Изобретение относится к области биотехнологии, а конкретно к получению биологически активных средств, обладающих иммуномоделирующими свойствами, на основе растительного сырья, и может найти применение в качестве пищевой добавки в лечебно-профилактических целях, а также в косметической, фармацевтической промышленности, в ветеринарии, а также в качестве кормовой добавки для животных и птиц.
Согласно приказу №117 Министерства здравоохранения РФ от 15.04.97 г. "О порядке экспертизы и гигиенической сертификации биологически активных добавок к пище": «биологически активными добавками к пище являются концентраты натуральных или идентичных натуральным биологически активных веществ, предназначенных для непосредственного приема или введения в состав пищевых продуктов, с целью обогащения рациона питания человека отдельными биологическими веществами и их комплексами».
Известно, что для нормальной жизнедеятельности, поддержания своего здоровья человеку необходимы белки, углеводы, клетчатка, жиры (необходимое количество), витамины, макро- и микроэлементы, ультрамикроэлементы. Введение в организм человека любого элемента в дозах, превышающих допустимые, является ядом.
Витамины и микроэлементы участвуют в регуляции большинства жизненных процессов и биохимических реакций в нашем организме. Важная роль в обеспечении организма рядом витаминов (К, B12, H) принадлежит микрофлоре пищеварительного тракта. Только немногие витамины, такие как А, D, E, В12, могут накапливаться в организме. Поэтому витаминная недостаточность влечет за собой болезни витаминодефицита.
Дефицит витаминов и микроэлементов может вызвать тяжелые воспалительные и гормональные нарушения.
Так, например, для человека суточная потребность в некоторых макро- и микроэлементах составляет (в мг - данные взяты в среднем на вес 65 кг):
Макроэлементы (суточная потребность более 100 мг)
Na - 1100-3300
K - 1900-5600
Са - 800
Mg - 350
Cl - 1700-5100
P - 800
S - 200
Микроэлементы (суточная потребность менее 100 мг)
Fe - 10
Zn - 15
Mn - 2-5
Cu - 2-3
Cr - 0,05-0,2
Mo - 0,15-0,5
Se - 0,05-0,2
I - 0,15
F - 0,0015-0,004
Витамины:
I. Жирорастворимые (витамины А, D, E, K) в мг:
Витамин А (Ретинол) - 1,0
При недостатке витамина А развивается куринная слепота, наблюдается нарушение роста;
Витамин D (кальциферол) - 0,01
Недостаточность в организме витамина D приводит к нарушению процесса минерализации костной ткани;
Витамин Е (токоферол) - 10
Является эффективным антиоксидантом;
Витамин K (филлохинон) - 0,08
Витамин K принимает участие в карбоксилировании остатков глутаминовой кислоты белков плазмы крови, что важно для нормализации или ускорения процесса свертывания крови.
II. Водорастворимые витамины 1-й и 2-й групп:
1-я группа (в мг)
Витамин B1 (тиамин) - 1,5
При недостатке витамина B1 происходит нарушение нервной системы, а также сердечно-сосудистые заболевания;
Витамин В2 (комплекс витаминов, включающих рибофлавин, фолиевую, никотиновую, пантотеновую кислоты)
рибофлавин - 1,8;
фолиевая кислота - 0,2;
никотиновая кислота - 20;
пантотеновая кислота (витамин В3) - 7.
Рибофлавин выполняет функцию переносчиков водорода, дефицит фолиевой кислоты приводит к анемии, дефицит никотиновой кислоты приводит к расстройствам желудка и депрессии, дефицит витамина В3 встречается редко, поскольку пантотеновая кислота входит в состав многих продуктов.
2-ая группа (в мг):
Витамин В6 (пиродоксаль, пиридоксин, пиридоксамин) - 2,0
Участвует в обмене веществ в организме, активизирует аминокислоты;
Витамин В12 (кобаламины - цианокобаламин) - 0,002
Витаминный дефицит витамина В12 связан главным образом с прекращением секреции внутреннего фактора, следствием чего является пернициозная анемия;
Витамин С (L-аскорбиновая кислота) - 60,0
Является стабилизатором ферментативных систем, кофермент, антиоксидант. Следствием дефицита витамина С является расстройство системы кроветворения, выпадение зубов.
Витамин Н (биотин) - 0,1
Участвует в обмене веществ, является переносчиком карбоксигрупп [Я.Кольман, К.-Г.Рем. Наглядная биохимия. М., «Мир», 2000, с.350-357].
Различного рода патологические нарушения в организме человека и животных вызывают отклонения от нормы параметров физиологического состояния. В этих случаях лечебное воздействие на организм, в том числе профилактическое воздействие, заключается в стабилизации, то есть поддержании в норме указанных параметров либо (при отклонениях их от нормы) в таком воздействии на организм, при котором эти параметры нормализуются.
Нормализацию физиологического состояния организма человека и животных можно осуществлять по двум направлениям: во-первых, путем непосредственного воздействия на патологию и, во-вторых, путем опосредованного воздействия на системы, органы и ткани организма, отвечающие за поддержание в норме параметров гомеостаза.
Введение гормональных препаратов, медиаторов, ростовых факторов, химиотерапия и тому подобные средства обеспечивают непосредственное воздействие на клетки-мишени путем рецепции. Например, при лечении диабета вводят инсулин, восполняющий функциональный недостаток поджелудочной железы; при нарушениях функциональной активности нервной системы вводят нейромедиаторы, способствующие нормализации пороговой чувствительности нейронов и соответственно улучшению передачи нервных импульсов; при нарушениях функциональной активности иммунной системы организма используют иммуномедиаторы, коррелирующие иммунный ответ, и так далее.
Статистика подтверждает массовый и постоянный дефицит в нашей пище жизненно важных белков, витаминов, микроэлементов. Запасов этих веществ в организме нет, откладываться впрок они не могут, поэтому должны содержаться в ежедневном рационе. Большинство же современных рафинированных продуктов питания обделено этими микронутриентами, поэтому необходимы новые виды пищевых продуктов общего и специального назначения с использованием БАД.
Для решения многих проблем, связанных с жизнедеятельностью человека, ученые предлагают вводить в организм человека биологически активные вещества из естественных источников, как в виде отдельных концентратов, так и в виде пищевых продуктов, которые содержат макро- и микроэлементы, витамины, полиненасыщенные жирные кислоты, незаменимые аминокислоты, некоторые моно- и дисахариды, пищевые волокна и др.
