СПОСОБ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ ХРОНИЧЕСКОЙ ГЕРПЕТИЧЕСКОЙ ИНФЕКЦИИ Российский патент 2008 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к лабораторной диагностике и может быть использовано для оценки эффективности лечения хронической рецидивирующей герпетической инфекции.

Известен способ оценки эффективности лечения хронической герпетической инфекции на стадии обострения, включающий определение титра специфических противогерпетических IgG-антител в сыворотке крови больных до и после лечения; при титрах специфических противогерпетических IgG-антител 1:100-1:200 делают заключение о наступлении фазы ремиссии и эффективном лечении больного, при титрах специфических противогерпетических IgG-антител свыше 1:300 - об отсутствии эффекта лечения (1). Недостатком известного способа является невозможность его использования при лечении герпетической инфекции на стадии ремиссии. Кроме того, известный способ не обладает достаточной точностью оценки, т.к. ограничен единственным показателем иммунной системы (титр специфических противогерпетических IgG-антител), который не отражает в полной мере особенности иммунитета при персистирующих (латентных) вирусных инфекциях. Между тем, герпетическая инфекция характеризуется так называемой «латентностью», то есть сохранением вируса в периоде ремиссии в ганглиях нервной системы или клетках эпителия, что подтверждается выявлением определенного уровня противогерпетических антител, превышающего контрольные значения более чем в 10 раз (2).

Наиболее близким к заявленному является способ оценки эффективности лечения хронической герпетической инфекции, включающий оценку до и после лечения фагоцитарной активности нейтрофилов, пролиферации лимфоцитов, индуцированной ФГА; количества цитотоксических лимфоцитов (CD8⁺), спонтанного образования активных форм кислорода, содержания в сыворотке крови общих (неспецифических) иммуноглобулинов (Ig) M, G, Е, а также содержания иммуноглобулина A (IgA), интерферона γ (IFN-γ). При нарастании способности нейтрофилов поглощать Staphylococcus aureus, снижении спонтанного образования активных форм кислорода, пролиферации лимфоцитов, уменьшении количества цитотоксических лимфоцитов (CD8⁺), снижении в сыворотке крови содержания общих иммуноглобулинов IgM, IgG, IgE и повышении содержания IgA, IFN-γ, делают заключение об эффективном лечении пациента (3). Недостатком известного способа является его субъективность, обусловленная отсутствием четких количественных критериев изменения величины существенных признаков, необходимых для заключения об эффективности лечения. Кроме этого, известный способ используют при лечении в периоде обострения заболевания, и отсутствуют какие-либо данные о возможности применения его в периоде клинической ремиссии хронической герпетической инфекции.

Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является снижение субъективности оценки, обеспечение возможности оценки эффективности лечения хронической герпетической инфекции на стадии ремиссии.

Решение поставленной задачи достигается тем, что у пациентов до и через 7, 14, 21 дней после окончания лечения на стадии ремиссии определяют в сыворотке крови содержание специфических IgG-антител (антител класса IgG) к вирусу простого герпеса I и II типа, степень их авидности, содержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК); при повышении через 7 дней содержания специфических IgG-антител не менее чем на 27%, через 14 дней - не менее чем на 33%, через 21 день - не менее чем на 60% по отношению к исходному уровню; при повышении степени авидности специфических IgG-антител по отношению к исходному уровню через 7 дней не менее чем на 25%, через 14 дней - не менее чем на 38%; при дальнейшем повышении или отсутствии изменений или снижении степени авидности через 21 день не более чем на 6% по сравнению с предыдущим сроком (через 14 дней); при повышении содержания ЦИК по сравнению с исходной величиной через 7 дней не менее чем на 27%, через 14 дней - не менее чем на 36%, при понижении содержания ЦИК через 21 день не более чем на 23% по сравнению с 14 днем у больных с исходным содержанием ЦИК ≤150 условных единиц либо при снижении по сравнению с исходной величиной содержания ЦИК через 7 дней не более чем на 37%, через 14 дней - не более чем на 43%; через 21 день - при повышении не менее чем на 6% по сравнению с предыдущим сроком (через 14 дней) у больных с исходным содержанием ЦИК>150 условных единиц - делают заключение об эффективном лечении и благоприятном прогнозе течения заболевания. Описание изобретения

Способ оценки эффективности лечения хронической герпетической инфекции включает определение до и через 7, 14, 21 дней после окончания лечения, проведенного на стадии ремиссии, содержания в сыворотке крови специфических IgG-антител к вирусу простого герпеса I и II типа, степени авидности специфических IgG-антител, содержания циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК).

