СРЕДСТВО СНИЖЕНИЯ УТОМЛЯЕМОСТИ Российский патент 2007 года по МПК A61K31/122 A61K31/05 A61P39/00 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к средству снижения утомляемости, содержащему восстановленный кофермент Q, представленный формулой (1), или восстановленный кофермент Q, представленный формулой (1), и окисленный кофермент Q, представленный формулой (2), в качестве активных ингредиентов, (где n представляет целое число от 1 до 12).

В данном описании средство снижения утомляемости представляет собой композицию, которая помогает при восстановлении от физического истощения, а также для предотвращения физического истощения, вызванного упражнениями, облегчает физическое истощение во время и после болезни и снижает утомляемость, вызванную старением.

Предшествующий уровень техники

Ухудшение физической формы, вызванное старением, проявляет себя в симптомах утомления. Происходит патологический цикл, в котором утомление вызывает недостаток физической активности, который в свою очередь индуцирует потерю мышечной силы. Потеря мышечной силы может вызывать переломы костей вследствие падения или может приводить к лежачему состоянию. Следовательно, для того чтобы получать удовольствие от плодотворного и комфортабельного пожилого возраста, является важным облегчить утомление и предотвратить потерю мышечной силы насколько это возможно.

В прошлом на рынке было представлено множество средствдлявосстановления от утомления. Однако наибольшее количество данных средств было предписано в качестве стимуляторов для молодых людей или юных спортсменов, и не было никаких средств, которые лица среднего или старшего возраста могли бы принимать безопасно в течение продолжительного длительного периода времени для поддержания здоровья и физической формы.

Кофермент Q представляет собой незаменимый компонент и широко распространен в живых организмах от бактерий до млекопитающих. Известно, что у людей кофермент Q₁₀, который представляет собой кофермент Q с 10 повторяющимися структурными единицами, является основным компонентом. Кофермент Q₁₀ представляет собой физиологический компонент, присутствующий в качестве составляющего компонента системы электронного транспорта митохондрий в клетках живых организмов, и функционирует в качестве транспортного компонента системы электронного транспорта посредством повторяющегося окисления и восстановления в живом организме. Известно, что кофермент Q₁₀ проявляет активность при производстве энергии, стабилизации мембран и антиокисления и широко применяется. Известно, что окисленный кофермент Q₁₀ (убихинон или убидекаренон) эффективно действует на сердце и его используют в фармацевтических областях применения в качестве средства для лечения застойной сердечной недостаточности. Сообщается о его эффектах по улучшению доступности кислорода к сердечной мышце, активации производства АТФ в сердечной мышце, улучшению функций сердца и т.п. Сообщается о его эффектах, отличных от фармацевтических применений, в качестве питательного компонента и пищевой добавки, подобно витаминам. Кроме того, в выкладке патентной заявки Японии № 62-59208 сообщается о композиции для активации тканевого метаболизма, содержащей смесь окисленного кофермента Q₁₀ (убихинона) и порошок сухих дрожжей, в выкладке патентной заявки Японии № 52-99222 сообщается об увеличении количества красных кровяных клеток при использовании окисленного кофермента Q₁₀. Кроме того, еще сообщается об эффекте восстановления от утомления при использовании окисленного кофермента Q₁₀ (выкладка патентной заявки Японии № 7-330584, выкладка патентной заявки Японии № 7-330593 и выкладка патентной заявки Японии № 10-287560).

В отличие от окисленного кофермента Q₁₀, однако, не сообщается о применимости восстановленного кофермента Q₁₀. Данное обстоятельство является следствием того факта, что, поскольку восстановленный кофермент Q₁₀ легко окисляется воздухом, его применимость не может быть оценена. Еще одна причина того, почему применимость восстановленного кофермента Q₁₀ не была оценена, состоит в том, что эффекты окисленного кофермента Q₁₀ и восстановленного кофермента Q₁₀ на живые организмы считаются эквивалентными, поскольку известно, что содержание восстановленного кофермента Q₁₀ возрастает, в целом, вследствие восстановления в живых организмах даже после введения окисленного кофермента Q₁₀. Ранее авторы раскрыли в выкладке патентной заявки Японии № 10-109933, что пероральное всасывание кофермента Q₁₀ увеличивается, когда сосуществуют как окисленный кофермент Q₁₀, так и восстановленный кофермент Q₁₀ по сравнению с тем случаем, когда окисленный кофермент Q₁₀ существует отдельно. Авторы показали, что применение восстановленного кофермента Q₁₀ является очень эффективным для увеличения перорального всасывания для многих применений. Однако отсутствует информация, существует ли какое-либо различие эффекта против утомляемости между окисленным коферментом Q₁₀ и восстановленным коферментом Q₁₀.

Цель настоящего изобретения состоит в разработке композиции, которая является эффективной для снижения и предотвращения физического утомления и которая является безопасной для непрерывного и долговременного введения лицам среднего и старшего возраста.