Известно биологически активное средство, обладающее иммуномодулирующим действием, для использования в медицине и ветеринарии и способ его получения по патенту RU №2041717, МПК А61K 35/55, 1992 г., в частности, для восстановления функциональной активности органов и тканей - для нормализации физиологического состояния организма. Биологически активное средство в соответствии с изобретением относится к веществам животного происхождения и включает в себя органические соединения, такие как пептиды, аминокислоты, углеводы, липиды и другие органические вещества.
Недостатком известного биологически активного средства является повышенное содержание в нем высокомолекулярных соединений, являющихся иммуногенами, приводящими к появлению побочных реакций, таких как аллергия, гиперчувствительность, а также и способ получения этого средства является мало производителен и весьма трудоемок из-за использования исходного сырья животного происхождения.
Известно биологически активное средство в виде порошка, содержащее: липиды 0,13-0,25 мас.%, аминокислоты и пептиды, по меньшей мере, 0,80 мг/г, холестерин 0,10-0,20 мг/г, фосфор 3,5-9,7 мас.%, кальций 0,15-20,0 мас.%, йод 0,02-0,04 мас.%, магний менее 6800 мкг/г, барий менее 31,30 мкг/г, марганец менее 3,5 мкг/г, олово 0,50 мкг/г, медь 0,5-20 мкг/г, железо 60-240 мкг/г, цинк 60-120 мкг/г, свинец менее 0,35 мкг/г, кадмий менее 0,001 мкг/г, цезий 4-12 мкг/г, стронций 5-10 мкг/г, калий 300-600 мкг/г [RU №2077887, МПК А61K 35/32, 1996 г.]. Данное биологически активное вещество животного происхождения изготовлено из окостенелых оленьих рогов.
К недостаткам вышеуказанного средства следует отнести то, что оно обладает выраженным побочным действием из-за значительного содержания белков и пептидов, многие из которых токсичны, эти препараты обладают гемолитическим и аллергенными свойствами. Большое содержание холестерина, сохраняющееся в готовом продукте, вызывает атеросклероз, липоидную гиперплазию и иные заболевания, связанные с избыточным поступлением в организм холестерина. Способ приготовления этого средства связан с дефицитом исходного сырья, трудностью его многостадийной переработки. В значительной мере на активность экстрактов из пантов влияет технология консервирования последних, методика осуществления экстрагирования. В процессе и консервирования и экстрагирования происходит заметное разрушение ценных составляющих исходного продукта белков, пептидов, элементов крови. Без осуществления консервирования панты могут храниться лишь 6-10 ч после срезки или до 10 дн при температуре -4°С.
Кроме того, общепринятые методы экстрагирования пантов не обеспечивают полного выделения фармакологически ценных веществ, иными словами, все известные препараты из пантов оленей в известной мере обеднены по составу в сравнении с исходным продуктом. Более 90% суммарного содержания ценных и биологически активных компонентов пантов остается в отходах производства препарата в жмыхе.
Также известно биологически активное вещество, используемое как биологически активная добавка к пище на основе пектинсодержащего растительного сырья, представляющая собой растительный пектин-целлюлозный комплекс, дополнительно содержит полученные из костной ткани гидролизат органического матрикса и минеральные вещества при следующем соотношении компонентов, мас.%: кальций 2,8-3,0; фосфор 1,6-1,8; магний 0,20-0,25; калий 0,015-0,025; железо 0,04-0,06; смеси аминокислот 0,5-0,7; белки и олигопептиды 8,0-9,2; пектин-целлюлозный комплекс 42-45; лигнин 7,0-9,0; клетчатка 22,5-24,51; сахароза не более 0,1; влага не более 14; тяжелые металлы не более 0,002.
В способе получения БАД к пище, включающем обработку пектинсодержащего растительного сырья насыщенной известковой водой, промывание последовательно водой, соляной кислотой и деионизированной водой, выдерживание полученной вытяжки в растворе минеральной соли, промывание и высушивание, дополнительно осуществляют обработку костной ткани путем ее кислотной декальцинации, нейтрализацию полученного раствора, отмывание осадка минерала, смешивание его с кислотным гидролизатом декальцинированного органического матрикса до получения аминоациловых солей минералов с последующим высушиванием; после чего продукты обработки костной ткани и растительного сырья смешивают между собой в соотношении 1:10 [RU №2213492, МПК А23L 1/30, 2001 г.].
Данное биологически активное вещество не содержит многие жизненно необходимые микроэлементы, что не достаточно обеспечивает регуляцию обмена веществ и функции иммунокомпетентных органов.
