков,

при этом каждый из аминокислотных остатков X независимо выбран из любого аминокислотного остатка;

n представляет собой целое число, относящееся к диапазону 0-2;

Z представляет собой карбоксиконцевой аминокислотный остаток,

причем каждый из аминокислотных остатков независимо выбран из любой аминокислоты;

R₁ представляет собой OR₂, NHR₃ или NHNHR₄;

R₂ представляет собой H, алкильный, аралкильный или арильный радикал, имеющий до 9 атомов углерода;

R₃ или R₄ независимо представляет собой H, OH, алкильный, аралкильный, арильный или ацильный радикал, имеющий до 9 атомов углерода;

боковая цепь каждого из X и Z необязательно и независимо имеет дополнительный функциональный радикал, выбранный из группы, состоящей из OH, SH, NHCONH₂, NHC(=NH)NH₂, NH₂, COOH, CONH₂, имидазолила, пирролидинила и индолила;

причем атом H дополнительного функционального радикала необязательно замещен группой NH₂, ацильным, алкильным, аралкильным или арильным радикалом, имеющим до 9 атомов углерода;

и при этом атом H в NH₂, NHNH₂, NHOH или NH(C=NH)NH₂ необязательно замещен липоевым радикалом.

Типичный ацильный радикал включает в себя, без ограничений, ацетил (Ac), пропаноил (Pa) и бензоил (Bz).

Типичная группа, присоединенная к карбоксиконцевому аминокислотному остатку, включает в себя, без ограничений, OH, OEt, NH₂, NHOH и NHNH₂, NHNHAc, NHNHPa или CN для замещения карбоксигруппы.

В другом аспекте варианты осуществления настоящего изобретения относятся к композициям для топического введения пациенту, причем композиции содержат терапевтически эффективное количество производного аминокислоты или пептида в соответствии с настоящим изобретением и необязательно фармацевтически или косметически приемлемый носитель.

В соответствии с другим вариантом осуществления настоящего изобретения производное аминокислоты или пептида также может представлять собой ди(липоевый) остаток, причем дополнительный липоевый остаток присоединен к дополнительной функциональной группе X или Z в формуле (I) и предпочтительно к аминогруппе посредством ковалентной амидной связи.

Типичные N-липоевые аминокислоты или пептиды, их производные в соответствии с изобретением включают в себя, без ограничений, (1) N-Lp- (X)_n-Z-R₁.

(1) Производные N-липоевой аминокислоты или пептида: N-Lp- (X)_n-Z-R₁

Типичные производные N-липоевой аминокислоты включают в себя, без ограничений, следующие:

N-Lp-Z-R₁, причем Z выбран из любой аминокислоты, включая A; R; D; N; C; G; E; Q; H; I; L; K; М; F; P; S; T; W; Y; V; bAla; Aba; Abu; 4Abu; Aib; All; Ali; Aad; bAad; Apa; Atyr; Cav; Can; Cil; Cya; Csa; Cit; Cre; Crn; Dsa; Dbu; Dpr; Dopa; Dtyr; Har; Hser; Hcys; Hcit; Hyl; 3Hyp; 4Hyp; Haba; Hyba; Horn; Hasp; Hpg; Ityr; Lan; βLys; Mala; Mas; Mpro; Mser; Mhis; Orn; Pgly; Pser; Sar; Sac; The; Thy; Tth; Tau.

Аминокислота Z может быть в форме изомера, свободной кислоты, основания, соли, лактона, амида, гидроксиламида, гидразида, сложного эфира или в форме нитрила, таких как формы OH, NH₂, NHOH, NHNH₂, NHNHAc, NHNHPa, OEt, OPr и CN.

Предпочтительными производными липоевой аминокислоты являются следующие: N-Lp-Gly-NH₂; N-Lp-Cys-NH₂; N-Lp-Tyr-NH₂; N-Lp-Tyr(OAc)- NH₂; N-Lp-Pro-NH₂; N-Lp-Cys-OH; N-Lp-Cys-OEt; N-Lp-Cys- (SAc)- OEt; и N-Lp-Cys- (SAc)- NH₂.

Предпочтительными производными липоевых дипептидов являются следующие: N-Lp-Gly-Cys-NH₂; N-Lp-Pro-Cys-NH₂; N-Lp-Cys-Gly-NH₂; N-Lp-Tyr-Gly-NH₂; N-Lp-Gly-Tyr-NH₂; N-Lp-Tyr-Cys-NH₂; N-Lp-Tyr-Cys-OEt; N-Lp-Gly-Cys-OH; и N-Lp-Gly-Cys-OEt.

