СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СТАДИИ ХРОНИЗАЦИИ ГЕПАТИТА Российский патент 2007 года по МПК G01N33/68 

Изобретение относится к области медицины, гепатологии и может быть использовано для диагностики стадии хронизации гепатита.

Известен способ диагностики стадии хронизации гепатита по гистологическому признаку (V.Desmet et al, 1994), [11] при котором определяют характер выраженности фиброзных изменений, а этим самым оценивают стадию хронизации процесса.

Известный способ является инвазивным - с помощью пункционной биопсии печени осуществляют забор биологического материала и далее проводят его гистологическое исследование с подсчетом индекса активности (ИГА) и гистологического индекса фиброза (ГИФ).)

Однако стадия хронизации гепатита отражает временное его течение и характеризуется степенью фиброза печени вплоть до развития цирроза. Цирроз печени рассматривается как необратимая стадия хронического гепатита.

Новый технический результат заключается в повышении точности и информативности при снижении числа осложнений.

Поставленную задачу решают новым способом диагностики стадии хронизации гепатита в печени, заключающимся в исследовании пациента, причем исследуют сыворотку крови с определением активности коллагеназы, ингибитора коллагеназы, протеазного ингибитора, содержание свободного оксипролина и белковосвязанного оксипролина и при увеличении активности коллагеназы до 2,2±0,2 мкмоль/л·ч, снижении активности протеазного ингибитора до 19,2±0,5 ИЕ/мл и ниже, активности ингибитора коллагеназы до 2,1±0,2 ИЕ/мл и ниже, нарастании содержания свободного оксипролина до 1,2±0,02 ИЕ/мл, а белковосвязанного оксипролина до 11,7±0,7 ИЕ/мл диагностируют I стадию хронизации, при повышении активности коллагеназы до 3,52±0,06 мкмоль/л·ч, повышении содержания свободного оксипролина до 1,45±0,02, при прежнем уровне активности ингибитора коллагеназы и активности ингибитора протеазы, содержания белковосвязанного оксипролина диагностируют II стадию хронизации, при увеличении активности коллагеназы до 3,5±0,06 мкмоль/л·ч, снижении активности протеазного ингибитора до 10,6±0,1 ИЕ/мл, повышении содержания свободного оксипролина до 1,52±0,01 ИЕ/мл, диагностируют III стадию хронизации, при увеличении активности коллагеназы до 4,06±0,02 мкмоль/л·ч, снижении активности протеазного ингибитора до 9,0±0,28 ИЕ/мл и ниже, а ингибитора коллагеназы до 1,4±0,1 ИЕ/мл, повышении содержания белковосвязанного оксипролина до 12,75±0,1 ИЕ/мл диагностируют IV стадию хронизации.

Способ осуществляют следующим способом.

В сыворотке крови больного определяют активность коллагеназы, ингибитора коллагеназы, протеазного ингибитора, содержание свободного оксипролина и белковосвязанного оксипролина и при увеличении активности коллагеназы до 2,2±0,2 мкмоль/л·ч, снижении активности протеазного ингибитора до 19,2±0,5 ИЕ/мл и ниже, ингибитора коллагеназы до 2,1±0,2 ИЕ/мл и ниже, нарастании содержания свободного оксипролина до 1,2±0,02 ИЕ/мл, а белковосвязанного оксипролина до 11,7±0,7 ИЕ/мл диагностируют I стадию хронизации, при повышении активности коллагеназы до 3,52±0,06 мкмоль/л·ч, повышении содержания свободного оксипролина до 1,45±0,02 диагностировали II стадию хронизации, при увеличении активности коллагеназы до 3,5±0,06 мкмоль/л·ч, снижении активности ингибитора протеазного до 10,6±0,1 ИЕ/мл, повышении содержания оксипролина свободного до 1,52±0,01 ИЕ/мл диагностируют III стадию хронизации, при увеличении активности коллагеназы до 4,06±0,02 мкмоль/л·ч, снижении активности ингибитора протеазного до 9,0±0,28 ИЕ/мл и ниже, а активности ингибитора коллагеназы до 1,4±0,1 ИЕ/мл, повышении содержания оксипролина белковосвязанного до 12,75±0,1 ИЕ/мл диагностируют IV стадию хронизации.

Предлагаемые критерии подобраны на основании анализа данных клинических исследований 60 больных хроническим гепатитом различной стадии хронизации процесса в печени, которым были проведены гистологические исследования биоптатов печени и определение биохимических показателей в сыворотке крови согласно предлагаемому способу.

