СПОСОБ СКРИНИНГ-ДИАГНОСТИКИ ФИБРОЗА ПЕЧЕНИ ПО САЛИВАРНЫМ БИОХИМИЧЕСКИМ КРИТЕРИЯМ Российский патент 2007 года по МПК G01N33/84 G01N33/68 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в гастроэнтерологии для ранней диагностики фибротических процессов, развивающихся на фоне хронических заболеваний печени (ХЗП) различной этиологии.

Актуальной проблемой гастроэнтерологии является повышение эффективности ранней диагностики фибротических изменений печени при ее хронической патологии, что обусловлено высокой распространенностью, ростом заболеваемости, смертности и увеличением экономических затрат на лечение цирроза печени и его осложнений, а также на трансплантацию печени во всем мире. Основными формами ХЗП являются алкогольная болезнь печени, неалкогольный стеатогепатит и хронический гепатит С. Как известно, терапия цирроза печени (ЦП), который развивается в финальной стадии данных заболеваний, зачастую оказывается малоэффективной. Однако на начальных этапах (фиброза) на этот процесс еще можно воздействовать, приостановить его. Отсюда следует важность раннего выявления, оценки динамики и (при возможности) устранения пускового фактора фиброгенеза.

До недавнего времени биопсия печени общепризнанно считалась "золотым" стандартом в оценке фиброза. Однако данный метод в силу так называемых "ошибок попадания" может давать ложное представление о характере изменений в печени. Кроме того, всегда сохраняется риск развития тяжелых осложнений этой инвазивной диагностической процедуры. (Массимо Пинцани (Флоренция, Италия). Эволюция фиброза печени: от гепатита к циррозу. // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. - 2002 г. - №5.)

Новый метод оценки фиброза - измерение в системной циркуляции его сывороточных маркеров, в частности компонентов внутриклеточного матрикса (ВКМ) (Галимова С.Ф., Надинская М.Ю., Маевская М.В., Ивашкин В.Т. Новые данные о диагностике и течении фиброза печени. // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. - 2001 г. - №4. - стр.22-28) - также имеет ограниченное применение, что связано с достаточно низкой специфичностью большинства показателей для ткани печени и высокой стоимостью их определения. Данный метод был взят нами в качестве прототипа. Кроме того, имеются данные об использовании в качестве сывороточных маркеров фиброза рутинных биохимических показателей крови, косвенно свидетельствующих об изменении различных функций печени, в частности белоксинтетической. Одним из них является сывороточное железо. (Бычкова В.И., Смирнов Б.М., Лесничук Л.В. Биохимические показатели соединительной ткани в диагностике начальной стадии фиброза печени. // Клиническая лабораторная диагностика. - 2003 г. - №1. - стр.10-14.)

Исследование слюны имеет ряд преимуществ по сравнению с рутинными методами лабораторной диагностики с использованием крови, взятой из вены или из пальца. Это, прежде всего простота и удобство сбора материала, неинвазивность и безболезненность этой процедуры, отсутствие риска инфицирования, возможность многократного получения проб. (Денисов А.Б. Слюнные железы. Слюна. М., 2003 г.)

Целью изобретения является разработка экономичного и неинвазивного способа ранней диагностики фиброза печени, пригодного для проведения широких скрининговых исследований.

Цель достигается определением содержания железа, гамаглутамилтранспептидазы (ГГТП) и орнитиндекарбоксилазы (ОДК) в слюне больных ХЗП с подтвержденным посредством проведения биопсии печени фиброзом и условно здоровых лиц. Железо было выбрано нами как вероятный показатель изменения белоксинтетической функции печени при наличии в ней фибротического процесса. В печени происходит синтез трансферрина - белка, участвующего в транспорте железа. ГГТП является маркером холестатических и паренхиматозных поражений печени. Повышение ее уровня в средах организма отчасти может быть связано с индукцией активности микросомальных ферментов. (Ш.Шерлок, Дж.Дули. Заболевания печени и желчных путей. // М.: "ГЭОТАР-МЕД", 2002 г.) ОДК - фермент, участвующий в образовании биогенных полиаминов, увеличение его активности является одним из наиболее ранних событий, происходящих при переходе клеток от состояния покоя к активной пролиферации. (Колпащиков И.Е., Шамин Г.А., Лак Г.А., Бейлин С.Б. Орнитиндекарбоксилаза в созревании, регенерации и адаптации кишечника. // Горький, 1987 г.)