Раскрытие изобретения

Для решения вышеупомянутой проблемы авторы настоящего изобретения интенсивно проводили исследование средств снижения или предотвращения утомляемости, которые содержат восстановленный кофермент Q, и обнаружили, что средства, содержащие восстановленный кофермент Q, являются более эффективными для снижения утомляемости, чем средства, содержащие один окисленный кофермент Q₁₀, и завершили настоящее изобретение. Таким образом, настоящее изобретение относится к средству снижения утомляемости, отличающемуся тем, что оно содержит восстановленный кофермент Q или восстановленный кофермент Q и окисленный кофермент Q в качестве активных ингредиентов. Дополнительно было обнаружено, что эффект снижения утомляемости, полученный при использовании восстановленного кофермента Q₁₀,является более выраженным с увеличением возраста. Данный результат, очевидно, указывает на то, что данное средство является эффективным для лиц среднего и старшего возраста, которые легко утомляются и имеют трудности при поддержании хорошего здоровья.

Подробное раскрытие изобретения

Известно, что в живых организмах обычно приблизительно 40-90% кофермента Q существует в восстановленной форме. Способ получения восстановленного кофермента Q конкретно не ограничен. Например, после получения кофермента Q посредством общепринято известных способов, таких как химический синтез, ферментация, экстракция из природных продуктов и т.п., фракцию восстановленного кофермента Q в элюенте концентрируют хроматографией. В данном случае, если необходимо, концентрирование посредством хроматографии может проводиться после восстановления окисленного кофермента Q в вышеупомянутом препарате кофермента Q посредством общепринятого способа, такого как добавление обычного восстановителя, такого как боргидрид натрия, дитионит натрия (гидросульфит натрия) и т.п. Кроме того, восстановленный кофермент Q может быть получен посредством взаимодействия существующего высокоочищенного кофермента Q с вышеуказанными восстановителями. Альтернативно, могут использоваться микробные клетки и т.п., содержащие восстановленный кофермент Q.

В обычных условиях, содержание восстановленного кофермента Q в препарате кофермента Q можно оценить посредством измерения количеств окисленного кофермента Q и восстановленного кофермента Q в образце при использовании ВЭЖХ-системы, оборудованной УФ-детектором, и расчета отношения количеств, или оно может быть получено расчетом отношения площадей пиков окисленного кофермента Q и восстановленного кофермента Q при использовании ВЭЖХ-системы со встроенным электрохимическим детектором. Система с электрохимическим детектором является очень полезной для измерения доли восстановленного кофермента Q, который присутствует в очень маленьком количестве в живых организмах или в тестовых образцах, поскольку данная система может измерить окисленный кофермент Q и восстановленный кофермент Q со специфичностью и высокой чувствительностью. Все данные по содержанию восстановленного кофермента Q, приведенные в настоящем изобретении, получены с использованием ВЭЖХ-системы с электрохимическим детектором.

Поскольку кофермент Q включен в производство энергии, полагают, что увеличение уровня кофермента Q в организме является эффективным при снижении утомляемости. Конкретно, восстановленный кофермент Q, в отличие от окисленного кофермента Q, проявляет противоокислительную активность и ожидается, что он защищает ткани от окислительного стресса и повреждений, относящихся к окислительному стрессу. Следовательно, считается, что увеличение уровня восстановленного кофермента Q является очень эффективным при улучшении восстановления от утомляемости, особенно в областях, где для мышц требуется большое количество энергии и где влияние окислительного стресса, вызванного производством энергии, имеет тенденцию к накоплению.

Как описано выше, авторы обнаружили, что пероральное введение восстановленного кофермента Q повышает уровень кофермента Q в плазме в большей степени, чем при пероральном введении окисленного кофермента Q₁₀, но является неясным, увеличивается ли уровень восстановленного кофермента Q₁₀ в организме. Общепринято полагают, что эффект на живой организм окисленного кофермента Q и восстановленного кофермента Q является по существу одинаковым без какого-либо различия вследствие того, что вводимый окисленный кофермент Q восстанавливается до восстановленного кофермента Q in vivo. Однако во время данного исследования авторы измерили внутримышечный уровень восстановленного кофермента Q и получили результаты, указывающие на то, что внутримышечный уровень восстановленного кофермента Q увеличивается после введения восстановленного кофермента Q, но уменьшается после введения окисленного кофермента Q. Данные результаты указывают на то, что защитный эффект восстановленного кофермента Q против окислительного стресса в мышцах сильно отличается от эффекта окисленного кофермента Q, что позволяет предположить, что введение восстановленного кофермента Q является более предпочтительным для защиты от повреждения мышц, вызванного нагрузкой, и для снижения утомляемости. Неожиданно авторы обнаружили, что уровень эндогенного кофермента Q может быть увеличен посредством введения восстановленного кофермента Q. В данном случае эндогенный кофермент Q не является вводимым извне, но представляет собой эндогенный кофермент Q, синтезированный in vivo. Авторы подтвердили увеличение эндогенного кофермента Q при введении восстановленного кофермента Q₁₀, и данный эффект, вероятно, имеет место вследствие активации биосинтеза кофермента Q или защиты метаболизма.