Предпочтительными производными липоевых трипептидов являются следующие: N-Lp-Gly-Cys-Cys-NH₂; N-Lp-Cys-Cys-Cys-NH₂; N-Lp-Tyr-Cys-Cys-NH₂; N-Lp-Gly-Tyr-Cys-NH₂; и N-Lp-Pro-Cys-Cys-NH₂.

N-липоевая аминокислота или пептид и их производные в соответствии с вариантами осуществления настоящего изобретения могут быть получены любым способом, известным специалистам в данной области с учетом настоящего описания.

Другой общий аспект настоящего изобретения относится к способу лечения, профилактики, ослабления или облегчения патологических состояний, расстройств, заболеваний, симптомов или синдромов, связанных с дерматологическими или косметическими патологическими состояниями или другими расстройствами кожной системы. Способ включает топическое введение пациенту композиции, содержащей терапевтически эффективное количество производного аминокислоты или пептида в соответствии с настоящим изобретением и необязательно фармацевтически или косметически приемлемый носитель.

Патологические состояния, расстройства, симптомы и синдромы, связанные с кожной системой, которые можно лечить с помощью композиции настоящего изобретения, описаны ниже.

Кожная система

Косметические, дерматологические или другие патологические состояния или расстройства кожной системы, которые можно лечить с помощью композиции настоящего изобретения, включают в себя, без ограничений, инфекции, повреждения или расстройства кожной или кожно-слизистой ткани, относящейся к коже, ногтям и волосам; ротовой, вагинальной и анальной слизистой оболочки; нарушение кератинизации; воспаление; изменения, связанные со старением, вызванным воздействием внутренних и внешних факторов. Аллергические проявления включают в себя, без ограничений, жирную кожу; угревую сыпь; розацеа; возрастные пятна; поврежденную кожу; пятна; целлюлит; дерматозы; дерматит; инфекции кожи, волос и ногтей; перхоть; сухость или ослабленность кожи, ногтей и волос; ксероз; воспаление или экзему; эластоз; герпес; гиперкератоз; гиперпигментированную кожу; ихтиоз; кератозы; лентиго; мелазмы; мраморность кожи; псевдофолликулит зоны роста бороды; старение и повреждение кожи под воздействием ультрафиолетового излучения; зуд; псориаз; линии на коже; растяжки; истончение кожи, ногтевых пластин и волос; бородавки; морщины; заболевания полости рта или десен; раздражения, воспаления, покраснения, болезненность, повреждения или патологии слизистой оболочки, кожи, волос, ногтей, ноздрей, слухового прохода, анальных или вагинальных патологических состояний; разложение, дефекты синтеза или восстановления компонентов кожи; ненормальный или сниженный синтез коллагена, гликозаминогликанов, протеогликанов и эластина, а также снижение уровней этих компонентов в дерме; неровный тон кожи; неровную и огрубевшую поверхность кожи, ногтей и волос; потерю или уменьшение стойкости, эластичности и упругости кожи, ногтей и волос; вялость; недостаток смазки и блеска кожи, ногтей и волос; хрупкость и расслоение ногтей и волос; пожелтение кожи; кожу, склонную к аллергическим реакциям, воспалению или телеангиэктазию кожи; и тусклые и постаревшие на вид кожу, ногти и волосы. Кроме того, композиция настоящего изобретения может применяться для общего ухода за кожей, ногтями и волосами; для улучшения текстуры кожи и пор, уменьшения шероховатости и покраснения; для придания коже мягкости, гладкости, свежести, для достижения сбалансированности, визуальной чистоты, выравнивания тона и осветления; для увеличения толщины кожи и повышения ее упругости; а также для отбеливания и осветления кожи и заживления ран; для уменьшения или предотвращения потения или перспирации подмышечной области, паховой области, ладоней или других частей тела.

Инфекции кожи, ногтей и волос могут быть вызваны микроорганизмами, которые включают в себя бактерии, грибковые образования, дрожжи, плесень, паразиты и вирусы. В частности, бактериальные инфекции могут вызывать подмышечный трихомикоз, мелкоточечный кератолиз, эритразму, импетиго, эктиму, фурункулез (нарывы), карбункул, синдром ошпаренной кожи, синдром токсического шока, рожистое воспаление, целлюлит, некротический фасциит, эризипелоид, болезнь кошачьих царапин (Rochalimaea henselae), сифилис, болезнь Лайма (Borrelia burgdorferi), кожную форму сибирской язвы (Bacillus anthracis), гонококковую септицемию, заражение туберкулезом, скрофулодерму, туберкулиды, индуративную эритему, лепру (Mycobacterium leprae), лейшманиоз и острую паронихию. Вирусные инфекции могут вызывать вирусные бородавки (вирус папилломы человека), ветряную оспу (ветрянку), опоясывающий герпес (вирус ветряной оспы), простой герпес (вирус простого герпеса), контагиозный моллюск, контагиозный пустулезный дерматит, СПИД (синдром приобретенного иммунодефицита, вирус иммунодефицита человека, ВИЧ), герпетическую ангину, синдром кожно-слизистых лимфоузлов (болезнь Кавасаки), синдром Джанотти - Крости (вирус гепатита B), корь, краснуху и инфекционную эритему. Грибковые инфекции могут вызывать стригущий лишай, дерматофитию стоп (стопу атлета), дерматофитию ногтей (ногтевую инфекцию), дерматофитию рук, дерматофитию паховой области, дерматофитию туловища и конечностей, дерматофитию головы (волосистой части головы), кандидоз полости рта, кандидозные опрелости, генитальный кандидоз, хроническую паронихию, хронический кожно-слизистый кандидоз, отрубевидный лишай, гистоплазмоз, кокцидиоидомикоз, бластомикоз, споротрихоз, актиномикоз и мицетому (мадурскую стопу). Устойчивые к антибиотикам микроорганизмы включают в себя метициллинрезистентный золотистый стафилококк (MRSA) и метициллинрезистентный эпидермальный стафилококк (MRSE).