Способ диагностики фиброза при ХЗП заключается в том, что комплексно используют количественные лабораторные критерии формирования фиброза (содержание железа, ГГТП и ОДК в слюне) у условно здоровых лиц в скрининге, что существенно отличается от определения показателей фиброза в крови.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом. У больного ХЗП или условно здорового лица утром натощак и до чистки зубов, после предварительного ополаскивания полости рта водой собирают слюну в конусообразную пробирку. В слюне определяют концентрацию железа, ГГТП и ОДК и сравнивают с показателями, рассчитанными на основе сравнения двух выборок (больных ХЗП с фиброзом и условно здоровых) с использованием формулы Байеса и последовательного анализа Вальда. (Е.В.Гублер, 1978 г., В.И.Бройтман, 1991 г.)

При сочетанном увеличении уровня саливарного железа более 1,0 мкм/л, ГГТП более 0,2 мккат/л, ОДК более 0,05 нкат/мл у обследуемого в скрининге с вероятностью 95% верно предположение о наличии у него фиброза печени.

Диагностическая эффективность предлагаемого способа была изучена у 20 больных хроническими заболеваниями печени (ХЗП) (хронический гепатит С (ХГС)). Эти пациенты составили группу Ф - больные с фибротическими изменениями печени. Диагноз фиброза печени во всех случаях был подтвержден посредством проведения пункционной биопсии печени (ПБП). Контрольную группу (К) составили 20 условно здоровых лиц.

Содержание железа определяли с помощью спектрофотометрии (атомно-сорбционным методом), для определения уровня ГГТП применялся унифицированный метод с использованием набора реагентов "Витал-Диагностикс СПб", концентрация ОДК определялась на фотоколориметре энзиматическим методом на основе убыли субстрата (орнитина) по методике В.Храмова. (В.А.Храмов. Простой метод определения активности орнитиндекарбоксилазы в смешанной слюне человека. // Клиническая лабораторная диагностика. - 1997 г. - №4. - С.14-15).

Результаты исследования железа, ГГТП и ОДК в слюне больных ХЗП и условно здоровых лиц представлены в табл. Средний уровень саливарного железа в группе Ф составил 1,67±0,34 мкм/л, в контрольной группе - 0,91±0,27 мкм/л. Содержание ГГТП в слюне больных с фиброзом печени равнялось 0,3±0,04 мккат/л, условно здоровых - 0,19±0,03 мккат/л. Концентрация ОДК, по результатам исследования: в слюне группы Ф - 0,12±0,03 нкат/мл, в слюне группы К - 0,04±0,01 нкат/мл.

Таким образом, сочетанное увеличение таких трех показателей, как саливарное железо (более 1,0 мкм/л), ГГТП в слюне (более 0,2 мккат/л), ОДК в слюне (свыше 0,05 нкат/мл) у обследуемого в скрининге, с вероятностью 95% будет свидетельствовать о наличии у него фиброза печени.

ТаблицаСпособ скрининг-диагностики фиброза печени по саливарным биохимическим критериямПоказательФ (n=20)К (n=20)Железо, мкм/л1,67±0,340,91±0,27*ГГТП, мккат/л0,3±0,040,19±0,03**ОДК, нкат/мл0,12±0,030,04±0,01*Примечание: * - достоверность различия с контрольной группой (по критерию Уилкоксона-Манна-Уитни) р<0,01, ** - достоверность различия с контрольной группой (по критерию Уилкоксона-Манна-Уитни) 0,01<р<0,05.

Изобретение относится к области клинической медицины, а именно к гастроэнтерологии, и может быть использовано для скрининг-диагностики фиброза печени. Сущность способа: в слюне обследуемых определяют содержание железа (мкм/л), гамма-глутамилтранспептидазы (мккат/л) и орнитиндекарбоксилазы (нкат/мл). Сочетанное увеличение в слюне железа более 1,0 мкм/л, гамма-глутамилтранспептидазы более 0,2 мккат/л и орнитиндекарбоксилазы свыше 0,05 нкат/мл у обследуемого свидетельствует о наличии фиброза печени. Способ неинвазивный, его использование позволяет диагностировать фиброз печени на ранней стадии, а также дает возможность проведения широких скрининговых исследований. 1 табл.

Способ скрининг-диагностики фиброза печени по саливарным биохимическим критериям, включающий количественное определение в слюне обследуемого железа, гаммаглутамилтранспептидазы и орнитиндекарбоксилазы, отличающийся тем, что при сочетанном увеличении железа более 1,0 мкм/л, гаммаглутамилтранспептидазы более 0,2 мккат/л и орнитиндекарбоксилазы свыше 0,05 нкат/мл у обследуемого диагностируют фиброз печени.