Следовательно, средство снижения утомляемости настоящего изобретения позволяет увеличить уровень кофермента Q в мышцах животных, позвоночных, млекопитающих и людей. Средство снижения утомляемости настоящего изобретения может увеличить уровень восстановленного кофермента Q в мышцах животных, позвоночных, млекопитающих и людей. Способы увеличения уровня 2 видов вышеупомянутого кофермента Q предоставляют способы снижения утомляемости у животных, позвоночных, млекопитающих и людей. Средство снижения утомляемости настоящего изобретения является эффективным для снижения и предотвращения физического утомления и может приниматься не только молодыми людьми, но также лицами среднего и старшего возраста. Кроме того, средство снижения утомляемости настоящего изобретения является более ценным особенно для лиц среднего и старшего возраста.

Содержание восстановленного кофермента Q в средстве снижения утомляемости настоящего изобретения конкретно не ограничено, но может быть установлено должным образом в соответствии с назначением продукта. При увеличении доли восстановленного кофермента Q до крайне высокого уровня можно ожидать более высокую эффективность средства, несмотря на то, что затраты могут также увеличиться вследствие необходимости принятия мер для стабилизации.

Доля восстановленного кофермента Q по отношению к общему содержанию кофермента Q в средстве снижения утомляемости настоящего изобретения может быть определена должным образом в соответствии с назначением продукта. При увеличении доли восстановленного кофермента Q до крайне высокого уровня можно ожидать более высокую эффективность средства, несмотря на то, что затраты могут также увеличиться вследствие необходимости принятия мер для стабилизации.

В средстве снижения утомляемости настоящего изобретения в качестве активного ингредиента может использоваться смесь восстановленного кофермента Q и окисленного кофермента Q. Соотношение восстановленного кофермента Q и окисленного кофермента Q конкретно не ограничено, но предпочтительно отношение восстановленного кофермента Q к общему коферменту Q равно или превышает 60 мас.% и равно или менее 100 мас.%, и более предпочтительно равно или превышает 80 мас.% и равно или менее 99,5 мас.%.

Восстановленный кофермент Q, который имеет от 1 до 12 повторяющихся структурных единиц (n в формуле) в боковой цепи, как показано в формуле (1), описанной выше, может применяться в настоящем изобретении, но то же соединение с 10 повторяющимися структурными единицами, которое представляет собой кофермент Q₁₀, может применяться предпочтительно.

Дозированная форма средства снижения утомляемости настоящего изобретения конкретно не ограничена, но может представлять собой пероральную готовую форму или мазь, которую наносят непосредственно на кожу. Пероральная готовая форма может представлять собой, например, порошковую форму, форму гранул, содержащую связующее или капсульную форму, полученную при заполнении капсул порошком или гранулами. Кроме того, могут быть добавлены природные масла, маслянистые высшие жирные кислоты, моноглицериды высших жирных кислот, поверхностно-активные вещества или их смеси, и может быть получена готовая форма в виде мягких капсул при заполнении капсул данными маслянистыми веществами. В данном случае, в качестве основного вещества могут применяться желатин, другие водорастворимые высшие молекулы или т.п.

Данные капсулы также включают микрокапсулу. Альтернативно, готовая форма для питья может быть получена ожижением.

В дополнение к восстановленному коферменту Q, описанному выше, другие фармацевтически приемлемые вещества готовых форм могут быть необязательно добавлены к средству снижения утомляемости настоящего изобретения и смешаны с ним общепринятым способом. Данные вещества конкретно не ограничены, но включают, например, эксципиент, дезинтегратор, смазку, связующее, антиоксидант, краситель, антикоагулянт, средство, облегчающее абсорбцию, солюбилизатор, стабилизатор и т.п.

Эксципиент, описанный выше, конкретно не ограничен, но включает, например, белый сахар, лактозу, глюкозу, кукурузный крахмал, маннит, кристаллическую целлюлозу, фосфат кальция, сульфат кальция и т.п. Дезинтегратор, описанный выше, конкретно не ограничен, но включает, например, крахмал, агар, цитрат кальция, карбонат кальция, гидрокарбонат натрия, декстрин, кристаллическую целлюлозу, карбоксиметилцеллюлозу, трагант и т.п.

Смазка, описанная выше, конкретно не ограничена, но включает, например, тальк, стеарат магния, полиэтиленгликоль, оксид кремния, гидрированное растительное масло и т.п. Связующее, описанное выше, конкретно не ограничено, но включает, например, этилцеллюлозу, метилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, трагант, шеллак, желатин, аравийскую камедь, поливинилпирролидон, поливиниловый спирт, полиакриловую кислоту, полиметакриловую кислоту, сорбит и т.п.

Антиоксидант, описанный выше, конкретно не ограничен, но включает, например, аскорбиновую кислоту, токоферол, витамин А, β-каротин, дитионит натрия, тиосульфат натрия, пиросульфат натрия, лимонную кислоту и т.п.

Краситель, описанный выше, конкретно не ограничен, но включает, например, вещества, которые разрешается добавлять для использования к фармацевтическим препаратам.

Антикоагулянт, описанный выше, конкретно не ограничен, но включает, например, стеариновую кислоту, тальк, легкий ангидрид кремниевой кислоты, гидратированный силикатный диоксид и т.п.