Способ введения и общие лекарственные формы

Композиции, содержащие производное аминокислоты или пептида в соответствии с изобретением, такое как N-липоевая аминокислота, или пептид, или их производное, может быть выполнено с возможностью введения пациенту, нуждающемуся в подобном, посредством способов топического нанесения, известных специалистам в данной области.

Композиция для топического нанесения, содержащая производное аминокислоты или пептида настоящего изобретения, может быть изготовлена в форме раствора, геля, лосьона, крема, эмульсии типа «масло в воде», эмульсии типа «вода в масле», мази, шампуня, спрея, помады, порошка, маски, подушечек, средства для полоскания или промывания полости рта, вагинального геля или суппозиториев, ректального геля или суппозиториев, уретрального геля или суппозиториев или в другой форме, приемлемой для применения на коже, ногтях, волосах, ротовой слизистой оболочке, вагинальной или анальной слизистой оболочке, в полости рта или на деснах. Концентрация производного аминокислоты или пептида может составлять от около 0 001% до около 99% от общей массы или общего объема композиции.

В другом варианте осуществления композиция может дополнительно содержать дополнительное косметическое, фармацевтическое или другое соединение для достижения синергетических или синергических эффектов в лечении или профилактике заболеваний, расстройств и синдромов, связанных с дерматологическими или косметическими патологическими состояниями или другими расстройствами кожной системы. Чтобы получить комбинированную композицию для топического нанесения, косметическое, фармацевтическое или другое соединение вводят в любую из вышеуказанных композиций посредством растворения соединения в составе или смешивания с ним. Специалисты в данной области легко распознают другие формы композиций для топической доставки N-липоевой аминокислоты, или пептида, или их производного.

Косметические средства

В другом аспекте варианты осуществления настоящего изобретения относятся к новому производному N-липоевой аминокислоты или пептида, используемому в косметической композиции в качестве соединения для замедления старения и/или осветления кожи. Косметические композиции настоящего изобретения, как правило, содержат от около 0,001% до около 99% по массе, и предпочтительно от около 0,01% до около 20%, и наиболее предпочтительно от около 0,1% до около 10% по массе нового производного N-липоевой аминокислоты или пептида в расчете на общую массу косметической композиции и включая все диапазоны, входящие в перечисленные выше. Другие предпочтительные диапазоны включают в себя от около 0,001% до 0,05%; от около 0,001% до 0,5%; от около 0,001% до 1%; и от около 0,001% до 2%.

Упаковка для композиции данного изобретения может быть выполнена в виде патча, бутылки, трубки, шарикового аппликатора, аэрозольного устройства, приводимого в действие пропеллентом, сжимаемого контейнера или контейнера с крышкой.

В любых композициях изобретения композиция может содержать по меньшей мере одно соединение, которое не является производным N-липоевой аминокислоты или пептида. Это соединение может представлять собой, например, одно или более из выбранных из солнцезащитного средства; соединения для лечения угревой сыпи; противомикробного соединения; противовоспалительного соединения; антиоксиданта; хелатирующего соединения; регулятора рН; мягчителя; загущающего соединения; консерванта; эмульгатора; влагоудерживающего вещества; увлажнителя; суспендирующего соединения; оптического осветлителя; стабилизатора; вещества, способствующего проникновению; ароматического вещества; и красящего соединения.

Производные липоевой кислоты

В предпочтительном варианте осуществления новое производное N-липоевой аминокислоты или пептида представляет собой производное липоевой кислоты.

