СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ДЕСКВАМИРОВАННЫХ ЭНДОТЕЛИАЛЬНЫХ КЛЕТОК В ЦЕЛЬНОЙ КРОВИ Российский патент 2008 года по МПК G01N33/49 

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике в ревматологии.

Метод подсчета концентрации десквамированных эндотелиальных клеток (ДЭК) в периферической крови используется в России (Петрищев Н.Н., Беркович О.А., Власов Т.Д. и др. Диагностическая ценность определения десквамированных эндотелиальных клеток в крови. // Клиническая и лабораторная диагностика. - 2001, №1. - С.50-58) и за рубежом (М.Mutin, I.Canavy, A.Blann et al. Direct Evidence of Endothelial Injury in Acute Myocardial Infarction and Unstable Angina by Demonstration of Circulating Endothelial Cells // Blood. - 1999. - Vol.93(9). - P. 2951-2958) как одно из составляющих оценки эндотелиальной функции. Изменение концентрации ДЭК в периферической крови при различных заболеваниях связано с вовлечением в патологический процесс эндотелия и усилением десквамации эндотелиальных клеток в результате повреждения эндотелия (Hladovec J., Prerovsky I., Stanek V., Fabian J. Circulating endothelial cells in acute myocardial infarction and angina pectoris // Klin. Wochenschr. - 1978. - Vol.56(20). - P.1033-1036; Dierk H. Endemann, Ernesto L. Schiffrin. Endothelial Dysfunction // J Am Soc Nephrol - 2004. - Vol.15. - P.1983-1992; Douglas B.Cines, Eleanor S.Pollak, Clayton A. Buck, et al., Endothelial Cells in Physiology and in the Pathophysiology of Vascular Disorders // Blood - 1998. - Vol.91(10). - P.3527-3561).

Традиционно принято определять концентрацию десквамированных эндотелиальных клеток (ДЭК) в периферической крови по методике, предложенной в 1978 г. Hladovec J. (Hladovec J. Circulating endothelial cells as a sign of vessel wall lesions // Physiol. Bohemoslov. - 1978. - Vol.27. - P.140-144) в интерпретации (Петрищев Н.Н., Беркович О.А., Власов Т.Д. и др. Диагностическая ценность определения десквамированных эндотелиальных клеток в крови. Клин. лаб. диагност.- 2001. - №1. - С.50-52). Существующая методика предполагает определение содержания ДЭК в плазме крови и представление результатов как количество ДЭК на единицу объема плазмы, что недостаточно информативно в связи с вариабельностью содержания форменных элементов крови, различным разведением полученной концентрации ДЭК и, как следствие, несопоставимостью содержания ДЭК у больных и здоровых лиц при различном уровне гематокрита. Для получения более точных и сопоставимых результатов содержания ДЭК у здоровых лиц и пациентов с различной патологией и различным уровнем гематокрита предлагается методика, позволяющая индексировать содержание ДЭК в 1 л плазмы, определяемых по стандартным методикам, на концентрацию ДЭК в 1 л цельной периферической крови.

Технический результат предлагаемого способа заключается в повышении точности определения концентрации ДЭК в цельной крови за счет введения дополнительного индекса, учитывающего уровень гематокрита и соответственно разведение полученного по стандартной методике содержания ДЭК.

Предлагается способ определения концентрации ДЭК в цельной крови, качественно дополняющий имеющуюся методику определения концентрации ДЭК в плазме.

1. Стандартным образом, согласно методике Hladovec J., 1978, готовят препараты ДЭК и определяют концентрацию ДЭК в 1 л плазмы по формуле ДЭК=0,56·N·10⁵, где N - число ДЭК в двух сетках камеры Горяева, 0,56 - коэффициент, учитывающий объем камеры и изменения объема исследуемого материала в процессе приготовления препаратов ДЭК.

2. Определяют показатель гематокрита (Ht) и долю плазмы

(P)=100%-Ht.

3. Высчитывают коэффициент индексации для перевода концентрации ДЭК в 1 л плазмы на содержание ДЭК в 1 л цельной крови (К)=Р/100%, где 100% - объем цельной крови.