Средство, облегчающее абсорбцию, описанное выше, конкретно не ограничено, но включает, например, поверхностно-активные вещества, такие как высшие спирты, высшие жирные кислоты, сложные жирнокислотные эфиры глицерина и т.п.

Солюбилизатор, описанный выше, конкретно не ограничен, но включает, например, органические кислоты, такие как фумаровую кислоту, янтарную кислоту, яблочную кислоту и т.п. Стабилизатор, описанный выше, конкретно не ограничен, но включает, например, бензойную кислоту, бензоат натрия, этилпараоксибензоат и т.п.

Готовую форму конкретно не ограничивают, когда средство наносят непосредственно на кожу, но, например, могут применяться следующие готовые формы: крем, паста, желе, гель, эмульсия или жидкая готовая форма (мазь, линимент, лосьон, крем, спрей и т.п.), в которых растворяются вещества для средства, описанные выше, или смешиваются и диспергируются в подходящей основе; готовая форма, в которой растворяются вещества для средства, или смешиваются и диспергируются в основе; и распределяются над средой для подложки (припарка и т.п.); готовая форма, в которой растворяются вещества для средства, описанные выше, или смешиваются и диспергируются в адгезиве и распределяются над средой для подложки (пластырь, лента и т.п.). Основы и адгезивы, которые обычно используют в фармацевтических препаратах и косметических средствах, могут использоваться при необходимости так долго, пока не нарушается эффективность настоящего изобретения.

Средство снижения утомляемости настоящего изобретения может также содержать антиоксидант или антиоксидантный фермент. Антиоксидант конкретно не ограничен, но, например, могут быть пригодными витамин Е, производные витамина Е, витамин С, производные витамина С, пробукол, ликопен, витамин А, каротиноиды, витамин В, производные витамина В, флавоноиды, полифенолы, глутатион, пирролохинолиновый хинон, пикногенол, флавангенол или селен. Антиоксиданты, описанные выше, могут применяться по отдельности или в виде смеси двух или более. Антиоксидантный фермент не ограничен конкретно, но, например, могут быть пригодными супероксиддисмутаза (SOD), глутатионпероксидаза, глутатион-S-трансфераза, глутатионредуктаза, каталаза или пероксидаза аскорбиновой кислоты. Антиоксидантные ферменты, описанные выше, могут применяться по отдельности или в виде смеси двух или более.

Средство снижения утомляемости настоящего изобретения может также содержать другие питательные и тонизирующие компоненты. Питательные и тонизирующие компоненты конкретно не ограничены, но, например, могут быть пригодными креатин, таурин, витамин В₁, производные витамина В или аминокислоты. Питательные и тонизирующие компоненты, описанные выше, могут применяться по отдельности или в виде смеси двух или более. При смешивании кофермента Q настоящего изобретения с данными компонентами может ожидаться аддитивный или синергический эффект.

Средство снижения утомляемости настоящего изобретения может также содержать питательные добавки. Питательные добавки конкретно не ограничены, но включают аминокислоты, ионы металлов, сахара, белки, жирные кислоты, витамины и т.п. Когда из средства снижения утомляемости настоящего изобретения получают обычную пищу, форма пищевого продукта конкретно не ограничена, но включает масляные и жировые композиции для пищи, кулинарные масла, масла для распыления, сливочные масла, маргарины, шортенинги (жиры, добавляемые в тесто), взбитые сливки, сгущенные молочные продукты, забеливатели, дрессинги, пикули, хлебцы, пирожные, пироги, кулинарные изделия, японские сладости, закуски, жареные закуски, шоколады и шоколадные конфеты, кулинарные изделия из риса, соевый соус, соусы, японские соусы для барбекю, кулинарные средства для украшения, леденцы, изделия из лапши, смеси для выпекания, жареные пищевые продукты, обработанные мясные продукты, рыбные брикеты, замороженные продукты, такие как замороженные закуски, замороженные мясные продукты, замороженные сельскохозяйственные продукты, готовые продукты из риса, джемы, сыры, пищевые продукты из сыра, пищевые продукты, подобные сыру, жевательные резинки, конфеты, ферментированные молочные продукты, консервированные пищевые продукты, напитки и т.п.