Так, у тех пациентов, где фиброз отсутствовал полностью активность коллагеназы в сыворотке крови была не выше 12,7±0,04 мкмоль/л·ч, активность протеазного ингибитора была не ниже 26,4±0,5 ИЕ/мл, ингибитора коллагеназы была не ниже 3,86±0,01 ИЕ/мл, содержание свободного оксипролина было не выше 0,6±0,02 ИЕ/мл, а белковосвязанного не выше 6,7±0,01 ИЕ/мл.

У больных с I стадией фиброза нарастала активность коллагеназы - 2,2±0,2 мкмоль/л·ч, снижалась активность протеазного ингибитора ниже 19,2±0,5 ИЕ/мл, ингибитора коллагеназы снижалась ниже 2,1±0,2 ИЕ/мл, нарастало содержание оксипролина свободного до 1,2±0,02 ИЕ/мл и белковосвязанного оксипролина до 11,7±0,7 ИЕ/мл.

Во II фазе фиброза активность коллагеназы повышалась до 3,52±0,06 мкмоль/л·ч повышалось содержание оксипролина свободного до 1,45±0,02. Остальные показатели не изменялись.

В III стадии фиброза активность коллагеназы нарастала до 3,5±0,06 мкмоль/л·ч, снижалась активность ингибитора протеазного до 10,6±0,1 ИЕ/мл, повышалось содержание оксипролина свободного до 1,52±0,01 ИЕ/мл. Остальные показатели не изменялись.

При IV стадии хронизации (цирроз) активность коллагеназы нарастала до 4,06±0,02 мкмоль/л·ч, снижалась активность ингибитора протеазного до 9,0±0,28 ИЕ/мл и ниже, активность ингибитора коллагеназы снижалась до 1,4±0,1 ИЕ/мл, повышалось содержание оксипролина белковосвязанного до 12,75±0,1 ИЕ/мл. Остальные показатели оставались прежними.

Видимо выявленная корреляция обусловлена следующим: биодеградация коллагенов, осуществляемая специфической протеазой-коллагеназой [4, 6, 7], может рассматриваться как активация системы коллагенолиза в ответ на усиление синтеза коллагена [3]. В то же время снижается активность ингибиторного звена - снижается активность протеазного ингибитора и ингибитора коллагеназы [1]. Деградация коллагенов ведет к повышению содержания оксипролина и его фракций - свободного оксипролина и белковосвязанного оксипролина [10].

По данным пункционной биопсии печени, доказывающей наличие определенной стадии фиброза соотетственно стадии хронизации процесса и параллельно проведенного биохимического исследования крови на активность коллагеназы [8], ингибиторов коллагеназы и протеазного ингибитора [5], а также определения содержания оксипролина - его фракций свободного оксипролина и белковосвязанного оксипролина [2] можно судить о существующих сдвигах биохимических показателей крови, связанных с нарастанием стадии фиброза.

При I стадии фиброза достоверно нарастала (почти в 2 раза - 2,2±0,04) активность коллагеназы, снижалась активность ингибитора коллагеназы (р<0,05) (почти в 2 раза - 2,0±0,2) и в 1,5 раза снижалась активность протеазного ингибитора (19,2±0,5), нарастало в 2 раза содержание оксипролина свободного и белковосвязанного (р<0,05), соответственно 1,2±0,02 и 11,7±0,7 ИЕ/мл.

Во II стадии фиброза активность коллагеназы нарастает (в 3 раза - 3,2±0,06), повышается содержание оксипролина свободного (р<0,05) - более чем в 2 раза - 1,45±0,02 ИЕ/мл.

В III стадии фиброза нарастает активность коллагеназы (3,5±0,06), снижается активность протеазного ингибитора 10,6±0,19 (почти в 2 раза в сравнении с I стадией), повышается содержание свободного оксипролина в 2 раза - 1,52±0,01 (р<0,05) ИЕ/мл.

Пример 1. Больной 39 лет, диагноз хронический гепатит вирусной этиологии, тип В, I стадия фиброза, умеренной стадии активности, HBcor AgIgG+, HBsAG+, повышение тран-саминаз - в 2 раза, печень была увеличена на 1,5 см ниже реберной дуги, безболезненна, мягкая, положительная ПЦР к ДНК HBV. При биохимическом исследовании крови нарушений белковосинтетической функции печени не отмечалось, протромбиновый индекс был - 90. Проведено исследование согласно предлагаемому способу. При биохимическом исследовании крови активность коллагеназы была 3,2 мкмоль/л·ч, протеазного ингибитора - 19,0 ИЕ/мл, активность ингибитора коллагеназы была снижена до 2,08, нарастает содержание оксипролина свободного до 1,25 ИЕ/мл, белковосвязанного оксипролина до 10,0 ИЕ/мл. Полученные данные позволили поставить диагноз хронический гепатит I стадии хронизации (I стадия фиброза).