Специфические IgG-антитела к вирусу простого герпеса (HSV) I и II типов в сыворотке крови определяют методом иммуноферментного анализа (ИФА), например, с помощью коммерческих диагностических тест-систем производства ЗАО "Вектор-Бест" (Кольцово, Новосибирская область). Содержание указанных антител выражают в условных единицах (усл.ед.) (условная единица равна единице оптической плотности). Расчетное пограничное значение оптической плотности, превышение которого расценивают как положительная реакция, то есть наличие специфических IgG-антител к вирусу простого герпеса, равно 0,167 усл.ед.

Авидность специфических IgG-антител к вирусу простого герпеса оценивают с помощью метода ИФА, например, на тест-системах «ДС-ИФА-АНТИ-ВПГ1,2-G-Авидность», производитель НПО «Диагностические системы» (г.Нижний Новгород). Степень авидности выражают в условных единицах (усл. ед.), котоорые рассчитывают по формуле, рекомендуемой инструкции производителя. Например, для вышеуказанной диагностической системы условная единица определяется по соотношению оптической плотности (ОН) исследуемого образца в двух реакциях:

Определение циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) проводят методом жидкостной преципитации 4%-м полиэтиленгликолем с молекулярной массой 6000 (ПЭГ-6000). Количество ЦИК выражают в условных единицах оптической плотности (усл.ед.), при этом условная единица оптической плотности определяется путем умножения величины оптической плотности на 1000, а именно: усл.ед.=оптическая плотность (ОП)×1000 (усл. ед.).

В связи с тем что абсолютные значения исследованных показателей могут иметь значительную дисперсию в зависимости от использованных тест-систем, для анализа используют относительные величины изменений значения показателей, выраженные в процентах.

Критерии оценки эффективности лечения по заявленному способу представлены в таблице 1. Повышение содержания специфических IgG-антител в течение всех трех обследований после лечения, а также повышение их авидности в течение всех трех обследований или в течение двух обследований с незначительным снижением значений показателей на 21 день являются благоприятными в плане снижения числа рецидивов и удлинения сроков ремиссии. Эффективность лечения определяется также динамикой циркулирующих иммунных комплексов, которая зависит от их исходного содержания в сыворотке крови.

При повышении через 7 дней содержания специфических IgG-антител не менее чем на 27%, через 14 дней - не менее чем на 33%, через 21 день - не менее чем на 60% по отношению к исходному уровню; при повышении степени авидности специфических IgG-антител по отношению к исходному уровню через 7 дней не менее чем на 25%, через 14 дней - не менее чем на 38%; при повышении, отсутствии изменений или снижении степени авидности не более чем на 6% через 21 день по сравнению с предыдущим сроком; при повышении содержания ЦИК по сравнению с исходной величиной через 7 дней не менее чем на 27%, через 14 дней - не менее чем на 36%, при понижении содержания ЦИК через 21 день не более чем на 23% по сравнению с предыдущей величиной (через 14 дней) у больных с исходным содержанием ЦИК≤150 условных единиц либо при снижении по сравнению с исходной величиной содержания ЦИК через 7 дней не более чем на 37%, через 14 дней - не более чем на 43%; через 21 день - повышении не менее чем на 6% по сравнению с предыдущим сроком (через 14 дней) у больных с исходным содержанием ЦИК>150 условных единиц - делают заключение об эффективном лечении и благоприятном прогнозе течения заболевания.