Известно биологически активное вещество "МОС ленкин" [RU №2111680, МПК А23L 1/30, 1996 г.], которое получают из предварительно измельченной горной руды одного геологического региона добычи, содержащей мумиеподобные вещества, характеризующееся следующими признаками: получают биологически активный водный экстракт из предварительно измельченной горной руды, содержащей мумиеподобные вещества, которую экстрагируют водой, экстракт декантируют, фильтруют, очищают от тяжелых элементов, концентрируют и/или сушат, при этом получают вещество со следующим химическим составом, мас.%:
Моно-, ди-, трипептиды - 25,0-30,0,
в том числе аминокислоты коньюгированные, мг аминокислоты на 100 г концентрата:
Аспарагиновая кислота - 200-500
Треонин - 70-150
Серии - 80-140
Глутаминовая кислота - 250-4700
Глицин - 2500-4300
Аланин - 350-1400
Цистин - 100-120
Изолейцин - 30-100
Лейцин - 50-140
Гистидин - 150-270
Лизин - 80-110
Аргинин - 150-570
Валин - 30-40
Метионин - 10-18
Фенилаланин - 40-95
Тирозин - 30-50
Пролин - 1200-1500
γ-аминомаслянная кислота - до 1,0,
том числе аминокислоты свободные, мг аминокислоты на 100 г концентрата:
Аспарагиновая кислота - 10-100
Оксипролин - 70-75
Глутаминовая кислота - 4,5-5,0
Глицин - 1000-4000
Аланин - 20-30
Валин - 10-20
Изолейцин - 2-3
Лейцин - 5-6
Тирозин - 7-8
α-аланин - 10-11
Фенилаланин - 4-5
γ-аминомаслянная кислота - до 1,0
Гистидин - 2-3
Аргинин - до 1,0
Минеральные вещества - 30,0-50,0,
в том числе микро-, макроэлементы, мкг на 100 г концентрата:
Алюминий - 3,0-43,0
Бор - 12,0-190,0
Барий - 10,0-42,0
Бериллий - 0,02-0,20
Кальций - 1600,0-18000,0
Кадмий - 0,1-1,0
Кобальт - 2,0-3,0
Хром - не более 0,001
Медь - 1,0-15,0
Железо - 12,0-240,0
Ртуть - следы
Калий - 1000,0-6300,0
Литий - 0,3-3,0
Магний - 1300,0-22400,0
Марганец - 53,0-58,3
Молибден - 0,02-2,0
Натрий - 2400,0-73000,0
Никель - 0,1-5,0
Фосфор - 20,0-193,0
Олово - следы
Сурьма - следы
Селен - следы
Кремний - 13,0-145,0
Свинец - 0,1-0,8
Стронций - 20,0-162,0
Титан - 0,2-2,5
Сера - 10,0-1000,0
Редуцирующие вещества - 2,0-4,0
Органические кислоты - 2,0-3,0
Летучие и нелетучие ароматические вещества - не более 4,0
Коричневые пигменты, полифенолы, меланоидины - не более 10,0
Известное биологически активное вещество имеет биозащитное свойство, поддерживает состояние высокой физической и умственной работоспособности в экстремальных условиях среды обитания;
- повышает устойчивость пои гипо- и гипертермии, гипобарии, улучшает систему кроветворения, обладает противовоспалительными, регенеративными свойствами;
- проявляет повышение иммуннозащитных свойств ослабленных людей, больных с обширными тяжелыми ожогами, с гнойно-септическими состояниями, больных реанимационных отделений после перенесенных хирургических операций, больных наркоманией и хроническим алкоголизмом;
- проявляет усиление защитных свойств организма от термического, бактериологического, химического, лучевого и др. поражений.
На основе заявленного вещества "МОС ленкин" возможны перспективные разработки нового класса пищевых композиций биозащитного действия, а также составление новых технических решений в биотехнологии, медицине, животноводстве, растениеводстве. Положительное радиопротекторное действие "МОС ленкин" имеет большое практическое значение при радиотерапии, реабилитации больных в постлучевом периоде [RU №2111680, МПК А23L 1/30, 1996 г.].
Хотя данное биологически активное вещество и можно назвать «панацеей», универсальным средством, но оно характеризуется высокой себестоимостью из-за использования избранных мумиесодержащих горных пород и трудоемкостью получения самого средства.
Как показал анализ уровня техники, в последнее время очень активно развивается направление переработки натурального сырья для получения биологически активных комплексов. В качестве натурального сырья используют пептидосодержащее животное сырье (отходы при переработке животного сырья, кровь животных), горную руду, содержащую мумиеобразные вещества, микроорганизмы, овощи и т.п.
Из уровня техники известен биологически активный состав, обладающий свойством биологического стимулятора, представляющий собой белковый гидролизат, полученный путем измельчения исходного сырья (протеиносодержащих отходов продукции животноводства), кислотного гидролиза исходного сырья в 5-20%-ной серной кислоте в течение 5-15 ч при температуре 90-110°С, последующей фильтрации кислотного гидролизата, затем проводят щелочной гидролиз остатка, не растворившегося в кислоте, оксидом кальция при 95-105°С в течение 3-5 час, смешиванием и перемешиванием кислотного и щелочного гидролизатов, коррекции рН (при необходимости), фильтрации и сублимационной сушки конечного раствора (МОС), при этом он имеет следующий состав, мас.%: аминокислоты 65-67, в том числе аминокислоты свободные: аспарагиновая 7,32, треонин 0,69, серин 1,38, глутаминовая 3,88, валин 1,73, пролин 5,22, метионин 0,89, аланин 2,39, лейцин 1,13, изолейцин 0,56, гистидин 22,16, фениланин 0,61, аргинин 1,56, лизин 1,28, жиры 18-20, липиды, не являющиеся жирами, 2-2,5, углеводы 8-11, органические и неорганические соли 0,5-2, макроэлементы 0,2-2, в том числе, мг/г: кальций 5,72, калий 7,13, сера 24,09, фосфор 19,15, хлор 2,0, микроэлементы 0,0005-0,009, в том числе, мкг/г: железо 67,79, цинк 33,22, медь 8,50, марганец 5,35 [RU №2016510, МПК А01Н 4/00, 1992 г.].
Также известна биологически активная добавка к пище, которая может быть получена на основе полученного биологически активного вещества и компонента, выбранного из ряда: углеводы, липиды, витамины, витаминоподобные вещества, минеральные компоненты, алкалоиды, гомеопатические средства, гликозиды, иммуноглобулиновые препараты, лактоферрин, фенольные соединения, органические кислоты, ферменты, терпеноиды, гормоны и гормоноподобные вещества, цитокины, продукты растительного происхождения, продукты микробного происхождения, продукты пчеловодства, продукты животного происхождения, минералосодержащие вещества природного происхождения, детоксиканты, технологические добавки или их смеси, при следующем соотношении компонентов, мас.%: БАВ - 10-90, компонент или смесь компонентов - остальное [RU №2221456, МПК А23L 1/30, 1/16, 1/24, 1/2003 г.]. При этом углеводы выбраны из ряда: глюкоза, фруктоза, лактоза, крахмал, сахароза, мальтоза, дезоксирибоза, растворимые и нерастворимые пищевые волокна, инулин, рибоза.
Липиды выбраны из ряда: триглицериды, фосфолипиды, стеролы, стерины, микробные липиды.
Витамины выбраны из ряда: витамин А, витамин D, витамин Е, витамин К, витамин В1, витамин В2, ниацин, витамин РР, никотиновая кислота, пантотеновая кислота, пиридоксин, фолиевая кислота, фолацин, цианокобаламин, витамин С, а витаминоподобные вещества выбраны из ряда: биотин, биофлавоноиды, оротовая кислота, пангамовая кислота, парааминбензойная кислота ПАБК, холин, инозит, витамин Т, карнитин, витамин U, липоевая кислота, α-липоевая кислота, тиоктовая кислота.
Минеральные компоненты выбраны из ряда: кальций, фосфор, магний, натрий, калий, сера, хлор, железо, медь, селен, йод, хром, цинк, фтор, марганец, кобальт, молибден, кремний, бром, серебро, бор, ванадий, германий.