Авторы изобретения разработали различные производные липоевой кислоты, обладающие повышенной стабильностью и антимеланогенным действием. Среди производных N-липоевый глицинамид (L20) показал значительное снижение уровня меланина в здоровых эпидермальных меланоцитах человека и моделях MelanoDerm. Структура L20 представлена ниже:

В нетоксичных дозах L20 полностью блокировал синтез меланина, причем в меланоцитах отсутствовал меланин в измеримых количествах. Действие L20 было протестировано с использованием 3-мерных моделей кожи сокультур MelanoDerm. Наблюдение под микроскопом показало, что L20 ингибировал синтез меланина через 24 ч. В нетоксичных дозах L20 уменьшил содержание меланина в сокультурах кератиноцитов-меланоцитов на 56% в образцах биопсии темнопигментированной кожи. Кроме того, регрессионное исследование на протяжении одной недели выявило обратимый характер ингибирования синтеза меланина. При использовании эквивалентов здоровой дермы (EpiDerm-FT) L20 индуцировал синтез проколлагена в сокультурах фибробластов-кератиноцитов. Таким образом, L20 является перспективным соединением для борьбы с гиперпигментацией кожи и признаками старения, включая тонкие линии и морщины.

Авторы изобретения синтезировали различные производные липоевой кислоты, включая данные N-липоевый глицинамид и N-липоевый цистеинамид

Эти производные липоевой кислоты являются более стабильными, чем липоевая кислота. Поэтому крайне важно использовать нетоксичные дозы для продуктов для ухода за кожей.

Авторы настоящего описания синтез различные новые производные N-липоевой амиинокислоты или пептида, которые являются производными липоевой кислоты, и провели испытания для определения их способности проявлять антимеланогенные, антивозрастные и антиоксидантные свойства.

Предпочтительными производными липоевой аминокислоты являются следующие: N-Lp-Gly-NH₂; N-Lp-Cys-NH₂; N-Lp-Tyr-NH₂; N-Lp-Tyr(OAc)- NH₂; N-Lp-Pro-NH₂; N-Lp-Cys-OH; N-Lp-Cys-OEt; N-Lp-Cys- (SAc)- OEt; и N-Lp-Cys- (SAc)- NH₂.

Предпочтительными производными липоевых дипептидов являются следующие: N-Lp-Gly-Cys-NH₂; N-Lp-Pro-Cys-NH₂; N-Lp-Cys-Gly-NH₂; N-Lp-Tyr-Gly-NH₂; N-Lp-Gly-Tyr-NH₂; N-Lp-Tyr-Cys-NH₂; N-Lp-Tyr-Cys-OEt; N-Lp-Gly-Cys-OH; и N-Lp-Gly-Cys-OEt.

Предпочтительными производными липоевых трипептидов являются следующие:

N-Lp-Gly-Cys-Cys-NH₂; N-Lp-Cys-Cys-Cys-NH₂; N-Lp-Tyr-Cys-Cys-NH₂; N-Lp-Gly-Tyr-Cys-NH₂; и N-Lp-Pro-Cys-Cys-NH₂.

Для дополнительной иллюстрации характера изобретения предложены следующие примеры. Следует понимать, что приведенные ниже примеры не ограничивают изобретение и что объем изобретения определяется прилагаемыми пунктами формулы изобретения.

ПРИМЕРЫ

Пример 1. Измерение толщины кожи с помощью микрометрического штангенциркуля

В исследовании, относящемся к кожным изменениям, связанным со старением, толщина кожи была измерена посредством микрометрического штангенциркуля, как описано ниже.

Кожа была захвачена с помощью металлической петли 2 × 6 см; внутренние поверхности которой были покрыты наждачной тканью для предотвращения проскальзывания, и сжималась вручную до достижения порога дискомфорта пациента. Общая толщина двух слоев цельной кожи, включая толщину обоих крыльев петли, была измерена с помощью микрометрического штангенциркуля. Толщина обоих крыльев петли была вычтена для определения фактической толщины двух цельных слоев кожи. Были проведены трехкратные измерения на участках, обработанных композицией настоящего изобретения, и было использовано среднее значение для расчета толщины кожи.

Пример 2. Измерение толщины кожи с помощью электронного цифрового штангенциркуля

В исследовании, относящемся к кожным изменениям, связанным со старением, толщина кожи была измерена посредством электронного цифрового штангенциркуля, как описано ниже.

Для испытаний были использованы участки кожи диаметром 17 мм, круглые участки были намечены стойкими чернилами. Участки для промежуточного контроля также имели диаметр 17 мм. Участки для испытаний были обработаны композицией настоящего изобретения на участках для испытаний, а контрольные участки были обработаны контрольным веществом. Толщина кожи всех участков была измерена напрямую с помощью электронного цифрового штангенциркуля. В этом случае губки штангенциркуля были раздвинуты на 17 мм, и прижаты с давлением к участкам кожи, а затем сдвинуты до плотного захвата. Затем были считаны показания толщины кожи на экране штангенциркуля. Измерения на всех участках были проведены трехкратно.