4. Полученное по стандартной методике число ДЭК в 1 л плазмы умножают на коэффициент К для получения показателя концентрации ДЭК в 1 л цельной крови.

Итоговая формула: ДЭК=(0,56·N·(100-Ht)/100)·10⁵,

где ДЭК - концентрация десквамированных эндотелиальных клеток в цельной крови;

10⁵ - степень, учитывающая концентрацию ДЭК;

N - количество ДЭК, полученное при их подсчете в двух сетках камеры Горяева;

Ht - уровень гематокрита;

0,56; 100 - коэффициенты, учитывающие изменения объема исследуемого материала в процессе приготовления препаратов ДЭК и перевод значений концентрации ДЭК в 1 л плазмы на концентрацию ДЭК в 1 л крови.

Пример осуществления изобретения

Для успешного достижения конечной цели - подсчета концентрации ДЭК в 1 л цельной крови необходимо поэтапно выполнить все вышеуказанные операции, в ходе которых производится пересчет содержания ДЭК в 1 л плазмы крови на концентрацию ДЭК в 1 л цельной крови с учетом показателя гематокрита по следующей формуле:

ДЭК=(0,56·N·(100-Ht)/100)·10⁵

Клинический пример

1. Больная К., 35 лет с диагнозом "Ревматоидный артрит. Серопозитивный. Полиартрит. Активность 2. Рентгенологическая стадия 2. Функциональный класс 2. Хроническая железодефицитная анемия средней степени тяжести".

Число ДЭК в 1 л плазмы = 3,89·10⁵ клеток

Гематокрит = 31%, доля плазмы = 100-31=69%

Коэффициент индексации = 69/100=0,69

Число ДЭК в 1 л цельной крови = (3,89·0,69) клеток·10⁵ = 2,7·10⁵ клеток или ДЭК = (N·0,56·(100-Ht)/100)·10⁵=(7·0,56·(100-31)/100·10⁵=2,7·10⁵ клеток,

где 7 - число ДЭК в 2 ячейках камеры Горяева.

2. Обследуемая Н. из контрольной группы (практически здоровая женщина), 33 лет.

Число ДЭК в 1 л плазмы = 3,89·10⁵ клеток

Гематокрит = 41%, доля плазмы = 100-41=59%

Коэффициент индексации = 59/100=0,59

Число ДЭК в 1 л цельной крови = (3,89·0,59) клеток·10⁵=2,2·10⁵

клеток или ДЭК = (N·0,56·(100-Ht)/100)·10⁵=(7·0,56(100-41)/100·10⁵=2,2·10⁵ клеток,

где 7 - число ДЭК в 2 ячейках камеры Горяева.

Таким образом, при равных концентрациях ДЭК в плазме крови их содержание в цельной крови различается и позволяет иначе трактовать результаты исследования. Так, у больной с анемией число ДЭК в цельной крови выше, чем у женщины из контрольной группы, что свидетельствует о вовлечении эндотелия в патологический процесс и требует наблюдения в динамике заболевания.

Разница достаточно заметна уже при единичном исследовании и может существенно изменить средний показатель по выборке в целом.

Так, нами обследован 31 пациент с ревматоидным артритом (РА) и сопутствующей анемией и 15 практически здоровых лиц (табл.1).

У пациентов с РА содержание ДЭК в 1 л плазме составило (4,92±0,37)·10⁵ клеток и достоверно не отличалось от контрольной группы, где аналогичный показатель был равен (3,72±0,43)·10⁵ клеток (р=0,07). Однако уровень гематокрита у здоровых был достоверно выше, чем при РА с сопутствующей анемией (41,7±0,84% против 35,59±0,87% соответственно) (р=0,00000005). Это обусловило достоверную разницу показателей ДЭК в цельной крови: у пациентов с РА и анемией концентрация ДЭК в цельной крови составила (3,17±0,24)·10⁵ клеток и была достоверно выше, чем у здоровых (2,18±0,27)·10⁵ клеток (р=0,01).

Таким образом, предлагаемый способ позволяет определять содержание ДЭК в цельной крови, что делает результат подсчета более универсальным и сопоставимым с концентрацией других клеточных элементов в крови, а также повышает точность диагностики эндотелиальной дисфункции у лиц с различным уровнем гематокрита (в том числе при анемических состояниях) у ревматологических больных, делая возможным сопоставление результатов подсчета концентрации ДЭК у больных и здоровых лиц при различном уровне гематокрита.

