СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ТКАНЕЙ ПАРОДОНТА Российский патент 2008 года по МПК G01N33/68 G01N33/52 

Изобретение относится к области медицины, а именно к стоматологии, и может быть использовано для диагностики воспалительных заболеваний тканей пародонта.

При диагностике и лечении воспалительных заболеваний пародонта очень важной является объективная оценка степени тяжести заболевания. Не менее актуальной является проблема точного биохимического контроля эффективности лечения и прогноза течения заболевания.

Известен способ диагностики пародонтита с использованием определения в десневой крови пациента наличия R-белка [Патент РФ № 2061961, G01N 33/68, 1996].

Данный метод основан на том, что он использует в качестве диагностического критерия повышенные концентрации в капиллярной крови десны R-белка - специфического маркера воспаления.

Этот способ позволяет определить наличие воспаления в пародонте. Однако он недостаточно точен и чувствителен на ранних стадиях и при хроническом протекании воспалительного процесса. Кроме того, он является инвазивным и сопряжен с болезненной и трудоемкой процедурой забора крови из десны.

Наиболее близким к предложенному является способ диагностики воспалительных заболевания пародонта (пародонтита) путем биохимического исследования интенсивности образования в смешанной нестимулированной слюне продуктов перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы слюны по интенсивности индуцированной хемилюминесценции на биохемилюминометре БХЛ-06 [Безрукова И.В. Быстропрогрессирующий пародонтит. Этиология. Клиника. Лечение. // Автореф. дисс.... докт. мед. наук. М. 2001].

Особенностью данного способа является то, что он использует в качестве диагностического критерия избыточное накопление продуктов перекисного окисления липидов, являющихся одним из звеньев патогенеза воспалительного процесса, а также снижение активности антиоксидантных систем, сопровождающее исчерпание естественных защитных противовоспалительных механизмов.

Однако его чувствительность недостаточна для выявления воспалительного процесса на ранних стадиях, особенно когда процессы деструкции тканей распространяются преимущественно в мягких тканях десны, еще не затрагивая существенно структуры пародонта, в частности при гингивите, а также при хроническом воспалении пародонта. Кроме того, указанный способ требует использования сложного оборудования и дорогих реагентов, не всегда доступных рядовым биохимическим лабораториям, что удорожает анализ и не позволяет рекомендовать его для широкого применения.

Для решения проблемы своевременного лечения и профилактики заболеваний пародонта необходимо раннее диагностирование и лечение начинающейся патологии пародонта. Настоятельно необходимой остается разработка простых, доступных для любой биохимической лаборатории и желательно неинвазивных методов исследования состояния тканей пародонта и десны.

Техническим результатом данного изобретения является повышение точности диагностики воспалительных заболеваний тканей пародонта с помощью простого и неинвазивного метода исследования.

Технический результат достигается тем, что в способе диагностики воспалительных заболеваний тканей пародонта путем биохимического исследования смешанной нестимулированной слюны отличительной особенностью является то, что при биохимическом исследовании смешанной нестимулированной слюны определяют содержание кальция, фосфора, активность щелочной фосфатазы, общей и тартратрезистентной кислой фосфатазы и диагностируют:

Гингивит при содержании:

Кальция 1-3 ммоль/л

Фосфора не больше 15 ммоль/л

Щелочной фосфатазы не меньше 0,7 мккат/л или общей кислой фосфатазы не меньше 700 нкат/л

Тартратрезистентной кислой фосфатазы не больше 200 нкат/л и не больше 20% от общей кислой фосфатазы

Легкую степень тяжести пародонтита при содержании:

Кальция 1,5-2 ммоль/л

Фосфора больше 10 ммоль/л

Щелочной фосфатазы 0,7-1,2 мккат/л

Общей кислой фосфатазы 700-1500 нкат/л

Тартратрезистентной кислой фосфатазы больше 200 нкат/л или больше 20% общей кислой фосфатазы

Среднетяжелую степень тяжести пародонтита при содержании:

