СПОСОБ ЦИТОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ПОСЛЕРОДОВОЙ ПАТОЛОГИИ У КОРОВ Российский патент 2007 года по МПК G01N33/48 A61B10/00 A01K67/02 

Изобретение относится к ветеринарной медицине, а именно к ветеринарному акушерству и гинекологии.

Известен способ цитологической диагностики послеродовой патологии (по А.Н.Вяткину, 1974). Для выполнения этого способа осуществляют следующие манипуляции:

1) берут мазок из шейки матки;

2) окрашивают его по Паппенгейму;

3) подсчитывают количество нейтрофилов, характер и степень их дегенеративных изменений;

4) по количеству и состоянию нейтрофилов оценивают состояние полового аппарата.

Данный метод выбираем за прототип.

Но у него существуют серьезные недостатки, заключающиеся в том, что:

1) мазок берется из шейки матки, что делает исследование трудоемким, требует дополнительного инструментария, навыков ветеринарного специалиста;

2) материал для исследования можно взять не ранее 6-8 суток после родов, т.к. до этого срока забор материала невозможен из-за болезненности исследования и высокой вероятности диагностической ошибки;

3) мазок окрашивают по методу Паппенгейма, что ограничивает использование метода в связи с дороговизной реактивов для его выполнения;

Задачей изобретения является разработка более дешевого и простого в исполнении способа диагностики, позволяющего прогнозировать и выявлять послеродовую патологию в более ранние сроки.

Техническим результатом является расширение функциональных возможностей способа, выражающееся в следующем:

1) появление возможности предикции послеродовых осложнений;

2) возможность ранней диагностики и предикции, начиная с первого дня после отела;

3) возможность проводить исследование не только у многорожавших коров, но и у первотелок.

Кроме того, техническим результатом является уменьшение трудоемкости и удешевление способа.

Для решения поставленной задачи разработанный способ цитологической диагностики послеродовой патологии у коров, как и прототип, заключается во взятии мазка из половых путей коровы с последующим его окрашиванием и микроскопическим исследованием клеток, по которым судят о характере течения послеродового периода. В отличие от прототипа, мазок берут из влагалища, окраску производят по Романовскому-Гимзе, а при микроскопическом исследовании считают клетки эпителия влагалища (поверхностные, парабазальные, базальные, дополнительно учитывая состояние их ядер) и по их соотношению определяют состояние репродуктивной системы.

В целом способ осуществляется следующим образом. Материалом для цитологического исследования является влагалищный секрет, который берется с верхней стенки влагалища вращательным движением при помощи ватных палочек, пропитанных стерильным изотоническим раствором хлорида натрия. Полученный материал наносят на обезжиренное предметное стекло, высушивают на воздухе в течение 10-15 мин, затем фиксируют в 96% этиловом спирте 30 мин. Окраску проводят по методу Романовского-Гимзы. В одном мазке подсчитывают 100 эпителиальных клеток, по 25 клеток в 4 полях зрения.

Цитологический состав влагалищной слизи определяют по двум показателям в процентном соотношении:

1) по количеству поверхностных, парабазальных и базальных эпителиальных клеток;

2) по состоянию ядер вышеуказанных клеток.

В качестве конкретного примера приведем результаты исследований предлагаемым способом у 175 голов крупного рогатого скота черно-пестрой породы в возрасте 3-6 лет, весом 350-450 кг со средней молочной продуктивностью 3500 кг, разделенных на 3 группы по характеру течения послеродового периода (1 группа с нормальным течением послеродового периода - 50 голов, 2 группа с субинволюцией матки - 64 головы, 3 группа с послеродовым эндометритом - 61 голова).

Результаты исследований приведены в виде диаграмм на прилагаемой фигуре. На ней показано процентное соотношение эпителиальных клеток в 3 группах: первая диаграмма отражает соотношение поверхностных эпителиальных клеток, вторая - парабазальных клеток и третья - базальных эпителиальных клеток. Черным цветом отмечены столбцы, отражающие соотношение клеток при субинволюции матки, темно-серым цветом - при нормальном течении послеродового периода и белым - при послеродовом эндометрите.

Как видно на чертеже, процентное соотношение эпителиальных клеток в 3 группах различно.

Так, поверхностных клеток в группе с нормальным течением послеродового периода будет 49-60% от общего числа эпителиальных клеток, в группе с субинволюцией матки - 15-20%, а при эндометрите - 0,5-11%.

Парабазальных клеток при нормальном течении в мазках насчитывается 28-38% от общего числа клеток эпителия влагалища, при субинволюции матки их будет 53-63%, а при послеродовом эндометрите - 40-55%.

Относительно базальных клеток картина следующая: при физиологическом течении послеродового периода их численность составляет не более 11% от общего числа эпителиальных клеток; при субинволюции матки - 15%, а при послеродовом эндометрите еще больше - 20-22%. Различия между клетками достоверны во всех группах.

Таким образом, при нормальном течении послеродового периода в мазках эпителия влагалища у коров превалируют поверхностные клетки.

При субинволюции матки больший процент составляют парабазальные эпителиальные, а численность поверхностных и базальных клеток практически равна.

При послеродовом эндометрите картина мазка другая: количество парабазальных клеток превалирует над другими видами эпителиальных клеток, но есть существенная разница между поверхностными и базальными клетками (0,5-11% против 20-22%).