Пример 3. Составы

Типичную композицию водного раствора, содержащую соединение N-липоевой аминокислоты или пептида или их производное в соответствии с настоящим изобретением, составляют следующим образом. Все аминокислоты или пептиды, за исключением глицина, имели L-форму.

0,1-1,0 г соединения N-липоевой аминокислоты или пептида или их производного в соответствии с настоящим изобретением растворили в 99,9-99,0 мл раствора, полученного из 40 частей воды, 40 частей этанола и 20 частей пропиленгликоля по объему (далее в документе - WEP442), или 80 частей этанола и 20 частей пропиленгликоля по объему (далее в документе - EP82), Составленный таким образом раствор содержал 0,1%-1% (масс./об.) соединения N-липоевой аминокислоты или пептида или их производного настоящего изобретения в композиции раствора. В аналогичных условиях легко получали композиции растворов, содержащие различные концентрации соединения N-липоевой аминокислоты или пептида или их производного настоящего изобретения.

Раствор или другие композиции, полученные или составленные таким образом, считаются терапевтически эффективными для лечения различных медицинских расстройств, включая расстройства нервной, сосудистой, скелетно-мышечной или кожной систем. Также эти растворы и композиции считаются терапевтически эффективными для лечения воспалительных заболеваний, включая экзему, псориаз и кожные изменения, связанные со старением, включая возрастные пятна, морщины и т. д.

Пример 4. Составы

В качестве примера 0,2 г N-Lp-O-Ac-Y-NH₂ растворили в 99,8 мл EP82. Составленная таким образом композиция раствора с pH 6,7 содержала 0,2% (масс./об.) N-Lp-O-Ac-Y-NH₂.

В аналогичных условиях 0,2 г N-Lp-Y-NH₂ растворили в 99,8 мл EP82. Составленная таким образом композиция раствора с pH 6,7 содержала 0,2% (масс./об.) N-Lp-Y-NH₂.

В аналогичных условиях 0,1 г N-Lp-P-NH₂ растворили в 99,9 мл EP82. Составленная таким образом композиция раствора с pH 6,8 содержала 0,1% (масс./об.) N-Lp-P-NH₂.

В аналогичных условиях 0,2 г N-Lp-G-NH₂ растворили в 99,8 мл WEP442. Составленная таким образом композиция раствора с pH 5,9 содержала 0,2% (масс./об.) N-Lp-G-NH₂.

В аналогичных условиях 0,4 г N-Lp-G-NH₂ растворили в 99,6 мл WEP442. Составленная таким образом композиция раствора с pH 5,6 содержала 0,4% (масс./об.) N-Lp-G-NH₂.

Композиции растворов или другие составы считаются терапевтически эффективными для лечения угревой сыпи и кожных изменений, связанных со старением, включая морщины, возрастные пятна, и для осветления кожи.

Пример 5

Типичная безводная композиция в форме раствора, содержащая N-липоевую аминокислоту или пептид, была составлена следующим образом:

200 мг N-Lp-Tyr-NH2 растворили в 100 мл раствора, полученного из 30 частей пропиленгликоля, 40 частей этанола и 30 частей олеиллактата по объему (далее в документе - PAO343).

Составленная таким образом композиция содержала 0,2% N-Lp-Tyr-N₂ в PAO343.

В тех же условиях, что и в (A), были составлены безводные композиции следующих производных N-липоевой аминокислоты.

N-Lp-Tyr(OAc)- NH₂ 0,2% в PAO343.

N-Lp-Pro-NH₂ 0,2% в PAO343.

N-Lp-Gly-NH2 0,2% в PAO343.

Lp-Cys-OEt 0,2% в PAO343.

Пример 6

Другая безводная композиция в форме раствора, содержащая N-липоевую аминокислоту или пептид, была составлена следующим образом:

200 мг N-Lp-Tyr-NH₂ растворили в 100 мл раствора, полученного из 30 частей пропиленгликоля и 70 частей этанола по объему (далее в документе - EP73).

Составленная таким образом композиция содержала 0,2% N-Lp-Tyr-N₂ в EP73.

В тех же условиях, что и в (B), были составлены безводные композиции следующих производных N-липоевой аминокислоты.

Lp-Cys-OEt 0,2% в EP73.

Lp-Cys-OH 0,2% в EP73.

Пример 7

Другая безводная композиция в форме крема, содержащая N-липоевую аминокислоту или пептид, была составлена следующим образом:

200 мг N-Lp-Pro-NH₂ растворили в 20 мл пропиленгликоля и, полученный таким образом раствор, смешали с 80 г расплавленной смеси, полученной из 20 частей пропиленгликоля, 30 частей олеиллактата, 5 частей пчелиного воска, 5 частей глицерилмоностеарата, 5 частей стеарата ПЭГ-40, 35 частей масла ши по массе.