Кальция 1,5-3,0 ммоль/л

Фосфора больше 10 ммоль/л

Щелочной фосфатазы больше 1,2 мккат/л или общей кислой фосфатазы больше 1500 нкат/л

Тартратрезистентной кислой фосфатазы больше 200 нкат/л и больше 20% общей кислой фосфатазы

Показатели считаются соответствующими норме (отсутствие признаков воспаления) при содержании в слюне:

Кальция 1-4 ммоль/л

Фосфора 2,5-10 ммоль/л

Щелочной фосфатазы 0,1-0,7 мккат/л и общей кислой фосфатазы не больше 700 нкат/л

Тартратрезистентной кислой фосфатазы не больше 200 нкат/л и не больше 20% общей кислой фосфатазы

Если показатели не соответствуют ни одному сочетанию диагностических критериев, это указывает на наличие сопутствующей патологии невоспалительного характера, например нарушение минерального обмена, эндокринные заболевания. В этом случае диагностика может проводиться после устранения сопутствующего заболевания.

Забор смешанной нестимулированной слюны изо рта желательно проводить не менее чем через 2 часа после приема пищи. После проведения лечебных манипуляций, сопровождающихся травмой мягких тканей полости рта (кюретаж, лоскутные операции и т.д.) исследование может быть проведено не ранее, чем через 10-14 суток. Диагностика не может проводиться при наличии гнойных процессов в тканях полости рта и воспалительных заболеваний слюнных желез.

Определение общей и тартратрезистентной кислых фосфатаз необходимо провести в день отбора. Щелочную фосфатазу можно определять и в слюне, сохранявшейся в замороженном виде до 2-3 месяцев, но только после однократного оттаивания. Определение кальция и фосфора можно проводить в слюне, сохранявшейся несколько месяцев в замороженном виде в герметически закрытой таре, даже и после многократного замораживания и оттаивания.

Определение кальция и фосфора можно проводить любым унифицированным методом, в частности кальция - с глиоксаль-бис-2-оксианилином, с арсеназо III; фосфора - методом с молибдат-ванадатом, с молибдатом.

Активность щелочной фосфатазы рекомендуется определять по скорости гидролиза п-нитрофенилфосфата в N-метил-D-глюкаминовом буфере (например, наборами реактивов фирмы ЛАХЕМА, Чехословакия).

Активность общей и тартратрезистентной кислых фосфатаз рекомендуется определять по скорости гидролиза п-нитрофенилфосфата в цитратном буфере (например, наборами реактивов фирмы ЛАХЕМА, Чехословакия).

Предлагаемый метод неинвазивен, прост, не требует дорогих реактивов, сложного оборудования и доступен для любой биохимической лаборатории.

Пример 1.

Пациент В., 1979 г.р. обратился в отделение профилактики ЦНИИС для проведения отбеливания зубов. Клиническим обследованием установлено отсутствие патологии тканей десны и пародонта. Поскольку патология пародонта является противопоказанием для отбеливания зубов, пациенту было предложено провести дополнительно биохимическое исследование слюны.

Кальций определяют методом с арсеназо III, наборами реактивов фирмы BioSystems (Испания).

Состав реагента: арсеназо III 0,2 ммоль/л, имидазол 75 ммоль/л.

Эталонный раствор: кальций 2,5 моль/л.

Отмерить (мл)ПробаРаствор сравненияКонтрольный растворПроба0,015--Эталонный раствор-0,015-Вода--0,015Реагент1,001,001,00

Через 2-15 мин после смешения пробы с реагентом определяют оптическую плотность раствора пробы при 650 нм против контрольного раствора (А_пр). Одновременно определяют оптическую плотность раствора сравнения против контрольного раствора (А_ср).

Концентрация кальция в пробе, ммоль/л:

Х=2,5×А_пр/А_ср

А_пр=0,2357; А_ср=0,4572.

Х=2,5×0,2357/0,4572=1,289 ммоль/л.

