СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЦИРРОЗА ПЕЧЕНИ Российский патент 2007 года по МПК G01N33/68 

Изобретение относится к области медицины, гепатологии и может быть использовано для диагностики цирроза печени.

Известен способ диагностики цирроза печени по данным пункционной биопсии печени, где V.Desmetit et al (1994) определяют стадию хронизации и оценивают степень выраженности фиброза в гистологических препаратах [6]. В.В.Серовым и Л.О.Северюгиной (1996) для оценки выраженности фиброза предложен гистологический индекс стадий хронизации процесса, где авторы на гистологических препаратах печени предлагают учитывать не только наличие признаков портального и септального фиброза, но и «синусоидального» (перегепатоцеллюлярного) фиброза. Использование известного способа диагностики стадий хронизации процесса дает хорошие результаты при исследовании достаточного объема печеночной ткани. Однако пункционная биопсия печени с нарастанием фиброза затруднительна особенно при уже развившемся циррозе печени. Надо учитывать инвазивность метода пункционной биопсии и невозможность его выполнения из-за опасности возможных осложнений (нарушений свертывания крови с последующим кровотечением при циррозе печени). Возникают сложности процедуры из-за отказа больного в виде инвазивности метода. Необходимо учитывать нередко возможные сложности в диагностике цирроза, так как печень не всегда увеличена, а наоборот, уменьшена в размерах, тем более что клинических признаков цирроза печени практически нет, особенно в стадии компенсации процесса.

Наиболее близким к предлагаемому является способ диагностики цирроза печени путем определения относительного содержания фракций лизофосфатидилхолина (ЛФХ), относительного содержания сфингомиелина (СМ), фосфатидилхолина фосфолипидного спектра крови и расчета коэффициента, определяемого по формуле ФХ²/CM×ЛФХ, где ФХ - относительное содержание фосфатидилхолина, CM - относительное содержание сфингомиелина, ЛФХ - относительное лизофосфатидилхолина, и при его значениях: 20-35 диагностируется хронический вирусный гепатит, в том числе и у носителей HB_sAg, 36-45 - хронический вирусный гепатит у лиц, злоупотребляющих алкоголем, 50-96 диагностируют цирроз [5].

Однако данный способ неточен, так как исследования фосфолипидного спектра проводятся в крови, в то время как первичные и наиболее выраженные изменения липидного обмена происходят в гепатоцитах печени, а уровень перекисного окисления липидов зависит от состояния антиоксидантной системы [1]. Указанный метод сомнителен, так как не решает вопросы по существу проблемы, а проводится путем относительного определения фракций фосфолипидного спектра крови и не сопровождаются параллельным изучением морфологического состояния печени. Поэтому указанные диагнозы в данном способе выглядят мало достоверными. Наконец, данный способ далек от диагностики сывороточных маркеров фиброза, в качестве последних применяются компоненты внеклеточного матрикса, участвующие в процессе печеного фибриногенеза, в частности, дисбаланс коллагеназы и ее ингибиторов, а также тканевых ингибиторов протеаз.

Новая техническая задача - повышение точности и информативности способа, расширение области его применения.

Поставленную задачу решают новым способом диагностики цирроза печени, заключающимся в обследовании пациента с проведением биохимического исследования крови, причем в сыворотке крови определяют активность коллагеназы, активность ингибитора коллагеназы и протеазы, и при увеличении активности коллагеназы до 4 мкмоль/(л·ч) и выше, снижении активности ингибитора коллагеназы до 1,9 ИЕ/мл и ниже и снижении активности протеазного ингибитора до 9 ИЕ/мл и ниже диагностируют цирроз печени.

Способ осуществляют следующим образом

В сыворотке крови пациента определяют активности коллагеназы, ингибитора коллагеназы и протеазы и при увеличении активности коллагеназы до 4 мкмоль/(л·ч) и выше, снижении активности ингибитора коллагеназы до 1,9 ИЕ/мл и ниже и снижении активности протеазного ингибитора до 9 ИЕ/мл и ниже диагностируют цирроз печени.

Предлагаемые критерии подобраны на основании анализа данных обследования 60 больных хроническим гепатитов различных стадий хронизации и 20 больных циррозом печени. Этиология заболевания - вирусная (вирус С, В, В+С). Всем больным проводились общие клинические методы обследования и пункционная печени по Менгини с получением биоптата с последующим морфологическим исследованием и определением гистологического индекса активности и индекса стадии хронизации (индекса фиброза) и одновременно определяли активность в сыворотке крови коллагензы [2], активности ингибиторов коллагеназы и протеазного ингибитора [3].

В группе больных с отсутствием фиброза активность коллагеназы в сыворотке крови была не выше 1,87 мкмоль/л·ч, у больных циррозом печени - 4 мкмоль/л·ч и выше, что позволяло рассматривать нарастание активности коллагеназы как активацию системы коллагенолиза в ответ на усиление синтеза коллагена [4]; при циррозе печени активность ингибитора коллагеназы в сыворотке крови с отсутствием фиброза была не ниже 3,8 ИЕ/мл, а при наличии цирроза этот показатель снижался до 1,9 ИЕ/мл и ниже; активность протеазного ингибитора при отсутствии фиброза была не ниже 26,4 ИЕ/мл, а у больных циррозом печени она снижалась до 9,0 ИЕ/мл и ниже.