Составленная таким образом композиция в форме крема содержала 0,2% N-Lp-Pro-N₂ в безводном креме.

В тех же условиях была легко составлена композиция, содержащая 0,2% Lp-Cys-OEt в безводном креме.

Указанные выше композиции, подобные составленным в примерах 4-7, считаются терапевтически эффективными для осветления кожи и топического лечения воспалительных расстройств и возрастных изменений кожи, включая экзему, псориаз, возрастные пятна, тонкие линии, морщины и т. д.

Пример 8. Составы

Композиции растворов или другие составы считаются терапевтически эффективными для лечения воспалительных заболеваний, включая экзему, псориаз, угревую сыпь и кожных изменений, связанных со старением, включая морщины, возрастные пятна, и для осветления кожи.

Пример 9. L20 ингибирует синтез меланина и индуцирует синтез проколлагена

L20 ингибирует синтез меланина в здоровых эпидермальных меланоцитах новорожденного человека до уровней ниже порога обнаружения

L20 представляет собой глицинамидное производное липоевой кислоты, и его в различных дозах использовали для обработки в течение 48 ч здоровых эпидермальных меланоцитов человека. Выяснилось, что дозы выше 0,05% L20 имеют умеренную токсичность (Фиг. 1a). Авторы изобретения определили способность L20 ингибировать синтез меланина в культурах меланоцитов. L20 был использован в нетоксичной дозе 0,001% в течение 7 дней (Фиг. 1b), обработку им проводили каждый день подряд. Через неделю обработки меланин был экстрагирован и определен количественно с использованием стандартной калибровочной кривой для меланина. В здоровых меланоцитах, обработанных L20, отсутствовал меланин в обнаружимых количествах по сравнению с необработанным контрольным образцом и контрольным образцом, обработанным ДМСО (Фиг. 1c).

L20 значительно ингибирует синтез меланина в 3-мерных моделях эквивалентов кожи MelanoDerm

MelanoDerm представляют собой модели сокультур кератиноцитов и меланоцитов, и они были использованы в испытаниях для определения антимеланогенных свойств L20. Модели MelanoDerm были получены от здорового взрослого человека с темнопигментированной кожей. Эти ткани обрабатывали разными дозами L20 каждый день подряд в течение двух недель. Один набор культур был использован для регрессионного исследования, причем L20 был удален из него спустя неделю обработки. После двух недель обработки ткани были исследованы для определения содержания меланина и жизнеспособности клеток (Фиг. 2a). Визуальная оценка показала значительный эффект осветления кожи для моделей MelanoDerm, обработанных L20, при 0,5% и 1% (Фиг. 2b). Содержание меланина было проанализировано с использованием стандартной калибровочной кривой для меланина. По сравнению с контрольным веществом используемый отдельно L20 при 1% снижал содержание меланина на 60%, при 0,5% - на 56%, а при 0,1% - на 44%. Наблюдалось дозозависимое снижение количества меланина при различных дозах L20 (Фиг. 2b-d). В качестве положительного контроля использовали койевую кислоту, что привело к снижению содержания меланина на 27%. Кроме того, провели регрессионное исследование L20 в группе использования L20 в дозе 0,5%, которое показало, что удаление L20 привело к восстановлению меланоцитов и возобновлению синтеза меланина (Фиг. 2b-d). Эти исследования показывают, что L20 при 0,5% является нетоксичным и значительно снижает содержание меланина. Наблюдение под микроскопом показало, что L20 снизил содержание меланина через 24 ч после первичной обработки. Совместно эти исследования показывают, что в моделях MelanoDerm, которые имеют тонкий роговой слой, доз 0,5% было достаточно для ингибирования синтеза меланина, и это ингибирование является обратимым.

L20 индуцирует синтез проколлагена в человеческой модели EpiDerm и усиливает свойства, замедляющие старение

Дермальный фибробласт играет важную роль в старении кожи под воздействием ультрафиолетового излучения и гомеостазе кожи. Используя дермальные фибропласты, авторы изобретения определили, имеет ли L20 какие-либо свойства, замедляющие старение. В исследовании была использована ткань EpiDerm-FT здорового человека. Epiderm-FT состоит из полностью дифференцированных эпидермальных и дермальных слоев кожи. Она также имеет 10-15 слоев клеток рогового слоя, а также базальный, шиповатый и зернистый слои. К тканям применили контроль растворителем и обработку L20 (1%) в течение 48 ч. Эти ткани были использованы для измерения экспрессии проколлагена с использованием анализа твердофазного ИФА. Уровни проколлагена были приведены к общему объему белка.