Перечень чертежей и иных материалов

Таблица 1. Критерии успешного (эффективного) лечения больных хронической герпетической инфекцией на стадии ремиссии.

Таблица 2. Изменение содержания специфических IgG-антител и степени их авидности до и в различные сроки после лечения больных хронической герпетической инфекцией на стадии ремиссии.

Таблица 3. Изменение содержания ЦИК до и в различные сроки после лечения больных хронической герпетической инфекцией на стадии ремиссии.

Примеры конкретного выполнения

Обследованы 52 пациента обоего пола в возрасте от 17 до 52 лет (средний возраст - 38 лет), страдающих хронической рецидивирующей герпетической инфекцией генитальной и орофациальной локализации, обусловленной вирусами герпеса I и II типов. На стадии клинической ремиссии им проведено лечение с помощью препарата эхинацеи (4). Эффективность лечения определяли по заявленному способу. На основании результатов оценки эффективности лечения по заявленному способу пациенты были разделены на 2 группы: основную, в которой лечение признано эффективным, и контрольную, к которой отнесены все остальные пациенты. Характеристика динамики иммунологического статуса в двух группах пациентов до и после лечения представлена в таблицах 2 и 3.

Как видно из таблицы 2, основная и контрольная группа значительно различаются по динамике относительного изменения содержания в сыворотке крови специфических противогерпетических антител класса G (специфических IgG-антител) и степени их авидности. В основной группе среднее содержание специфических IgG-антител на всех сроках после лечения (через 7, 14 и 21 день) возрастает и его суммарный прирост равен 87,5% по отношению к исходному уровню (до лечения), в то время как в контрольной группе он не превышает в среднем 26%. На индивидуальном уровне (здесь и далее - с учетом доверительных интервалов) относительный прирост содержания сывороточных IgG-антител в основной группе составляет через 21 день не менее 60% по отношению к исходному уровню, в контрольной группе - 12%.

Степень авидности специфических IgG-антител также увеличивается через 7 и 14 дней с последующим небольшим снижением через 21 день. Относительный прирост степени авидности в основной группе через 14 дней равен в среднем 45%, но не менее чем 38% на индивидуальном уровне по отношению к исходной величине. Относительное снижение степени авидности специфических IgG-антител в основной группе через 21 день по сравнению с предыдущим сроком (через 14 дней) составляет в среднем 3,9%, но не более 6% на индивидуальном уровне. В контрольной группе изменение средней степени авидности на всех сроках после лечения остается слабовыраженным: прирост через 14 дней составляет лишь 5,7%, снижение через 21 день - 2,8%.

Полученные данные свидетельствуют не только о существенном количественном повышении (не менее чем на 60%) содержания антител к IgG в сыворотке крови после проведенного лечения (через 21 день) у пациентов основной группы, но и о значимом повышении нейтрализующей способности антител (степени авидности) не менее чем на 45% через 14 дней после лечения. В контрольной группе таких изменений не выявлено.

Кроме содержания специфических IgG-антител и степени их авидности, у больных исследовали содержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), образование которых является показателем активности специфического взаимодействия антиген-антитело.

Как видно из таблицы 3, динамика изменения содержания ЦИК у больных в основной и контрольной группе зависит от исходного содержания ЦИК до лечения. В связи с этим в таблице 3 больные основной и контрольной группы разделены на две подгруппы: с исходным содержанием ЦИК, меньшим или равным 150 условных единиц, с одной стороны и более 150 условных единиц - с другой.

При исходном содержании ЦИК ≤150 усл.ед. его содержание в основной группе увеличивается через 7 и 14 дней в среднем на 37,6% и 52,3% соответственно, на индивидуальном уровне - не менее чем на 27% и 36% соответственно. Через 21 день в основной группе отмечено снижение содержания ЦИК в среднем на 13,6%, на индивидуальном уровне - не более чем на 23%.

