СРЕДСТВО, НОРМАЛИЗУЮЩЕЕ РЕПРОДУКТИВНУЮ ФУНКЦИЮ У МУЖЧИН, И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 2007 года по МПК A61K35/48 A61P15/08 

Группа изобретений относится к лекарственному средству и способу его получения из органов животных, в частности к выделению биологически активного вещества из семенников и получению лекарственной формы для парентерального введения, которая может использоваться в медицине как средство, нормализующее репродуктивную функцию у мужчин.

Известны способы получения биологически активных веществ и лекарственных средств из животного сырья (патент РФ №944191, 1994; а.с. SU №1112606, 1996; а.с. SU №1218521, 1994; а.с. SU №1227198, 1986; патент РФ 1298879, 1993; патент РФ №1522486, 1994; патент РФ №2075944, 1997; патент РФ №2104702, 1998; патент РФ №2161501, 2001; патент US 4341765, патент GB 1161896, 1969; патент FR 2583982, 1987).

Известно вещество, восстанавливающее репродуктивную функцию, и способ его получения из семенников половозрелого скота (патент РФ №1448443, 1994, А61К 35/48), являющееся наиболее близким аналогом - прототипом для предлагаемого средства и способа его получения.

Согласно способу, описанному в патенте РФ №1448443, измельченные семенники крупного рогатого скота обрабатывают уксусной кислотой, осаждают ацетоном. Обрабатывают сырье уксусной кислотой при рН 3,5-4,0, в течение 12-24 ч при температуре 10-15°С с добавлением 0,5 г/л хлористого цинка, осаждение ацетоном производят тремя объемами при температуре от минус 5 до минус 10°С, а к измельченным семенникам добавляют жмых семенников после отделения вещества, обладающего гиалуронидазной активностью. Растворяют осадок в воде с последующей фильтрацией и высушиванием целевого продукта.

Выход активного вещества (то есть вещества, восстанавливающего репродуктивную функцию) составляет от 24 г до 36 г на 1 кг исходного сырья.

К недостаткам известного способа следует отнести извлечение в процессе экстракции из ткани семенников большого количества (более 70%) веществ не пептидной природы, которые, являясь примесями, не определяют биологическую активность выделенного активного вещества, а также его низкий выход.

Настоящим изобретением поставлена и решена задача разработки способа получения средства, нормализующего репродуктивную функцию у мужчин, в виде лекарственной формы для парентерального введения, выделенного из семенников половозрелых бычков не старше 12-месячного возраста или свиней, техническим результатом которого является оптимальная технология выделения пептидного комплекса с содержанием низкомолекулярной фракции от 70 до 90% с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов в пределах от 75 до 228 Да и получение водного раствора экстракта с концентрацией полипептидов 2,5-2,9 мг/мл, позволяющая не только очистить получаемый продукт от примесей, но и увеличить его выход.

Экспериментальная проверка показала, что предлагаемый способ обеспечивает фармацевтическую стабильность, максимальную биологическую ценность и терапевтическую эффективность средства, нормализующего репродуктивную функцию у мужчин, выполненного в виде лекарственной формы для парентерального введения, что подтверждено результатами экспериментов, приводимыми в примерах, иллюстрирующих изобретение.

Другим аспектом изобретения является средство, нормализующее репродуктивную функцию у мужчин, в виде лекарственной формы для парентерального введения, представляющее собой пептидный комплекс с содержанием низкомолекулярной фракции от 70 до 90% с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов в пределах от 75 до 228 Да, с концентрацией полипептидов 2,5-2,9 мг/мл, технический результат которого заключается в том, что выделенное вещество отличается от известных веществ, полученных ранее из животного сырья, по молекулярной массе (от 500 до 1500 Да) входящих в него пептидных компонентов (патенты РФ №№1298879, 2104702, 2163129), а также по его не токсичности и апирогенности за счет полной очистки от примесей.

В ходе исследований в экспериментах на животных выявлено, что полученный водный раствор средства в концентрации полипептидов 2,5-2,9 мг/мл является терапевтически эффективной дозой, что позволяет считать показанным использование средства при различных видах патологии половой системы у мужчин. Это подтверждается приводимыми ниже примерами.