Средство снижения утомляемости настоящего изобретения может снижать мышечное утомление, будучи нанесенным непосредственно на кожу. В данном случае, в готовую форму может быть включено противовоспалительное вещество. Противовоспалительное вещество не ограничивают конкретно, но, по меньшей мере, одно такое вещество может быть выбрано из группы, состоящей из стероидов, салициловой кислоты и ее производных, арилацетата и его производных, пропионовой кислоты и ее производных, фенаминовой кислоты и ее производных, пиразолона и его производных, оксикама и его производных и некислотных противовоспалительных средств. Стероиды включают, например, ацетат валерата преднизолона, амцинонид, валерат дифлукортолона, валерат дексаметазона, пропионат кробетазола, диацетат дифлоразона, пропионат дексаметазона, дипропионат бетаметазона, дифлупреднат, флуоцинонид, галцинонид, будезонид, пропионат лактата гидрокортизона, валерат бетаметазона, дипропионат беклометазона, ацетонид флуоцинолона, ацетонид триамцинолона, пивалат флуметазона, лактат гидрокортизона, бутират клобетазона, дипропионат алклометазона, дексаметазон, ацетат метилпреднизолона, преднизолон, ацетат гидрокортизона. Производные салициловой кислоты включают, например, аспирин и его производные и дифлунизал. Производные арилацетата включают, например, индометацин, диклофенак, сулиндак, набуметон, проглуметацин, фарнезилиндометацин и этодолак. Производные пропионата включают, например, ибупрофен, напроксен, флурбипрофен, фенопрофен, тиапрофен, пранопрофен, локсопрофен и алминопрофен. Производные фенаминовой кислоты включают, например, мефенамовую кислоту, толфенамовую кислоту и т.п. Производные пиразолона включают, например, фенилбутазон, оксифенбутазон и т.п. Производные оксикама включают, например, пироксикам, теноксикам, ампироксикам и т.п. Некислотные противовоспалительные средства включают, например, эпиризол, тиарамид, эморфазон и т.п. При смешивании средства снижения утомляемости настоящего изобретения, содержащего восстановленный кофермент Q₁₀, с данными компонентами можно ожидать аддитивный или синергичный эффект.

При производстве средства снижения утомляемости настоящего изобретения, содержащего восстановленный кофермент Q₁₀, форму продукта, способ и режим хранения определяют соответствующим образом в зависимости от дизайна и применения промышленного продукта средства снижения утомляемости.

Наилучший способ осуществления изобретения

Следующие примеры и примеры готовых форм далее иллюстрируют детали настоящего изобретения, но объем настоящего изобретения не ограничен данными примерами и примерами готовых форм.

(Ссылочный пример 1) Реакцию восстановления осуществляют посредством добавления 100 г окисленного кофермента Q₁₀ (чистота 99,4%) и 60 г L-аскорбиновой кислоты к 1000 г этанола и перемешивания при 78^оС. Через тридцать часов реакционную смесь охлаждают до 50^оС и добавляют 330 г этанола и 70 г воды при поддержании температуры при 50^оС. Данный этанольный раствор (содержащий 100 г восстановленного кофермента Q₁₀) охлаждают до 2^оС при скорости 10^оС/ч в процессе перемешивания с получением белой взвеси. Полученную таким образом взвесь фильтруют при пониженном давлении и влажные кристаллы промывают последовательно холодным этанолом, холодной водой, холодным этанолом (холодные среды для промывания поддерживают при 2^оС) и далее сушат при пониженном давлении (20-40^оС, 1-30 ммHg) с получением 97 г сухих белых кристаллов. Все операции, за исключением сушки при пониженном давлении, осуществляют в атмосфере азота.

(Ссылочный пример 2) Сто граммов окисленного кофермента Q₁₀ растворяют в 1000 г раствора гептана при 25^оС. Сто граммов гипосульфита натрия (чистота 75% или более), растворенные в 1000 мл воды, добавляют медленно в качестве восстановителя к раствору окисленного кофермента Q для проведения реакции восстановления при 25^оС и при рН 4-6. Через два часа водную фазу удаляют из реакционного раствора и гептановую фазу промывают 6 раз 1000 г дегазированного насыщенного раствора хлорида натрия. До данного момента все операции осуществляют в атмосфере азота. Данную гептановую фазу подвергают обмену растворителей при пониженном давлении для получения 7% (м/м) этанольного раствора восстановленного кофермента Q₁₀ при 50^оС (содержащего 100 г восстановленного кофермента Q₁₀). К этанольному раствору добавляют пятьдесят граммов воды и охлаждают до 2^оС со скоростью 10^оС/ч при перемешивании для кристаллизации восстановленного кофермента Q₁₀. Все операции осуществляют в атмосфере азота. Полученную взвесь фильтруют при пониженном давлении и влажные кристаллы промывают последовательно холодным этанолом, холодной водой, холодным этанолом (холодные среды для промывания поддерживают при 2^оС) и далее сушат при пониженном давлении (20-40^оС, 1-30 ммHg) с получением 97 г сухих белых кристаллов.

(Пример 1) Полагают, что кофермент Q увеличивает энергетическое обеспечение мускулатуры посредством его воздействия на систему генерации АТФ, и в результате проявляется эффект против утомляемости. Следовательно, будет возможным предсказать эффект кофермента Q против утомляемости при исследовании влияния введения восстановленного кофермента Q₁₀ на внутримышечный кофермент Q.