Таблица 1
Концентрация десквамированных эндотелиоцитов в плазме и цельной крови и уровень гематокрита у больных ревматоидным артритом с сопутствующей анемией и практически здоровых лиц№Пациенты с РА и анемиейЗдоровые лицаДЭК пл.·10⁵, кл/лДЭК ЦК·10⁵, кл/лHt,%ДЭК пл.·10⁵, кл/лДЭК ЦК·10⁵, кл/лHt,%15,283,5632,652,9940,223,612,4332,85,563,3939,135,563,5136,94,722,8739,148,064,939,21,670,9841,353,892,5135,42,781,584363,061,9536,34,722,840,772,51,635,93,892,3938,58106,4235,81,941,238,394,172,6137,32,781,6740102,221,3937,53,612,0642,9112,51,5637,77,54,6438,1125,563,5336,53,061,6845,2133,332,1336,131,670,8946,6144,723,023652,5648,9153,061,8938,21,941,0943,8164,442,7538,1   178,895,5737,3184,172,5838,2198,894,6947,2203,612,2737214,442,9533,5224,172,6935,6232,781,8533,3247,786,1920,4255,833,7535,6265,283,3237,1272,221,3539,3283,892,7130,4296,395,0520,97305,283,3237,1316,944,338,1Среднее ± ошибка среднего4,92±0,373,17±0,2441,7±0,843,72±0,432,18±0,2735,59±0,87Медиана4,923,1735,593,612,0640,7Интерквартильный размахот 3,33
до 5,83от 2,13
до 3,75от 35,4
до 37,7от 1,94
до 5от 1,2
до 2,87от 39,1
до 43,8Тест Манна-УитниР=0,066Р=0,018Р<0,001   Примечание:
PA - ревматоидный артрит;
ДЭК пл.·10⁵, кл/л - концентрация десквамированных эндотелиальных клеток в 1 л плазмы · 10⁵;
ДЭК ЦК·10⁵, кл/л - концентрация десквамированных эндотелиальных клеток в 1 л цельной крови · 10⁵;
Ht,% - уровень гематокрита, %;
Тест Манна-Уитни проводился между двумя сравниваемыми группами (пациенты с РА и анемией и здоровые лица) по соответствующим показателям (ДЭК пл.·10⁵, кл/л;
ДЭК ЦК·10⁵, кл/л Ht, %)

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике в ревматологии. Получают по стандартной методике значение концентрации десквамированных эндотелиальных клеток (ДЭК) в 1 л плазмы крови. Затем пересчитывают концентрацию ДЭК в 1 л цельной крови с учетом уровня гематокрита по следующей формуле: ДЭК=(0,56·N·(100-Ht)/100)·10⁵. Возможны сопоставления результатов подсчета концентрации ДЭК у больных и здоровых лиц при различном уровне гематокрита. Изобретение позволяет определить концентрацию ДЭК в цельной крови, что делает результат более универсальным и сопоставимым с концентрацией других клеточных элементов в крови, а также повышает точность диагностики эндотелиальной дисфункции. 1 табл.

Способ определения концентрации десквамированных эндотелиальных клеток (ДЭК) в цельной крови путем исследования плазмы крови, отличающийся тем, что дополнительно производится пересчет содержания ДЭК в 1 л плазмы крови на их концентрацию в 1 л цельной крови с учетом уровня гематокрита по следующей формуле: ДЭК=(0,56·N·(100-Ht)/100)·10⁵,

где ДЭК - концентрация десквамированных эндотелиальных клеток в цельной крови;

10⁵ - степень, учитывающая концентрацию ДЭК;

N - количество ДЭК, полученное при их подсчете в двух сетках камеры Горяева;

Ht - уровень гематокрита;

0,56; 100 - коэффициенты, учитывающие изменения объема исследуемого материала в процессе приготовления препаратов ДЭК и перевод значений концентрации ДЭК в 1 л плазмы на концентрацию ДЭК в 1 л крови.