В процессе проведения исследований была установлена важность следующих стадий способа получения средства, нормализующего репродуктивную функцию у мужчин, выполненного в виде лекарственной формы для парентерального введения (далее - препарат):

- повторное осаждение образовавшегося гомогенизированного осадка двукратными объемами ацетона не менее двух раз и последующее промывание на нутч-фильтре двукратными объемами ацетона до получения осадка светло-серого цвета, что свидетельствует о полной очистке осадка от примесей, таких как липидные, белковые, фосфолипидные и другие;

- получение водного раствора экстракта в концентрации полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл; его центрифугирование, фильтрование, с последующей ультрафильтрационной очисткой на установке при противодавлении не более 1,0 кгс/см² через материалы с задерживающей способностью 15000 Да, и добавлении в ультрафильтрат гликокола до конечной концентрации 10-20 мг/мл при рН 5,6-6,6;

- стерилизующая фильтрация, ампулирование и автоклавирование в течение 8 минут при температуре 120°С и атмосферном давлении 1,1 кгс/см², что обеспечивает стабильность препарата при сохранении терапевтической эффективности.

Режим и время автоклавирования были установлены экспериментально.

Указанный технический результат достигается тем, что средство, нормализующее репродуктивную функцию у мужчин, выполнено в виде лекарственной формы для парентерального введения и представляет собой пептидный комплекс с содержанием низкомолекулярной фракции от 70 до 90% с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов в пределах 75 до 228 Да, с концентрацией полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл и получено из семенников половозрелых бычков не старше 12-месячного возраста или свиней путем экстракции уксусной кислотой в присутствии хлористого цинка.

Указанный технический результат достигается также тем, что предлагаемый способ получения средства, нормализующего репродуктивную функцию у мужчин, характеризуется тем, что семенники половозрелых бычков не старше 12-месячного возраста или свиней замораживают при температуре не менее минус 40°С, выдерживают при температуре минус 20-22°С в течение не менее двух месяцев, затем измельчают, добавляют 3% раствор уксусной кислоты в объемном соотношении 1:5 при температуре 20±5°С, экстракцию проводят при постоянном перемешивании, после получения однородной взвеси в нее добавляют 1% раствор хлористого цинка в объемном соотношении 50:1, охлаждают при постоянном перемешивании до температуры 7-16°С, затем перемешивают по 1 часу через каждые 4 ч отстаивания в течение 48 ч, экстракт отделяют от балластных веществ сепарированием, к экстракту добавляют ацетон в объемном соотношении 1:5, выдерживают при температуре 3-5°С в течение 4 ч, образовавшийся гомогенизированный осадок повторно осаждают ацетоном не менее 2 раз, затем осадок, содержащий активное вещество, промывают на нутч-фильтре двукратными объемами охлажденного до температуры 7-16°С ацетона до получения осадка светло-серого цвета, протирают через металлическое сито, высушивают, растворяют в дистиллированной воде при комнатной температуре и постоянном перемешивании до концентрации полипептидов 2,5-2,9 мг/мл, раствор центрифугируют, фильтруют, подвергают ультрафильтрационной очистке на установке при противодавлении не более 1,0 кгс/см² через материалы с задерживающей способностью 15000 Да, в ультрафильтрат добавляют гликокол до его конечной концентрации 10-20 мг/мл при рН 5,6-6,6, раствор подвергают стерилизующей фильтрации под давлением не более 2,0 кгс/см², разливают в ампулы по 2 мл и автоклавируют в течение 8 минут при температуре 120°С и атмосферном давлении 1,1 кгс/см².

Сущность изобретения поясняется таблицами и чертежом.

На чертеже представлено влияние препарата на развитие эксплантатов семенников.

В Таблице 1 представлено влияние препарата на морфологические и биохимические показатели периферической крови морских свинок при изучении токсичности.

В Таблице 2 показано влияние препарата на содержание половых гормонов в периферической крови у пациентов с мужским климаксом.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами: пример 1 - способ получения препарата; пример 2 - изучение токсичности препарата; пример 3, подтверждающий биологическую активность препарата; пример 4, подтверждающий терапевтическую эффективность препарата, выполненного в виде лекарственной формы для парентерального введения.

Пример 1. Способ получения препарата

В качестве сырья используются семенники половозрелых бычков не старше 12-месячного возраста или свиней, которые замораживают при температуре не менее минус 40°С и выдерживают при температуре минус 20-22°С в течение не менее двух месяцев.