Фосфор определяют методом с молибдат-ванадатом, наборами реактивов фирмы ЛАХЕМА.

Реактивы:

1. Эталонный раствор: водный раствор дигидрофосфата калия, 5 ммоль/л;

2. Раствор 1: водный раствор трихлоруксусной кислоты, 0,62 моль/л;

3. Раствор 2: аммония ванадат 1 ммоль/л, аммония молибдат 15 ммоль/л.

Отмерить (мл)ПробаРаствор сравненияКонтрольный растворПроба0,20--Эталонный раствор-0,10-Вода0,600,700,80Раствор 10,800,800,80Перемешивают и через 5 мин центрифугируют в течение 10 мин при 3000 об/минСупернатант0,800,800,80Раствор 21,001,001,00Перемешивают и через 20 мин измеряют оптическую плотность пробы (А_пр) и раствора сравнения (А_ср) против контрольного раствора при длине волны 405 нм в кювете 1,00 см

Концентрация фосфора в пробе, ммоль/л:

Х=2,5×А_пр/А_ср.

А_пр=0,3558; А_ср=0,1508.

Х=2,5×0,3558/0,1508=5,90 ммоль/л.

Щелочную фосфатазу определяют по скорости гидролиза п-нитрофенилфосфата в N-метил-D-глюкаминовом буфере.

Реактивы:

1. Субстрат: водный раствор п-нитрофенилфосфата динатриевой соли 92 ммоль/л;

2. Буфер: 0,426 моль/л N-метил-D-глюкаминовый буфер pH 10,1 (37°С).

К 1,00 мл буфера добавляют 0,040 мл пробы, термостатируют при 37°С 2 мин, добавляют 0,20 мл субстрата и измеряют скорость нарастания оптической плотности ΔА/мин при 37°С в интервале 60-240 с после добавления субстрата при длине волны 405 нм в кювете 1,00 см.

Активность щелочной фосфатазы, мккат/л:

Х=15,5432(ΔА/мин)

ΔА/мин=0,00938;

Х=15,5432×0,00938=0,1458 мккат/л.

Кислую фосфатазу общую и тартратрезистентную определяют по скорости гидролиза п-нитрофенилфосфата в цитратном буфере

Реактивы:

1. Раствор 1: нитратный буфер, pH 4,95, 0,05 моль/л; п-нитрофенилфосфата динатриевая соль, 5,5 ммоль/л

2. Раствор 2: калий-натрий тартрат, 0,5 ммоль/л

3. Раствор 3: п-нитрофенол, 0,54 моль/л в этаноле

4. Ингибитор: трилон Б (комплексен III) 0,03 моль/л, натрия гидроксид 0,1 моль/л

Отмерить (мл)Проба 1Проба 2Контрольный растворСтандартРаствор 10,500,500,50-Раствор 2-0,02--Перемешивают, инкубируют 5 мин при 37°С и прибавляютПроба0,050,05--Инкубируют точно 30 мин при 37°С и прибавляютИнгибитор2,002,002,002,00Проба--0,05-Раствор 3---0,05Перемешивают и измеряют оптическую плотность пробы 1 (А₁), пробы 2 (А₂), контрольного раствора (А₃) и стандарта (А₄) против воды при длине волны 405 нм в кювете 1,00 см

Активность кислой фосфатазы общей в пробе, нкат/л:

Активность кислой фосфатазы тартратрезистентной в пробе, нкат/л:

A₁=0,281; А₂=0,184; А₃=0,169; А₄₌0,188.

Результаты исследования слюны:

Кальций: 1,289 ммоль/л

Фосфор: 5,90 ммоль/л

Щелочная фосфатаза: 0,1458 мккат/л

Кислая фосфатаза общая: 179 нкат/л

Кислая фосфатаза тартратрезистентная: 24 нкат/л (14% общей)

Заключение: Показатели в норме, признаки воспаления пародонта и тканей десны отсутствуют. Клинический диагноз соответствует биохимическому.

Пример 2.