Восстановленный кофермент Q₁₀, полученный в ссылочном примере 1 (содержащий приблизительно 1% окисленного кофермента Q₁₀), растворяют в растворе соевого масла (восстановленный кофермент Q₁₀/раствор соевого масла = 20 мг/мл) и перорально вводят самцам крысы SD (возраст 6 недель) при дозе 100 мг/кг восстановленного кофермента Q₁₀ (содержащего приблизительно 1% окисленного кофермента Q₁₀) один раз в день в течение 5 дней. Через пять дней забирают мышцы бедренной области и измеряют уровень кофермента Q в мышцах. Измерение уровня кофермента Q в мышцах осуществляют, используя ВЭЖХ. Собранные мышцы крысы (0,2 г) гомогенизируют после добавления кофермента Q₇ (0,003 мг), этанола (1 мл), дистиллированной воды (1 мл) и хлорида железа (0,01%) и далее добавляют гексан (3 мл). Кофермент Q₁₀ экстрагируют из гомогената после встряхивания. После повторения данной экстракционной операции дважды экстракт доводят досуха выпариванием гексана, перерастворяют в 0,25 мл этанола и вводят в ВЭЖХ. Условия ВЭЖХ являются следующими: колонка: YMC-Pack (ODS-A303), длина волны детектирования: 275 нм, подвижная фаза: метанол (88%), гексан (12%), скорость потока: 1 мл/мин. Измерение отношения восстановленного кофермента Q₁₀ и окисленного кофермента Q₁₀ в мускулатуре осуществляют следующим образом. Собранные мышцы крысы (0,2 г) гомогенизируют после добавления дистиллированной воды (0,2 мл) и этанола (0,8 мл) и гомогенат экстрагируют посредством добавления гексана (1,2 мл). После упаривания гексана под током азота экстракт перерастворяют в этаноле (0,2 мл) и вводят в ВЭЖХ. Условия операции ВЭЖХ являются такими же, как указано выше, за исключением того, что используют электрохимический детектор. Соевое масло вводят контрольной группе.

(Сравнительный пример 1) Сходным образом вводят окисленный кофермент Q₁₀ и далее измеряют уровень кофермента Q в мышцах.

Таблица 1
Уровень кофермента Q в мышцах Уровень кофермента Q (мкг/г)Q₁₀Q₉Общий KoQКонтрольная группа0,73+0,18
(100)9,62+2,33
(100)10,35+2,52
(100)Группа с восстановленным коферментом Q₁₀1,57+0,21
(215**)15,82+2,89
(164*)17,39+3,09
(168*)Группа с окисленным коферментом Q₁₀1,34+0,16
(184**)12,84+2,03
(133)14,18+2,18
(137)*р<0,05, **p<0,01 t-тест Стьюдента. Значительно отличается от контрольной группы.

Результат измерения уровня кофермента Q в мышцах после введения восстановленного или окисленного кофермента Q₁₀ показан в табл.1.

(Пример 2) Уровень восстановленного кофермента Q в мышцах измеряют после введения восстановленного кофермента Q₁₀ образом, сходным с (примером 1).

(Сравнительный пример 2) Уровень восстановленного кофермента Q в мышцах измеряют после введения окисленного кофермента Q₁₀ образом, сходным со (сравнительным примером 1).

Таблица 2
Уровень восстановленного кофермента Q в мышцах Уровень восстановленного кофермента Q (мкг/г)Q₁₀Q₉Общий KoQКонтрольная группа0,32+0,06
(100)3,28+0,59
(100)3,60+0,63
(100)Группа с восстановленным коферментом Q₁₀0,39+0,24
(122)5,32+1,07
(162*)5,71+1,16
(159*)Группа с окисленным коферментом Q₁₀0,11+0,10
(34**)2,34+0,42
(71*)2,45+0,44
(68*)*р<0,05, **p<0,01 t-тест Стьюдента. Значительно отличается от контрольной группы.

Результат измерения уровня восстановленного кофермента Q в мышцах после введения восстановленного или окисленного кофермента Q₁₀ показан в табл.2.

(Пример 3) Эффект восстановленного кофермента Q₁₀ у молодых крыс в тестах с беговой дорожкой.

Эффект против утомляемости восстановленного кофермента Q₁₀ (отмечается, что он содержит приблизительно 1% окисленного кофермента Q₁₀) оценивают на самцах крысы SD (возраст 7 недель, n=10), используя беговую дорожку. Крысу заставляют бежать со скоростью 10 м/мин по автоматической беговой дорожке (Тип NK-73-4, Natsume Seisakusho Co., Ltd.). Далее скорость увеличивают постадийно на 5 м/мин через каждые 3 мин, и время, когда крыса не может дольше бежать, замеряют (максимальное время пробега). Раствор восстановленного кофермента Q₁₀ в соевом масле в соответствии со ссылочным примером 1 (восстановленный кофермент Q₁₀/раствор соевого масла = 20 мг/мл) получают в качестве тестового вещества и перорально вводят крысам в качестве восстановленного кофермента Q₁₀ (отмечается, что он содержит приблизительно 1% окисленного кофермента Q₁₀) при дозе, равной 300 мг/кг. Максимальные времена пробега замеряют перед введением и через 2 часа после введения и рассчитывают пролонгирование максимального времени пробега. Контрольной группе вводят соевое масло.

Таблица 3
Эффект снижения утомляемости у молодых крыс Максимальное время пробега (сек)Перед введениемПосле введенияВремя
пролонгацииКонтроль с растворителем1542+105
(100)1598+104
(100)56,1+50,2
(100)Восстановленный кофермент Q₁₀
300 мг/кг1523+97
(99)1719+160
(108*)196+127
(349**)Окисленный кофермент Q₁₀
300 мг/кг1543+99
(100)1733+107
(108**)190+76
(339**)

Отмечается, что восстановленный кофермент Q₁₀ содержит приблизительно 1% окисленного кофермента Q₁₀. *р<0,05, **p<0,01 t-тест Стьюдента. Значительно отличается от контрольной группы с растворителем.