При последующем гистологическом исследовании печени диагноз подтвержден.

Пример 2. Больной 32 года, диагноз хронический гепатит вирусной этиологии, тип С, в фазе репликации (положительная ПЦР к РНК HCV), II стадия фиброза. При биохимическом исследовании крови трансаминазы были в норме, нормальным было содержание альбумина и протромбинового индекса, активность коллагеназы повышалась до 3,58 мкмоль/л·ч, содержание оксипролина свободного повышалось до 1,43 ИЕ/мл. Был поставлен диагноз: хронический гепатит, II стадия хронизации.

При гистологическом исследовании печени диагноз был подтвержден.

Пример 3. Больной, 36 лет, диагноз хронический гепатит вирусной этиологии, тип С, в фазе репликации вирусной инфекции, минимальной степени активности, III стадия фиброза. Больной жалоб не предъявлял, печень пальпировалась на 1 см ниже реберной дуги, безболезненная, плотновата. Отмечались периферические печеночные знаки в виде единичные телеангиоэктазий. При биохимическом исследовании крови трансаминазы были повышены незначительно, не превышали более чем в 1,5 раза, содержание альбумина было в пределах номы - 38 г/л, величина протромбинового индекса был равна 85. Согласно данным дополнительно проведенного исследования согласно предлагаемому способу - нарастала активность коллагеназы до 3,56 мкмоль/л·ч, протеазного ингибитора снижалась до 11,6 ИЕ/мл, содержание оксипролина свободного повышалось до 1,51 ИЕ/мл: диагностирован хронический гепатит III стадии фиброза, который подтвердился данными пункционной биопсии печени

Пример 4. Больной В., 49 лет, диагноз цирроз печени вирусной этиологии, минимальной стадии активности. При биохимическом исследовании трансаминазы были в пределах нормы, концентрация билирубина была 20 мг/%, из них прямой - 12, непрямой - 8, альбумины были 35 г/л, протромбиновый индекс - 82, дополнительно было проведено исследование согласно предлагаемому способу - активность коллагеназы выросла до 4,04 мкмоль/л·ч, активность протеазного ингибитора снизилась до 8,72 ИЕ/мл, ингибитора коллагеназы снизилась до 1,5 ИЕ/мл, содержание оксипролина белковосвязанного повышалось до 12,74 ИЕ/мл, диагноз - IV стадия фиброза, цирроз печени был подтвержден данными пункционной биопсии печени.

Таким образом, с помощью предлагаемого способа можно с высокой точностью и информативностью диагностировать стадию хронизацию процесса в печени у больных гепатитом, избегая использования инвазивного способа, связанного с проведением биопсии печени, что на некоторых стадиях заболевания противопоказано, так как может вызвать кровотечение.

Литература

1. Зорин Н.А. Изучение реакций между ингибиторами протеиназ плазмы крови и коллагеназы / Н.А.Зорин, С.Г.Жабин, И.Р.Козлова // Вопросы медицинской химии. - 1993. - Т.41, №6. - С.53.

2. Кузнецова Т.П., Прошина Л.Я., Приваленко Л.И. Модификация определения содержания оксипролина в сыворотке крови // Лабораторное дело. - 1982. - №8. - С.8-10.

3. Логвинов А.С., Блок Ю.Е. Хронические гепатиты и циррозы печени. - М.: Медицина, 1987.

4. Маскевичус З.К. Механизмы и роль биодеградации коллагена в патологии / З.К.Маскевичус // Архив патологии. - 1987. - Т.49, №6. - С.3-9.

5. Нартикова В.Ф., Пасхина Т.С. Унифицированный метод определения активности α₁ антитрипсина и α₂ макроглобулина в сыворотке крови (плазме) крови человека // Вопросы медицинской химии. - 1979. - Т.25, №4. - С.494-499.

6. Серов В.В. Соединительная ткань / В.В.Серов, А.Б.Шехтер. - М.: Наука, 1981. - 456 с.

7. Слуцкий Л.И. Биохимия нормальных и патологических изменений соединительной ткани / Л.И.Слуцкий. - М.: Наука, 1969. - 345 с.

8. Шараев П.Н., Пишков В.Н., Зворыгина Н.Г. Определение коллагенолитической активности плазмы крови // Лабораторное дело. - 1987. - №1, - С.60-62.