В реактор для экстракции перекачивают 400 л 3% раствора уксусной кислоты и охлаждают до температуры (20±5)°С, затем в реактор при постоянном перемешивании загружают 80 кг измельченного до получения гомогенной массы сырья. Экстракцию проводят при постоянном перемешивании, после получения однородной взвеси добавляют в нее 1% раствор хлористого цинка в объемном соотношении 50:1, охлаждают при постоянном перемешивании до температуры плюс 7-16°С, затем перемешивают по 1 часу через каждые 4 ч отстаивания в течение 48 ч. Экстракт отделяют от балластных веществ сепарированием при (5000±500) об/мин в течение 1 ч. К экстракту добавляют ацетон в объемном соотношении 1:5. Выдерживают при температуре плюс 3-5°С в течение 4 ч. Образовавшийся осадок гомогенизируют и повторно осаждают ацетоном не менее двух раз. Затем осадок, содержащий активное вещество, промывают на нутч-фильтре двукратными объемами охлажденного до температуры 7-16°С ацетона до получения осадка светло-серого цвета. Промытый осадок протирают через металлическое сито, выкладывают тонким слоем в эмалированные кюветы, закрывают двойным слоем ткани хлопчатобумажной и высушивают при периодическом помешивании в вытяжном шкафу до полного удаления запаха ацетона.

Выход активного вещества (порошка биологически активного пептидного комплекса, выделенного из семенников) составляет 65 г на 1 кг исходного сырья.

Полученный порошок растворяют в дистиллированной воде при постоянном перемешивании при комнатной температуре в течение 40 мин до концентрации пептидов 2,5-2,9 мг/мл. Полученный раствор центрифугируют при (3000±200) об/мин в течение (20±5) мин. Центрифугат фильтруют через фильтр типа АР-15 или аналогичный.

Фильтрат подвергают ультрафильтрационной очистке на установке для ультрафильтрации при противодавлении не более 1,0 кгс/см², через материалы с задерживающей способностью 15000 Да.

В ультрафильтрат добавляют расчетную навеску гликокола, до его конечной концентрации 10-20 мг/мл, перемешивают до полного растворения гликокола при сохранении рН 5,6-6,6.

Раствор подвергают стерилизующей фильтрации, которую проводят под давлением, не превышающим 2,0, кгс/см².

Полученный раствор разливают в ампулы по 2,0 мл и автоклавируют, причем ампулы с препаратом подвергают стерилизации в течение 8 минут при температуре 120°С и атмосферном давлении не более 1,1 кгс/см².

Препарат представляет собой бесцветный, прозрачный раствор и содержит пептидный комплекс с концентрацией полипептидов 2,5-2,9 мг/мл.

Тестирование на отсутствие высокомолекулярных белковых компонентов осуществляют путем добавления к содержимому 1 ампулы препарата 1 мл 10%-ного раствора трихлоруксусной кислоты. Прозрачность раствора свидетельствует об отсутствии высокомолекулярных белковых компонентов.

Для определения в препарате пептидных связей к его раствору добавляют биуретовый реактив. Окрашивание раствора в фиолетовый цвет свидетельствует об имеющихся в препарате пептидных связях.

С целью определения в препарате полипептидов и их фракций используют методы ультрафиолетовой спектрофотометрии, гель-хроматографии, масс-спектрометрии, высокоэффективной жидкостной хроматографии и электрофореза в полиакриламидном геле.

Ультрафиолетовый спектр раствора препарата снимают в области длин волн от 250 до 350 нм: максимум поглощения отмечается при длине волны 270±5 нм.

Молекулярную массу полипептидов, входящих в препарат, определяют следующими методами;

методом гель-хроматографии на сефадексах G-25 и G-50 («Pharmacia», Швеция). Для калибровки колонки 1,6×60 см используют Peptide Molecuar Weight Kit MS III («Serva», Германия);

методом масс-спектрометрии. Спектры получают на времяпролетном масс-спектрометре Voyager DE Biospectrometry с лазерной десорбцией и ионизацией с помощью матрицы (MALDI-TOF) при относительной интенсивности азотного лазера 2300-2400, ускоряющем напряжении 25000 В, времени задержки 90 нс и давлении в вакуумной камере 2,6×10⁶ тор;

методом электрофореза в 15%-ном полиакриламидном геле в сравнении со стандартным набором маркерных белков.