Алкалоиды выбраны из ряда: производные пирролидина, производные пиперидина, производные пиридина, производные хинолина, производные изохинолина, производные индола, производные имидазола, производные пурина, алкалоиды дитерпеновой структуры, стероидные алкалоиды, гликоалкалоиды, ациклические и пептидные алкалоиды, содержащие серу, производные мочевины.
Гликозиды выбраны из ряда: сапонины, антрагликозиды, горькие гликозиды, тиогликозиды.
Фенольные соединения выбраны из ряда: простые фенолы, фенолоспиеты, фенолокислоты, кумарины, хромоны, лигнаны, флавоноиды, изофлавоноиды, флавононы, флавоны, ротеноиды, дубильные вещества, лигнин, меланины, гуминовые кислоты.
К недостаткам вышеуказанных добавок можно отнести их высокую себестоимость, связанную с переработкой исходного животного сырья и трудностью получения самого биологически активного вещества. Кроме того, способ изготовления биодобавки исключает возможность длительного сохранения витаминов и таких ценных биоактивных добавок как флавонов, флавонолоидов, флавоноидов.
Известен биологически активный состав для получения биологически активных добавок к корму из натурального сырья для сельскохозяйственных животных, которые содержат витамины, макро- и микроэлементы и другие биологически активные вещества (БАВ). Предлагаемый способ осуществляют следующим образом: подготовленное натуральное сырье: овощное, и/или плодовое, и/или ягодное, и/или зерновое, и/или бахчевое, и/или бобовое, и/или водоросли, и/или травы, в том числе и лекарственные, и/или листья, и/или ветви, и/или корни, и/или коренья, и/или скорлупа яиц, и/или раковины моллюсков, и/или панцири, и/или рога диких животных, например северных оленей, предварительно измельчают до размера частиц 10-35 мм, затем его сушат при давлении 0,01-1,033 кг/см2 и 10-150°С до влажности не более 10%, затем высушенную массу охлаждают до температуры от -30 до -180°С по всему объему, например, в среде жидкого азота, после чего охлажденное сырье измельчают до размера частиц 1,0-1000 мкм с последующей упаковкой полученного продукта, при этом перед упаковкой продукт может быть переведен в дозированную форму, например в гранулы.
Данный биологически активный состав содержит белок, витамины (каротин, витамины Е, С, углеводы, моносахариды, полисахариды [RU №2232514, МПК А23K 1/16, 2002 г.].
Предлагаемый способ расширяет арсенал способов получения БАД к корму животных, предназначен для использования в сельском хозяйстве и позволяет получать биологически активные добавки (БАД) к корму из натурального сырья в широком его диапазоне, включая как растительное сырье, так и сырье животного происхождения, при этом получаемые добавки сохраняют до 80%, а в некоторых случаях и до 100% БАВ, содержащихся в исходном сырье, при этом они сохраняют и органолептические свойства исходного сырья, имеют большую активную поверхность при повышенной проницаемости клеточных мембран и, как следствие, высокую биодоступность и сорбционную способность, поэтому они могут успешно применяться в качестве БАД к основному корму.
В настоящее время разработаны биологически активные составы как в России, так и за рубежом для получения биологически активных добавок к пище на основе растительного сырья.
Известны БАД, содержащие соевые фосфолипиды - "Stem Lecithin" (Германия), "Лецитин гранулированный" и "Мослецитин" (Россия), в которых на долю фосфатидилхолина приходится 23%; "Лецитинхолин", содержащий 35% фосфатидилхолина ("Эмрион", США); "Premium lecithin" компании "New Spirit Naturals" и другие [Семенова С.Б. Оздоровительные добавки в питание. Справочник. М., «Дека», 1998, с.256]. Рекомендуемые дозы потребления колеблются в достаточно широком диапазоне (от 1 до 14 г в день и в отдельных случаях вплоть до 35 г).
Известны также БАД, содержащие фосфолипиды в качестве рядового компонента, например БАД "Beauty" (Vision International People Group), представляющая собой витаминный комплекс с растительными и животными компонентами, в которой на долю лецитина (соевый фосфолипидный комплекс) приходится 6%. Или, например, БАД "Тейк Хат" ("Эмрион", США), в которой на долю фосфолипидов приходится 11%, и которая содержит также холин, инозитол, липоевую кислоту, витамины, микроэлементы и хондроитин сульфат.
Известна пищевая добавка, содержащая фосфатидилхолин (ФХ), фосфатидилинозитол (ФИ) и/или фосфатидилэтаноламин (ФЭ), соевый лецитин, один или несколько мукополисахаридов, ниацин и диоксид кремния, кремниевую кислоту и/или органические эфиры кремниевой кислоты [Пат. US 4466958, 1984]. БАД предназначена для улучшения состояния пациентов с сердечно-сосудистыми нарушениями в рекомендуемой дозе 4-32 г ежедневно.
Известны композиции, обеспечивающие эссенциальные жирные кислоты омега-3 и омега-6 и содержащие фосфолипиды, богатые полиненасыщенными жирными кислотами с длинной углеродной цепочкой, выделенные из желтка яиц от кур, содержавшихся на особом рационе, соевый лецитин, один или более мукополисахаридов, которые в разных вариантах могут содержать витамины Е, С и ниацин, а также казеин и приемлемые носители [Пат. US №5869530, 1999]. Композиции могут быть представлены в форме порошка, добавляемого в молоко для младенцев, в форме гранулята, добавляемого в пищу детей и пожилых людей.
Известно, что фосфолипиды являются основным структурным компонентом всех клеточных и субклеточных мембран, обеспечивая их нормальную структуру и тем самым нормальное функционирование клеток [Canty D.J., Zeisel S.H / Nutrition Reviews 52 (10), 327-339]. Сходство растительных фосфолипидов с собственными фосфолипидами человека и обусловленная этим сходством способность соевых фосфолипидов встраиваться в биомембраны клеток и липопротеины крови позволяет растительным, в частности соевым, фосфолипидам предупреждать целый ряд возможных патологических процессов. Экспериментальными и клиническими исследованиями показано, что фосфолипиды играют важную роль в метаболизме организма человека, проявляют мембраностабилизирующее, гепатопротекторное, липотропное, антиатерогенное и целый ряд других свойств. Сами, не обладая антиоксидантными свойствами, фосфолипиды являются синергистами многих антиоксидантов, входящих в систему неферментативной антиоксидантной защиты липидов в организме человека, например токоферолов [Бурлакова Е.Б. и др. Биологические мембраны, РАН, 1998, 15 (2), с.137-166]. Кроме того, они способствуют всасыванию и лучшему усвоению жирорастворимых витаминов A, D, Е и К; убихинонов и ряда других биоактивных веществ.