В контрольной группе изменение среднего содержания ЦИК и его индивидуальные колебания были значительно менее выраженными: прирост через 7 и 14 дней составил в среднем 12,2% и 18,5% соответственно, на индивидуальном уровне - не менее 6%; снижение через 21 день в среднем на 9,2%, на индивидуальном уровне - не более 7%.

Вероятно, такую динамику в основной группе после лечения можно трактовать как активацию специфического взаимодействия антиген-антитело, а затем, по мере элиминации циркулирующих иммунных комплексов и вируса, - как снижение воспалительной реакции.

В том случае, если исходное среднее содержание ЦИК у больных из основной группы превышало 150 усл.ед., через 7 и 14 дней имело место его снижение в среднем на 30,7% и 33,9%, на индивидуальном уровне - не более чем на 37% и 43% соответственно. Через 21 день отмечалось некоторое повышение содержания ЦИК в среднем на 12,4%, а на индивидуальном уровне - не менее чем на 6%.

В контрольной группе изменения были менее выражены: снижение среднего содержания ЦИК составило через 7 и 14 дней 18,3% и 16,1%, на индивидуальном уровне - не более 12% и 4% соответственно. Через 21 день среднее содержание ЦИК увеличилось на 15,7%, на индивидуальном уровне - не менее чем на 2%.

Изначально высокий уровень ЦИК (более 150 условных единиц), по-видимому, обеспечивался неустойчивыми иммунными комплексами, образованными антигенными структурами вируса и низкоавидными антителами. Именно их распад и усиленное выведение из циркуляции макрофагальными клетками, активированными после лечения под воздействием эхинацеи, отражает снижение содержания ЦИК на 7-й и 14-й дни после лечения. В результате же лечения возросла продукция специфических высокоавидных антител, взаимодействие которых с антигенами вируса герпеса проявилось повышением содержания вновь образующихся устойчивых иммунных комплексов, чем и обусловлено повышение содержания ЦИК на 21 день после иммуноактивного воздействия эхинацеей.

Клиническое обследование пациентов основной и контрольной группы в течение 6 месяцев после лечения дало следующие результаты. У пациентов основной группы получены хорошие и отличные клинические результаты лечения в период ремиссии. Для данной группы характерно сокращение частоты рецидивов (более чем вдвое) и увеличение длительности ремиссии - в среднем с 43 дней до 85 дней (то есть также более чем вдвое). Максимальная длительность ремиссии, отмеченная в основной группе, составила 180 дней, то есть весь период наблюдения после проведенного лечения. В случае наступления рецидива заболевания в течение шести месяцев у больных основной группы рецидив протекал в абортивной форме. В этом случае на привычном месте локализации высыпаний отмечалась гиперемия, невыраженный зуд и макуло-папулезные элементы, не переходящие в везикулы и эрозии, что значительно повышало качество жизни пациентов. Подобная клиника свидетельствовала о хорошем клиническом эффекте лечения.

Контрольная группа пациентов характеризовалась отсутствием видимых улучшений или удовлетворительными клиническими результатами лечения. У пациентов с удовлетворительными клиническими результатами лечения частота рецидивов, длительность и тяжесть обострения уменьшились незначительно, длительность ремиссии увеличилась менее чем в два раза.

Таким образом, оценка эффективности лечения по заявленному способу согласуется с результатами клинического обследования больных.

Сравнительный анализ по клиническим признакам заболевания и совокупности существенных признаков заявленного способа позволяет сделать заключение, что группа больных с отличной и хорошей эффективностью лечения (основная группа) и удовлетворительной и низкой эффективностью лечения (контрольная группа) на стадии ремиссии объективно, на основе количественных критериев различаются по всей совокупности существенных признаков заявленного способа.

Список использованных источников

1. Патент РФ на изобретение № 2239840. Способ оценки активности хронической рецидивирующей герпетической инфекции. МПК G01N 33/573, 2004.

2. Обухова O.O., Трунова Л.А., Шваюк А.П., Горбенко О.М., Трунов А.Н. Особенности иммунопатогенеза хронической герпетической инфекции в стадии клинической ремиссии // Сибирский консилиум. - 2006. - № 3. - С.11-14.