Перечисленными выше методами установлено, что в состав препарата входят полипептиды с молекулярной массой от 75 до 228 Да.

С помощью обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии в градиенте ацетонитрила (сорбент «Lichrosorb C18», колонка 2×62 мм) установлено, что в состав препарата входят преимущественно низкомолекулярные фракции - от 70 до 90%, а высокомолекулярные компоненты в препарате отсутствуют.

Пирогенность препарата определяют на кроликах общепринятым методом (ГФ XI, вып.2, с.183) при тест-дозе препарата 0,25 мг на 1 кг массы животного в 1,0 мл изотонического 0,9% раствора натрия хлорида для инъекций. Показано, что препарат является апирогенным.

Таким образом, вышеизложенным способом получен препарат - лекарственная форма для парентерального введения, представляющая собой пептидный комплекс с содержанием низкомолекулярной фракции от 70 до 90%, с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов в пределах от 75 до 228 Да, с концентрацией полипептидов 2,5-2,9 мг/мл.

Пример 2. Изучение токсичности препарата

Общетоксическое действие препарата исследовали в соответствии с требованиями «Руководства по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (2000): острой токсичности при однократном введении препарата, а также подострой и хронической токсичности при длительном введении препарата.

Исследование по изучению острой токсичности проведено на 72 белых беспородных мышах-самцах с массой тела 20-22 г. Животные были рандомизированно разделены на 6 равных групп. Препарат вводили животным однократно внутримышечно в дозах 35 мг/кг, 50 мг/кг, 100 мг/кг, 150 мг/кг, 200 мг/кг в 0,25 мл стерильного 0,9% раствора NaCl. Животным контрольной группы в том же объеме вводили 0,9% раствор NaCl.

Исследования по изучению подострой токсичности проведено на 65 белых беспородных крысах-самцах с массой тела 150-180 г. Ежедневно однократно животным подопытных групп вводили препарат внутримышечно в течение 90 дней в дозах 1 мг/кг, 10 мг/кг, 100 мг/кг в 0,5 мл стерильного 0,9% раствора NaCl. Животным контрольной группы вводили в том же объеме стерильный 0,9% раствор NaCl. До введения препарата, на 30, 60 и 90 сутки после начала введения препарата у животных исследовали морфологический состав и свойства периферической крови. При завершении эксперимента исследовали биохимические и коагулологические показатели крови.

Исследования по изучению хронической токсичности проводили в течение 6 месяцев, исходя из длительности рекомендуемого клинического назначения препарата, на 84 морских свинках-самцах с массой тела 250-280 г. Животные подопытных групп получали ежедневно однократно внутримышечно препарат в течение 6 мес в дозах 1 мг/кг, 10 мг/кг, 100 мг/кг в 0,5 мл стерильного 0,9% раствора NaCl. В контрольной группе животным вводили по аналогичной схеме стерильный 0,9% раствор NaCl в том же объеме. У животных в периферической крови общепринятыми методами определяли: количество эритроцитов, гемоглобина, ретикулоцитов, тромбоцитов, лейкоцитов, лейкоцитарную формулу, скорость оседания эритроцитов (СОЭ), резистентность эритроцитов. Наряду с этим определяли содержание в сыворотке крови общего белка по методу Лоури, калия и натрия методом плазменной спектрофотометрии. После завершения эксперимента проводили патоморфологическое исследование головного и спинного мозга, спинномозговых ганглиев, щитовидной железы, паращитовидных желез, надпочечников, семенников, гипофиза, сердца, легких, аорты, печени, почки, мочевого пузыря, поджелудочной железы, желудка, тонкой кишки, толстой кишки, тимуса, селезенки, лимфатических узлов, костного мозга.

При изучении острой токсичности установлено, что однократное введение исследуемого препарата животным в дозе, превышающей терапевтическую, рекомендованную для клинического применения, более чем в 5000 раз, не вызывает токсических реакций, что свидетельствует о большой терапевтической широте препарата.

Изучение подострой и хронической токсичности препарата свидетельствует об отсутствии побочных эффектов при длительном применении препарата в дозах, превышающих терапевтическую в 300-3000 раз. При исследовании влияния препарата на морфологический состав и биохимические показатели периферической крови морских свинок через 3 и 6 месяцев после начала его введения достоверного изменения показателей не выявлено (Таблица 1).