Пациентка К., 1980 г.р. обратилась в отделение профилактики ЦНИИС для проведения отбеливания зубов.

Соматический статус: практически здорова (со слов больной).

Результаты клинического обследования: Наличие мягкого зубного налета в области фронтальных зубов нижней челюсти с язычной стороны, мягкого зубного налета в области шеек всех групп зубов. Слизистые десны гиперемированы, отечны, при зондировании десневой борозды наблюдается кровоточивость десен.

На ортопантомограмме изменений нет.

Диагноз клинический: хронический гингивит.

Поскольку патология пародонта является противопоказанием для отбеливания зубов, пациенту было предложено провести дополнительно биохимическое исследование слюны по методике, описанной в примере 1.

Результаты биохимического исследования слюны:

Кальций: 1,302 ммоль/л

Фосфор: 2,84 ммоль/л

Щелочная фосфатаза: 0,7504 мккат/л

Кислая фосфатаза общая: 1301 нкат/л

Кислая фосфатаза тартратрезистентная: 192 нкат/л (15% общей)

Заключение: воспаление без деструкции минерализованных тканей, что является признаком гингивита.

Клинический диагноз соответствует биохимическому.

Пример 3.

Больной Е., 1969 г.р. обратился в отделение пародонтологии ЦНИИС с жалобами на периодически возникающую кровоточивость десен при чистке зубов, неприятный запах изо рта. Соматический статус: практически здоров (со слов больного).

Результаты клинического обследования: Наличие мягкого зубного налета и твердых зубных отложений в области фронтальных зубов нижней челюсти, пигментированного зубного налета в области шеек всех групп зубов.

Глубина пародонтальных карманов 1-2 мм. Кровоточивость при зондировании пародонтальных карманов.

На ортопантомограмме: отсутствие компактной пластинки межзубных перегородок фронтальных зубов, резорбция вершин межзубных перегородок на 1/4 высоты.

Диагноз клинический: хронический генерализованный пародонтит легкой степени тяжести.

Для уточнения диагноза было проведено биохимическое исследование слюны по методике, описанной в примере 1.

Результаты биохимического исследования слюны:

Кальций: 1,825 ммоль/л

Фосфор: 11,03 ммоль/л

Щелочная фосфатаза: 0,8055 мккат/л

Кислая фосфатаза общая: 918 нкат/л

Кислая фосфатазатартратрезистентная: 192 нкат/л (21% общей)

Заключение: воспаление с деструкцией минерализованных тканей, что является признаком пародонтита легкой степени тяжести.

Клинический диагноз соответствует биохимическому.

Пример 4.

Больной К., 1980 г.р. обратился в отделение пародонтологии ЦНИИС с жалобами на периодически возникающую кровоточивость десен при чистке зубов, наличие зубных отложений, болезненность при жевании твердой пищи. Соматический статус: практически здоров (со слов больного).

Результаты клинического обследования: Наличие мягкого зубного налета и твердых зубных отложений в области фронтальных зубов нижней челюсти с язычной стороны, пигментированного зубного налета в области шеек всех групп зубов.

Глубина пародонтальных карманов 3-6 мм. Кровоточивость при зондировании пародонтальных карманов.

На ортопантомограмме: разрушение кортикальной пластинки межзубных перегородок, резорбция вершин межзубных перегородок на 1/2 высоты.

Диагноз клинический: хронический генерализованный пародонтит среднетяжелой степени тяжести.

Для уточнения диагноза было проведено биохимическое исследование слюны по методике, описанной в примере 1.

Результаты биохимического исследования слюны:

Кальций: 1,51 ммоль/л

Фосфор: 10,16 ммоль/л

Щелочная фосфатаза: 1,4397 мккат/л

Кислая фосфатаза общая: 1547 нкат/л

Кислая фосфатаза тартратрезистентная: 322 нкат/л (21% общей)

Заключение: воспаление с деструкцией минерализованных тканей, что является признаком пародонтита средне-тяжелой степени тяжести.