3. Рабинович О.Ф., Рабинович И.М., Разживина Н.В. Эффективность применения полиоксидония в комплексном лечении герпетических поражений ротовой полости // Иммунология. - 2005. - № 4. - С.211-214.

4. Обухова О.О., Башур Г.В., Трунова Л.А. Клиническая эффективность препарата эхинацеи при рецидивирующей герпетической инфекции // Журнал клинической и экспериментальной медицины - 2004. - №4. - С.24-28.

Таблица 1.Критерии успешного (эффективного) лечения больных хронической герпетической инфекцией на стадии ремиссииЧисло дней после окончания леченияИзменение содержания специфических IgG-антител (%)Изменение степени авидности специфических IgG-антител (%)Изменение содержания ЦИК (%)При исходном ≤150 усл.ед.При исходном >150 усл.ед.Через 7 дней(+) ≥27%*(+) ≥25%*(+) ≥27%*(-) ≤37%*Через 14 дней(+) ≥33%*(+) ≥38%*(+) ≥36%*(-) ≤43%*Через 21 день(+) ≥60%*(+), 0 или (-) ≤6%**(-) ≤23%**(+) ≥6%**Примечание: (+) - увеличение, (-) - уменьшение;* - по отношению к исходному уровню до начала лечения;** - по отношению к 14 дню после окончания лечения.

Таблица 2.Изменение содержания специфических IgG-антител и степени их авидности до и в различные сроки после лечения больных хронической герпетической инфекцией на стадии ремиссииЧисло дней после окончания леченияСодержание специфических IgG-антител (усл.ед.)Среднее изменение содержания специфических IgG-антител (%)Минимальное повышение содержания специфических IgG-антител (%)Степень авидности специфических IgG-антител (усл.ед)Среднее изменение степени авидности специфических IgG-антител (%)Минимальное повышение (+) или максимальное снижение (-) степени авидности специфических IgG-антител (%)Основная группа (35 чел.)Исходная величина(до лечения)1,19±0,04  66,27±1,59  Через 7 дней1,63±0,07(+) 54,7%(+) 27%88,77±2,16(+) 35,2%(+) 25%Через 14 дней1,68±0,08(+) 56,7%(+) 33%98,04±3,36(+) 45,0%(+) 38%Через 21 день2,02±0,07(+) 87,5%(+) 60%*95,27±3,12(-) 3,9%*(-) 6%*Контрольная группа (17 чел.)Исходная величина(до лечения)1,64±0,05  65,44±0,92  Через 7 дней1,77±0,07(+) 10,1%(+) 1%67,89±0,74(+) 6,6%(+) 0,1%Через 14 дней1,98±0,11(+) 24,6%(+) 9%67,56±0,12(+) 5,7%(-) 0,6%Через 21 день1,99±0,09(+) 26,0%(+) 12%65,94±0,09(-) 2,8%*(-) 2,0%*Примечание: (+) - увеличение, (-) - уменьшение по отношению к исходному уровню до начала лечения;* - по отношению к 14 дню.

Таблица 3.Изменение содержания ЦИК до и в различные сроки после лечения больных хронической герпетической инфекцией на стадии ремиссииКол-во дней после леченияПри исходном содержании ЦИК≤150 усл.ед.При исходном содержании ЦИК>150 усл.ед.Содержание ЦИКСреднее изменение содержания ЦИК (%)Минимальное повышение (+) или максимальное снижение (-) содержания ЦИК (%)Содержание ЦИКСреднее изменение содержания ЦИК (%)Минимальное повышение (+) или максимальное снижение (-) содержания ЦИК (%)Основная группа (35 чел.)Исходная величина (до лечения)95,5±12  171,3±11  Через 7 дней127,9±11(+) 37,6%(+) 27%116,4±7(-) 30,7%(-) 37%Через 14 дней139,6±9(+) 52,3%(+) 36%111,7±8(-) 33,9%(-) 43%Через 21 день114,3±7(-) 13,6%*(-) 23%*115,3±7(+) 12,4% *(+) 6%*Контрольная группа (17 чел.)Исходная величина (до лечения)70±9  174±12  Через 7 дней77±6(+) 12,2%(+) 6%142±11(-) 18,3%(-) 12%Через 14 дней87±9(+) 18,5%(+) 6%146±9(-) 16,1%(-) 4%Через 21 день79±9(-) 9,2%*(-) 7%*169±12(+) 15,7%*(+) 2%*Примечание: (+) - увеличение, (-) - уменьшение по отношению к исходному уровню до начала лечения;* - по отношению к 14 дню после лечения.