При оценке общего состояния животных, морфологических и биохимических показателей периферической крови, морфологического состояния внутренних органов, состояния сердечно-сосудистой и дыхательной систем, функции печени и почек патологические изменения в организме не обнаружены.

Следовательно, препарат, полученный предлагаемым способом, при длительном введении животным не обладает токсическими свойствами, препятствующими дальнейшему его применению в качестве лекарственного средства, выполненного в виде лекарственной формы для парентерального введения.

Пример 3. Влияние препарата на развитие эксплантатов семенников

Эксперименты проведены на 52 фрагментах семенников крыс линии «Wistar» с массой тела 150÷200 г. Питательная среда для культивирования эксплантатов состояла из 35% раствора Игла, 25% фетальной сыворотки теленка, 35% раствора Хенкса, 5% куриного эмбрионального экстракта, в среду добавляли глюкозу (0,6%), инсулин (0,5 ед./мл), пенициллин (100 ед./мл), глютамин (2 мМ). Фрагменты семенников помещали в эту среду и культивировали на коллагеновой подложке в чашках Петри в термостате при температуре 36,7°С в течение 2 суток. В экспериментальную среду добавляли препарат в концентрациях 1, 10, 50, 100, 200 и 400 нг/мл. Критерием биологической активности служил индекс площади (ИП) - соотношение площади всего эксплантата вместе с зоной роста к исходящей площади фрагмента семенников. Значения ИП выражали в процентах, контрольное значение ИП принималось за 100%.

На чертеже показано влияние препарата на развитие эксплантатов семенников.

Установлено, что через 1 сутки культивирования происходило распластывание эксплантатов на коллагеновой подложке и начиналось выселение пролиферирующих и мигрирующих клеток по периферии эксплантата. На 3-й сутки культивирования при концентрации препарата 100 нг/мл наблюдалось достоверное повышение ИП эксплантатов на 35%, по сравнению с контрольными значениями ИП. При исследовании эксплантатов семенников на более длительных сроках культивирования (7 дней) было выявлено аналогичное стимулирующее действие препарата в той же концентрации.

Таким образом, в отношении семенников препарат оказывал тканеспецифическое действие, проявляющееся в стимуляции роста эксплантатов, что свидетельствует о нормализующем действии препарата на функцию клеток семенников.

Пример 4. Эффективность применения препарата при мужском климаксе

Лечение с применением препарата проведено 19 больным основной группы в возрасте от 43 лет до 61 года с негативными проявлениями мужского климакса. Пациенты предъявляли жалобы на быструю утомляемость, уменьшение физической и умственной работоспособности, ослабление памяти, внезапные приливы жара, повышенное потоотделение, раздражительность, но большинство мужчин уделяли особое внимание появлению половой слабости. Больные ранее за медицинской помощью не обращались.

Препарат пациентам основной группы вводили в дозе 5 мг в 2 мл физиологического раствора внутримышечно однократно ежедневно в течение 10 дней.

Контрольная группа включала 17 пациентов, получавших инъекции физиологического раствора по аналогичной схеме.

В динамике оценивали жалобы больных, проводили общеклиническое исследование крови и мочи, биохимическое изучение крови. Используя радиоиммунологический метод, определяли содержание половых гормонов в сыворотке крови пациентов. Кроме того, производили пальпаторную оценку предстательной железы, лабораторное исследование ее секрета и эякулята.

Результаты проведенных исследований показали, что у обследованных пациентов проявления мужского климакса являются следствием преимущественно гормональных перестроек в организме, характерных для этой возрастной группы. Хотя не исключено, что степень выраженности этих проявлений у лиц более молодого возраста обусловлена также воздействием различных неблагоприятных эколого-профессиональных факторов. У отдельных больных отмечалось повышение содержания глюкозы в крови, что, вероятно, свидетельствует о "срыве" инсулиновой системы регуляции. Характерным было изменение концентрации в крови половых гормонов (Таблица 2).

Практически у всех больных при пальпаторном исследовании определялись отечные изменения предстательной железы.

Применение препарата способствовало улучшению общего самочувствия больных, все пациенты отмечали улучшение половой функции, уменьшение явлений половой слабости и повышение либидо.