9. Шараев И.Н. Метод определения свободного и связанного оксипролина в сыворотке крови // Лабораторное дело. - 1981. - №5. - С.283-285.

10. Юрканец Е.А. Влияние коллагеназы на нервно-мышечную передачу лягушек / Е.А. Юрканец // Физиологический журнал СССР им.Сеченова. - 1987. - Т.73, 34. - С.488-491.

11. Desmet V., Gerber M., Hoffnagle H. et al. Классификация хронического гепатита, диагностика, определение степени тяжести и тяжести течения // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. - 1995. - №2. - С.38-45.

Таблица 1
Стадии заболевания хронического гепатита по гистологическим признакам - степени фиброза (гистологический индекс (ГИ фиброза))ГИСтепень фиброзаМорфологические признаки0отсутствуетотсутствует1слабыйфиброз и расширение портальных трактов2умеренныйперипортальный фиброз3тяжелыйпортоцентральные септы4циррозцирроз

Изобретение относится к области медицины, гепатологии. Способ осуществляют следующим образом: в сыворотке крови определяют активности коллагеназы, ингибитора коллагеназы, протеазного ингибитора, содержание свободного оксипролина и белковосвязанного оксипролина и при увеличении активности коллагеназы до 2,2±0,2 мкмоль/л·ч, снижении активности протеазного ингибитора до 19,2±0,5 ИЕ/мл и ниже, активности ингибитора коллагеназы до 2,1±0,2 ИЕ/мл и ниже, нарастании содержания свободного оксипролина до 1,2±0,02 ИЕ/мл, а белковосвязанного оксипролина до 11,7±0,7 ИЕ/мл диагностируют I стадию хронизации, при повышении активности коллагеназы до 3,52±10,06 мкмоль/л·ч, повышении содержания свободного оксипролина до 1,45±0,02, при прежнем уровне активности ингибитора коллагеназы и активности ингибитора протеазы содержания белковосвязанного оксипролина диагностируют II стадию хронизации, при увеличении активности коллагеназы до 3,5±0,06 мкмоль/л·ч, снижении активности протеазного ингибитора до 10,6±0,1 ИЕ/мл, повышении содержания свободного оксипролина до 1,524±0,01 ИЕ/мл, диагностируют III стадию хронизации, при увеличении активности коллагеназы до 4,06±0,02 мкмоль/л·ч, снижении активности протеазного ингибитора до 9,0±0,28 ИЕ/мл и ниже, а ингибитора коллагеназы до 1,4±0,1 ИЕ/мл, повышении содержания белковосвязанного оксипролина до 12,75±0,1 ИЕ/мл диагностируют IV стадию хронизации. Изобретение обеспечивает повышение точности и информативности способа. 1 табл.

Способ диагностики стадии хронизации гепатита в печени, заключающийся в исследовании пациента, отличающийся тем, что исследуют сыворотку крови с определением активности коллагеназы, ингибитора коллагеназы, протеазного ингибитора, содержания свободного оксипролина и белковосвязанного оксипролина и при увеличении активности коллагеназы до (2,2±0,2) мкмоль/л·ч, снижении активности протеазного ингибитора до (19,2±0,5) ИЕ/мл и ниже, активности ингибитора коллагеназы до (2,1±0,2) ИЕ/мл и ниже, нарастании содержания свободного оксипролина до (1,2±0,02) ИЕ/мл, а белковосвязанного оксипролина до (11,7±0,7) ИЕ/мл диагностируют I стадию хронизации, при повышении активности коллагеназы до (3,52±0,06) мкмоль/л·ч, повышении содержания свободного оксипролина до (1,45±0,02) ИЕ/мл при прежнем уровне активности ингибитора коллагеназы и активности ингибитора протеазы, содержания белковосвязанного оксипролина диагностируют II стадию хронизации, при увеличении активности коллагеназы до (3,5±0,06) мкмоль/л·ч, снижении активности протеазного ингибитора до (10,6±0,1) ИЕ/мл, повышении содержания свободного оксипролина до (1,52±0,01) ИЕ/мл диагностируют III стадию хронизации, при увеличении активности коллагеназы до (4,06±0,02) мкмоль/л·ч, снижении активности протеазного ингибитора до (9,0±0,28) ИЕ/мл и ниже, а ингибитора коллагеназы до (1,4±0,1) ИЕ/мл, повышении содержания белковосвязанного оксипролина до (12,75±0,1) ИЕ/мл диагностируют IV стадию хронизации.