L20 был получен в виде 1%-го раствора в носителе WEP, состоящем из воды, этанола и пропиленгликоля при естественном уровне pH. Материал для испытаний и носитель (WEP) наносили на модель культуры ткани, состоящую из воссозданного эпидермиса человека (RHE, EpiDermFT™), 3-мерную модель высокодифференцированной ткани, состоящую из здоровых эпидермальных кератиноцитов человеческого происхождения (NHEK) и дермальных фибробластов человека, выращенных на специально приготовленных вставках для культивирования тканей. Ткани обрабатывали 25 мкл L20 (1%) или носителя и хранили в течение 48 часов. Образцы ткани были расщеплены при помощи буферного раствора для лизирования клеток, и были определены уровни экспрессии белка проколлагена. Проколлаген был определен количественно с использованием стандартного метода твердофазного ИФА (Takara Bio inc.). Как видно на Фиг. 3, L20 в дозе 1% значительно повысил выработку проколлагена в сравнении с контролем растворителем, p < 0,02.

МАТЕРИАЛЫ И СПОСОБЫ

Клеточная культура. Здоровые меланоциты эпидермиса человека (Lonza, г. Уолкерсвилл, штат Мэриленд, США) были выращены в специальной среде для меланоцитов MGM4 с добавками (Lonza, г. Уолкерсвилл, штат Мэриленд, США). Клетки высевали и обрабатывали различными дозами L20 в течение 48 ч. Сначала L20 растворили в ДМСО (100%) и выполнили серийное разбавление в среде. Маточная смесь была разбавлена в 1000 раз для получения менее 0,001% ДМСО в конечном растворе. Были сделаны микроскопические снимки с использованием 10-кратного увеличения. Здоровые дермальные фибробласты человека (Lonza, г. Уолкерсвилл, штат Мэриленд, США) были выращены в специальной ростовой среде для фибробластов (Lonza, г. Уолкерсвилл, штат Мэриленд, США). Был проведен анализ токсичности L20 в различных дозах, и было выявлено, что дозы 0,001% и ниже являются нетоксичными. Для проверки жизнеспособности клеток был использован набор для анализа пролиферации клеток Cell Titer 96® Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay и было колориметрически измерено поглощение при 490 нм с помощью считывающего устройства для микропланшетов Tecan.

Анализ снижения количества меланина . Здоровые эпидермальные меланоциты человека обрабатывали контрольным веществом или L20 в течение 7 дней, при этом L20 заменяли каждый день подряд. Клетки были собраны на 7-й день и выдержаны в реагенте Solvable (Perkin Elmer, г. Акрон, штат Огайо, США) в течение ночи при 65 градусах. Стандартные образцы меланина (Sigma, г. Сент-Луис, штат Миссури, США) были приготовлены в реагенте Solvable и обработаны аналогично их исследуемым образцам параллельно с этим. Затем содержание меланина было определено количественно и колориметрически с помощью считывающего устройства для микропланшетов Tecan при 490 нм.

Исследование MelanoDerm. Исследование тканей MelanoDerm было проведено в соответствии с инструкциями компании-производителя (Mattek, г. Ашленд, штат Массачусетс, США). Ткани MelanoDerm были получены из темнопигментированного типа кожи. Ткани стабилизировали в течение 24 ч, а затем обрабатывали различными дозами L20 (25 мкл) в носителе, модифицированном WEP. Ткани MelanoDerm обрабатывали в течение 2 недель каждый день подряд. Были сделаны микроскопические снимки через день. Через две недели обработки был проведен анализ MTT с использованием набора Cell Titer 96® Aqueous One Solution и определено содержание меланина, как упомянуто в протоколе.

Исследование эпидермиса. Для исследования была использована ткань Epiderm-FT (Mattek, г. Ашленд, штат Массачусетс, США), полученная из крайней плоти в неонатальный период развития. Ткани обрабатывали L20 при 1% (100 мкл) и выдерживали в течение 48 ч. Ткани были измельчены при помощи ножниц и обработаны буферным раствором для лизирования клеток с ингибиторами протеаза. Был определен уровень проколлагена в клеточном лизате с использованием твердофазного ИФА (Такара, Сига, Япония) в соответствии с инструкциями и приведен к общему объему белка.

Специалистам в данной области следует понимать, что в варианты осуществления, описанные выше, можно вносить изменения без отступления от общей концепции, обладающей признаками изобретения, представленного в настоящем документе. Таким образом, следует понимать, что данное изобретение не ограничено конкретными описанными вариантами осуществления, но предполагается, что оно охватывает модификации в пределах сущности и объема настоящего изобретения, определяемого прилагаемой формулой изобретения.