В качестве сухих экстрактов лекарственных растений композиция содержит один или несколько экстрактов, перечисленных ниже:
- корней шлемника байкальского (Scutellaria baicalensis Georgi)
- травы зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum L.)
- корневища левзеи сафлоровидной (Rhaponticum carthamoides Willd). (Ilijn)
- зеленых листьев и молодых побегов чайного куста L. (Camellia sinensis)
- плодов шиповника (Rosa L.)
- корней и травы одуванчика лекарственного (Taraxacum officinale Wigg)
- корней элеутероккока колючего (Eleutherococcus senticosus Rupr. et Maxim)
- корней и травы эхинацеи пурпурной (Echinacea purpurea L.)
- соплодий хмеля обыкновенного (Humulus lupulus L.)
- травы душицы обыкновенной (Origanum vulgare L.)
- корневища и корней родиолы розовой (Rhodiola rosea L.)
- плодов лимонника китайского (Schizandra chinensis Baill.)
- плодов расторопши пятнистой (Silybum marianum L.)
- соцветий гибискуса или каркаде (Hibiscus sabdariffa)
- флавоноидный комплекс древесины лиственницы сибирской (Larix sibirica Ledeb.)
- листьев аронии черноплодной (Aronia melanocarpa (Elliot.) Michx.)
- надземной части володушки многожильчатой (Bupleurum multinerve DC.)
- корневища лапчатки прямостоячей или калгана (Potentilla erecta L.)
- цветочных корзинок календулы лекарственной (Calendula officinalis L.)
- листьев бадана толстолистного (Bergenia crassifolia (L.) Fritsch)
- листьев и бутонов вахты трехлистной (Menyanthes trifoliata L.)
- листьев подорожника большого (Plantago major L.)
- листьев мяты перечной (Mentha piperita L.)
- слоевища фукуса пузырчатого (Fucus vesiculosus L.)
Биологически активная добавка на основе обозначенной композиции может дополнительно включать кофермент Q10 и/или отдельные витамины или витаминные премиксы, и/или микроэлементы цинк и/или селен и фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества (целлюлоза микрокристаллическая, крахмал, лактоза, магния стеарат, кальция стеарат, кальция карбонат и др.) в количестве 15-22 мас.% [RU №2252029, МПК А61K 35/78, 2003].
Хотя известная добавка и содержит достаточное количество полезных элементов, но все же в этих композициях недостаточное количество микроэлементов, таких как кобальт, ванадий, молибден.
Известная биологически активная добавка к пище представляет собой таблетку и содержит германийорганическое соединение - 2-карбоксиэтил-гермсесквиоксан (КГС), жирорастворимые витамины А и Е, водорастворимые витамины С и В6, сухое обезжиренное молоко, минеральные вещества калий и фосфор в виде калия дигидроортофосфата, фруктозу, кальций стеариновокислый и поливинилпирролидон при определенном соотношении. Изобретение позволяет получить продукт, обладающий повышенной биоантиоксидантной активностью и улучшенной усвояемостью [RU №2262276, МПК А61L 1/30, 2003].
К недостаткам данного биологически активного состава следует отнести трудность ее получения и дефицит германийсодержащих соединений.
Поиск новых нетрадиционных источников для БАД является актуальной задачей. Особенно актуальной задачей является поиск природных (естественных) источников исходного материала, например растительного сырья.
Известен биологически активный состав на основе маточного раствора гумата натрия. Добавка характеризуется следующим составом в мг/л маточного раствора гумата натрия: общий белок - 800,5; общие липиды - 5004; калий - 12,0; натрий - 500,0; кальций - 59,5; железо - 12,5; медь - 0,08; цинк - 0,19; кобальт - 0,02; кадмий - 0,008; марганец - 0,43; азот аммонийный - 20,7; нитраты - 0,02; фосфор общий - 16,0; витамин С - 16,75; триглицериды - 100,59; амилаза - 1200-1300; гумат натрия - 4800; гуминовые кислоты - 3600; йод - 0,12; лизин - 20,0; гистидин - 10,0; аспарагиновая кислота - 10,0; треонин - 10,0; серии - 5,0; глутаминовая кислота - 20,0; пролин - 10,0; лейцин - 10,0; глицин - 2,0; валин - 3,0; метионин - 0,1; изолейцин - 4,0; тирозин - 10,0; фенилаланин - 20,0; аланин - 2,0.
Изобретение позволяет получить биологически активную добавку, которая способна устранить дефицит микро- и макроэлементов, витаминов и аминокислот в организме человека, восстановить нормальный метаболизм, а также очистить организм от токсинов, аллергенов и радионуклидов [RU №2259147, МПК А61K 1/30, 2003].
Хотя вышеуказанный состав и содержит достаточное количество полезных веществ, но вместе с тем имеет и недостатки, а именно недостаточное количество необходимых микроэлементов.
Известна также биологически активная добавка на основе сена люцерны и способ ее получения по патенту RU №2176918, МПК А61K 35/78, 2000 г. Данная добавка выпускается под торговой маркой «Люцевит», имеет регистрационный номер 004836.Р.643.09.2002 г., выпускаемая в соответствии с ТУ 9749-001-04269058-02, имеет экспертное заключение ГИЦ при ГУНИИ РАМН №72/Э1709/И02.
Известная добавка, полученная на основе экстракта люцерны, в соответствии с вышеуказанным ТУ, содержит в 1 грамме сухого продукта:
сапонины, флавоны, изофлавоны, стеролы,
дереваты кумаринов, значительное количество белков, альфа- и бета-каротины, флавониды - 2 мг;
витамины группы:
А - 0,03 мг
B1 -0,2 мг
B2 - 0,25 мг
B5 - 0,67 мг
B6 - 33,33 мг
Е - 1,67 мг
С - 11,6 мг
K - 0,011 мг
гидрокислоты:
лимонная - 0,012 мг
винная - 0,02 мг
яблочная - 0,005 мг
карбоновые (янтарная, щавелевая) и
фенол-карбоновые кислоты,
белки (аминокислоты): валин - 0,35 мг
лейцин - 0,96 мг
метионин - 0,33 мг
аланин - 2,5 мг и др.