При циррозе печени нарастала активность коллагеназы в 3 и более раз (4 мкмоль/(л·ч) и выше), снижается активность ингибитора коллагеназы в 2 раза (1,9 ИЕ/мл и ниже) и снижается активность протеазного ингибитора, отражающая снижение белково-синтетической функции печени, в 3 раза (9 ИЕ/мл и ниже).

Пример 1. Больной П., 52 года, диагноз - цирроз печени, стадия А (по Чальз-Пью) в анамнезе в течение 10 лет определяется HBcorAgIgG, HBsAg, повышение трансаминаз умеренного характера в 1,5 раза, отмечается умеренная гепатомегалия, печень плотная с острым краем. Жалобы на общую слабость, утомляемость, при обследовании выявлено ПЦР к ДНК HBV, повышение активности трансаминаз в 2 раза. Проведено исследование согласно предлагаемому способу. В сыворотке крови - альбумин 38 г/л, протромбиновый индекс - 80, активность коллагеназы 4,4 мкмоль/л·ч, активность ингибитора коллагеназы 1,7 ИЕ/мл, активность протеазного ингибитора 8,5 ИЕ/мл. При гистологическом исследовании печени - цирроз печени в активной фазе.

Пример 2. Больная Г., 56 лет в анамнезе частое донорство и гемотрансфузия по поводу маточного кровотечения 10 лет назад. Периодически повышение уровня аланинами-нотрансферазы, ухудшение самочувствия в последние 3 года. При обследовании в условиях гепатологического отделения отмечается положительная ПЦР к РНК HCV, активность трансаминаз была повышена в 1,5 раза, на УЗИ гепато и спленомегалия/. Проведено исследование согласно предлагаемому способу. В сыворотке крови содержание альбумина 35 г/л, протромбиновый индекс 78, активность коллагеназы - 4,6 мкмоль/л·ч, активность ингибитора коллагеназы 1,6 ИЕ/мл, активность протеазного ингибитора 8,3 ИЕ/мл. При гистологическом исследовании печени диагностирован цирроз печени активная фаза.

Пример 3. Больной Ц., 41 год, в анамнезе в течение 10 лет применение внутривенного введения наркотиков (опийная наркомания). Периодически повышение трансаминаз не более чем в 2 раза в крови в течение этого времени положительная ПЦР к РНК HCV. Проведено исследование согласно предлагаемому способу. В сыворотке крови при поступлении отмечалось снижение альбуминов до 33 г/л, протромбиновый индекс 78, активность коллагеназы 4,8 мкмоль/л·ч, активность ингибитора коллагеназы 1,7 ИЕ/мл, активность протеазного ингибитора 8,1 ИЕ/мл. Проведение пункционной биопсии выявило цирроз печени умеренной степени активности.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет провести неинвазивное обследование с определением биохимических показателей сыворотки крови на активность коллагеназ, активность ингибиторов коллагеназы и протеазы.

Применение предложенного неинвазивного метода исследования позволяет диагностировать цирроз печени, т.е. оценить структуру печени, а при динамическом наблюдении без пункционной биопсии печени оценить результаты лечения, выражающиеся в нарастании цирротических изменений, либо в стабилизации показателей.

Источники информации

1. Дунаевский О.А. Вирусные гепатиты и дифференциальная диагностика заболеваний печени. - Тверь, 1993. - 263 с.

2. Шараев И.Н., Пишков В.Н., Зворыгина Н.Г. Определение коллагеновой активности плазмы крови // Лабораторное дело. - 1987. - №1. - С.60-62.

3. Нарткова В.Ф., Пасхина Т.С. Унифицированный метод определения активности α₂-макроглобулин в сыворотке (плазме) крови человека // Вопросы медицинской химии. - 1979. - Т.25, №4. - С.494-499.

4. Логинов А.С., Блок Ю.Е. Хронические гепатиты и циррозы печени. - Медицина, 1987.

5. Патент №2167424 Способ диагностики хронических заболеваний печени. Автор Макаров В.К.

6. Desmetit V., Gerber M., et al. Классификация хронического гепатита, диагностика, определение тяжести и тяжести течения // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопрактологии. - 1995. - №2. - С.38-45.

Изобретение относится к области медицины, гепатологии. Способ осуществляют следующим образом: в сыворотке крови определяют активность коллагеназы, ингибитора коллагеназы и протеазы, и при увеличении активности коллагеназы до 4 мкмоль/(л·ч) и выше, снижении активности ингибитора коллагеназы до 1,9 ИЕ/мл и ниже и снижении активности ингибитора протеазы до 9 ИЕ/мл и ниже диагностируют цирроз печени. Изобретение обеспечивает повышение точности и информативности способа.

Способ диагностики цирроза печени, заключающийся в обследовании пациента и проведении биохимического исследования крови, отличающийся тем, что в сыворотке крови определяют активность коллагеназы, ингибитора коллагеназы и протеазы и при увеличении активности коллагеназы до 4 мкмоль/(л·ч) и выше, снижении активности ингибитора коллагеназы до 1,9 ИЕ/мл и ниже и снижении активности ингибитора протеазы до 9 ИЕ/мл и ниже диагностируют цирроз печени.