Препарат оказывал регулирующее действие на содержание половых гормонов в крови (Таблица 3). Причем отмечалось достоверно повышение концентрации тестостерона, что коррелировало с улучшением половой функции и результатами микроскопического исследования эякулята.

При микроскопическом исследовании эякулята отмечалось увеличение количества спермиев и их подвижности, уменьшение патологических форм спермиев, снижение количества лейкоцитов, что подтверждает нормализующее действие препарата на функцию семенников.

Таким образом, результаты проведенного исследования свидетельствуют о лечебной эффективности препарата и целесообразности его применения в комплексном лечении мужского климакса для нормализации функции репродуктивной системы у мужчин в терапевтической дозе 5 мг (2,5 мг/мл) внутримышечно однократно ежедневно в течение 10 дней.

Таблица 1Средство, нормализующее репродуктивную функцию у мужчин, и способ его полученияПоказательВведение препарата (10 мг/кг)3 месяца6 месяцевКонтроль (n=24)Препарат (n=24)Контроль (n=24)Препарат (n=24)Эритроциты, ×10¹²/л5,3±0,75,3±0,75,2±0,15,1±0,3Гемоглобин, г/л14,3±1,814,1±1,514,2±1,414,1±1,2Ретикулоциты, %1,1±0,021,2±0,031,1±0,051,3±0,08Тромбоциты, ×10⁹/л142,2±5,8143,2±5,3144,3±7,2144,1±7,3Лейкоциты, ×10⁹/л9,6±0,19,4±0,79,7±0,29,6±0,4Нейтрофилы палочкоядерные, %0,32±0,010,31±0,050,30±0,030,32±0,07Нейтрофилы сегментоядерные, %43,2±1,644,6±2,143,8±1,744,3±2,6Эозинофилы, %0,71±0,050,70±0,060,72±0,070,70±0,01Базофилы, %0,67±0,010,69±0,040,71±0,040,60±0,01Моноциты, %2,5±0,032,2±0,052,4±0,032,4±0,04Лимфоциты, %48,5±1,950,1±2,252,7±2,747,8±2,1СОЭ, мм/ч1,82±0,021,78±0,041,91±0,061,79±0,03Резистентность эритроцитов, % NaCl    -максимальная0,41±0,040,40±0,030,40±0,040,43±0,06-минимальная0,33±0,050,31±0,040,32±0,020,31±0,05Общий белок в сыворотке крови, г/л72,3±2,273,7±2,271,0±2,773,1±3,6Натрий в сыворотке крови, ммоль/л153,7±7,1152,7±5,6153,3±6,2151,9±7,1Калий в сыворотке крови, ммоль/л5,3±1,75,2±2,85,2±1,45,3±2,1

Таблица 2Средство, нормализующее репродуктивную функцию у мужчин, и способ его полученияПоказательДо леченияПосле лечения с применением препаратаЛГ, нг/мл3,64±0,172,95±0,12ФСГ, нг/мл2,86±0,092,34±0,11Тестостерон, нг/мл5,7±0,67,2±0,1** - Р<0,05 по сравнению с показателем до применения препарата.