углеводы: глюкоза - 0,055 мг
фруктоза - 0,073 мг и др.
макро- и микроэлементы:
Fe - 0,354 мг
Zn - 0,133 мг
Cu - 0,0124 мг
Mn - 0,0325 мг
V - 0,033 мг
Мо - 0,0147 мг
Ti - 0,0147 мг
Мнения авторов изобретения по патенту RU №2176918 (Люцевит) являются ошибочными, например относительно биохимической активности титана.
В книге Б.В.Некрасова «Основы общей химии» - Изд. "Химия", М., 1974, т.1, с.646, п.5. упоминается, что соединение титана не имеет биологической ценности, хотя и присутствует в массе растений.
В обширных монографиях Кольмана Я., Рема К.Г. «Наглядная биохимия» также ничего не сказано о титане, как об облигатном элементе в биохимических процессах.
В известных авторам литературных источниках также ничего не сказано о потребности человека в титане.
Наиболее близким техническим решением к заявляемому - прототипом - как по составу, так и по способу получения, является биологически активный препарат на основе люцерны - «Долюцар», полученный обработкой его экстрагентом, содержащим смесь солей микроэлементов Ва, Sn, Co, Cr, V, Zn, Fe, Se, Mn, Cu при их следующем соотношении, мг/кг растительного сырья:
Ва - 13,0
Sn - 0,6
Со - 4,0
Cr - 1,0
V - 1,8
Zn - 700
Fe - 1030
Se - 1,0
Mn - 22
Cu - 1,0
[RU №2145863, МПК А61K 31/00,1998], который выпускался по ТУ 9199-002-12705616-01, ранее выпускался по ТУ 494К-АО42-006-97 под маркой «Эраконд».
Это экстракт люцерны содержит в своем составе аминокислоты, углеводы, флавоноиды, физиологически важные микроэлементы и другие активные биологические соединения. Экстракт обладает мощным иммуномодулирующим действием, укрепляя специфические и неспецифические факторы иммунитета организма. Он восстанавливает способность организма к саморегуляции физиологических функций. Благодаря этому экстракт обладает широким спектром действия, в частности гепато- и гемопротекторным, противоязвенным, противовоспалительным, ранозаживляющим, желчегонным, стимулирует репаративные процессы и т.д. Он рекомендуется, в частности, как пищевая добавка в продукты питания и парфюмерно-косметические средства для придания лечебно-профилактических свойств; как оздоровительное средство в лечебном питании; в качестве вкусовой добавки экстракт добавляется в хлебобулочные и кондитерские изделия, кисломолочные продукты, в мороженое, колбасные изделия, безалкогольные и алкогольные напитки, пиво и т.д. [«Молочная промышленность», №9, 2000, с.12].
Из данных Лукмановой К.А. [Разработка полифункциональных лекарственных средств и биологически активной добавки на основе экстракта травы люцерны посевной - Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук. Уфа, 2000], препарат «Эраконд» имеет в своем составе (кроме макро- и микроэлементов):
Кроме указанного в таблицах 1-3 Долюцар (Эраконд) содержит:
Содержание гуминовых веществ - 2,19-5,6 г/100 г продукта
Содержание уроновых кислот - 3,0-10,0 г/100 г продукта
Содержание флавоноидов - 2,1-2,8 г /100 г продукта
Белок - 15-20 г/100 г продукта
Рибоза - 4,5-5,5 г/100 г продукта
Конкретное содержание витаминов не указано, но можно предполагать, что они содержатся на уровне препарата «Люцевит».
В качестве прототипа на способ получения биологической добавки авторами взят способ получения биологически активного препарата на основе сена люцерны, включающий тепловую обработку измельченного сырья экстрагентом, содержащим раствор микроэлементов Ва, Sn, Со, Cr, V, Zn, Fe, Se, Mn, Cu по патенту 2145863 РФ.
По прототипу биологически активный препарат готовят следующим образом.
Измельченное сено люцерны до фракции 3-5 мм экстрагируют паровым конденсатом, содержащим микроэлементы (соотношение измельченного растительного сырья к экстрагенту равно 1:8), при 60-80°С, выдерживают при температуре 150°С в течение 90 минут и давлении 5,4-5,9.105 Па. По истечении времени полученный экстракт фильтруют, упаривают до 40% концентрации.
Для получения сухого целевого препарата 40%-ный экстракт подают в распылительную сушилку и сушат при температуре 250-300°С.
Высушенный продукт подают на упаковку.
К недостаткам известного препарата и способа следует отнести:
- сравнительно невысокая биологическая активность;
- недостаточное содержание витаминов, которые вследствие проведения экстракции при повышенных температуре и давлении разрушаются;
- длительность и трудоемкость технологии;
- энергетические затраты, связанные с проведением процесса при высоких температурах и давлении;
- осмоление целевого продукта, что сказывается на его качестве, потере витаминов и других ценных компонентов.
Технической задачей предлагаемого комплексного изобретения является разработка улучшенного состава биологически активного препарата, повышение его биологической активности, снижение затрат при его производстве, снижение его себестоимости и улучшение качества, а также расширение ассортимента биологически активных добавок.
Поставленная задача решается тем, что биологически активный препарат на основе люцерны, полученный обработкой его экстрагентом, содержащим макро- и микроэлементы, характеризующийся тем, что он содержит ингредиенты при следующем соотношении, мг/100 грамм:
Кальций - 2000-8000
Калий - 4000-12000
Натрий - 4000-12000
Магний - 400-2000
Фосфор - 1400-8000
Железо - 80-600
Цинк - 180-1000
Олово - 0,1-0,4
Кобальт - 0,1-0,4
Хром - 1,0-2,0
Ванадий - 0,1-0,4
Марганец - 0,06-0,40
Молибден - 1,0-1,8
Медь - 6,0-20,0,
а также
свободные аминокислоты, липиды, белки, мг/100 г продукта:
Белок - 20000-30000 мг/100 г продукта,
Липиды - 100-1000 мг/100 г продукта,
Аминосахара 2000-8000 мг/100 г продукта, а также органические кислоты:
углеводы:
витамины:
Поставленная задача решается также тем, что в предлагаемом способе получения биологически активного препарата, включающем измельчение растительного сырья, его обработку экстрагентом, содержащим водный раствор солей макро- и микроэлементов, выдержку экстрагирующей смеси при повышенной температуре и повышенном давлении, с дальнейшим отделением, очищением и сушкой полученного экстракта, что сначала проводят экстракцию растительного сырья конденсатом, подогретым до температуры 60-80°С в течение 0,3-0,5 час, при этом, массовое соотношение растительного сырья к конденсату составляет 1:6, далее часть экстракта передавливают в промежуточную емкость, а остальную часть подают на «горячую экстракцию» в аппарат, обогреваемый водяным паром, и при перемешивании вводят водные растворы макро- и микроэлементов из расчета на 1 кг растительного сырья. Горячую экстракцию проводят при температуре 110-140°С и давлении 1,5-4,5 атм в течение 0,6-1,2 час.