Максимальные времена пробега показаны в табл.3. Максимальное время пробега у крыс значительно пролонгируется посредством введения восстановленного кофермента Q₁₀, ясно показывая, что восстановленный кофермент Q₁₀ также обладает эффектом против утомляемости у молодых крыс.

(Сравнительный пример 3) Эффект окисленного кофермента Q₁₀ у молодых крыс в тестах с беговой дорожкой.

Эффект против утомляемости окисленного кофермента Q₁₀ у молодых крыс оценивают методом, сходным с методом (Примера 3). Результат указывает на то, что эффект против утомляемости окисленного кофермента Q₁₀ у молодых крыс является приблизительно таким же, что и у восстановленного кофермента Q₁₀.

(Пример 4) Эффект у взрослых крыс в тесте с беговой дорожкой.

Эффект против утомляемости восстановленного кофермента Q₁₀ (содержащего приблизительно 1% окисленного кофермента Q₁₀) оценивают на самцах крысы SD (возраст 61-63 недель, n=7) методом, сходным с методом (примера 3). Данный эксперимент осуществляют, используя метод перекрестного исследования (двойной слепой метод).

Таблица 4
Эффект снижения утомляемости у взрослых крыс Максимальное время пробега (сек)Перед введениемПосле введенияВремя
пролонгацииКонтроль с растворителем861+123
(100)836+121
(100)-25+24Восстановленный кофермент Q₁₀
300 мг/кг861+123
(100)958+52*
(115)97+28**Окисленный кофермент Q₁₀
300 мг/кг861+123
(100)875+108
(105)14+43

Отмечается, что восстановленный кофермент Q₁₀ содержит приблизительно 1% окисленного кофермента Q₁₀. *р<0,05, **p<0,01 t-тест Стьюдента. Значительно отличается от контрольной группы с растворителем.

Максимальные времена пробега показаны в табл.4. Максимальное время пробега у крыс значительно пролонгируется на один день после введения восстановленного кофермента Q₁₀, ясно показывая, что восстановленный кофермент Q₁₀ также обладает эффектом против утомляемости у взрослых крыс.

(Сравнительный пример 4) Эффект против утомляемости окисленного кофермента Q₁₀ оценивают образом, сходным с (Примером 4). Результаты показаны в табл.4. Окисленный кофермент Q₁₀ не проявляет никакого эффекта пролонгирования на максимальное время пробега у взрослых крыс, показывая, что эффект против утомляемости для окисленного кофермента Q₁₀ является слабым. Вышеприведенные результаты показывают, что восстановленный кофермент Q₁₀ демонстрирует широкий диапазон эффекта против утомляемости от молодых до взрослых животных, в то время как окисленный кофермент Q₁₀, который использовали в прошлом, демонстрирует эффективность у молодых животных, но проявляет слабую эффективность у животных в возрасте.

(Пример готовой формы 1) (Порошок)

Восстановленный кофермент Q₁₀ (содержащий 1% окисленного кофермента Q₁₀) растворяют в пропаноле и адсорбируют на микрокристаллической целлюлозе и далее сушат при пониженном давлении. Порошковую готовую форму получают посредством смешивания с кукурузным крахмалом под током азота:

Восстановленный кофермент Q₁₀
Окисленный кофермент Q₁₀
Микрокристаллическая целлюлоза
Кукурузный крахмал9,9 массовых частей
0,1 массовых частей
40 массовых частей
55 массовых частей

(Пример готовой формы 2) (Капсула)

После получения порошковой готовой формы методом, сходным с методом примера готовой формы 1, заполнение ей желатиновой капсулы осуществляют общепринятым способом. Заполненную капсулу закрывают, пакуют в атмосфере азота и хранят в условиях охлаждения:

Восстановленный кофермент Q₁₀
Окисленный кофермент Q₁₀
Микрокристаллическая целлюлоза
Кукурузный крахмал
Лактоза
Стеарат магния
Поливинилпирролидон19,8 массовых частей
0,2 массовых частей
40 массовых частей
20 массовых частей
65 массовых частей
3 массовых части
2 массовых части

(Пример готовой формы 3) (Мягкая капсула)

Восстановленный кофермент Q₁₀ (содержащий 1% окисленного кофермента Q₁₀), плавленный при 50^оС, растворяют в кукурузном масле, нагретом до 50^оС. Наполнение мягких капсул осуществляют общепринятым способом:

Восстановленный кофермент Q₁₀
Окисленный кофермент Q₁₀
Кукурузное масло49,5 массовых частей
0,5 массовых частей
350 массовых частей

(Пример готовой формы 4) (Таблетка)