Изобретение относится к лабораторной диагностике и может быть использовано для оценки эффективности лечения хронической рецидивирующей герпетической инфекции на стадии ремиссии. Способ включает определение в сыворотке крови IgG-антител до и после лечения, при этом у пациентов до и через 7, 14, 21 дней после окончания лечения на стадии ремиссии определяют в сыворотке крови содержание специфических IgG-антител к вирусу простого герпеса I и II типа, степень их авидности, содержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК); при повышении через 7 дней содержания специфических IgG-антител не менее чем на 27%, через 14 дней - не менее чем на 33%, через 21 день - не менее чем на 60% по отношению к исходному уровню; при повышении степени авидности специфических IgG-антител по отношению к исходному уровню через 7 дней не менее чем на 25%, через 14 дней - не менее чем на 38%; при дальнейшем повышении или отсутствии изменений или снижении степени авидности через 21 день не более чем на 6% по сравнению с предыдущим сроком (через 14 дней); при повышении содержания ЦИК по сравнению с исходной величиной через 7 дней не менее чем на 27%, через 14 дней - не менее чем на 36%, при понижении содержания ЦИК через 21 день не более чем на 23% по сравнению с 14 днем у больных с исходным содержанием ЦИК ≤150 условных единиц либо при снижении по сравнению с исходной величиной содержания ЦИК через 7 дней не более чем на 37%, через 14 дней - не более чем на 43%; через 21 день - при повышении не менее чем на 6% по сравнению с предыдущим сроком (через 14 дней) у больных с исходным содержанием ЦИК>150 условных единиц - делают заключение об эффективном лечении и благоприятном прогнозе течения заболевания. Изобретение обеспечивает повышение объективности оценки и обеспечения возможности использования способа при лечении на стадии ремиссии. 3 табл.

Способ оценки эффективности лечения хронической герпетической инфекции, включающий определение в сыворотке крови IgG-антител до и после лечения, отличающийся тем, что у пациентов до и через 7, 14, 21 дней после окончания лечения на стадии ремиссии определяют в сыворотке крови содержание специфических IgG-антител к вирусу простого герпеса I и II типа, степень их авидности, содержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК); при повышении через 7 дней содержания специфических IgG-антител не менее чем на 27%, через 14 дней - не менее чем на 33%, через 21 день - не менее чем на 60% по отношению к исходному уровню; при повышении степени авидности специфических IgG-антител по отношению к исходному уровню через 7 дней не менее чем на 25%, через 14 дней - не менее чем на 38%; при дальнейшем повышении или отсутствии изменений или снижении степени авидности через 21 день не более чем на 6% по сравнению с предыдущим сроком (через 14 дней); при повышении содержания ЦИК по сравнению с исходной величиной через 7 дней не менее чем на 27%, через 14 дней - не менее чем на 36%, при понижении содержания ЦИК через 21 день не более чем на 23% по сравнению с 14 днем у больных с исходным содержанием ЦИК≤150 условных единиц, либо при снижении по сравнению с исходной величиной содержания ЦИК через 7 дней не более чем на 37%, через 14 дней - не более чем на 43%; через 21 день - при повышении не менее чем на 6% по сравнению с предыдущим сроком (через 14 дней) у больных с исходным содержанием ЦИК>150 условных единиц - делают заключение об эффективном лечении и благоприятном прогнозе течения заболевания.