Клинический диагноз соответствует биохимическому.

Пример 5.

Больная Ч., 1954 г.р. обратилась в отделение пародонтологии ЦНИИС с жалобами на периодически возникающую кровоточивость десен при чистке зубов, подвижность отдельных зубов. Соматический статус: практически здорова (со слов больной).

Результаты клинического обследования: Наличие мягкого зубного налета и твердых зубных отложений в области фронтальных зубов нижней челюсти с язычной стороны, пигментированного зубного налета в области шеек всех групп зубов.

Тремы:

Диастема:

Глубина пародонтальных карманов 5-8 мм. Кровоточивость при зондировании пародонтальных карманов.

Подвижность I степени:

На ортопантомограмме: разрушение кортикальной пластинки межзубных перегородок, резорбция вершин межзубных перегородок на 1/2-2/3 высоты.

Диагноз клинический: хронический генерализованный пародонтит среднетяжелой степени тяжести.

Для уточнения диагноза было проведено биохимическое исследование слюны по методике, описанной в примере 1.

Результаты биохимического исследования слюны:

Кальций: 2,175 ммоль/л

Фосфор: 11,41 ммоль/л

Щелочная фосфатаза: 1,5106 мккат/л

Кислая фосфатаза общая: 1589 нкат/л

Кислая фосфатаза тартратрезистентная: 852 нкат/л (54% общей)

Заключение: воспаление с деструкцией минерализованных тканей, что является признаком пародонтита среднетяжелой степени тяжести.

Клинический диагноз соответствует биохимическому.

Предложенный способ диагностики воспалительных заболеваний тканей пародонта позволяет выявить:

- наличие воспалительного процесса в тканях полости рта и оценить его тяжесть и

- наличие поражения тканей пародонта и оценить его тяжесть.

Предложенный способ прост, не требует специальной и дорогостоящей аппаратуры, дает воспроизводимые результаты.

Изобретение относится к области медицины, а именно к стоматологии, и может быть использовано для диагностики воспалительных заболеваний тканей пародонта. Сущность способа: при биохимическом исследовании смешанной нестимулированной слюны определяют содержание кальция, фосфора, активность щелочной фосфатазы, общей и тартратрезистентной кислой фосфатазы. В зависимости от совокупности их значений диагностируют гингивит или пародонтит легкой или среднетяжелой степени тяжести. Использование способа позволяет повысить точность диагностики гингивита и/или степени тяжести пародонтита, а также прогноза течения заболевания с помощью простого и неинвазивного метода исследования.

Способ диагностики воспалительных заболеваний тканей пародонта путем биохимического исследования смешанной нестимулированной слюны, отличающийся тем, что при биохимическом исследовании смешанной нестимулированной слюны определяют содержание кальция, фосфора, активность щелочной фосфатазы, общей и тартратрезистентной кислой фосфатазы и диагностируют:

гингивит при содержании:

кальция 1-3 ммоль/л;

фосфора не больше 15 ммоль/л;

щелочной фосфатазы не меньше 0,7 мккат/л или общей кислой фосфатазы не меньше 700 нкат/л;

тартратрезистентной кислой фосфатазы не больше 200 нкат/л и не больше 20% от общей кислой фосфатазы,

легкую степень тяжести пародонтита при содержании:

кальция 1,5-2 ммоль/л;

фосфора больше 10 ммоль/л;

щелочной фосфатазы 0,7-1,2 мккат/л;

общей кислой фосфатазы 700-1500 нкат/л;

тартратрезистентной кислой фосфатазы больше 200 нкат/л или больше 20% общей кислой фосфатазы,

среднетяжелую степень тяжести пародонтита при содержании:

кальция 1,5-3,0 ммоль/л;

фосфора больше 10 ммоль/л;

щелочной фосфатазы больше 1,2 мккат/л или общей кислой фосфатазы больше 1500 нкат/л;

тартратрезистентной кислой фосфатазы больше 200 нкат/л и больше 20% общей кислой фосфатазы.