Восстановленный кофермент Q₁₀ (содержащий приблизительно 1% окисленного кофермента Q₁₀) растворяют в пропаноле и адсорбируют на микрокристаллической целлюлозе и далее сушат при пониженном давлении. Данный субстрат смешивают с кукурузным крахмалом, лактозой, карбоксиметилцеллюлозой и стеаратом магния в атмосфере азота. Далее, к данной смеси добавляют водный раствор поливинилпирролидона в качестве связующего и проводят гранулирование общепринятым способом. После добавления талька в качестве смазки и смешивания из гранул прессуют таблетки. Таблетки пакуют в атмосфере азота и хранят при охлаждении:

Восстановленный кофермент Q₁₀
Окисленный кофермент Q₁₀
Кукурузный крахмал
Лактоза
Карбоксиметилцеллюлоза кальция
Микрокристаллическая целлюлоза
Поливинилпирролидон
Стеарат магния
Тальк19,8 массовых частей
0,2 массовых частей
25 массовых частей
15 массовых частей
10 массовых частей
40 массовых частей
5 массовых частей
3 массовых части
10 массовых частей

(Пример готовой формы 5)

Гидрофильную мазь, содержащую восстановленный кофермент Q₁₀ (содержащий 1% окисленного кофермента Q₁₀) следующей композиции, получают известным способом:

Гидрофильная мазь
Восстановленный кофермент Q₁₀
Окисленный кофермент Q₁₀
Индометацин
Аскорбилстеарат95,000 мас.%
0,990 мас.%
0,010 мас.%
1,000 мас.%
3,000% мас.%

(Пример готовой формы 6)

Крем типа вода в масле, содержащий восстановленный кофермент Q₁₀ (содержащий приблизительно 1% окисленного кофермента Q₁₀) следующей композиции, получают известным способом:

Сложный жирнокислотный эфир
сорбитана глицерина6,000 мас.%Микрокристаллический воск
Оливковое масло
Жидкий парафин
Стеарат магния
Пропиленгликоль
Сульфат магния (MgSO₄·7H₂O)
Восстановленный кофермент Q₁₀
Окисленный кофермент Q₁₀
Индометацин
Обессоленная вода1,000 мас.%
3,000 мас.%
18,000 мас.%
1,000 мас.%
3,700 мас.%
0,700 мас.%
0,990 мас.%
0,010 мас.%
1,000 мас.%
До 100,000 мас.%

(Пример готовой формы 7)

Эмульсию типа вода в масле, содержащую восстановленный кофермент Q₁₀ (содержащий приблизительно 1% окисленного кофермента Q₁₀) следующей композиции, получают известным способом:

Сложный жирнокислотный эфир
сорбитана глицерина3,600 мас.%Сложный жирнокислотный эфир
полиоксиэтилена1,400 мас.%Стеариловый спирт
Минеральное масло, GP9
Парабеновая смесь
Сульфат магния (MgSO₄·7H₂O)
Восстановленный кофермент Q₁₀
Окисленный кофермент Q₁₀
Хлорид кальция (CaCl₂)
Витамин Е
Индометацин
Обессоленная вода2,000 мас.%
20,000 мас.%
по требованию
0,700 мас.%
0,990 мас.%
0,010 мас.%
0,85 мас.%
1,000 мас.%
1,000 мас.%% масс.
До 100,000 мас.%

(Пример готовой формы 8)

Лосьон типа вода в масле, содержащий восстановленный кофермент Q₁₀ (содержащий приблизительно 1% окисленного кофермента Q₁₀) следующей композиции, получают известным способом:

Сложный жирнокислотный эфир
сорбитана глицерина1,300 мас.%Сложный жирнокислотный эфир
полиоксиэтилена3,700 мас.%Нейтральное масло
Жидкий парафин, GP9
Пропиленгликоль
Сульфат магния (MgSO₄·7H₂O)
Липоевая кислота
Восстановленный кофермент Q₁₀
Окисленный кофермент Q₁₀
Аскорбиновая кислота
Обессоленная вода6,000 мас.%
14,000 мас.%
3,800 мас.%
0,700 мас.%
1,500 мас.%
0,990 мас.%
0,010 мас.%
2,000 мас.%
До 100,000 мас.%

Промышленная применимость

Поскольку средство снижения утомляемости в настоящем изобретении имеет состав, как описано выше, оно демонстрирует превосходный эффект предотвращения и снижения утомляемости, а также мышечного утомления. Средство обладает сильным эффектом снижения утомляемости, особенно для лиц среднего и старшего возраста, и, таким образом, оно обладает превосходным эффектом поддержания физической формы и здоровья для лиц среднего и старшего возраста.

Изобретение относится к области медицины, фармакологи и касается применения восстановленного или окисленного и восстановленного кофермента Q₁₀ для изготовления средства для снижения утомляемости, способа увеличения уровня кофермента Q₁₀ в мышцах животных, способа увеличения уровня восстановленного кофермента Q₁₀ в мышцах животных и способа снижения утомляемости у позвоночных посредством использования средства для снижения утомляемости, содержащего восстановленный или окисленный и восстановленный кофермент Q₁₀. Изобретение обеспечивает более эффективное снижение утомляемости. 14 н.п. ф-лы, 4 табл.

1. Применение восстановленного кофермента Q₁₀ формулы (1),

для изготовления лекарственного средства для снижения утомляемости.

для изготовления лекарственного средства для снижения утомляемости.