После чего избыточное давление сбрасывают, и температуру снижают до 100°С, и при этой температуре смесь выдерживают еще 0,2-0,8 час. Далее полученный экстракт подают на фильтрацию и далее на упаривание, где происходит упаривание до концентрации 45-50%.
Для восполнения витаминами групп А, В1-В12, С, Д, Е, К, Р, Н упаренный экстракт соединяют с холодным экстрактом, при этом массовое соотношение холодного экстракта к упаренному составляет 4,0-6,0 к 36,0. Готовую смесь подают на розлив или сублимационную сушку и далее на упаковку.
В качестве экстрагента для горячей экстракции используют водные растворы макро- и микроэлементов Са, К, Na, Fe, Zn, Mg, P, Sn, Co, Cr, V, Zn, Mn, Mo, Cu при их следующем соотношении, мг/кг растительного сырья:
Кальций - 14,6-18,4
Калий - 18,6-22,6
Натрий - 13,5-14,6
Магний - 1,4-2,0
Фосфор - 21,0-22,5
Железо - 0,3-0,8
Цинк - 0,13-0,18
Олово - 0,21-0,31
Кобальт - 0,20-0,28
Хром - 0,43-0,51
Ванадий - 0,04-0,09
Марганец - 0,06-0,40
Молибден - 0,02-0,06
Медь - 0,40-0,62
Необходимо отметить, что все витамины - термолабильные вещества и при термоэкстракции многие из них разрушаются. А соединение «холодного экстракта» с «горячим экстрактом» позволяет сохранить эти витамины, и не только витамины, в готовом продукте, что в целом увеличивает биологическую активность препарата.
Сущность изобретения поясняется принципиальной схемой, изображенной на чертеже.
Заявляемый способ реализуется следующим образом.
Сначала на каждую партию исходного сена люцерны определяют содержание на микро- и макроэлементы, содержание суммы флавоноидов.
Дробленое сено люцерны до фракции 3-5 мм загружают в обогреваемый аппарат с мешалкой 1, в который предварительно заливают конденсат I, подогретый до 60-80°С. Перемешивание осуществляют в течение 0,3-0,5 час. Далее часть экстракта передавливают в промежуточную емкость 5, а остальную часть подают в аппарат 2 на «горячую экстракцию», обогреваемый водяным паром, и при перемешивании вводят водные растворы макро- и микроэлементов II из расчета на 1 кг растительного сырья, при этом соотношение водного раствора экстракта к растительному сырью составляет 6:1 мас. Смесь в аппарате 2 выдерживают при температуре 110-140°С и давлении 1,5-4,5 атм в течение 0,6-1,2 час. После чего избыточное давление сбрасывают, и температуру снижают до 100°С, и при этой температуре смесь выдерживают еще 0,2-0,8 час. Далее полученный экстракт подают на фильтрацию в аппарат 3 и далее в аппарат 4, где происходит упаривание до концентрации 45-50%.Концентрат, выходящий из аппарата 3, потоком III направляют в накопитель конденсата.
Для восполнения витаминами групп А, В1-В12, С, Д, Е, К, Р, Н упаренный экстракт подают в аппарат 6, туда же добавляют холодный экстракт из промежуточной емкости 5, при этом массовое соотношение холодного экстракта к упаренному составляет 4,0-6,0 к 36,0. Готовую смесь подают на розлив аппарат 7, откуда 45-50% раствор потоком IV отправляют как целевой продукт или сублимационную сушку в аппарат 8 и далее потоком V на упаковку.
В готовом концентрате определяют величину рН по стандартной методике на иономере или рН-метре, а также биологическую активность, определяют содержание микро- и макроэлементов, содержание аминокислот, органических кислот, углеводов, витаминов по известным методикам.
Для определения биологической активности готовый экстракт в количестве 0,25 л упаривают до объема 50 мл, и на приборе КФК-2 определяют активность белка в условных единицах.
Витамины определяют по известным методикам по ГОСТ 70-47-55, ГОСТ 52147-2003. Анализ аминокислот и активный белок определяют реакцией с цитроном натрия и двухкоординатной тонкослойной хроматографии с проявлением нингидрилом, при этом вводятся метки в виде индивидуальных растворов аминокислот.
Используемый состав микроэлементов, условия получения биологически активного препарата и его показатели представлены в таблицах.
На основании представленных данных можно сделать вывод, что билогически активный препарат, полученный заявляемым способом, отличается по составу микроэлементов и их количеству, а также по количественному составу витаминов, аминокислот; способ отличается параметрами проведения процесса и самим проведением процесса, в результате чего целевой продукт получают с повышенной биологической активностью, богатый микро- и макроэлементами, витаминами и другими ценными компонентами.