КлеткиНормаСубинволюцияЭндометритПоверхностные49-60%15-20%0,5-11%Парабазальные28-38%53-63%40-55%Базальные11% (не более)15%20-22%

Дополнительным диагностическим показателем, позволяющим предсказывать течение послеродового периода уже в первый день после отела, является состояние ядер вышеперечисленных клеток влагалищного эпителия.

Так, при нормальном течении послеродового периода в первый день после родов количество парабазальных эпителиальных клеток с нормальным ядром будет составлять 33,8% от общего числа эпителиальных клеток, базальных клеток с ядром в состоянии лизиса в мазке не отмечается.

О возможности замедления процессов инволюции матки свидетельствует наличие в мазках уже в первый день послеродового периода поверхностных клеток с нормальным ядром, их численность составляет 7-10% от общего числа эпителиальных клеток, поверхностных клеток с ядром в состоянии пикноза - 0,5-2%, поверхностных клеток с ядром в состоянии рексиса - 2-8%, парабазальных клеток с нормальным ядром - 12-17%, парабазальных клеток с ядром в состоянии рексиса - 7,5%.

При эндометрите в первый день после родов регистрируются парабазальные клетки с ядром в состоянии лизиса - 10% и 2% базальных клеток с ядром в состоянии рексиса от общего числа эпителиальных клеток.

НормаСубинволюцияЭндометритПарабазальные кл. с нормальным ядром - 33,8%Поверхностн. кл. с нормальным ядром - 7-10%Парабазальные клетки с ядром в состоянии лизиса -10%Базальные клетки с ядром в состоянии лизиса - нетПоверхностн. кл. с ядром в состоянии пикноза - 0,5-2%Базальные клетки с ядром в состоянии рексиса - 2% Поверхностн. кл. с ядром в состоянии рексиса - 2-8%  Парабазальные клетки с нормальным ядром - 12-17%  Парабазальные клетки с ядром в состоянии рексиса - 7,5% 

Таким образом, было установлено следующее:

различия цитологического состава влагалищной слизи в трех группах по соотношению эпителиальных клеток и по состоянию ядер этих клеток регистрируются уже в первый день после родов, что и дает возможность предсказывать послеродовые осложнения у коров уже в первый день после отела. Техника выполнения способа, т.е. взятие вагинального, а не цервикального мазка снижает трудоемкость способа и позволяет получать материал не только у многорожавших животных, но и у первотелок. Исследование эпителиальных клеток влагалища более просто в исполнении, более дешево и более информативно, нежели исследование нейтрофильных лейкоцитов в способе, принятом за прототип.

Очевидно, что исследование состава влагалищной слизи может служить ценным способом, позволяющим прогнозировать течение послеродового периода и дифференцированно диагностировать его осложнения.

Изобретение относится к ветеринарной медицине. Способ включает взятие мазка из влагалища коровы с последующим его окрашиванием и микроскопическим исследованием клеток. При микроскопическом исследовании считают клетки эпителия влагалища (поверхностные, парабазальные и базальные). При превалирующем количестве поверхностных клеток (49-60%) диагностируют нормальное течение послеродового периода, при преобладании парабазальных эпителиальных клеток диагностируют осложнение послеродового периода, причем если количество поверхностных и базальных клеток при этом одинаково или отличается незначительно (15-20% против 15% соответственно), то диагностируют субинволюцию матки, а при существенной разнице количества поверхностных и базальных клеток (0,5-11% против 20-22%) диагностируют острый послеродовой эндометрит. Способ позволяет прогнозировать и выявлять послеродовую патологию в ранние сроки. 1 з.п. ф-лы, 2 табл., 1 ил.

1. Способ цитологической диагностики послеродовой патологии у коров, включающий взятие мазка из половых путей коровы с последующим его окрашиванием и микроскопическим исследованием клеток, отличающийся тем, что мазок берут из влагалища, а при микроскопическом исследовании считают клетки эпителия влагалища (поверхностные, парабазальные и базальные), и при превалирующем количестве поверхностных клеток (49-60%) диагностируют нормальное течение послеродового периода, при преобладании парабазальных эпителиальных клеток диагностируют осложнение послеродового периода, причем, если количество поверхностных и базальных клеток при этом одинаково или отличается незначительно (15-20% против 15% соответственно), то диагностируют субинволюцию матки, а при существенной разнице количества поверхностных и базальных клеток (0,5-11% против 20-22%) диагностируют острый послеродовой эндометрит.2. Способ цитологической диагностики послеродовой патологии у коров по п.1, отличающийся тем, что окрашивание мазка производят по Романовскому-Гимзе и, дополнительно исследуют состояние ядер вышеперечисленных клеток влагалищного эпителия, причем при количестве парабазальных клеток с нормальным ядром 33,8% от общего числа клеток и отсутствием базальных клеток с ядром в состоянии лизиса диагностируют нормальное течение послеродового процесса, при количестве поверхностных клеток с нормальным ядром 7-10%, поверхностных клеток с ядром в состоянии пикноза 0,5-2%, поверхностных клеток с ядром в состоянии рексиса 2-8%, парабазальных клеток с нормальным ядром 12-17%, и парабазальных клеток с ядром в состоянии рексиса 7,5% диагностируют субинволюцию матки, а при количестве парабазальных клеток с ядром в состоянии лизиса 10%, и базальных клеток с ядром в состоянии рексиса 2% диагностируют острый эндометрит.