Изобретение относится к способу лечения дерматологического расстройства, выбранного из группы, состоящей из тонких линий, морщин, возрастных пятен. Способ включает топическое введение пациенту композиции, содержащей терапевтически эффективное количество соединения, включающего производное N-липоевой аминокислоты или пептида, имеющее следующую формулу (I): N-липоевая кислота-(X)_n-Z-R₁ Формула (I). Липоевая представляет собой липоевый (Lp) радикал, (X)_n представляет собой пептид, имеющий n аминокислотных остатков, причем каждый из аминокислотных остатков X независимо выбран из любой аминокислоты, n представляет собой целое число, относящееся к диапазону 0-2, Z представляет собой карбоксиконцевой аминокислотный остаток, причем каждый из аминокислотных остатков независимо выбран из любой аминокислоты, R₁ представляет собой NHR₃, R₃ представляет собой H. Также предложены применение терапевтической композиции, содержащей соединение формулы (I), и применение соединения формулы (I). Технический результат предложенного способа заключается в применении стабильных производных липоевой кислоты для лечения дерматологического расстройства. 3 н. и 4 з.п. ф-лы, 8 ил., 9 пр.

1. Способ лечения дерматологического расстройства, выбранного из группы, состоящей из тонких линий, морщин, возрастных пятен, который включает топическое введение пациенту композиции, содержащей терапевтически эффективное количество соединения, включающего производное N-липоевой аминокислоты или пептида, имеющее следующую формулу (I):

N-липоевая кислота-(X)_n-Z-R₁ Формула (I),

причем липоевая представляет собой липоевый (Lp) радикал;

(X)_n представляет собой пептид, имеющий n аминокислотных остатков;

причем каждый из аминокислотных остатков X независимо выбран из любой аминокислоты;

n представляет собой целое число, относящееся к диапазону 0-2;

Z представляет собой карбоксиконцевой аминокислотный остаток, причем каждый из аминокислотных остатков независимо выбран из любой аминокислоты;

R₁ представляет собой NHR₃;

R₃ представляет собой H.

2. Способ по п.1, в котором соединение выбрано из группы, состоящей из: N-Lp-Gly-NH₂; N-Lp-Cys-NH₂; N-Lp-Tyr-NH₂; N-Lp-Tyr(OAc)-NH₂; N-Lp-Pro-NH₂; N-Lp-Cys-(SAc)-NH₂; N-Lp-Gly-Cys-NH₂; N-Lp-Pro-Cys-NH₂; N-Lp-Cys-Gly-NH₂; N-Lp-Tyr-Gly-NH₂; N-Lp-Gly-Tyr-NH₂; N-Lp-Tyr-Cys-NH₂; N-Lp-Gly-Cys-Cys-NH₂; N-Lp-Cys-Cys-Cys-NH₂; N-Lp-Tyr-Cys-Cys-NH₂; N-Lp-Gly-Tyr-Cys-NH₂; и N-Lp-Pro-Cys-Cys-NH₂.

3. Способ по п.1, в котором соединение представляет собой N-Lp-Gly-NH₂.

4. Применение терапевтической композиции, содержащей соединение, включающее производное N-липоевой аминокислоты или пептида, имеющее следующую формулу (I):

N-липоевая кислота-(X)_n-Z-R₁ Формула (I),

причем липоевая представляет собой липоевый (Lp) радикал;

(X)_n представляет собой пептид, имеющий n аминокислотных остатков;

причем каждый из аминокислотных остатков X независимо выбран из любой аминокислоты;

n представляет собой целое число, относящееся к диапазону 0-2;

Z представляет собой карбоксиконцевой аминокислотный остаток, причем каждый из аминокислотных остатков независимо выбран из любой аминокислоты;

R₁ представляет собой NHR₃;

R₃ представляет собой H, для лечения дерматологического расстройства, выбранного из группы, состоящей из тонких линий, морщин, возрастных пятен.

5. Применение по п.4, в котором соединение представляет собой N-Lp-Gly-NH₂.

6. Применение соединения, включающего производное N-липоевой аминокислоты или пептида, имеющее следующую формулу (I):

N-липоевая кислота-(X)_n-Z-R₁ Формула (I),

причем липоевая представляет собой липоевый (Lp) радикал;

(X)_n представляет собой пептид, имеющий n аминокислотных остатков;

причем каждый из аминокислотных остатков X независимо выбран из любой аминокислоты;

n представляет собой целое число, относящееся к диапазону 0-2;

Z представляет собой карбоксиконцевой аминокислотный остаток, причем каждый из аминокислотных остатков независимо выбран из любой аминокислоты;

R₁ представляет собой NHR₃;

R₃ представляет собой H,

в получении лекарственного средства, предназначенного для лечения дерматологического расстройства, выбранного из группы, состоящей из тонких линий, морщин, возрастных пятен.

7. Применение по п.6, в котором соединение представляет собой N-Lp-Gly-NH₂.