Группа изобретений относится к выделению биологически активного вещества из семенников животных и получению лекарственной формы для парентерального введения, которая может использоваться в медицине как средство, нормализующее репродуктивную функцию у мужчин. Средство выполнено в виде лекарственной формы для парентерального введения и представляет собой пептидный комплекс с содержанием низкомолекулярной фракции от 70 до 90%, с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов в пределах от 75 до 228 Да, с концентрацией полипептидов 2,5-2,9 мг/мл и получено из семенников половозрелых бычков не старше 12-месячного возраста или свиней путем экстракции уксусной кислотой в присутствии хлористого цинка. Предлагаемый способ получения средства заключается в том, что семенники половозрелых бычков не старше 12-месячного возраста или свиней замораживают при температуре не менее минус 40°С, выдерживают при температуре минус 20-22°С в течение не менее двух месяцев, затем измельчают, добавляют 3% раствор уксусной кислоты в объемном соотношении 1:5 при температуре 20±5°С, экстракцию проводят при постоянном перемешивании, после получения однородной взвеси в нее добавляют 1% раствор хлористого цинка в объемном соотношении 50:1, охлаждают при постоянном перемешивании до температуры 7-16°С, затем перемешивают по 1 ч через каждые 4 ч отстаивания в течение 48 ч, экстракт отделяют от балластных веществ сепарированием, к экстракту добавляют ацетон в объемном соотношении 1:5, выдерживают при температуре 3-5°С в течение 4 ч, образовавшийся гомогенизированный осадок повторно осаждают ацетоном не менее 2 раз, затем осадок, содержащий активное вещество, промывают на нутч-фильтре двукратными объемами охлажденного до температуры 7-16°С ацетона до получения осадка светло-серого цвета, протирают через металлическое сито, высушивают, растворяют в дистиллированной воде при комнатной температуре и постоянном перемешивании до концентрации полипептидов 2,5-2,9 мг/мл, раствор центрифугируют, фильтруют, подвергают ультрафильтрационной очистке на установке при противодавлении не более 1,0 кгс/см² через материалы с задерживающей способностью 15000 Да, в ультрафильтрат добавляют гликокол до его конечной концентрации 10-20 мг/мл при рН 5,6-6,6, раствор подвергают стерилизующей фильтрации под давлением не более 2,0 кгс/см², разливают в ампулы по 2 мл и автоклавируют в течение 8 минут при температуре 120°С и атмосферном давлении 1,1 кгс/см². Изобретение обеспечивает оптимальную технологию выделения пептидного комплекса с содержанием низкомолекулярной фракции от 70 до 90% с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов в пределах от 75 до 228 Да и получение водного раствора экстракта с концентрацией полипептидов 2,5-2,9 мг/мл, позволяющую не только очистить получаемый продукт от примесей, но и увеличить его выход; а также то, что выделенное вещество отличается от известных веществ, полученных ранее из животного сырья, по молекулярной массе входящих в него пептидных компонентов, по его нетоксичности и апирогенности за счет полной очистки от примесей. 2 н.п. ф-лы, 1 ил., 2 табл.

1. Средство, нормализующее репродуктивную функцию у мужчин, характеризующееся тем, что оно выполнено в виде лекарственной формы для парентерального введения и представляет собой пептидный комплекс с содержанием низкомолекулярной фракции от 70 до 90% с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов в пределах от 75 до 228 Да, с концентрацией полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл и получено из семенников половозрелых бычков не старше 12-месячного возраста или свиней путем экстракции уксусной кислотой в присутствии хлористого цинка.2. Способ получения средства, нормализующего репродуктивную функцию у мужчин, характеризующийся тем, что семенники половозрелых бычков не старше 12-месячного возраста или свиней замораживают при температуре не менее -40°С, выдерживают при температуре минус 20÷22°С в течение не менее двух месяцев, затем измельчают, добавляют 3%-ный раствор уксусной кислоты в объемном соотношении 1:5 при температуре 20±5°С, экстракцию проводят при постоянном перемешивании, после получения однородной взвеси в нее добавляют 1%-ный раствор хлористого цинка в объемном соотношении 50:1, охлаждают при постоянном перемешивании до температуры 7÷16°С, затем перемешивают по 1 ч через каждые 4 ч отстаивания в течение 48 ч, экстракт отделяют от балластных веществ сепарированием, к экстракту добавляют ацетон в объемном соотношении 1:5, выдерживают при температуре 3÷5°С в течение 4 ч, образовавшийся гомогенизированный осадок повторно осаждают ацетоном не менее 2-х раз, затем осадок, содержащий активное вещество, промывают на нутч-фильтре двукратными объемами охлажденного до температуры 7÷16°С ацетона до получения осадка светло-серого цвета, протирают через металлическое сито, высушивают, растворяют в дистиллированной воде при комнатной температуре и постоянном перемешивании до концентрации полипептидов 2,5÷2,9 мг/мл, раствор центрифугируют, фильтруют, подвергают ультрафильтрационной очистке на установке при противодавлении не более 1,0 кгс/см² через материалы с задерживающей способностью 15000 Да, в ультрафильтрат добавляют гликокол до его конечной концентрации 10÷20 мг/мл при рН 5,6÷6,6, раствор подвергают стерилизующей фильтрации под давлением не более 2,0 кгс/см², разливают в ампулы по 2 мл и автоклавируют в течение 8 мин при температуре 120°С и атмосферном давлении 1,1 кгс/см².