название | год | авторы | номер документа |
---|---|---|---|
БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЙ ПРЕПАРАТ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ | 2005 |
|
RU2290838C1 |
КОМПОЗИЦИЯ НА ОСНОВЕ ХВОЙНОЙ ЗЕЛЕНИ И СПОСОБ ЕЁ ПОЛУЧЕНИЯ | 2018 |
|
RU2701562C1 |
БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНАЯ ДОБАВКА К ПИЩЕ "ЭРАВИТ" АНТИОКСИДАНТНОЙ НАПРАВЛЕННОСТИ И СПОСОБ ЕЕ ПРИГОТОВЛЕНИЯ | 2011 |
|
RU2456825C1 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СОРБЕНТА НА РАСТИТЕЛЬНОЙ ОСНОВЕ | 2011 |
|
RU2482913C1 |
МОЛОЧНЫЙ ПРОДУКТ | 2012 |
|
RU2495580C1 |
Гуминовый препарат и способ его получения | 2019 |
|
RU2717659C1 |
ПРОДУКТ ДИЕТИЧЕСКОГО, ПРОФИЛАКТИЧЕСКОГО И ФУНКЦИОНАЛЬНОГО ПИТАНИЯ ДЛЯ СПОРТИВНОГО ПИТАНИЯ С ПРОБИОТИКОМ В | 2011 |
|
RU2458538C1 |
БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНАЯ ПИЩЕВАЯ ДОБАВКА | 2011 |
|
RU2449600C1 |
БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНАЯ ДОБАВКА К ПИЩЕ И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ | 2007 |
|
RU2340216C1 |
КОМПЛЕКСНАЯ ДОБАВКА С БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫМИ СВОЙСТВАМИ ДЛЯ МУЧНЫХ ИЗДЕЛИЙ, ИЗГОТОВЛЕННЫХ НА ОСНОВЕ СОЕВОГО НАПИТКА И/ИЛИ СОЕВОЙ ОКАРЫ, И ПРОДУКТ, ЕЕ СОДЕРЖАЩИЙ | 2006 |
|
RU2356246C2 |
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к производству биологически активных препаратов. Биологически активный препарат (БАП) на основе люцерны получен обработкой его экстрагентом и содержит макро- и микроэлементы, аминокислоты, белок, липиды, аминосахара, органические кислоты, углеводы и витамины в определенном соотношении. Способ получения БАП включает измельчение растительного сырья, его обработку экстрагентом, содержащим водный раствор солей макро- и микроэлементов, выдержку экстрагирующей смеси при повышенной температуре и давлении, с дальнейшим отделением, очищением и сушкой экстракта. При этом сначала проводят экстракцию растительного сырья конденсатом, подогретым до 60-80°С. Причем массовое соотношение растительного сырья к конденсату составляет 1:6. Далее часть экстракта передавливают в промежуточную емкость. Остальную часть подают на «горячую экстракцию» в аппарат, обогреваемый водяным паром, и при перемешивании вводят водные растворы макро- и микроэлементов. При этом соотношение водного раствора экстракта к растительному сырью составляет 6:1 мас. Горячую экстракцию проводят при 110-140°С и давлении 1,5-4,5 атм в течение 0,6-1,2 час. После чего избыточное давление сбрасывают, и температуру снижают до 100°С. Смесь выдерживают еще 0,2-0,8 час. Далее экстракт подают на фильтрацию, упаривание до концентрации 45-50%. Упаренный экстракт соединяют с холодным экстрактом при массовом соотношении 4,0-6,0 к 36,0. Готовую смесь разливают или сушат, затем упаковывают. Изобретение позволяет получить продукт с повышенной биологической активностью. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 1 ил., 13 табл.
кальций - 2000-8000
калий - 4000-12000
натрий - 4000-12000
магний - 400-2000
фосфор - 1400-8000
железо - 80-600
цинк - 180-1000
олово - 0,1-0,4
кобальт - 0,1-0,4
хром - 1,0-2,0
ванадий - 0,1-0,4
марганец - 0,06-0,40
молибден - 1,0-1,8
медь - 6,0-20,0
незаменимые аминокислоты, мг/100 г продукта:
валин - 30-100
лейцин - 30-80
изолейцин - 30-40
лизин - 20-60
метионин - 20-100
треонин - 20-80
триптофан - 20-100
фенилаланин - 20-120,
заменимые аминокислоты, мг/100 г продукта
аланин - 30-130
аргинин - 20-100
глицин - 30-130
гистидин - 20-100
тирозин - 20-100
аспарагин - 20-60
аспарагиновая кислота - 20-200
глутамин - 20-60
глутаминовая кислота - 20-200
пролин - 20-100
серии - 20-100
цистеин - 30-100,
белок 20000-30000 мг/100 г
липиды - 100-100 мг/100 г
аминосахара - 2000-8000 мг/100 г, а также:
витамины:
Витамин А (ретинол) - 15-80
Витамин В1 (тиамин) - 15-80
Витамин В2 (рибофлавин)- 20-100
Витамин В3 (РР, ниацин) - 200-800
Витамин В4 (холин) - 20-50
Витамин В5 (пантотеновая кислота) - 70-600
Витамин В6 (пиродоксин) - 20-200
Витамин В9 (фолиевая кислота) - 10-80
Витамин В12 (пианкокобаломин) - 1,0-15,0
Витамин С (аскорбиновая кислота) - 60-120
Витамин Д (эргокальциферол) - 1,0-10,0
Витамин Е (изомеры токоферола) - 80-300
Витамин К (филлогидрохинон, викасол) - 10-80
Витамин Н (биотин) - 1,5-20,0
Витамин Р (биофлавоноиды), - 1,5-20,0
органические кислоты:
аскорбиновая - 200-400
винная - 100-400
щавелевая - 50-400
яблочная - 300-800
лимонная - 300-1500
углеводы:
арабиноза - 300-800
ксилоза - 300-1500
фруктоза - 3000-8000
галактоза - 300-1000
глюкоза - 3000-7000
сахароза - 400-1500
мальтоза - 100-600
Кальций - 14,6-18,4
Калий - 18,6-22,6
Натрий - 13,5-14,6
Магний - 1,4-2,0
Фосфор - 21,0-22,5
Железо - 0,3-0,8
Цинк - 0,13-0,18
Олово - 0,21-0,31
Кобальт - 0,20-0,28
Хром - 0,43-0,51
Ванадий - 0,04-0,09
Марганец - 0,06-0,40
Молибден - 0,02-0,06
Медь - 0,40-0,62
БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЙ ПРЕПАРАТ НА ОСНОВЕ ЭКСТРАКТА ЛЮЦЕРНЫ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ | 1998 |
|
RU2145863C1 |
БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЙ ПРЕПАРАТ НА ОСНОВЕ ЭКСТРАКТА ЛЮЦЕРНЫ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ | 2000 |
|
RU2176918C1 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФИТОПРЕПАРАТОВ | 1993 |
|
RU2060683C1 |
RU 2000111014 A, 20.04.2002. |
Авторы
Даты
2008-10-20—Публикация
2006-04-12—Подача